侧耳母种培养基及其制备方法与流程

1.本发明涉及一种侧耳母种培养基及其制备方法，属于侧耳栽培技术领域。


背景技术：

2.侧耳栽培生产过程中，菌种质量是影响其产量的关键，优良的菌种菌丝粗壮抗病，能广泛适应多种代用栽培料，出菇早，菇形好，产量高。侧耳菌种分为母种、原种和栽培种，也称一级种、二级种、三级种，母种是采用子实体组织分离、孢子分离或耳木、菇木基内菌丝体分离所得到的菌丝体纯培养物及其转接的菌种，为了便于保藏、运输和防止杂菌污染，一般采用试管里培养，故又称“试管菌种”；原种是由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物；栽培种是由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，栽培种直接用于栽培。其中，侧耳母种培养是决定菌种质量的关键步骤，目前，母种培养基常采用由去皮马铃薯、葡萄糖、琼脂和水配制而成的马铃薯琼脂培养基，此种培养基可提供基础养分，仅能完成基本的侧耳母种培养，无法满足市场对菌种质量的更高要求。


技术实现要素：

3.本发明要解决的技术问题是，提供一种侧耳母种培养基及其制备方法，培养得到的侧耳菌种的质量好，且产量高。
4.本发明所述的侧耳母种培养基，其成分每升水中包括去皮马铃薯100-140g、琼脂15-20g、葡萄糖15-20g、复合维生素b 30-50mg、枯草芽胞杆菌多肽提取物15-25mg。
5.所述侧耳母种培养基的成分每升水中还包括桑树木屑50-70g、棉籽壳50-70g、磷酸二氢钾1-2g、硫酸镁0.5-1g。
6.所述枯草芽胞杆菌多肽提取物是由有效活菌数为1
×
10
8-2
×
109cfu/ml的菌液中提取，其提取方法为：对枯草芽胞杆菌菌液进行首次离心，收集上清液，调节上清液ph值至2-4，进行二次离心，弃去上清液，收集沉淀，50-60℃干燥1-2h，得到多肽提取物；
7.其中，首次离心的转速为3000-4000rpm，离心时间10-15min；二次离心的转速为7000-8000rpm，离心时间20-25min。
8.所述复合维生素b为otc非处方药品复合维生素b片，优选华中药业股份有限公司生产的维福佳复合维生素b片。
9.所述侧耳母种培养基的制备方法，包括以下步骤：
10.(1)将去皮马铃薯、桑树木屑、棉籽壳加入水中，加热至沸腾，持续加热30-50min，过滤得到滤液；
11.(2)向滤液中加入琼脂，继续加热至琼脂溶化，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、复合维生素b、枯草芽胞杆菌多肽提取物，使充分溶解，用水定容；
12.(3)将制作好的培养基进行罐装，放入高压灭菌锅中，设置灭菌温度121℃，时间30-60min，降温至50-60℃，即可得到侧耳母种培养基。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
14.1、本发明侧耳母种培养基通过复合维生素b和枯草芽胞杆菌多肽提取物的作用，促进了侧耳母种的生长，生长速度快，且菌丝浓密、洁白，品质好。
15.2、通过本发明培养基培养得到的侧耳母种，经扩大培养得到的栽培种，出菇早，菇形好，且产量高。
具体实施方式
16.下面结合实施例对本发明作进一步描述
17.需要说明的是：实施例中用到的所有原料除特殊说明外，均为市购，复合维生素b为华中药业股份有限公司生产。
18.实施例1
19.本发明所述的侧耳母种培养基，其成分每升水中包括去皮马铃薯100g、桑树木屑50g、棉籽壳50g、琼脂15g、葡萄糖15g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、复合维生素b 30mg、枯草芽胞杆菌多肽提取物15mg；
20.其中，枯草芽胞杆菌多肽提取物是由有效活菌数为1
×
109cfu/ml的菌液中提取，其提取方法为：对枯草芽胞杆菌菌液进行离心，3000rpm离心15min，收集上清液，用hcl溶液调节上清液ph值至3，进行二次离心，8000rpm离心20min，弃去上清液，收集沉淀，60℃干燥1h，得到多肽提取物。
21.制备方法如下：
22.(1)将去皮马铃薯、桑树木屑、棉籽壳加入水中，加热至沸腾，持续加热30min，用8层医用纱布过滤得到滤液；
23.(2)向滤液中加入琼脂，继续加热至琼脂溶化，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、复合维生素b、枯草芽胞杆菌多肽提取物，使充分溶解，用水定容至1l；
24.(3)将制作好的培养基进行试管罐装，培养基的量占试管的1/5-1/4，用试管塞盖好试管，再用报纸捆扎好试管放入高压灭菌锅中，设置灭菌温度121℃，时间60min，降温至55℃，即可得到侧耳母种培养基。
25.实施例2
