一种兼具控油和舒缓功效的组合物及其应用的制作方法

1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种兼具控油和舒缓功效的组合物及其应用。


背景技术：

2.皮脂乳化形成皮脂膜保护头皮的健康，但当皮脂分泌过于旺盛时，则会为微生物的定殖提供了丰富的营养源，皮脂溢出是皮脂腺分泌功能亢进所致的皮脂分泌过多，主要表现为头皮和头发多脂、油腻，麟屑增多，而且如果不及时清洁头部，外来的污染物以及细小灰尘会粘附在头皮和头发上，会进一步刺激头皮，从而导致头皮脂质进一步分泌增多。常伴随头屑、遮痒等问题，甚至日久发展为脂溢性脱发，又严重影响了现代人的生活质量。
3.针对这一问题，开发能够有效抑制皮脂分泌和炎症因子的兼具控油和舒缓功效的组合物对于控油舒缓类产化妆品的应用具有重要意义。


技术实现要素：

4.本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本技术的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
5.作为本发明其中一种技术方案，本发明公开了一种兼具控油和舒缓功效的组合物，其中：所述兼具控油和舒缓功效的组合物由油茶籽提取物和糖脂组成，所述油茶籽提取物和糖脂的质量比为1∶4～4∶1。
6.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：所述糖脂为槐糖脂。
7.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：所述油茶籽提取物，是油茶籽的水提产物，所述油茶籽提取物的制备方法包括：将油茶籽加入水中，加热，过滤，干燥，得到油茶籽提取物。
8.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：所述槐糖脂包括内酯型槐糖脂。
9.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：所述内酯型槐糖脂的制备方法包括：将假丝酵母菌再发酵培养基中发酵，发酵结束后静置分层，收集底层内酯型槐糖脂。
10.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：还包括，将收集到的所述底层内酯型槐糖脂进行萃取。
11.作为本发明所述的兼具控油和舒缓功效的组合物的一种优选方案：所述萃取，包括用乙醇萃取。
12.本发明还提供所述的组合物在控油和舒缓功效的化妆品中的应用。所述化妆品包括洗发水、护发产品、头皮护理产品中的一种或几种。
13.本发明的有益效果：本发明研究了油茶籽提取物和槐糖脂对于皮脂分泌及炎症因子的影响，实验结果表明，油茶籽提取物和槐糖脂均能抑制皮脂分泌，并抑制炎症因子的表达，并发现油茶籽提取物和槐糖脂复配对于抑制皮脂分泌和炎症因子的表达具有协同作用，二者在质量比1∶1时具有强协同作用，在质量比4∶1～1∶4范围内均有协同抑制皮脂分泌和抑制炎症因子分泌的作用。本发明发现油茶籽提取物和槐糖脂组合物能够用于控油和舒缓功能化妆品中，尤其是洗发水、护发产品、头皮护理产品等需要控油、舒缓功效的化妆品中，具有很好的应用前景。
附图说明
14.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，其中：
15.图1为尼罗红染色法检测sz95细胞内中性脂质合成情况数据统计。
16.图2为尼罗红染色法检测各实验组对于sz95细胞皮脂分泌的荧光显微镜图。
17.图3为各实验组对raw 264.7细胞炎症因子il-6分泌水平的抑制作用。
具体实施方式
18.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
19.实施例1：
20.本发明防脱组合物由原料1和原料2组成，具体组分如下：
21.原料1：inci名称：油茶籽提取物；
22.油茶籽提取物的制备方法示例：将油茶籽饼粉碎后，按1∶5料液比、水为溶剂进行提取，提取温度为80℃，提取时间为4小时，提取结束后，料液先经过滤除去植物碎渣，再利用陶瓷膜设备进行超滤，使滤液先通过200nm陶瓷膜、再通过50nm陶瓷膜，即获得澄清溶液，最后将该溶液经喷雾干燥获得粉末样品。
23.原料2：inci名称：糖脂
24.本发明所用糖脂为槐糖脂。
25.槐糖脂是由假丝酵母菌以糖和植物油等为碳源，经一定条件的发酵工艺产生的微生物次级代谢产物。
26.槐糖脂制备方法示例：
27.菌种培育及发酵方法：ypd固体培养基(g/l)：酵母粉10，蛋白胨20，葡萄糖20，琼脂20，115℃高压灭菌35min。
28.发酵培养基(g/l)：葡萄糖100，酵母粉5，kh2po4 1，mgso4
·
7h2o 0.5，nacl 0.1，cacl2
·
