一种人参皂苷米托蒽醌脂质体、其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，其包括如下质量分数的组分：5-15份磷脂、0.1-4份人参皂苷、1份米托蒽醌盐；所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体不包含胆固醇。2.如权利要求1所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体满足如下一个或多个条件：(1)所述人参皂苷米托蒽醌脂质体还包括0.1-2份peg-dspe，较佳地，所述peg-dspe为peg2000-dspe；(2)所述的米托蒽醌盐为盐酸米托蒽醌通过ph梯度法与盐溶液进行离子交换得到的米托蒽醌盐，所述的盐溶液为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；较佳地，所述的盐溶液为硫酸铵水溶液、蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、甲基磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或丙二磺酸三乙胺水溶液；更佳地，所述的盐溶液为硫酸铵水溶液、蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、甲基磺酸铵水溶液或乙二磺酸三乙胺水溶液；例如硫酸铵水溶液；(3)所述的米托蒽醌盐为硫酸米托蒽醌、蔗糖八硫酸米托蒽醌、甲基磺酸米托蒽醌、米托蒽醌甲基磺酸、米托蒽醌乙二磺酸、米托蒽醌丙二磺酸、米托蒽醌乙二磺酸或米托蒽醌丙二磺酸；较佳地，所述的米托蒽醌盐为硫酸米托蒽醌、蔗糖八硫酸酯米托蒽醌或米托蒽醌甲基磺酸盐；例如硫酸米托蒽醌；(4)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体中，所述的人参皂苷与所述的磷脂形成磷脂膜，较佳地，所述的磷脂膜还包括peg-dspe；(5)所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.975m；例如0.05m、0.1m、0.2m、0.3m、0.325m、0.65m、0.975m或0.16m；(6)所述的磷脂选自氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂和脑磷脂中的一种或多种；较佳地，所述的磷脂为氢化磷脂或蛋黄卵磷脂；(7)所述的人参皂苷选自20(s)-人参皂苷rg3、人参皂苷伪rg3、20(s)-人参皂苷rh2、人参皂苷rg5、人参皂苷rk1和人参皂苷rp1中的一种或多种，较佳地，所述的人参皂苷为20(s)-人参皂苷rg3和/或20(s)-人参皂苷rh2；(8)所述的米托蒽醌盐与所述的人参皂苷的质量比为1:(0.1～4)；例如所述的米托蒽醌盐与所述的人参皂苷的质量比为1:1或1:1.5；(9)所述人参皂苷的hplc纯度≥99％；(10)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体粒径d90≤150nm。3.如权利要求2所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体满足如下一个或多个条件：(1)所述的盐酸米托蒽醌为盐酸米托蒽醌水溶液，较佳地，所述的盐酸米托蒽醌水溶液的浓度为10mg/ml；(2)所述的盐酸米托蒽醌与所述的磷脂的质量比为1:(5～15)；例如，所述的盐酸米托蒽醌与氢化磷脂的质量比为1:10；(3)所述的磷脂膜的内侧为内水相，所述的磷脂膜的外侧为外水相，所述的米托蒽醌盐被包封于所述的内水相中；所述的米托蒽醌盐为米托蒽醌盐不溶盐；较佳地，所述的内水相为所述盐溶液，所述的外水相为生理等渗溶液；例如生理等渗溶液为5％葡萄糖水溶液或10％蔗糖水溶液；
(4)当所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.3m，例如0.1m、0.2m或0.3m；(5)当所述的盐溶液为乙二磺酸三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m；(6)当所述的盐溶液为甲基磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.325m-0.975m；(7)当所述的盐溶液为硫酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m，例如0.325；(8)所述的磷脂的质量分数为10份；(9)所述的peg-dspe的质量分数为0.5份；(10)所述的人参皂苷的质量分数为1份；(11)所述的米托蒽醌盐的质量分数为1份；(12)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体为如下质量分数的组分：10份磷脂、0.5份peg-dspe、1份人参皂苷、1份硫酸米托蒽醌。4.