一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂及其制备方法。


背景技术：

2.沙丁胺醇(albuterol)是一种肾上腺素类β受体激动剂，可与人呼吸道平滑肌上的β2受体结合，增加细胞内环磷酸腺苷(camp)浓度，camp进一步激活蛋白激酶a，使肌肉蛋白磷酸化，降低细胞内钙离子浓度，使支气管平滑肌舒张。camp浓度增加，还可抑制肥大细胞炎性介质的释放。沙丁胺醇为消旋体，其中只有左旋体产生舒张支气管平滑肌的作用，右旋体无此作用，但可与β受体结合产生头痛、头晕、心悸、手指颤抖等副作用。左旋沙丁胺醇是沙丁胺醇的单一旋光异构体，药效是沙丁胺醇的80倍，副作用减少，疗效也有进一步提高，左旋沙丁胺醇只需消旋体1/4的剂量便可产生相同疗效，1/2剂量时，其作用优于消旋体。在慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease，copd)中，左旋沙丁胺醇的促炎症反应作用比沙丁胺醇弱。其扩张支气管作用明显，是目前临床治疗支气管哮喘、哮喘型支气管炎、肺气肿患者支气管痉挛及急性哮喘发作等的首选药物。
3.目前左旋沙丁胺醇以通过口服摄入、静脉注射和雾化吸入的方式缓解哮喘。左旋沙丁胺醇的全身平均滞留时间为3小时，口服时消除半衰期为3～4h，口服时生物利用度约为30～50％，降低了14.8％。左旋沙丁胺醇的生物半衰期很短，因此需要频繁给药保持支气管扩张作用，为了将左旋沙丁胺醇用于治疗夜间哮喘，缓释长效的左旋沙丁胺醇剂型的开发已经受到广泛关注，已经有很多研究集中在开发缓释长效的口服左旋沙丁胺醇型。而雾化吸入因其发挥疗效更快，且靶向性强，避免首过效应，施用剂量少，可以减少药物对全身其他组织的毒副作用，是目前被认为治疗哮喘最安全有效的方法，被who全球哮喘防治创议作为首选疗法。雾化吸入β2受体激动剂已经用于重度急性支气管哮喘发作的临床治疗，然而，雾化吸入的沙丁胺醇因较快的药代动力学过程，也需要频繁的给药。吸入后5～15min起效，支气管扩张时间达6小时，成人常规吸入量为0.25～0.5mg/次，按需用药。哮喘发作具有昼夜节律性，肺功能情况最好的时间是下午4时，而凌晨4时是肺功能最弱的时间，为了保证在凌晨哮喘突然发作时，患者体内仍然有有效剂量的抗哮喘药物来缓解哮喘症状，开发可以在前一天晚间服用并可以发挥药效至次日凌晨的长效抗哮喘药物是非常必要的，目前已经有长效吸入β2受体激动剂(例如沙美特罗，福莫特罗)可以有效地控制抗炎药不足以控制的夜间哮喘。此外，持续释放的茶碱和控释口服β2受体激动剂(如口服控释沙丁胺醇和特布他林)也是有效的。研究显示长效吸入β2受体激动剂优于其他长效支气管扩张剂。长效吸入β2受体激动剂是除了抗炎药物和其他标准控制措施(如环境质量控制)外，用于治疗夜间哮喘的首选方案。因雾化吸入左旋沙丁胺醇的方式优于口服摄入，而雾化吸入左旋沙丁胺醇的长效制剂的开发也非常必要，雾化吸入的长效左旋沙丁胺醇制剂将不仅能发挥雾化吸入的优势，也会有利于雾化吸入左旋沙丁胺醇用于治疗夜间哮喘。左旋沙丁胺醇需要一个合适的可以用于其肺部递送的载体，使雾化吸入的左旋沙丁胺醇不仅可以发挥及时的缓解哮
喘的作用，也可以通过载体的缓释效果使左旋沙丁胺醇持续长时间存在于作用部位并发挥药效。
4.传统口服剂型，服用量较大，不能直接作用于病患部位，需要通过肝脏的首过效应，进入循环系统作用于病患部位，起效较慢，在一定程度上限制了患者的用药。而注射液，需经过循环系统，作用于病患部位，这样药物在其他组织的分布较多，增加了药物的毒副作用，同时注射液给药存在给药部位疼痛，患者顺应性较差问题。雾化吸入溶液制剂作为呼吸道或肺部给药制剂，可以直接作用于病患部位，可提高呼吸道或肺部的给药浓度，起效快，且该制剂避免了肝脏的首过效应，减少药物的给药剂量，提高药物生物利用度，并降低药物在其他组织的分布，减少副作用。肺部吸入制剂是指药物以特殊装置给药后，再经呼吸道深部、腔道、粘膜等发挥全身或局部作用的制剂。