26.本发明所述的侧耳母种培养基，其成分每升水中包括去皮马铃薯120g、桑树木屑60g、棉籽壳60g、琼脂17.5g、葡萄糖17.5g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁0.75g、复合维生素b 40mg、枯草芽胞杆菌多肽提取物20mg；
27.其中，枯草芽胞杆菌多肽提取物是由有效活菌数为2
×
109cfu/ml的菌液中提取，其提取方法为：对枯草芽胞杆菌菌液进行离心，4000rpm离心10min，收集上清液，用hcl溶液调节上清液ph值至2，进行二次离心，7000rpm离心25min，弃去上清液，收集沉淀，50℃干燥2h，得到多肽提取物。
28.制备方法如下：
29.(1)将去皮马铃薯、桑树木屑、棉籽壳加入水中，加热至沸腾，持续加热50min，用8层医用纱布过滤得到滤液；
30.(2)向滤液中加入琼脂，继续加热至琼脂溶化，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、复合维生素b、枯草芽胞杆菌多肽提取物，使充分溶解，用水定容至1l；
31.(3)将制作好的培养基进行试管罐装，培养基的量占试管的1/5-1/4，用试管塞盖
好试管，再用报纸捆扎好试管放入高压灭菌锅中，设置灭菌温度121℃，时间60min，降温至55℃，即可得到侧耳母种培养基。
32.实施例3
33.本发明所述的侧耳母种培养基，其成分每升水中包括去皮马铃薯140g、桑树木屑70g、棉籽壳70g、琼脂20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、复合维生素b 50mg、枯草芽胞杆菌多肽提取物25mg；
34.其中，枯草芽胞杆菌多肽提取物是由有效活菌数为1
×
108cfu/ml的菌液中提取，其提取方法为：对枯草芽胞杆菌菌液进行离心，3500rpm离心13min，收集上清液，用hcl溶液调节上清液ph值至4，进行二次离心，7500rpm离心22min，弃去上清液，收集沉淀，55℃干燥1.5h，得到多肽提取物。
35.制备方法如下：
36.(1)将去皮马铃薯、桑树木屑、棉籽壳加入水中，加热至沸腾，持续加热40min，用8层医用纱布过滤得到滤液；
37.(2)向滤液中加入琼脂，继续加热至琼脂溶化，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、复合维生素b、枯草芽胞杆菌多肽提取物，使充分溶解，用水定容至1l；
38.(3)将制作好的培养基进行试管罐装，培养基的量占试管的1/5-1/4，用试管塞盖好试管，再用报纸捆扎好试管放入高压灭菌锅中，设置灭菌温度121℃，时间60min，降温至55℃，即可得到侧耳母种培养基。
39.对比例1
40.侧耳母种培养基，其成分每升水中包括去皮马铃薯100g、琼脂20g、葡萄糖20g。
41.制备方法如下：
42.(1)将去皮马铃薯加入水中，加热至沸腾，持续加热40min，用8层医用纱布过滤得到滤液；
43.(2)向滤液中加入琼脂，继续加热至琼脂溶化，加入葡萄糖，使充分溶解，用水定容至1l；
44.(3)将制作好的培养基进行试管罐装，培养基的量占试管的1/5-1/4，用试管塞盖好试管，再用报纸捆扎好试管放入高压灭菌锅中，设置灭菌温度121℃，时间60min，降温至55℃，得到侧耳母种培养基。
45.使用实施例与对比例制备的侧耳母种培养基进行侧耳母种试管培养试验：
46.接种：选择第一潮、长势健壮、朵型美观、七八分成熟的子实体作为组织分离对象。将子实体和母种试管培养基放入超净工作台中，紫外加臭氧灭菌30min，待臭氧散尽后进入无菌室接种。在酒精灯火焰保护范围内，选择菌盖和菌柄连接处的子实体进行分离，3-5mm大小，用接种针放入母种试管培养基中，再用接种铲将培养基断开，长度1cm。
47.培养：待培养基接完种后，将母种试管培养基放在恒温培养箱中，培养温度设置为23℃左右，避光培养7天。
48.观察并记录菌丝生长情况，结果见表1。
49.表1菌种生长指标数据表
50.项目菌丝日生长量菌丝生长状态菌丝整齐度实施例10.52cm较洁白较浓密较整齐一致
实施例20.75cm较洁白浓密较整齐一致实施例30.93cm洁白浓密整齐一致对比例10.36cm灰白稀疏参差不齐
51.从对比结果中可以看出，使用本发明培养基培养的侧耳菌种，各项生长指标均优于对比例，其中，实施例3菌丝生长情况尤为突出，表现为菌丝生长整齐一致，菌丝洁白浓密，菌丝日生长量可达0.93cm，菌丝活力最强。
52.将上述侧耳母种进行扩繁得到栽培种，进行菌包出菇的生产试验，记录生产指标，结果见表2。
53.表2栽培种出菇的生产指标数据表
54.项目第一潮出菇时间单包鲜菇产量实施例121d396g实施例221d412g实施例320d430g对比例122d352g
55.从对比结果中可以看出，使用本发明培养基培养的侧耳菌种，其栽培种出菇时间短，产量更高。