一种人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤；步骤1、将磷脂溶解于有机溶剂中得混合物a1，然后将混合物a1与盐溶液水化，得到脂质体溶液a1；步骤2、其为方案1或方案2；方案1：高压均质法，包括如下步骤：将步骤1得到的脂质体溶液a1进行高压均质，控制粒径d90在100nm以下，得到脂质体溶液a2a；方案2：挤出法，包括如下步骤：将步骤1得到的所述的脂质体溶液a1，分别依次通过各孔径挤出板挤出，控制粒径d90在100nm以下，得到脂质体溶液a2b；步骤3、将步骤2中得到的脂质体溶液a2a或a2b，置于透析袋中，以等渗溶液作为透析介质进行透析；得到脂质体溶液a3；步骤4、将步骤3中得到的脂质体溶液a3与盐酸米托蒽醌水溶液混合，得脂质体溶液a4；步骤5、将步骤4得到的脂质体溶液a4与人参皂苷溶液中混合，置于透析袋中，以上述步骤3相同的等渗溶液作为透析介质进行透析；得人参皂苷米托蒽醌脂质体溶液a5。5.如权利要求4所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法满足如下一个或多个条件：(1)所述的磷脂选自氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂和脑磷脂中的一种或多种；较佳地，所述的磷脂为氢化磷脂或蛋黄卵磷脂；(2)所述的盐酸米托蒽醌与所述的磷脂的质量比为1:(5～15)；例如，所述的盐酸米托蒽醌与氢化磷脂的质量比为1:10；(3)所述的人参皂苷选自20(s)-人参皂苷rg3、人参皂苷伪rg3、20(s)-人参皂苷rh2、人参皂苷rg5、人参皂苷rk1和人参皂苷rp1中的一种或多种，较佳地，所述的人参皂苷为20(s)-人参皂苷rg3和/或20(s)-人参皂苷rh2；(4)所述的盐酸米托蒽醌与所述的人参皂苷的质量比为1:(0.1～4)；例如所述的盐酸米托蒽醌与所述的人参皂苷的质量比为1:1或1:1.5；
(5)所述人参皂苷的hplc纯度≥99％；(6)所述的盐溶液为硫酸铵、蔗糖八硫酸酯三乙胺、甲基磺酸铵、甲基磺酸三乙胺；乙二磺酸铵、丙二磺酸铵、乙二磺酸三乙胺、丙二磺酸三乙胺等水溶液，例如，硫酸铵水溶液；(7)所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.975m；例如0.05m、0.1m、0.2m、0.3m、0.325m、0.65m、0.975m或0.16m；更佳地，当所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.3m，例如0.1m、0.2m或0.3m；更佳地，当所述的盐溶液为乙二磺酸三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m；更佳地，当所述的盐溶液为甲基磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.325m-0.975m；更佳地，当所述的盐溶液为硫酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m，例如0.325；(8)所述人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法还包括以下步骤中的一步或多步：步骤6、将步骤5得到的所述的脂质体溶液a5和peg-dspe生理等渗溶液混合，得到脂质体溶液a6；步骤7、将步骤5得到的脂质体溶液a5或步骤6得到的脂质体溶液a6除菌过滤、灌装。6.如权利要求5所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法，其特征在于，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的制备方法满足如下一个或多个条件：(1)所述的步骤1中，所述的有机溶剂为乙醇；例如无水乙醇；(2)所述的步骤1中，所述的磷脂与所述的有机溶剂的质量体积比为1g/1～10ml，例如1g/2ml；(3)所述的步骤1中，为将所述的磷脂加热溶解于有机溶剂中得到所述的混合物a1；例如，所述的加热可为水浴加热至55-65℃，例如60℃；(4)所述的步骤1中，所述的水化的温度可为55-65℃，例如，60℃；(5)所述的步骤1中，所述的水化为在旋蒸瓶中进行，转速为40～60rp/min，例如50rp/min；(6)所述的步骤1中，所述的水化的时间与反应规模相关，以使溶液均一即可，例如2-4小时；(7)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质为在均质机中使用0～10℃冷冻水冷切循环；较佳地，确保脂质体溶液的温度在5-10℃；(8)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的压力在800-1400bar之间，例如1200bar；(9)所述的步骤2的方案1中，所述的高压均质的次数为3-4次，例如4次；(10)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的温度为35-45℃，例如40℃；(11)所述的步骤2的方案2中，所述挤出板的孔径为800nm，400nm，200nm，100nm；(12)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的压力为600～800psi；例如800psi；(13)所述的步骤2的方案2中，所述挤出的次数可为4-10次，例如4次；(14)所述的步骤2的方案2中，所述的溶液a1，分别依次通过孔径分别为800nm、400nm、