目前临床使用的这类剂型主要包括定量吸入气雾剂(metered dose inhaler，mdi)、干粉吸入剂(dry powder inhaler,dpi)和雾化吸入剂(nebulizer)。其中雾化吸入是利用雾化吸入器的负压空间将药物制成微小的雾粒或雾滴(直径一般小于5μm)悬浮于气体中，使气体湿化后和药液吸入呼吸道，以达到湿润粘膜、消炎祛痰、解痉、平喘等作用的给药方法，它主要分为超声雾化吸入、气体压缩泵雾化吸入、智能自调式雾化吸入等方式。药物通过肺部递送，是非侵入性的方式，不仅能提供局部肺效应，而且具有较高的系统生物利用度，又能避免首过代谢，更快速的发挥治疗效果，而且肺泡提供了巨大的可用的表面积。
5.肺吸入给药是除口服、注射给药外另一种更具吸引力的给药途径。从作用时长来看，药物在肺部消除快速，半衰期短。目前关于肺部给药临床研究显示，由于肺部独特的生理特点(较大的血流量与丰富的毛细血管)，大多需多次给药，患者依从性差。因而需开发能够提高药物疗效、提高药物使用顺应性的肺部缓释制剂。其可避免肺部巨噬细胞的清除，在肺部驻留数周的纳米制剂(其保证不被呼出的机制是纳米粒团聚至微米级的团聚体后再被吸入)就是非常有潜力的肺部缓释载体。肺部给药纳米载体主要有纳米脂质体、纳米胶束、固体脂质纳米粒、微球、纳米晶、纳米乳等。
6.专利cn110898039 a公开了一种吸入用盐酸左旋沙丁胺醇溶液制剂及其制备方法。一种吸入用盐酸左旋沙丁胺醇溶液制剂包括：盐酸左旋沙丁胺醇、和/或其水合物；渗透压调节剂；ph调节剂；稳定剂和溶剂本发明提供的吸入用盐酸左旋沙丁胺醇溶液制剂，吸入溶液制剂稳定性高，质量可靠、安全性好、且贮存时间长，无需充氮气，从而简化了制备工艺，降低了对生产设备的要求，简单易操作、生产成本低，易于工业化生产。
7.专利cn111228243 a公开了一种雾化吸入用妥布霉素脂质体，由以下成份组成：妥布霉素0.1％～15.0％、磷脂0.5％～36.0％、稳定剂0.05％～20.0％、电荷修饰剂0.01％～10.0％、抗氧剂0.01％～5.0％、有机相介质5.0％～50.0％，水相介质余量；该发明的雾化吸入用妥布霉素脂质体利用雾化吸入技术，相对于口服给药，其可直接将药物传递到呼吸道，吸收快，作用迅速，提高呼吸道药物浓度；生物利用度和稳定性高，并具有良好的安全性；制备过程简单易制合理，性能稳定，为实现工业产品化创造条件。
8.一般来说，构建药物释放系统有两种策略。传统的方法是通过疏水相互作用、静电相互作用、氢键作用和π-π堆积等方式包裹疏水药物。由于该方法操作简单，被广泛用于构建药物递送系统并应用于治疗。然而，这种相对较弱的物理相互作用可能会导致给药后药物释放系统在体内血液循环中提前释放。同时，它也受到低载药量的限制。另一种策略是将
药物直接化学偶联到载体上制备前体药物纳米粒。前体药物纳米粒具有载药量高、毒副作用低、稳定性好、减少不期望的过早释放等优点。与脂质体相比，微球具有在体内和体外的更稳定物理化学行为，并可以达成缓释效果，具有较好的药理学活性，有利于将药物递送到肺部。因此，研发出一种纳米盐酸左沙丁胺醇颗粒应用于雾化吸入溶液缓释制剂将极大地提升药效，同时进一步提升药物释放时间及稳定性。


技术实现要素：

9.有鉴于现有技术中的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种药效更长久，更稳定的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂及其制备方法。
