效价测定的制作方法

技术特征：
1.用于评估人间充质干细胞(msc)效价的方法，包括：用促炎性细胞因子或其他促炎性分子刺激msc群；鉴别所述msc产生抗炎细胞因子；和量化所述msc产生的抗炎细胞因子的水平。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述促炎性细胞因子是tnf-α、il-17a或其组合。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述促炎性细胞因子是tnf-α。4.根据权利要求1所述的方法，其中刺激步骤进行1小时到24小时。5.根据权利要求1所述的方法，其中以0.1pg/ml至1μg/ml的量，向所述msc施用所述促炎性细胞因子。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述msc来源于骨髓、脂肪组织、外周血、肺、心脏、羊水、内部器官、羊膜、脐带或胎盘或其他组织，或从诱导多能干细胞(ipsc)或其他来源分化而来。7.根据权利要求1所述的方法，其中可以鉴别和量化的所述抗炎细胞因子选自由il-1ra、il-4、il-7、il-8、il-10、il-13、g-csf及其组合组成的组。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在用所述促炎性细胞因子刺激前，检查所述msc上生物标记的表达的步骤。9.根据权利要求8所述的方法，其中探寻的生物标记包括cd105

、cd90

、cd73

、cd45-、cd34-、cd19-、cd11b-、il-17ra

、hla-dr-或其任何组合。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还可以包括在用所述促炎性细胞因子刺激前，将所述msc接种到基质上的步骤。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述基质是具有或不具有添加的基质涂层的膜、塑料表面、玻璃表面或细胞培养孔板，例如96孔板。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述将所述msc接种到基质上持续1小时到24小时。13.根据权利要求1所述的方法，其中在用所述促炎性细胞因子刺激前，将所述msc分成较小的msc群。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在用所述促炎性细胞因子刺激后分离所述msc的上清液的步骤。15.根据权利要求14所述的方法，其中一旦从所述msc中分离出所述上清液，就将其冷冻保存。16.根据权利要求14所述的方法，其中用电化学发光免疫测定或其他测定来分析所述上清液，以确定所述msc产生的抗炎细胞因子的水平。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在用所述促炎性细胞因子刺激所述msc后，对所述msc进行活力分析。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述活力分析是atp检测分析、四氮唑还原分析、刃天青还原分析、蛋白酶活力标记分析、钠钾比分析、细胞溶解或膜渗漏分析、线粒体活性或半胱氨酸天冬氨酸酶分析、功能分析、基因组和蛋白质组分析或其任何组合。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述活力分析包括使用流式细胞术。20.根据权利要求17所述的方法，其中，与用媒介处理的msc群相比，用促炎性细胞因子
刺激后所述msc的活力大70％。21.根据权利要求17所述的方法，还包括根据所产生的抗炎分子的量为所述msc的效价指定等级。

技术总结
一种评估MSC响应促炎性刺激产生抗炎细胞因子的效价的方法。该方法包括用一种或多种促炎性细胞因子(例如TNF-α)刺激MSC一段时间，然后鉴别和量化抗炎细胞因子的产生。响应TNF-α产生有效水平的抗炎细胞因子的MSC可以用于治疗衰老相关疾病状况，包括衰老衰弱和阿尔茨海默病，也可用于治疗冠状病毒感染。该方法表明，TNF-α诱导的MSC稳健分泌多种抗炎细胞因子，包括IL-1受体拮抗剂(IL-1RA)、IL-10和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。CSF)。CSF)。


技术研发人员：安东尼
受保护的技术使用者：美商生命科学有限公司
技术研发日：2021.04.20
技术公布日：2023/1/13