200nm或100nm的聚碳酯膜过滤板；(15)所述的步骤3中，所述的透析袋的截留分子量为8000～15000，例如，截留分子量为10000；(16)所述的步骤3中，所述的等渗溶液为5％葡萄糖或10％蔗糖水溶液；(17)所述的步骤3中，所述的溶液a2a或a2b与所述的等渗溶液的体积比为1:1000；(18)所述的步骤3中，所述的透析的温度为0-10℃，例如4℃；(19)所述的步骤3中，所述的透析的时间以完全去除所述的溶液a2a或a2b脂质体中外水相中的所述的盐溶液，较佳地，所述的透析的时间为10-18小时，例如12小时；(20)所述的步骤3中，为将所述将步骤2中得到的脂质体溶液a2a或a2b，置于透析袋中，以等渗溶液作为透析介质，4℃透析12小时，样品与透析介质体积比为1：1000，透析期间每4小时更换1次透析液，完全去除空白脂质体外水相中的酸根离子，得到由等渗溶液组成的外水相，由酸根盐溶液为内水相的空白脂质体；(21)所述的步骤4中，所述的盐酸米托蒽醌水溶液的浓度为5～20mg/ml，例如1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml或20mg/ml；优选地为10～15mg/ml；(22)所述的步骤4中，为将所述的步骤3中得到的溶液a3与所述的盐酸米托蒽醌水溶液，按照体积比为1：1混合，并于50-60℃水浴中孵育40分钟，即得人参皂苷米托蒽醌脂质体；具体地，该脂质体内水相为酸根米托蒽醌不溶盐，该脂质体外水相为等渗溶液；(23)所述的步骤5中，所述的人参皂苷溶液的浓度为5～20mg/ml，例如10mg/ml；(24)所述的步骤5中，所述的人参皂苷溶液的溶剂同步骤1中的溶剂；(25)所述的步骤5中，所述的混合为搅拌，较佳地，所述搅拌时间为30-60分钟，例如45分钟；(26)所述的步骤5中，所述的透析袋的截留分子量为8000～15000，例如，截留分子量为10000；(27)所述的步骤5中，为将所述人参皂苷溶液缓慢加入到所述步骤4中得到的脂质体溶液a4，搅拌，挥发除去大部分乙醇，然后再置于透析袋中，以上述步骤3相同的等渗溶液作为透析介质，4℃透析12小时，样品与透析介质体积比为1：1000，透析期间每4小时更换1次透析液，完全去除乙醇溶剂、无机盐、未包裹的盐酸米托蒽醌和人参皂苷，即得脂质体溶液a5；(28)所述的步骤6中，所述的peg-dspe与所述磷脂的质量比为(0.025～0.15):1，例如，0.05:1；(29)所述的步骤6中，所述的peg-dspe浓度为1-20mg/ml，例如10mg/ml；(30)所述步骤6中，为准确称取一定量的peg-dspe，溶于步骤3相同的等渗溶液中，然后加入到所述步骤5所得到的脂质体溶液a5；(31)所述的步骤7中，所述的除菌过滤和所述的灌装的条件和操作均可为本领域该类工艺中常规的条件和操作；例如，除菌过滤步骤中，采用0.22μm滤膜过滤所述的脂质体；灌装步骤中，灌装于10ml或20ml西林瓶中、压盖和包装；(32)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的粒径d90≤150nm，包封率≥80％。7.一种人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，其由权利要求4-6任一项所述的制备方法制得。8.一种人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，所述人参皂苷米托蒽醌脂质体的原料
包括以下质量分数的组成：5-15份磷脂、0.1-4份人参皂苷、1份米托蒽醌盐；但不包含胆固醇。9.如权利要求8所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体，其特征在于，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体满足如下一个或多个条件：(1)所述人参皂苷米托蒽醌脂质体的原料还包括0.1-2份peg-dspe，较佳地，所述peg-dspe为peg2000-dspe；(2)所述的米托蒽醌盐为盐酸米托蒽醌通过ph梯度法与盐溶液进行离子交换得到的米托蒽醌盐；所述的盐溶液为硫酸盐水溶液、磺酸盐水溶液或蔗糖八硫酸酯盐水溶液；较佳地，所述的盐溶液为硫酸铵水溶液、蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、甲基磺酸铵水溶液、甲基磺酸三乙胺水溶液、乙二磺酸铵水溶液、丙二磺酸铵水溶液、乙二磺酸三乙胺水溶液或丙二磺酸三乙胺水溶液；更佳地，所述的盐溶液为硫酸铵水溶液、蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液、甲基磺酸铵水溶液或乙二磺酸三乙胺水溶液；例如硫酸铵水溶液；(3