10.肺部给药是一种非侵入式给药方式。与口服给药比较，肺部具有大的吸收比表面积，且肺泡上皮细胞层薄(0.1～0.2μm)，药物透过距离短，小分子能迅速被身体吸收，生物利用度较高。此外，肺部的代谢酶活性低，对蛋白质类和多肽类药物的降解作用小。与注射给药相比，肺部给药更方便，患者顺应性高。肺部给药方式可将药物直接递送于肺部组织，特别适合肺部疾病的治疗，同时可能减少全身毒副作用。目前许多肺部给药方式通过对药物包封以制备纳米颗粒给药系统来改善药物生物；利用度低、副作用严重等缺陷，但由于制备复杂、稳定性差、载药量低、药物过早释放等原因，其应用仍然受到严重限制。本发明人通过合成一种金属酚醛网络的给药系统极大地改善了上述缺陷，该纳米药物颗粒的给药系统具有良好的稳定性、载药量以及生物相容性，其主要是通过以下方式合成：首先通过氧化还原反应制备了盐酸左沙丁胺醇二聚体，然后用所制备的改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物对其进行包封，水溶性增强的同时稳定性也有所提升，随后，将铁和单宁酸的复合网络和包封后的盐酸左沙丁胺醇二聚体进行络合，得到盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒。该纳米颗粒具有长期且优良的稳定性，并且不会过早释放，生物相容性良好，药物装载能力同样能够满足目前的装载需求。
11.本发明的技术方案：
12.一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂，主要包括以下质量分数的组分：盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒0.05～0.06％，等渗剂0.2～0.9％，ph调节剂0.001～0.005％，剩余即为溶剂。
13.所述盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
14.x1称取盐酸左沙丁胺醇6～7g加入到60～70ml二氯甲烷中，搅拌1～2h后，加入0.02～0.03g 4-二甲氨基吡啶，0.02～0.03g 3,3-二硫代二丙酸，0.5～0.6g n,n'-二环己基碳酰亚胺，升温至40～45℃回流，搅拌2～3d，反应结束后过滤，滤饼干燥，得到盐酸左沙丁胺醇二聚体；
15.x2称取d,l-乳酸0.63～0.65g，乙二醇0.27～0.30g，马来酸0.1～0.15g加入到安瓿瓶中，再加入过氧化苯甲酰0.0.3～0.04g，异辛酸亚锡0.01～0.02g，安瓿瓶抽真空后在30～35℃下干燥10～12h，然后在140～150℃下进行熔融聚合，反应20～24h，反应结束后将混合物溶于20～30ml三氯甲烷中，再加入到100～200ml乙醇中，有沉淀出现，过滤，滤饼经真空干燥得到马来酸酐改性的聚乳酸；
16.x3取步骤x2中的马来酸酐改性的聚乳酸1～1.1g溶解在5～10ml三氯甲烷中，再缓慢滴加1,4-丁二胺0.2～0.3g，在5～10℃下搅拌10～20min，再升至室温搅拌30～40min，反
应结束后将混合物加入到50～100ml乙醇中进行搅拌，有沉淀生成，过滤，滤饼用水洗至ph＝7～8，然后在35～40℃下干燥20～24h，即得到改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物；
17.x4称取盐酸左沙丁胺醇二聚体1.5～1.8g，改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物0.125～0.15g加入到5～6ml二甲基亚砜中，搅拌溶解后加入45～54ml水，超声分散1～2h，继续加入单宁酸2～2.4mg，氯化铁0.5～0.6mg，继续超声分散1～2h后以8000～10000rpm下离心，得下层沉淀，干燥后得到盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒。
18.本发明还提供了所述盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂的制备方法，包括以下步骤：
19.s1向配液器中加入50～80％总量的溶剂，加入处方量盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒，等渗剂，搅拌至其全部溶解；
