一种西洋参根茎叶PPD、PPT和OA型皂苷分布的分析方法与流程

一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法
技术领域
1.本发明涉及医疗保健技术领域，具体地说是一种一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法。


背景技术：

2.众所周知，西洋参（panaxquinquefolium l.）属于人参属植物。人参属的主要药用植物是人参，人参的根以其高含量的人参皂苷组分和补气血的药用价值中医中，人参性温，而西洋参性凉，可能是由于其皂苷种类的不同造成。西洋参由于与人参有近似的成分，在临床上也有多重应用。西洋参中主要含有人参皂苷，多糖，氨基酸，微量元素等，其中最重要的成分为人参皂苷，在抗肿瘤，提升免疫力，心脑血管保护，抗糖尿病和抗氧化方面活性较高。人参皂苷是一类三萜皂苷，目前西洋参中发现有超过100种皂苷，从结构上的区别可以分为主要三类，分别为人参二醇型（protopanaxadiol, ppd），人参三醇型 (protopanaxatiol, ppt)和齐墩果酸型 (oleanolic acid, oa)皂苷。作为西洋参的主要成分，人参皂苷的种类和含量影响着西洋参的品质。由于人参皂苷的结构较为相似，给其鉴定区分带来了较大的困难。目前主要的检测方法为高分辨质谱定性和三重四级杆作部分皂苷的定量分析，但是对于仪器的依赖较大，高分辨质谱的价格较为昂贵，且目前还没有文献或专利对于西洋参皂苷分型分析，并系统研究西洋参中不同类型皂苷的分布。


技术实现要素：

3.本发明的目的是解决上述现有技术的不足，提供一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法。
4.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法，其特征在于该分析方法的步骤为采用靶向质谱扫描模式与液相联用、非靶向质谱扫描模式与液相联用的方式联合分析西洋参根、茎、叶中的ppd、ppt和oa型的皂苷种类及含量，其中靶向质谱扫描模式与液相联用的方式包括皂苷分型的定性定性质谱分析与液相联用的方式和皂苷分型的半定量质谱分析与液相联用的方式。
5.本发明所述的皂苷分型的定性定性质谱分析与液相联用的方式中皂苷分型的定性质谱分析的方法具体为采用3200 qtrap质谱仪的prec-ida-epi负离子扫描模式，子离子选择459，475和455三种，扫描范围400~1500 da，气帘气15~20 psi，喷雾电压-4500 v，离子源温度100~450 ℃，雾化气 10~30 psi，辅助气 0~20 psi，去簇电压60~150 v，碰撞电压 30~70 v。
6.本发明所述的皂苷分型的半定量质谱分析与液相联用的方式中皂苷分型的半定量质谱分析的方法具体为采用3200 qtrap质谱仪的mrm负离子扫描模式，离子对的母离子为不同皂苷分子量减氢的母离子，子离子为459，475和455三个。扫描范围400~1500 da，气帘气15~20 psi，喷雾电压-4500 v，离子源温度100~450 ℃，雾化气 10~30 psi，辅助气 0~
20 psi，去簇电压60~150 v，碰撞电压 30~70 v。
7.本发明所述的非靶向质谱扫描模式与液相联用的方式中非靶向质谱扫描模式为皂苷定性分析的质谱分析，具体为：采用3200 qtrap质谱仪的ems-ida-epi负离子扫描, 扫描范围400~1500 da，气帘气15~20 psi，喷雾电压-4500 v，离子源温度100~450 ℃，雾化气 10~30 psi，辅助气 0~20 psi，去簇电压60~150 v，碰撞电压 30~70 v。
8.本发明所述的皂苷分型的半定量质谱分析中采用mrm扫描中的峰面积a来计算不同皂苷的半定量，具体计算方法为log
10
（a 0.00001）。
9.本发明所述的液相的分离方法为：ods-100 v柱子，流动相为0.1%甲酸（a）/乙腈（b），时间程序为0~4 min, 20% b; 4~30 min, 20%~36% b; 30~60 min, 36%~48% b; 60~75 min, 48%~100% b; 75~84 min, 100%; 84~85 min, 100%~20% b; 85~90 min 20% b，流速为0.1 ml/min。
10.本发明由于采用上述结构，具有等优点。
附图说明
11.图1是本发明西洋参根（a）茎（b）叶（c）皂苷指纹图谱。
12.图2 是本发明ppd型皂苷rb1（a），ppt型皂苷rc（b）和oa型皂苷ro（c）质谱裂解规律图。
13.图3是本发明 ppd、ppt、oa型皂苷在根茎叶中的分布图，其中，（a）总皂苷分布；（b）ppd型皂苷的分布；（c）ppt型皂苷的分布；（d）oa型皂苷的分布；（e）不同皂苷分布的热图。
具体实施方式
14.下面结合附图对本发明进一步说明：如附图所示，一种西洋参根茎叶ppd、ppt和oa型皂苷分布的分析方法，其特征在于该分析方法的步骤为采用靶向质谱扫描模式与液相联用、非靶向质谱扫描模式与液相联用的方式联合分析西洋参根、茎、叶中的ppd、ppt和oa型的皂苷种类及含量，其中靶向质谱扫描模式与液相联用的方式包括皂苷分型的定性定性质谱分析与液相联用的方式和皂苷分型的半定量质谱分析与液相联用的方式。
15.进一步，所述的皂苷分型的定性定性质谱分析与液相联用的方式中皂苷分型的定性质谱分析的方法具体为采用3200 qtrap质谱仪的prec-ida-epi负离子扫描模式，子离子选择459，475和455三种，扫描范围400~1500 da，气帘气15~20 psi，喷雾电压-4500 v，离子源温度100~450 ℃，雾化气 10~30 psi，辅助气 0~20 psi，去簇电压60~150 v，碰撞电压 30~70 v。
16.进一步，所述的皂苷分型的半定量质谱分析与液相联用的方式中皂苷分型的半定量质谱分析的方法具体为采用3200 qtrap质谱仪的mrm负离子扫描模式，离子对的母离子为不同皂苷分子量减氢的母离子，子离子为459，475和455三个。扫描范围400~1500 da，气帘气15~20 psi，喷雾电压-4500 v，离子源温度100~450 ℃，雾化气 10~30 psi，辅助气 0~20 psi，去簇电压60~150 v，碰撞电压 30~70 v。
17.进一步，所述的非靶向质谱扫描模式与液相联用的方式中非靶向质谱扫描模式为皂苷定性分析的质谱分析，具体为：采用3200 qtrap质谱仪的ems-ida-epi负离子扫描, 扫
psi，辅助气 0 psi，去簇电压70 v，碰撞电压 30 v。液相分离方法为：ods-100 v柱子，流动相为0.1%甲酸（a）/乙腈（b），时间程序为0
–
4 min, 20% b; 4
–
30 min, 20%
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36% b; 30
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60 min, 36%
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48% b; 60
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75 min, 48%
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100% b; 75
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84 min, 100%; 84
–
85 min, 100%
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20% b; 85
–
90 min 20% b，流速为0.1 ml/min。各皂苷的半定量方法采用mrm扫描中的峰面积a来计算，具体计算方法为log
10
（a 0.00001），构建热图。
25.本发明利用ab 3200 qtrap低分辨质谱即可完成西洋参根茎叶中皂苷的指纹图谱采集及质谱分型，不依赖高分辨贵重仪器；同时本发明第一次建立了皂苷分型的质谱分析方法，从定性定量两个角度系统比较根茎叶中不同类型皂苷的分布。本发明也可以具有普适性，对于人参属其他植物，如人参，三七等中药材中皂苷的分型及分布具有普适性。