细胞的制作方法

技术特征：
1.细胞，其共表达：(i)在细胞表面的第一嵌合抗原受体(car)，其包含与cd19结合的抗原结合域；(ii)在细胞表面的第二car，其包含与cd22结合的抗原结合域；(iii)显性阴性shp2(dshp2)；和(iv)显性阴性tgfβ受体ii(dntgfβrii)。2.根据权利要求1的细胞，其中每个car包含细胞内信号传导域，其中所述第一car的细胞内信号传导域包含tnf受体家族胞内域；并且所述第二car的细胞内信号传导域包含共刺激胞内域。3.根据权利要求2的细胞，其中所述共刺激域是cd28共刺激胞内域。4.根据权利要求2或3的细胞，其中所述tnf受体家族胞内域是ox-40或4-1bb胞内域。5.根据权利要求2、3或4中任一项的细胞，其中所述第一car和所述第二car的细胞内信号传导域还包含含有itam的域。6.根据权利要求1至5中任一项的细胞，其中每个car包含：(i)抗原结合域；(ii)间隔物；和(iii)跨膜域；其中所述第一car的间隔物与所述第二car的间隔物不同。7.根据权利要求6的细胞，其中所述第二car的间隔物包含软骨寡聚基质蛋白(comp)卷曲螺旋域。8.根据权利要求1至7中任一项的细胞，其中所述第一car包含cd19结合域，其包含a)重链可变区(vh)，其具有含有以下序列的互补决定区(cdr)：cdr1
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sywmn(seq id no.1)；cdr2
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qiwpgdgdtnyngkfk(seq id no.2)；cdr3
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retttvgryyyamdy(seq id no.3)；和b)轻链可变区(vl)，其具有含有以下序列的cdr：cdr1
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kasqsvdydgdsyln(seq id no.4)；cdr2
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dasnlvs(seq id no.5)；cdr3
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qqstedpwt(seq id no.6)。9.根据权利要求8的细胞，其中所述cd19结合域包含具有如seq id no.7或seq id no 8所示的序列的vh域；或具有如seq id no 9、seq id no.10或seq id no.11所示的序列的vl域，或其具有至少90％序列同一性的变体，所述变体保留结合cd19的能力。10.根据权利要求9的细胞，其中所述cd19结合域包含如seq id no12、seq id no.13或seq id no.14所示的序列，或其具有至少90％序列同一性的变体，所述变体保留结合cd19的能力。11.根据权利要求1至7中任一项的细胞，其中所述第二car包含cd22结合域，其包含a)重链可变区(vh)，其具有含有以下序列的互补决定区(cdr)：cdr1
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nywin(seq id no.15)；cdr2
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niypsdsftnynqkfkd(seq id no.16)；cdr3
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dtqerswyfdv(seq id no.17)；和
b)轻链可变区(vl)，其具有含有以下序列的cdr：cdr1
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rssqslvhsngntylh(seq id no.18)；cdr2
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kvsnrfs(seq id no.19)；cdr3