20.s2加入ph调节剂调节ph；
21.s3补加溶剂至全量，搅拌使其混合均匀；
22.s4用0.45μm滤膜进行初滤，0.22μm滤膜进行精滤，均为无菌过滤，灌封于安瓿中，装量为3ml。
23.进一步的，所述溶剂为纯化水、注射用水或无菌注射用水。
24.进一步的，所述用水总量为3～4l。
25.进一步的，所述盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的处方量为4～5g。
26.进一步的，所述等渗剂为氯化钠、氯化镁、氯化钙中的一种。
27.进一步的，所述等渗剂的加入量为27～30g。
28.进一步的，所述步骤s1中溶剂搅拌温度控制在15～35℃。
29.进一步的，所述ph调节剂为盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、醋酸、磷酸、枸橼酸中的一种。
30.进一步的，所述步骤s2中调节后的ph值为4.5～5.5。
31.优选的，所述ph调节剂为硫酸或盐酸中的一种。
32.与现有技术相比，本发明的有益效果：
33.(1)本发明人通过合成一种金属酚醛网络的给药系统极大地改善了现有缺陷，该盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的给药系统具有良好的稳定性、载药量以及生物相容性；
34.(2)用雾化吸入技术，相对于口服给药，其可直接将药物传递到呼吸道，吸收快，作用迅速，提高呼吸道药物浓度，增加疗效的同时最小化全身暴露，从而降低全身性毒副作用，避免肝脏首过效应，生物利用度高，减少药剂量；相对于注射剂给药，吸入给药可提高患者依从性，也减轻或避免部分药物不良反应；
35.(3)本研究的工艺制备过程简单易制合理，性能稳定，为实现工业产品化创造条件。
具体实施方式
36.下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，但是应该明确提出这些实施例用于举例说明，但是不解释为限制本发明的范围。
37.本发明实施例中部分原料的参数如下：
38.硫酸，0.1mol/l水溶液，产品编号：68279，默克。
39.盐酸左沙丁胺醇，产品编号：phr3457，默克。
40.3,3-二硫代二丙酸，97wt％，产品编号：t30201，默克。
41.磷酸盐缓冲液，ph＝7.2～7.4，武汉普诺赛。
42.d,l-乳酸，纯度90％，上海皓鸿生物医药科技。
43.聚乳酸-羟基乙酸共聚物(50:50)，分子量：10000～20000，纯度≥99wt％,购于medchemexpress。
44.对照例1
45.一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液的制备方法，包括如下步骤：
46.s1向配液器中加入2l纯化水，加入0.73g盐酸左沙丁胺醇，27g氯化钠，搅拌至其全部溶解；
47.s2加入硫酸调节ph至5.3；
48.s3补加纯化水至3l，搅拌使其混合均匀；
49.s4用0.45μm滤膜进行初滤，0.22μm滤膜进行精滤，均为无菌过滤，灌封于安瓿中，装量为3ml。
50.实施例1
51.一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂的制备方法，包括如下步骤：
52.s1向配液器中加入2l纯化水，加入4g盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒，27g氯化钠，搅拌至其全部溶解；
53.s2加入硫酸调节ph至5.3；
54.s3补加纯化水至3l，搅拌使其混合均匀；
55.s4用0.45μm滤膜进行初滤，0.22μm滤膜进行精滤，均为无菌过滤，灌封于安瓿中，装量为3ml。
56.所述盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
