LUM的表位肽及所述表位肽与热休克蛋白的复合物的制作方法

技术特征：
1.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有如seq id no：1、2或3任一项所示的氨基酸序列。2.一种多肽组合物，所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：seq id no：1、2和3任一项所示的多肽；优选地，所述多肽组合物含有的多肽的比例相同或不同；优选地，所述多肽组合物包含seq id no：1所示的多肽、seq id no：2所示的多肽和seq id no：3所示的多肽。3.一种复合物，其由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白形成；优选地，所述复合物是由权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白在体外混合而制备的；优选地，所述混合在40-80℃(例如40-70℃，40-60℃，或50-60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min而制备的；优选地，所述复合物是通过将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例在体外混合而制备；优选地，所述热休克蛋白选自hsp70、hsp90、gp96、hsp110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如seq id no：6所示的氨基酸序列；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达lum的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或乳腺癌细胞)的特异性免疫应答。4.一种组合物，所述组合物包含至少2种(例如，2种，3种，4种，5种，或更多种)权利要求3所述的复合物；优选地，所述组合物中的热休克蛋白相同或不同；优选地，所述组合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达lum的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或乳腺癌细胞)的特异性免疫应答。5.一种制备权利要求3所述的复合物的方法，其包括将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白混合；优选地，权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白以自然吸附或热击方式形成复合物；优选地，所述混合在40-80℃(例如40-70℃，40-60℃，或50-60℃)下进行；优选地，所述混合在55℃下进行；优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物和热休克蛋白接触并置于55℃中10min，然后置于室温30min；
优选地，所述方法包括：将权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物与热休克蛋白按照0.1:1至100:1(例如0.1:1至50:1，0.1:1至20:1，0.1:1至10:1，0.1:1至5:1，0.1:1至1:1，0.5:1至100:1，0.5:1至50:1，0.5:1至20:1，0.5:1至10:1，0.5:1至5:1，0.5:1至1:1，1:1至100:1，1:1至50:1，1:1至20:1，1:1至10:1，1:1至5:1)的质量比例混合；优选地，所述热休克蛋白选自hsp70、hsp90、gp96、hsp110，以及它们的突变体或融合蛋白；优选地，所述热休克蛋白是gp96；优选地，所述热休克蛋白具有如seq id no：6所示的氨基酸序列；优选地，所述复合物具有免疫原性并且能够诱导针对表达lum的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或乳腺癌细胞)的特异性免疫应答。6.一种t细胞，其表达能够特异性识别基膜聚糖蛋白lum或权利要求1所述分离的多肽或者权利要求2所述的多肽组合物的t细胞受体；优选地，所述t细胞由权利要求3所述的复合物或权利要求4所述的组合物刺激免疫细胞而获得；优选地，所述免疫细胞包含pbmc或t淋巴细胞；优选地，所述刺激还包括使用免疫刺激性细胞因子(例如il-2)；优选地，所述t细胞是细胞毒性t淋巴细胞；优选地，所述t细胞能够特异性识别并杀伤表达lum的细胞(例如肿瘤细胞，例如胰腺癌或乳腺癌细胞)。7.一种制备权利要求6所述的t细胞的方法，所述方法包括使用权利要求3所述的复合物或权利要求4所述的组合物刺激免疫细胞；优选地，所述免疫细胞包含pbmc或t淋巴细胞；优选地，所述刺激还包括使用免疫刺激性细胞因子(例如il-2)。8.分离的核酸分子，其包含编码权利要求1所述的分离的多肽的核苷酸序列；优选地，所述分离的多肽具有如seq id no：1、2或3所示的氨基酸序列。9.一种分离的核酸分子的组合，其包含编码权利要求2的多肽组合物的核苷酸序列；所述多肽组合物包含选自下列的任意两种或三种多肽：seq id no：1、2和3任一项所示的多肽；更优选地，所述多肽组合物包含seq id no：1所示的多肽、seq id no：2所示的多肽和seq id no：3所示的多肽。10.载体，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子或权利要求9所述的分离的核酸分子的组合；或者，所述载体包含编码权利要求1的分离的多肽或权利要求2的多肽组合物的核苷酸序列；优选地，所述载体是病毒载体，例如慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或杆状病毒载体。11.宿主细胞，其包含权利要求8所述的分离的核酸分子或权利要求9所述的分离的核酸分子的组合或权利要求10所述的载体。12.药物组合物，其包含权利要求1所述的分离的多肽、权利要求2所述的多肽组合物、权利要求3所述的复合物、权利要求4所述的组合物、权利要求6所述的t细胞、权利要求8所述的分离的核酸分子、权利要求9所述的分离的核酸分子组合、权利要求10所述的载体或权利要求11所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂；优选地，所述药物组合物是肿瘤疫苗；
优选地，所述药物组合物包含佐剂；优选地，所述药物组合物还包含另外的治疗剂，例如抗肿瘤剂或免疫增强剂；优选地，所述抗肿瘤剂选自烷化剂、有丝分裂抑制剂、抗肿瘤抗生素、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、放射性核素剂、放射增敏剂、抗血管生成剂、细胞因子、免疫检查点抑制剂(例如，pd-1抗体、pd-l1抗体、ctla-4抗体、lag-3抗体或tim3抗体)；优选地，所述免疫增强剂选自免疫刺激性抗体(例如抗cd3抗体、抗cd28抗体、抗cd40l(cd154)抗体、抗41bb(cd137)抗体、抗ox40抗体、抗gitr抗体或其任意组合)。13.权利要求1所述的分离的多肽、或权利要求2所述的多肽组合物或权利要求3的复合物、或权利要求4的组合物或权利要求5所述的t细胞在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中诱导针对表达lum的肿瘤的免疫应答、和/或在受试者中预防或治疗表达lum的肿瘤；优选地，所述表达lum的肿瘤选自结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、甲状腺癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈部癌或急性髓系白血病；优选地，所述t细胞来自所述受试者；优选地，所述受试者是人；优选地，所述受试者是hla-a2阳性；优选地，所述分离的多肽、多肽组合物、组合物或t细胞与另外的治疗剂联合施用，例如同时、分开或相继施用；优选地，所述另外的治疗剂是免疫刺激剂或抗肿瘤剂；优选地，所述表达lum的肿瘤中lum蛋白表达异常(例如，与健康受试者相比表达上升)。

技术总结
本发明涉及免疫学及肿瘤治疗领域。具体而言，本发明涉及蛋白LUM的表位肽及其组合，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。本发明还涉及所述表位肽与热休克蛋白形成的复合物，由其所诱导的特异性免疫细胞，包含它们的肿瘤疫苗，及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。及其用于预防或治疗肿瘤的用途。


技术研发人员：张含 鞠莹 王力 杨博 陈立钊
受保护的技术使用者：佛山热休生物技术有限公司
技术研发日：2021.06.18
技术公布日：2022/12/19