一种增强盐霉素抗癌活性的方法及应用

1.本发明涉及医药化学技术领域，特别是涉及一种增强盐霉素抗癌活性的方法及应用。


背景技术：

2.盐霉素是70年代初从白色链霉菌培养基中提取的一种单羧基聚醚类抗生素。在很长一段时间内，盐霉素只作为一种抗球虫药用于家畜疾病的治疗。直到2009年，温伯格团队发现盐霉素具有抗癌功能。随后的研究表明，盐霉素能够抑制多种癌细胞活性。而且，与传统化疗药物紫杉醇、阿霉素、顺铂、替莫唑胺等不同，盐霉素不仅能杀伤癌细胞，还能够清除肿瘤干细胞样细胞和多药耐药细胞。鉴于这些优势，盐霉素受到了科学家的高度重视，被认为具有开发为高效抗癌药物的潜力。但是，高浓度盐霉素可以导致哺乳动物产生严重的全身不良反应，从而阻碍了其在人类疾病治疗中的应用。虽然很多提高盐霉素抗癌活性从而降低盐霉素使用量的方法被发现，例如将盐霉素与靶向组蛋白去乙酰化酶、丙酮酸脱氢酶激酶或自噬过程的化合物联合使用，但是，这些方法本身会引起正常细胞损伤。因此，寻找更有效的增强盐霉素抗癌活性且对正常细胞影响小的方法是亟待解决的问题。


