一种多西他赛中间体中DMAP残留的快速检测方法与流程

一种多西他赛中间体中dmap残留的快速检测方法
技术领域
1.本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种多西他赛中间体中dmap残留的快速检测方法。


背景技术：

2.多西他赛也叫多西紫杉醇，属于紫杉烷类化合物抗肿瘤药，作用机制是加强微观蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性微管束，因而破坏肿瘤细胞的有丝分裂。
3.目前多西他赛都是由天然提取产物10-去乙酰基巴卡亭ⅲ通过半合成得到，在此合成过程中会用到dmap，dmap学名为4-二甲氨基吡啶，白色结晶粉末，分子式为c7h10n2，dmap难溶于水、己烷和环己烷，易溶于乙醇、苯、氯仿、甲醇和乙酸乙酯等。dmap具有一定的毒性和腐蚀性，所以在多西他赛中间体中对dmap残留的控制非常重要。
4.目前公开号为cn105891348a名称为抗生素类药物原料中毒性杂质dmap的检测方法的中国专利，将抗生素类药物原料溶解稀释并离心后得到的上清液，通过高效液相色谱四级杆串联线性离子肼质谱，从而检测出抗生素类药物原料毒性杂质dmap的含量，所述高效液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和乙腈溶液的混合液，所述四级杆串联线性离子肼质谱对dmap检测的母离子为质荷比(m/z)122.7、子离子为质荷比(m/z)107.1。但是乙酸铵在水溶液中会发生微弱水解，其反应式为nh
4
ch3coo- h2o＝nh3·
h2o ch3cooh，其会干扰dmap的分离，影响dmap色谱检测结果。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种多西他赛中间体中dmap残留的快速检测方法，其优点在于dmap的分离度好，专属性强、检测灵敏度高,检测方法快速灵敏。
6.本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
7.一种多西他赛中间体中dmap残留的快速检测方法，其特征在于，包括：将多西他赛中间体溶解得到利用高效液相色谱法对多西他赛中间体中dmap的残留进行检测，所述高效液相色谱法的色谱柱以流动相进行梯度洗脱，所述流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为磷酸二氢钠水溶液，流动相b为乙腈，梯度洗脱中流动相a和流动相b比例范围为70～90：10～30，检测波长为210nm。
8.进一步的，所述色谱柱为waterssunfire-c18，所述色谱柱规格为4.6*250mm，3.5μm。
9.进一步的，所述流动相中磷酸二氢钠的浓度为20mmol/l。
10.进一步的，所述流动相的ph值为3.0。
11.进一步的，所述流动相使用的稀释剂为乙腈、甲醇及乙腈甲醇混合溶液中的一种。
12.进一步的，所述稀释剂为甲醇乙腈溶液。
13.进一步的，所述甲醇乙腈溶液中甲醇乙腈和水的体积为1：9。
14.进一步的，梯度洗脱中所述流动相a和流动相b比例为75：25。
15.进一步的，所述色谱柱的柱温范围为30～50℃。
16.进一步的，所述色谱柱的柱温为45℃。
17.综上所述，本发明具有以下有益效果：
18.1.采用乙腈和20mmol/l磷酸二氢钠水溶液进行洗脱，因为dmap是一种强极性碱性化合物，其在常用的色谱上保留少，导致dmap和常规溶剂峰无法明显的分离，采用磷酸二氢钠，其本身属于无机酸式盐，并且将液相ph值调节到3.0，实现反相色谱分离，实现dmap在色谱柱上。
19.2.严格控制温度范围25～75℃，在该洗脱梯度下，不仅仅保证检测样品的结构完整性，dmap的检测不受空白干扰，dmap峰型好，检测灵敏度高。
20.3.检测试剂配制简单，检测条件容易达成，方便快速监测dmap残留。
附图说明
21.图1是实施例中空白溶液的色谱图。
22.图2是实施例中dmap对照品溶液的色谱图。
23.图3是实施例中混合对照品溶液的色谱图。
24.图4是实施例中加标供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
25.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和具体实施方式对本发明提出的方案作进一步详细说明。根据下面说明，本发明的优点和特征将更清楚。
26.实施例：
27.一种多西他赛中间体中dmap残留的快速检测方法，包括以下步骤：
28.s1、检测准备：
29.质谱分析仪：安捷伦1260。
30.dad检测器。安捷伦openlab cds2.3软件系统。
31.色谱柱：waterssunfire-c18，150mm
×
4.6mm，3.5μm。
32.s2、流动相准备：
33.流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为20mmol/l磷酸二氢钠水溶液(ph3.0)，流动相b为乙腈。
34.梯度洗脱中流动相a和流动相b比例范围为70～90：10～30，本实施例中，以流动相a和流动相b比例为75：25进行梯度洗脱。
35.s3、梯度洗脱参数设置：
36.检测波长210nm，进样量20ul，流速1.2ml/min,柱温45℃，进样量为20μl。梯度洗脱表，见表1。
[0037][0038]
表1
[0039]
检测实验：
[0040]
空白溶液/稀释剂：10％甲醇乙腈溶液。
[0041]
对照溶液：精密称取dmap对照品适量，用稀释剂溶剂并稀释成每ml含有约3μg的溶液，作为对照溶液。
[0042]
混合对照品溶液：分别精密称取中间体杂质ⅱa、ⅱb、ⅱc、多西他赛中间体ⅰ、中间体杂质ⅱd、ⅱe适量，加入稀释剂溶解并稀释制成每ml含各杂质约10μg的溶液，作为混合对照溶液。
[0043]
加标供试品溶液：称取多西他赛中间体ⅱ适量，加入对照品溶液溶解并稀释成每1ml含有约10mg的溶液，作为加标供试品溶液。
[0044]
分别取上述空白溶液，对照品溶液和供试品溶液进样检测，记录色谱图。
[0045]
实验结果：
[0046]
空白溶液的色谱图见图1。
[0047]
对照溶液的色谱图见图2。
[0048]
混合对照品溶液的色谱图见图3。
[0049]
加标供试品溶液的色谱图见图4。
[0050]
详细对照品溶液中dmap检测结果见下表2。
[0051]
详细加标供试品溶液中dmap的回收率检测结果见下表3。
[0052]
溶液类型rt(min)areas/n对照品溶液11.11324.730213对照品溶液21.11324.133117对照品溶液31.11124.003243对照品溶液41.10723.664133对照品溶液51.10723.631197rsd(％)0.31.9n/a
[0053]
表2
[0054][0055][0056]
表3
[0057]
结果分析：
[0058]
该检测结果中，空白溶液不干扰检测，连续5针对照品溶液中dmap的保留时间的rsd值小于1％，峰面积的rsd值小于10％，对照品溶液中dmap的信噪比大于100；混合对照品溶液不干扰dmap的检测；加标供试品溶液中dmap与相邻杂质的分离度大于2.0，加标供试品溶液中dmap的回收率在90％-110％之间。
[0059]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0060]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。