57.x1称取盐酸左沙丁胺醇6g加入到60ml二氯甲烷中，搅拌2h后，加入0.02g 4-二甲氨基吡啶，0.02g 3,3-二硫代二丙酸，0.5g n,n'-二环己基碳酰亚胺，升温至40℃回流，搅拌3d，反应结束后过滤，滤饼干燥，得到盐酸左沙丁胺醇二聚体；
58.x2称取d,l-乳酸0.65g，乙二醇0.30g，马来酸0.15g加入到安瓿瓶中，再加入过氧化苯甲酰0.03g，异辛酸亚锡0.01g，安瓿瓶抽真空后在35℃下干燥12h，然后在140℃下进行熔融聚合，反应24h，反应结束后将混合物溶于30ml三氯甲烷中，再加入到100ml乙醇中，有沉淀出现，过滤，滤饼经真空干燥得到马来酸酐改性的聚乳酸；
59.x3取步骤x2中的马来酸酐改性的聚乳酸1g溶解在5ml三氯甲烷中，再缓慢滴加1,4-丁二胺0.3g，在10℃下搅拌10min，再升至室温搅拌30min，反应结束后将混合物加入到100ml乙醇中进行搅拌，有沉淀生成，过滤，滤饼用水洗至ph＝7，然后在40℃下干燥24h，即得到改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物；
60.x4称取盐酸左沙丁胺醇二聚体1.5g，改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物0.125g加入到5ml二甲基亚砜中，搅拌溶解后加入45ml水，40khz，400w下超声分散2h，继续加入单宁酸2mg，氯化铁0.5mg，继续于40khz，400w下超声分散2h后以10000rpm下离心，得下层沉淀，30℃下干燥4h后得到盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒。
61.实施例2
62.一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂的制备方法，包括如下步骤：
63.s1向配液器中加入2l纯化水，加入5g盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒，27g氯化钠，搅拌至其全部溶解；
64.s2加入硫酸调节ph至5.3；
65.s3补加纯化水至3l，搅拌使其混合均匀；
66.s4用0.45μm滤膜进行初滤，0.22μm滤膜进行精滤，均为无菌过滤，灌封于安瓿中，装量为3ml。
67.所述盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
68.x1称取盐酸左沙丁胺醇6g加入到60ml二氯甲烷中，搅拌2h后，加入0.02g 4-二甲氨基吡啶，0.02g 3,3-二硫代二丙酸，0.5g n,n'-二环己基碳酰亚胺，升温至40℃回流，搅拌3d，反应结束后过滤，滤饼干燥，得到盐酸左沙丁胺醇二聚体；
69.x2称取盐酸左沙丁胺醇二聚体1.5g，聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.125g加入到5ml二甲基亚砜中，搅拌溶解后加入45ml水，40khz，400w下超声分散2h，继续加入单宁酸2mg，氯化铁0.5mg，继续于40khz，400w下超声分散2h后以10000rpm下离心，得下层沉淀，30℃下干燥4h后得到盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒。
70.实施例3
71.一种盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂的制备方法，包括如下步骤：
72.s1向配液器中加入2l纯化水，加入4g盐酸左沙丁胺醇脂质体颗粒，27g氯化钠，搅拌至其全部溶解；
73.s2加入硫酸调节ph至5.3；
74.s3补加纯化水至3l，搅拌使其混合均匀；
75.s4用0.45μm滤膜进行初滤，0.22μm滤膜进行精滤，均为无菌过滤，灌封于安瓿中，装量为3ml。