2h2o 0.1，蛋白胨0.7，初始菜籽油50，121℃高压灭菌20min。
29.(1)平板/斜面培养：活化菌株，挑取假丝酵母菌菌株(atcc 22214)于ypd固体培养基上平板划线活化/试管斜面，30℃培养48h，获得单菌落。
30.(2)种子液培养：从平板上挑取单菌落接种至50ml ypd液体培养基，30℃，220rpm摇床培养48h。
31.(3)5l发酵罐分批补料发酵：5l发酵罐装液量为2l，控制转速在350-450rpm，温度
维持在30℃，通气量维持在3-6l/min。发酵前24h后用naoh使ph维持在3.5-3.8之间。接种后每隔一段时间取样，测量菌体浓度、槐糖脂浓度和残糖浓度，ph和溶氧可以通过发酵罐上的电极示数直接读取。在葡萄糖含量低于20g/l，用80％(w/v)葡萄糖水溶液补料至20g/l及以上；在菜籽油含量低于30g/l，补料至30g/l及以上。
32.(4)槐糖脂的分层收集：发酵结束后，首先将发酵液装入分液漏斗，通过静置过夜，自然沉降分层，得到上层残油(可循环利用)，中层酸型槐糖脂为主的菌体发酵液，底层内酯型为主的槐糖脂。
33.(5)乙醇萃取除去水溶性大分子杂质：分离收集一定体积的棕黄色油状粘稠内酯型槐糖脂，加入三倍体积无水乙醇混匀，搅拌30分钟，可见絮状蛋白、残糖析出，8000rpm离心十分钟以除去絮状杂质，得上层澄清棕黄色糖脂乙醇溶液。
34.(6)旋蒸法除去乙醇：65℃下，旋蒸糖脂乙醇溶液，除去溶剂乙醇，得到粘稠澄清棕黄色的内酯型槐糖脂。
35.本发明实验材料：
36.商品化sz95细胞株；商品化胎牛血清；dmem高糖培养基、青链霉素混合液、胰蛋白酶，购买于美国hyclone公司；四甲基偶氮唑蓝(mtt，质量分数98％)、二甲基亚砜(dmso)；il-6酶联免疫(elisa)检测试剂盒，上海碧云天生物技术有限公司。
37.实验方法：
38.sz95细胞培养：常规方法培养sz95细胞，取对数生长期细胞用于后续实验。
39.mtt法测sz95细胞活力：将对数生长期sz95细胞消化、计数，细胞悬液调整为1
×
104个/ml，每孔100μl接种于96孔培养板中。次日吸出孔板中的培养基，并用pbs冲洗1次。分别向样品孔中加入溶于培养基的不同浓度油茶籽提取物，以无提取物作为对照组，无细胞及提取物作为凋零组，每组设置3个复孔，继续培养24h。检测时，弃去上清液，加入新鲜配制的mtt工作液，37℃避光培养。4h后弃掉上清液，每孔加入100μl二甲基亚砜，震荡溶解结晶5min，于酶标仪490nm处读取od值每组三个复孔。细胞存活率计算公式为：
[0040][0041]
式中，凋零孔为溶剂对照组。
[0042]
尼罗红染色法检测sz95细胞内中性脂质：将对数生长期sz95细胞消化、计数，细胞悬液调整为1
×
104个/ml，以每孔100μl的量转移至黑色底透型的96孔板的各样品孔中。次日吸出孔板中的培养基，并用pbs冲洗1次。然后加入不同纯度以及不同浓度的油茶籽提取物或糖脂或者组合物作为实验组，并以不加活性组分的组作为空白对照组。孵育48h后弃取dmem完全培养基，用pbs小心冲洗2次后加入10μg/ml尼罗红，37℃黑暗环境中静置15min。用带荧光功能的多功能酶标仪测试485nm激发波长，565nm吸收波长检测释放的荧光值，每组三个复孔。
[0043]
原料对于raw 264.7细胞毒性检测：收集处于对数期的细胞，用dmem调整细胞密度为5
×
104个/ml，在96孔细胞培养板中按照每孔100μl加入细胞悬液。放在培养箱中过夜培养。细胞贴壁后，洗去旧培养液，样品组分别加入1μg/ml、3μg/ml、6μg/ml、10μg/ml、12.5μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的两种原料及其组合物溶液，每个浓度4个复孔。
同时设置正常细胞组(细胞和培养液)作为对照组以及1μg/ml lps组。将96孔板置于培养箱培养24h。每孔加入100μl 0.5mg/ml的mtt溶液，培养箱培养4h后终止培养，小心吸去上清，每孔加入100μl dmso，包上锡箔纸避光摇匀。用酶标仪测定490nm下的各孔od值，计算细胞存活率。
[0044][0045]
组合物对lps诱导raw 264.7细胞炎症模型的影响：
[0046]
为了建立lps诱导的raw264.7细胞炎症模型，首先通过mtt实验来评估两种原料和组合物对细胞活性的影响，发现在两种原料或组合物使用量小于10μg/ml时的细胞的存活率均大于90％，说明这两种原料及其组合物在本实验浓度下对细胞均没有毒性作用。
[0047]
原料及组合物对细胞炎症因子il-6释放的影响：收集对数生长期的raw264.7细胞，用dmem调整细胞的密度为1
×
