一种pH响应型抑菌缓释凝胶及制备方法与流程

一种ph响应型抑菌缓释凝胶及制备方法
技术领域
1.本发明属于抑菌凝胶技术领域，尤其涉及一种ph响应型抑菌缓释凝胶、制备方法及其应用。


背景技术：

2.hpv病毒，中文名为人乳头瘤病毒，是一类病毒的统称，能感染人体不同部位的皮肤和粘膜导致不同的病变。hpv病毒感染非常普遍，绝大多数人,不论男女,都会在人生中的某个阶段感染hpv。hpv病毒具有潜伏性，所以有可能在被传染后，会携带hpv很多年，在此期间，80％的感染者所携带的病毒会被机体免疫系统清除，尤其在年轻女性，致病风险主要依赖于hpv的特殊亚型。某些高危亚型的hpv毒株长期潜伏在体内，可能诱发宫颈部位细胞异常，并可能发展成癌前病变。虽然这些癌前病变并不必然意味着癌症，但随着时间的推移，部分异常细胞可能会变为癌细胞。一旦肿瘤出现，它就会在宫颈及周边扩散，导致宫颈癌。
3.宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其中原位癌高发年龄为30-35岁，浸润癌为45-55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。目前世界宫颈癌治疗后总五年存活率为55.5％，其中ⅰ期80.04％。ⅱ期58.9％，ⅲ期32.8％，ⅳ期7.1％。约半数的患者治疗后一年内复发，25％于第二年复发，5％于五年后复发，因此，宫颈癌作为一种恶性肿瘤威胁着很多女性的生命健康。
4.安全套和hpv疫苗对于hpv病毒的预防并不100％可靠，而hpv感染目前还没有特效药可以治疗，主要采用积极预防的思路，目前的治疗方法也有诸多缺陷，可以说，目前市场上没有任何产品能够充分有效地满足宫颈癌的防治需求。有鉴于此，开发更为确切可靠的阻止hpv感染的产品和安全可靠的宫颈癌防治产品势在必行。
5.专利cn105168676a公开了一种女士安全抑菌凝胶，包括以下重量份的原料：a料：卡波姆0.1～1.5份，聚乙二醇1～15份，纯水68～96份；b料：吐温80 1～6份，芦荟提取物0.05～1份，苯扎氯铵0.05～0.2份，透明质酸钠0.05～2份，三乙醇胺0.1～1.5份；c料：杰马0.1～0.5份，辛苯聚醇1～3.5份。该发明还公开了一种女士安全抑菌凝胶的制备方法。该发明能够杀精抗孕、杀菌消毒，预防生殖道感染，对阴道刺激性小，具有双向保护作用。但是，该发明杀菌消炎的作用有限，且对hpv病毒的抑制杀灭作用较弱，不能起到防治宫颈癌的效果。
6.因此，现有技术在研制抑菌抗病毒凝胶的同时增加了预防宫颈癌等其他妇科疾病、肿瘤的功效，专利cn114129688a公开了一种用于预防宫颈癌及尖锐湿疣和治疗乳头瘤病毒感染的凝胶，涉及药品技术领域。该用于预防宫颈癌及尖锐湿疣和治疗乳头瘤病毒感染的凝胶，包括以下质量份数的原料：茶树油0.1％-5％、卡波姆1％-6％、莪术油1％-10％、苦参碱0.1％-5％、胡萝卜提取液0.001％-5％、聚六亚甲基双胍0.1％-5％、纯水97.697％-100％、红色诺卡氏菌细胞壁骨架0.002％-0.1％。通过在抑菌消炎的基础上，通过莪术油提高自身免疫力，利用苦参碱、红色诺卡氏菌细胞壁骨架和聚六亚甲基双胍hpv病毒清除到体外，该发明通过改善阴道微菌环境、修复阴道损伤、维持阴道内壁正常弹性、改善阴道清洁
度、提高阴道粘膜及宫颈粘膜免疫力，对于预防和治疗女性乳头瘤病毒感染具有重要意义。但是，该发明抑菌效力较弱，不能满足使用需求，且制备方法较为复杂，凝胶的有效时间较短。