76.所述盐酸左沙丁胺醇脂质体颗粒的制备方法，包括如下步骤：
77.x1称取卵磷脂8g，胆固醇24g，盐酸左沙丁胺醇4g，加入100ml丙酮溶解，随后旋转蒸发旋干溶剂，再加入磷酸盐缓冲液水化500ml得混悬液；
78.x2将步骤x1中的混悬液在冰浴条件下于40khz，400w下超声30min，经0.8μm微孔滤膜过滤后进行喷雾干燥，温度控制在35℃，压力为0.4mpa，干燥24h，得盐酸左沙丁胺醇脂质体颗粒。
79.测试例1
80.对对照例及实施例中制备的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂进行体外释放试验，具体的实验方法为体外释放实验是将所制备的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂装在透析袋中，并放进37℃的pbs(ph＝7.4)溶液中，在特定的时间点取样检测盐酸左沙丁胺醇的释放量，从而考察盐酸左沙丁胺醇包封后的缓释作用。每组平行取三批，并检测每一批载药量，最终结果取平均值。依次将3批制备好的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂各取出2ml，分别装在3个干净并且无破漏的透析袋中，透析袋两端用绳子绑紧，仔细检查是否有漏液现象。用容量瓶精确量取50ml的pbs缓冲液(ph＝7.40)，分别装于3个干净的100ml瓶中，在磁力搅拌器的加热板上进行水浴加热，设置温度为37℃，转速为50rpm。待瓶中的pbs缓冲液一直保持37℃后，将的透析袋分别放进瓶中，立即开始计时，在以下时间点(0.5h、
2h、8h、35h、120h、192h)取瓶中的样品1ml，加入1ml pbs。将3批释放样品用在13000rpm下离心5分钟，取800μl上层清液用于液相色谱仪检测，所检测的释放量为该时间后的累计释放量。
81.具体测试结果见表1.
82.表1体外释放试验
[0083][0084]
体外释放试验研究是为了验证假设包封后盐酸左沙丁胺醇在体外生理条件下可以产生持续释放的效果。从体外释放试验的结果可以看出，对照例1中没有对盐酸左沙丁胺醇进行包封，其在8h已经释放了90.8％，基本已经完全释放，而实施例1～3中的盐酸左沙丁胺醇包封物均表现出缓释效果，实施例1中的盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒缓释效果最佳，这可能是由于单宁酸分子和铁离子的紧密结合形成复合网络，而盐酸左沙丁胺醇二聚体络合在其中因此缓释效果得以增强，使得有效成分能够维持稳定且长效的缓释效果，该络合结构的稳定性也进一步保证了缓释效果。
[0085]
测试例2
[0086]
对对照例及实施例中制备的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂进行存储稳定性实验，每组平行取5批样品，其中中三批于4℃存放，并分别存放10天、20天、30天，另外两批存放于25℃，并分别存放10天、20天。在不同温度条件下存放到期后，取样100μl用于检测包封率。具体测试结果见表2.
[0087]
表2存储稳定性实验结果表
[0088][0089][0090]
从存储稳定性实验可以看出，实施例1～3中实施例1,2的稳定性明显优于实施例3，实施例3中盐酸左沙丁胺醇脂质体的包封在低温条件下较为稳定，包封率经历较长时间的保存仍能保证一定的包封率，但是当温度较高时脂质体表面包封的磷脂和胆固醇有可能发生降解，使得其中的有效物质发生渗漏，而实施例1中由于使用了所制备的改性的聚(d,l-乳酸-乙二醇)聚合物对活性物进行包封，水溶性增强的同时稳定性也有所提升，并且单宁酸分子和铁离子的紧密结合形成复合网络，盐酸左沙丁胺醇二聚体络合在其中因此稳定性较佳，在温度较高的情况下也能保证不会发生有效成分的泄露。
[0091]
测试例3
[0092]