105个/ml，然后在24孔细胞培养板中每孔加入500μl的细胞悬液，实验分组为lps组、油茶籽提取物组、槐糖脂组、组合物组，培养24h。小心吸去上清。lps组加入含lps(终浓度1μg/ml)的dmem溶液500μl；待测原料 lps组：先用不同浓度待测原料或组合物的dmem溶液预处理2h，再加入lps使终浓度为1μg/ml共孵育，放入培养箱继续培养24h。按照il-6试剂盒操作，每个样品重复8个孔，使用酶标仪测定od值并计算il-6水平。
[0048]
实验结果：
[0049]
采用上述尼罗红染色法考察组合物对皮脂分泌的抑制作用：
[0050]
将原料1和原料2分别按照表1中的比例复配混合。
[0051]
表1
[0052][0053][0054]
实验1为油茶籽提取物组，分别配制油茶籽提取物的浓度为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml；实验2为糖脂组，分别配制糖脂的浓度为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml；实验3为油茶籽提取物与糖脂按照质量比1∶1混合，油茶籽提取物与糖脂混合物总浓度分别为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml；实验4为油茶籽提取物与糖脂按照质量比4∶1混合，油茶籽提取物与糖脂混合物总浓度分别为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml；实验5为油茶籽提取物与糖脂按照质量比1∶4混合，油茶籽提取物与糖脂的混合物总浓度分别为1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml，8μg/ml。
[0055]
采用上述尼罗红染色法检测sz95细胞内中性脂质合成情况，将空白对照组的脂质合成水平设置为1，对数据作归一化处理，并采用compusyn软件计算ci值，ci值0.1～0.3强
烈协同作用，0.3～0.7具有协同作用，统计分析结果见表2。
[0056]
表2
[0057][0058][0059]
如表2和图1所示，与空白对照组相比，油茶籽提取物和糖脂均对于皮脂分泌具有抑制作用，二者复配能够协同抑制皮脂分泌，其中，二者质量比1∶1时协同作用最强。图2为原料浓度为4μg/ml时，空白组、油茶籽提取物组、糖脂组、油茶籽提取物∶糖脂＝1∶1组合物组的免疫荧光图。
[0060]
按上述方法考察各实验组对炎症因子il-6分泌水平的影响：
[0061]
将原料1和原料2分别按照表1中的比例复配混合作为实验组1-5。实验1为油茶籽提取物组，分别配制油茶籽提取物的浓度为0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml；实验2为糖脂组，分别配制糖脂的浓度为0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml；实验3为油茶籽提取物与糖脂按照质量比1∶1混合，油茶籽提取物与糖脂混合物总浓度分别为0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml；实验4为油茶籽提取物与糖脂按照质量比4∶1混合，油茶籽提取物与糖脂混合物总浓度分别为0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml；实验5为油茶籽提取物与糖脂按照质量比1∶4混合，油茶籽提取物与糖脂的混合物总浓度分别为0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml，4μg/ml。
[0062]
以lps刺激条件下巨噬细胞的炎症因子水平为1，作归一化处理。并采用compusyn软件计算ci值，ci值0.1～0.3强烈协同作用，0.3～0.7具有协同作用，统计分析结果见表3。
[0063]
表3
[0064][0065][0066]
如表3和图3所示，与lps组相比，加入油茶籽提取物或糖脂后，炎症因子il-6表达水平明显下降，油茶籽提取物和糖脂复配后更能显著降低lps刺激下raw 264.7细胞的il-6的表达水平，油茶籽提取物和糖脂复配对于降低il-6具有协同作用。
[0067]
本发明研究了油茶籽提取物和槐糖脂对于皮脂分泌及炎症因子的影响，实验结果表明，油茶籽提取物和槐糖脂均能抑制皮脂分泌，并抑制炎症因子的表达，并发现油茶籽提取物和槐糖脂复配对于抑制皮脂分泌和炎症因子的表达具有协同作用，二者在质量比1∶1时具有强协同作用，在质量比4∶1～1∶4范围内均有协同抑制皮脂分泌和抑制炎症因子分泌的作用。油茶籽提取物和槐糖脂组合物能够用于控油和舒缓功能化妆品中，尤其是洗发水、护发产品、头皮护理产品等需要控油、舒缓功效的化妆品中，具有很好的应用前景。
[0068]
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。