7.紫杉醇(taxol，paclitaxel)：别名红豆杉醇，是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物，临床上已经广泛用于多种实体肿瘤的治疗。紫杉醇对多种实体瘤细胞显示出良好的抗癌作用，其中，对于宫颈原位癌及1到4级宫颈癌都具有良好的治疗作用，已经开始用于宫颈癌预防和治疗之中，其中，不乏在抑菌抗病毒凝胶中添加适量紫杉醇，以提高凝胶的效力。专利cn108324682a公开了一种多价键纳米凝胶，其由聚丙烯酸接枝环糊精聚合物和聚丙烯酸接枝紫杉醇聚合物通过非共价键复合而成。cn114209847a公开了一种二次纳米化的白蛋白紫杉醇制剂及其应用。具体地，该发明抗癌活性的纳米药物包括但不限于白蛋白结合的紫杉醇和脂质体柔红霉素，可制备为凝胶剂型，使用白蛋白结合型紫杉醇，虽然某些方面是优于普通剂型紫杉醇，但是也会带来副作用，虽然该发明提供了一种降低毒副作用的药物的制备方法，但是，白蛋白结合型紫杉醇的副作用区别于普通的紫杉醇，其周围神经毒性的发生率仍旧较高。并且，上述两项专利虽然使用紫杉醇凝胶起到了一定预防宫颈癌的作用，但是紫杉醇的疏水性极高，其疏水性在很大程度上影响了药物的效果，因此，改善紫杉醇的疏水性至关重要。并且，上述凝胶在阴道中起效的时间有限，不能实现缓释的功效，此外，健康的阴道ph值是3.8-4.4左右，发生炎症或其他疾病的情况下，阴道的ph值会升高，因此，若根据该特性实现凝胶的控释功效，会进一步提高该凝胶的抑菌、抗病毒和预防疾病的能力。
8.因此，如何获得一种ph响应型，具有缓释功能和较长有效时间，在抑菌抗病毒的同时起到预防宫颈癌的效果，成为本领域亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

9.针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种有效时间久，在抑菌抗病毒的同时起到预防宫颈癌效果的ph响应型抑菌缓释凝胶。
10.具体的，本发明提供一种ph响应型抑菌缓释凝胶，按份数计，抑菌缓释凝胶包括以下组分：
11.12.所述紫杉醇缓释微胶囊的芯材为改性介孔二氧化硅负载紫杉醇，壁材为交联壳聚糖-明胶复合壁材；
13.所述芯材和壁材的质量百分比比例为1：(2-4)；
14.所述改性介孔二氧化硅为依次经过氨基化改性和聚丙烯酸接枝改性的纳米级中空介孔二氧化硅。
15.辛苯聚糖是本发明杀灭hpv的主要活性成分，包括辛基酚聚醚-9、辛基酚聚醚-10、辛基酚聚醚-11、辛基酚聚醚-12、辛基酚聚醚-13、辛基酚聚醚-16、辛基酚聚醚-20、辛基酚聚醚-25、辛基酚聚醚-30、辛基酚聚醚-33、辛基酚聚醚-40和辛基酚聚醚-70中的至少一种。辛苯聚糖是一种天然活性微生态制剂，可以通过破坏细菌的细胞膜和病毒的包膜物质，使细胞内容物外泄，提供其他成分进入细胞进而发挥杀灭作用，对6大类20种病原体及男性精子进行杀灭，保护生殖器官不受多种细菌、病毒、真菌、衣原体、支原体、滴虫的侵袭，安全无毒可长期使用，因此，对hpv病毒有较好的抑制和消灭作用。同时，借助辛苯聚糖破膜形成的孔洞，苯扎氯铵能够快速进入病原微生物包浆内，进一步破坏其遗传物质而发挥杀灭作用。
16.苯扎氯铵(benzalkonium chloride)，是一种阳离子表面活性剂，属非氧化性杀菌剂，具有广谱、高效的杀菌能力，能够在1分钟内杀灭任何接触到的致病微生物，能够起到抑菌抗病毒作用，包括能够诱发宫颈癌的hpv、hsv-2等。
17.褪黑素，在以预防为主要作用的凝胶产品中，作为强抗氧化剂和清道夫，清除氧、氮等自由基和氧化剂，及时清除机体细胞的代谢产物或外来物质，稳定和清洁阴道内环境，避免因持久不良刺激诱发新的癌变,其本身也具有抗癌效应，同时，褪黑素具有强效抑制肿瘤发生、发展、转化和转移的作用，除了hpv感染，不稳定和有污染物如代谢废物、性生活带来的异物等持久存在的阴道内环境是宫颈癌发生的另一重要原因。在发明中，褪黑素作为强抗氧化剂和清道夫，能够即时清除氧、氮等自由基、氧化剂、机体细胞的代谢产物及外来物质，达到稳定和清洁阴道内环境，避免因持久不良刺激诱发癌前病变的可能性。