对对照例及实施例中制备的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂进行实验体内药效实验，本实验中使用的动物是普通级白化豚鼠，均购于南方医科大学动物实验中心，雌雄各半，体重290
±
40g，给予适量的水和食物饲养于25
±
2℃，湿度为60
±
5％的环境中，12小时交替光照。依次将豚鼠放入多功能诱咳引喘仪的4升密闭钟罩内，用超声雾化器以0.15ml/min的雾化速度向密闭钟罩内雾化0.6％组胺溶液(以生理盐水配制)15s，停止雾化后观察豚鼠的引喘潜伏期，即从喷雾开始到豚鼠出现哮喘症状呼吸困难，发生抽搐并跌倒的时间，潜伏期超过2min者弃去，通过筛选的豚鼠，可自由饮食喝水，在实验前一天将待试验动物禁食。取筛选后的豚鼠，称重后以1.25g/kg的量将乌拉坦溶液通过腹腔注射麻醉豚
鼠，约半小时待豚鼠完全麻醉后，将豚鼠腹部向上固定好四肢和头部，然后小心剖开颈部皮肤，实施颈静脉插管(插管需用0.1％的肝素钠溶液润洗并充满管道)和气管插管，每组取三只豚鼠，所有实验结果取平均值。将气管插管通过描记箱壁的上相同直径的孔管引伸到描记箱外并连接上1l的流量头，用于呼吸流速的测定；然后在豚鼠右胸第四、五根肋骨之间插入胸内压插管，该插管通过导管从描记箱侧边的开孔连接到压力换能器，即可进行记录胸内压、呼吸流速变化及潮气量。以1ml/min的速度静脉注射15μg/ml的组胺0.5ml，观察动物的生理状态，此时动物会发生气急呼吸困难的症状，记录参数中可以见到潮气量变小、胸内压增大、呼吸流速减小以及呼吸频率加快等指标的变化，静脉给刺激结束后，继续记录各参数，待动物状态稳定后(约15-30min)，开始给药与给刺激的步骤。撤离连接到描记箱壁上的流量头，连接压缩雾化器的喷头，使其与气管插管相连，给动物雾化吸入1mg/ml盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂2min，撤离给药装置，重新连接流量头于导出的气管插管，待动物稳定约4min后，静脉注射15μg/ml组胺0.5ml，观察参数的变化，等待动物状态稳定，继续记录参数。待给药完4h后，静脉注射15μg/ml组胺0.5ml，观察参数的变化，等待动物状态稳定，继续记录参数约5min。根据气道阻力＝胸内压的变化值/呼吸流速变化值，动态肺顺应性＝潮气量/胸内压变化值计算出上述值，将给药后与给药前的上述值进行相减后除以给药前的数值即得到两种参数的变化率，具体实验结果见表3.
[0093]
表3体内药效实验结果表
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豚鼠的哮喘模型比大鼠或小鼠更适合作为人类气道药理学模型；本实验中使用磷酸组胺诱发豚鼠气道高反应性来建立哮喘模型，它的作用原理是通过激动h1受体，引起支气管平滑肌收缩。豚鼠对组织胺极敏感，能快速造模，停止组胺刺激后，豚鼠又快速回复正常呼吸，是常用的“速发型”支气管收缩模型。这种模型的发病机制与人类的哮喘症相仿，同样属于ⅰ型变态反应，可以很好地模拟人类哮喘急性发作的病症，例如气急、喘息、呼吸困难等。目前最主要的测定肺功能的呼吸力学生理指标是：气道阻力和动态肺顺应性。气道阻力是指气道内单位流量所产生的压力差，以每秒内通气量所产生的压力差表示。动态肺顺应性是指单位压力改变时所引起的肺容积的改变，它代表了胸腔压力改变对肺容积的影响，其检测结果在临床中可初步用于评价患者的肺功能。以上两个指标相互结合可以很好的反映气道的通气功能，对照例及实施例与空白对照组相比在给药后气道阻力上升率出现明显下降，动态肺顺应性下降率明显上升，这说明豚鼠的哮喘在进行雾化后明显得到了缓解，但是时间延长后不同组的缓解哮喘效果均发生了变化，对照例1中缓解哮喘的效果明显变差，而实施例1则维持较佳，这可能是由于盐酸左沙丁胺醇复合纳米颗粒的优良的稳定性和长效的缓释效果所造成的，这一实验很好地证明了所制备的盐酸左沙丁胺醇雾化吸入溶液缓释剂对于缓解哮喘能够持续更长时间。