技术实现要素：

3.本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种增强盐霉素抗癌活性的方法及应用。
4.本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
5.一种增强盐霉素抗癌活性的方法及应用，使用端粒酶抑制剂抑制端粒酶活性，提高盐霉素的抗癌活性；
6.其机理是：端粒酶是一种逆转录酶，由rna模板terc及蛋白催化亚基tert组成，端粒酶能以terc为模板，利用tert的催化功能把ttaggg重复序列加在端粒末端，在癌细胞中，端粒酶能够通过端粒dna合成功能防止端粒缩短，使癌细胞永生化，tert在癌细胞中还与基因转录、dna损伤修复、干性维持及ros调节密切相关，靶向端粒酶是增强盐霉素抗癌活性且对正常细胞影响小的有效方法。
7.其中，所述的端粒酶抑制为bibr1532。
8.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
9.使用端粒酶抑制剂bibr1532抑制端粒酶活性，从而提高盐霉素的抗癌活性，靶向端粒酶是增强盐霉素抗癌活性且对正常细胞影响小的有效策略。
附图说明
10.图1是bibr1532与盐霉素的结构式；
11.图2是bibr1532与盐霉素同时处理对mcf-7细胞活力的影响；
12.图3是bibr1532与盐霉素同时处理对mda-mb-231细胞活力的影响；
13.图4是bibr1532与盐霉素同时处理对微球体形态的影响；
14.图5是bibr1532与盐霉素同时处理对微球体数量的影响；
15.图6是bibr1532与盐霉素同时处理对ros产生的影响；
16.图7是bibr1532、盐霉素及ros清除剂nac同时处理对mcf-7细胞活力的影响；
17.图8是bibr1532与盐霉素同时处理对肿瘤生长的影响；
18.图9是bibr1532与盐霉素同时处理对肿瘤组织形态的影响。
具体实施方式
19.下面结合附图对本发明作进一步说明：
20.实施例1
21.bibr1532与盐霉素同时处理对mcf-7细胞活力的影响
22.将mcf-7细胞以1
×
104个/孔的密度接种到96孔培养板中，接种之后将培养板置于37℃、5％co2、潮湿的培养箱中培养24h。加入bibr1532及盐霉素，使bibr1532的终浓度为15μm，盐霉素的浓度分别为1、2、4、8、16μm，并将培养板放回培养箱中继续培养72h。加入cck-8溶液(10μl/孔)，培养箱中培养2h。最后将培养板置于酶标仪中，450nm测量吸光度。使用吸光度值计算细胞相对活力。图2是bibr1532与盐霉素同时处理对mcf-7细胞活力的影响。图2显示bibr1532能够增强不同浓度盐霉素对mcf-7细胞活力的抑制作用，说明bibr1532能够增强盐霉素对乳腺癌的抑制作用。
23.实施例2
24.bibr1532与盐霉素同时处理对mda-mb-231细胞活力的影响
25.将mda-mb-231细胞以1
×
104个/孔的密度接种到96孔培养板中，接种之后将培养板置于37℃、5％co2、潮湿的培养箱中培养24h。加入bibr1532及盐霉素，使bibr1532的终浓度为15μm，盐霉素的浓度分别为1、2、4、8、16μm，并将培养板放回培养箱中继续培养72h。加入cck-8溶液(10μl/孔)，培养箱中培养2h。最后将培养板置于酶标仪中，450nm测量吸光度。使用吸光度值计算细胞相对活力。图3是bibr1532与盐霉素同时处理对mda-mb-231细胞活力的影响。图3显示bibr1532能够增强不同浓度盐霉素对mda-mb-231细胞活力的抑制作用，说明bibr1532能够增强盐霉素对乳腺癌的抑制作用。
26.实施例3
27.bibr1532与盐霉素同时处理对微球体形成的影响
28.将mcf-7细胞以5000个/孔的密度接种到dmem/f12培养基中，在其中添加20ng/ml碱性成纤维生长因子bfgf、20ng/ml人重组上皮生长因子egf、4μg/ml肝素、1％链霉素和青霉素，并在6孔超低粘附培养板中培养。同时加入bibr1532与盐霉素，使bibr1532的浓度为15μm，盐霉素浓度为4μm。7天后，在显微镜下观察微球体形态和数量，并拍照。图4是bibr1532与盐霉素同时处理对微球体形态的影响。图5是bibr1532与盐霉素同时处理对微球体数量的影响。从图4和图5可以看出，bibr1532能够增强盐霉素对微球体形成的抑制作用，说明bibr1532能够增强盐霉素对肿瘤干细胞样细胞的抑制作用。
29.实施例4
30.bibr1532与盐霉素同时处理对ros产生的影响
31.将mcf-7细胞以1
×
106个/孔的密度接种到6孔培养板中，接种之后将培养板置于
37℃、5％co2、潮湿的培养箱中培养24h。加入bibr1532及盐霉素，使bibr1532的终浓度为15μm，盐霉素的浓度为8μm，并将培养板放回培养箱中继续培养72h。加入dcfh-da(10μm)孵育30min，用流式细胞技术检测细胞内ros含量。图6是bibr1532与盐霉素同时处理mcf-7细胞后，细胞中ros的水平。图6显示，bibr1532能够在乳腺癌细胞中增强盐霉素诱导的ros产生。
32.实施例5
33.bibr1532、盐霉素及ros清除剂(n-乙酰-l-半胱氨酸，nac)同时处理对mcf-7细胞活力的影响
34.将mcf-7细胞以1
×
104个/孔的密度接种到96孔培养板中，接种之后将培养板置于37℃、5％co2、潮湿的培养箱中培养24h。加入bibr1532、盐霉素及nac，使bibr1532的终浓度为15μm、盐霉素浓度为8μm、nac浓度为10mm。48h或72h后，加入cck-8溶液(10μl/孔)，孵育2h。最后将培养板置于酶标仪中，450nm测量吸光度。使用吸光度值计算细胞相对活力。图7是bibr1532、盐霉素及nac同时处理对mcf-7细胞活力的影响。图7说明清除ros能够部分逆转bibr1532与盐霉素诱导的mcf-7细胞活力抑制。
35.实施例6
36.bibr1532与盐霉素同时处理对肿瘤生长的影响
37.将5
×
106个mcf-7细胞注射到balb/c免疫缺陷鼠皮下。待肿瘤体积达到150mm3时，每3天注射一次bibr1532(1.5mg/kg)与盐霉素(2mg/kg)，并且每3天用游标卡尺测量、记录一次肿瘤体积。肿瘤体积计算公式为：长
×
宽2/2(mm3)。36天后，取出肿瘤组织，进行石蜡包埋、切片、he染色，并在光学显微镜下观察肿瘤组织。图8是brbi1532与盐霉素同时处理对肿瘤生长的影响；图9是bibr1532与盐霉素同时处理对肿瘤组织的影响。从图8与图9可以看出，bibr1532能够增强盐霉素对肿瘤生长的抑制作用，并能增强盐霉素对肿瘤组织的破坏作用。