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sqsthvpwt(seq id no.20)。12.根据权利要求11的细胞，其中所述cd22结合域包含具有如seq id no.21或seq id no 22所示的序列的vh域；或具有如seq id no 23或seq id no.24所示的序列的vl域，或其具有至少90％序列同一性的变体，所述变体保留结合cd22的能力。13.根据权利要求11的细胞，其中所述cd22结合域包含如seq id no25或seq id no.26所示的序列，或其具有至少90％序列同一性的变体，所述变体保留结合cd22的能力。14.根据权利要求1至13中任一项的细胞，其中所述第一car具有以下结构：agb1-间隔物1-tm1-tnf-itam其中：agb1是所述第一car的抗原结合域；间隔物1是所述第一car的间隔物；tm1是所述第一car的跨膜域；tnf是tnf受体胞内域；和itam是含有itam的胞内域；并且所述第二car具有以下结构：agb2-间隔物2-tm2-costim-itam其中：agb2是所述第二car的抗原结合域；间隔物2是所述第二car的间隔物；tm2是所述第二car的跨膜域；costim是共刺激域；和itam是含有itam的胞内域。15.核酸序列，其编码如权利要求1至14中任一项所定义的第一和第二嵌合抗原受体(car)、dshp2和dntgfβrii。16.根据权利要求15的核酸序列，其具有以下结构：模块1-coexpr-agb1-间隔物1-tm1-coexpr-agb2-间隔物2-tm2-coexpr-模块2其中agb1是编码所述第一car的抗原结合域的核酸序列；间隔物1是编码所述第一car的间隔物的核酸序列；tm1是编码所述第一car的跨膜域的核酸序列；coexpr是能够实现共表达的核酸序列；agb2是编码所述第二car的抗原结合域的核酸序列；间隔物2是编码所述第二car的间隔物的核酸序列；tm2是编码所述第二car的跨膜域的核酸序列；模块1和模块2是编码显性阴性shp2(dshp2)或显性阴性tgfβrii(dntgfβrii)的核酸序列，其中当模块1编码dshp2时，模块2编码dntgfβrii，并且当模块2编码dntgfβrii时，模块1
编码dshp2；当核酸序列在t细胞中表达时，其编码在切割位点被切割的多肽，使得所述第一car和所述第二car在t细胞表面共表达。17.根据权利要求16的核酸序列，其中coexpr编码包含自切割肽的序列。18.根据权利要求16或17的核酸序列，其中替代密码子被用于编码相同或相似氨基酸序列的序列区，以避免同源重组。19.载体，其包含权利要求15至18中任一项的核酸序列。20.根据权利要求19的逆转录病毒载体或慢病毒载体或转座子。21.用于制备根据权利要求1至14中任一项的细胞的方法，其包括引入根据权利要求15至18中任一项的核酸序列；或根据权利要求19或20的载体至细胞中的步骤。22.根据权利要求21的方法，其中所述细胞来自从受试者分离的样品。23.药物组合物，其包含多个根据权利要求1至14中任一项的细胞。24.用于治疗和/或预防疾病的方法，其包括向受试者施用根据权利要求23的药物组合物的步骤。25.根据权利要求24的方法，其包括以下步骤：(i)从受试者分离含有细胞的样品；(ii)用根据权利要求15至18中任一项的核酸序列；或根据权利要求19或20的载体转导或转染所述细胞；和(iii)将来自(ii)的所述细胞施用于所述受试者。26.根据权利要求24或25的方法，其中所述疾病是癌症。27.根据权利要求26的方法，其中所述癌症是b细胞恶性肿瘤。28.根据权利要求23的药物组合物，其用于治疗和/或预防疾病。29.根据权利要求1至14中任一项的细胞在制备用于治疗和/或预防疾病的药物中的用途。30.试剂盒，其包含(i)第一核酸序列，其编码第一嵌合抗原受体(car)，该核酸序列具有以下结构：agb1-间隔物1-tm1其中agb1是编码与cd19结合的所述第一car的抗原结合域的核酸序列；间隔物1是编码所述第一car的间隔物的核酸序列；tm1是编码所述第一car的跨膜域的核酸序列；(ii)第二核酸序列，其编码第二嵌合抗原受体，该核酸序列具有以下结构：agb2-间隔物2-tm2其中agb2是编码与cd22结合的所述第二car的抗原结合域的核酸序列；间隔物2是编码所述第二car的间隔物的核酸序列；和tm2是编码所述第二car的跨膜域的核酸序列；和(iii)第三核酸序列，其编码本文所述的dshp2和dntgfβrii。31.试剂盒，其包含：第一载体，其包含如权利要求30所定义的第一核酸序列；第二载
体，其包含如权利要求30所定义的第二核酸序列；以及第三载体，其包含如权利要求30所定义的第三核酸序列。

技术总结
本发明涉及细胞，其共表达：(i)在细胞表面的第一嵌合抗原受体(CAR)，其包含与CD19结合的抗原结合域；(ii)在细胞表面的第二CAR，其包含与CD22结合的抗原结合域；(iii)显性阴性SHP2(dSHP2)；和(iv)显性阴性TGFβ受体II(dnTGFβRII)。(dnTGFβRII)。(dnTGFβRII)。


技术研发人员：S.斯里瓦斯塔瓦 S.科尔多巴 S.奥诺哈 S.托马斯 M.普勒
受保护的技术使用者：奥托路斯有限公司
技术研发日：2021.05.06
技术公布日：2022/12/30