)所述的米托蒽醌盐为硫酸米托蒽醌、蔗糖八硫酸米托蒽醌、甲基磺酸米托蒽醌、米托蒽醌甲基磺酸、米托蒽醌乙二磺酸、米托蒽醌丙二磺酸、米托蒽醌乙二磺酸或米托蒽醌丙二磺酸；较佳地，所述的米托蒽醌盐为硫酸米托蒽醌、蔗糖八硫酸酯米托蒽醌或米托蒽醌甲基磺酸盐；例如硫酸米托蒽醌；(4)所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.975m；例如0.05m、0.1m、0.2m、0.3m、0.325m、0.65m、0.975m或0.16m；更佳地，当所述的盐溶液为蔗糖八硫酸酯三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.05m-0.3m，例如0.1m、0.2m或0.3m；或，当所述的盐溶液为乙二磺酸三乙胺水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m；或，当所述的盐溶液为甲基磺酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.325m-0.975m；或，当所述的盐溶液为硫酸铵水溶液时，所述的盐溶液的浓度为0.16m-0.325m，例如0.325；(5)所述的盐酸米托蒽醌水溶液的浓度为10mg/ml；(6)所述的磷脂选自氢化磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂和脑磷脂中的一种或多种；较佳地，所述的磷脂为氢化磷脂或蛋黄卵磷脂；(7)所述的人参皂苷选自20(s)-人参皂苷rg3、人参皂苷伪rg3、20(s)-人参皂苷rh2、人参皂苷rg5、人参皂苷rk1和人参皂苷rp1中的一种或多种，较佳地，所述的人参皂苷为20(s)-人参皂苷rg3和/或20(s)-人参皂苷rh2；(8)所述的米托蒽醌盐与所述的人参皂苷的质量比为1:(0.1～4)；例如所述的米托蒽醌盐与所述的人参皂苷的质量比为1:1或1:1.5；(9)所述人参皂苷的hplc纯度≥99％；(10)所述的磷脂的质量分数为10份；(11)所述的peg-dspe的质量分数为0.5份；(12)所述的人参皂苷的质量分数为1份；(13)所述的米托蒽醌盐的质量分数为1份；(14)所述人参皂苷米托蒽醌脂质体的原料为如下质量分数的组分：10份磷脂、0.5份
peg-dspe、1份人参皂苷、1份盐酸米托蒽醌。10.一种人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物，其特征在于，其包含葡萄糖水溶液和如权利要求1-3或权利要求7-9中任一项所述人参皂苷米托蒽醌脂质体；较佳地，所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物满足如下一个或二个条件：(1)所述的葡萄糖水溶液为5％葡萄糖水溶液；(2)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体的包封率≥80％。11.一种物质x在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用，其特征在于，所述物质x为如权利要求1-3或权利要求7-9中任一项所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体或如权利要求10所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物；较佳地，所述的应用满足如下一个或多个条件：(1)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体或所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物中的人参皂苷米托蒽醌脂质体的粒径d90≤150nm；(2)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体或所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物中的人参皂苷米托蒽醌脂质体的包封率≥80％；(3)所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体或所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体组合物中的人参皂苷米托蒽醌脂质体中的人参皂苷的纯度≥99％；(4)所述的癌症为乳腺癌、结直肠癌、乳腺癌、原发性肝癌、胃癌、膀胱癌或脑瘤。

技术总结
本发明公开了一种人参皂苷米托蒽醌脂质体、其制备方法和应用。本发明提供了一种人参皂苷米托蒽醌脂质体，其包括如下质量份数的组分：5-15份磷脂、0.1-4份人参皂苷、1份米托蒽醌盐；所述的人参皂苷米托蒽醌脂质体中不包括胆固醇。本发明的人参皂苷米托蒽醌脂质体对肿瘤细胞的具有靶向作用和增效减毒。细胞的具有靶向作用和增效减毒。


技术研发人员：李翀 王建新 王丹 陈颖江 詹华杏
受保护的技术使用者：厦门本素药业有限公司
技术研发日：2021.06.18
技术公布日：2022/12/19