18.紫杉醇：稳定微管，阻滞癌细胞分裂、分化、转移、侵润。本发明的紫杉醇缓释微胶囊是一种具有ph值响应功能的缓释微胶囊，以纳米级改性介孔二氧化硅负紫杉醇为芯材，以交联壳聚糖-明胶为复合壁材。经过改性的介孔二氧化硅对紫杉醇的负载能力提高，并且显著提高了紫杉醇的水溶性，此外，经过改性的介孔二氧化硅具有了ph响应性。
19.卡波姆钠和羟丙基甲基纤维素能形成交联骨架，保证凝胶中的活性成分能够较长时间停留在体内，提供药物缓释的介质，借以延长药物发挥的时长，并避免局部药物浓度过高。
20.进一步的，增稠剂为羟丙基甲基纤维素，所述保湿剂为卡波姆钠，所述溶剂包括水性溶剂和油性溶剂，所述水性溶剂为双蒸水，所述油性溶剂为甘油。
21.双蒸水是利用液体混合物中各组分挥发度的差别，汽化混合物，再冷凝蒸气，获得蒸馏水，再使所得的蒸馏水汽化，再次冷凝获得双蒸水，由此去除绝大部分的污染物。在双蒸水制备过程中，虽然挥发性的杂质如二氧化碳、氨以及一些有机物无法去除，但经过两次蒸馏，水中的无机盐、有机物、微生物、可溶解气体和挥发性杂质含量极低，尤其重要的是无菌且除去了致热源，适于最终凝胶的配制。
22.进一步的，抑菌缓释凝胶还包括渗透压调节剂，所述渗透压调节剂选自氯化钠盐、氯化钾盐中的至少一种，所述抑菌缓释凝胶的渗透压为250-340mosm/kg
·
h2o。
23.正常的胶体渗透压虽利于凝胶的较长时间体内滞留的舒适性，过低的晶体渗透压有其不利的方面。渗透压调节剂使本发明的凝胶具有与体液平衡等晶体渗透压。过低的晶体渗透压，以阴道用药为例，一方面，在无损伤、破损、溃疡或糜烂存在的情况下，阴道内注入本发明的凝胶的即刻至两分钟左右，阴道壁和宫颈能够接触到凝胶的局部上皮细胞可能发生应激反应，使用者会有短暂的不适；另一方面，在有损伤、破损、溃疡或糜烂存在的情况下，阴道内注入本发明的凝胶即刻至10分钟左右，阴道壁和宫颈能够接触到凝胶的局部上皮细胞及与这些上皮细胞发生间隙、通讯连接的其他组织细胞、未被上皮完全覆盖的、暴露的平滑肌细胞、躯体和内脏感觉神经元分布于阴道壁和子宫口及宫颈的周围突、内脏运动神经元支配阴道壁和子宫口及宫颈的运动支等，将会由于细胞膜内外的晶体渗透压急剧变化而发生水波动和电解质涌动，激发钾离子外流和/或钠离子内流，致使膜电位除极，发生应激反应。因此，本发明的凝胶中加入生理浓度的nacl或kcl盐成分,使其晶体渗透压处于维持细胞静息电位所需的离子水平，在阴道内注入本发明的凝胶时，对阴道无刺激，不管有无损伤、破损、溃疡或糜烂存在，阴道壁及宫颈上皮、平滑肌、神经末梢等都将维持其应有的静息电位，避免发生应激反应。
24.进一步的，紫杉醇缓释微胶囊的制备方法包括以下步骤：
25.(1)制备芯材：将改性介孔二氧化硅加入有机溶剂中超声分散，加入紫杉醇，磁力搅拌后离心，将离心后的沉淀物反复洗涤后冷冻干燥，得到所述芯材；
26.(2)将明胶溶液加热至50-60℃，加入甘油，分散乳化20-30s；
27.(3)加入交联壳聚糖溶液，搅拌；
28.(4)加入芯材，一边搅拌一边加入水，稀释完成后加入氢氧化钠溶液，调节ph为5.9-6.20，反应20-30min；
29.(5)降温后加入戊二醛溶液，静置固化；
30.(6)反复清洗，干燥后得到所述紫杉醇缓释微胶囊。
31.本发明的有机溶剂为二甲基亚砜、二氯甲烷、丙酮中的任意一种，改性介孔二氧化硅和紫杉醇的质量百分比比例为1：(0.6-1.2)。
32.进一步的，改性介孔二氧化硅的制备方法包括以下步骤：
33.步骤1：纳米级中空介孔二氧化硅氨基化改性
34.1.1将纳米级中空介孔二氧化硅加入无水乙醇中超声分散；
35.1.2加热至80-95℃，持续通入氩气，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，磁力搅拌；
36.1.3离心后用无水乙反复清洗沉淀物，冷冻干燥得到经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅；
37.步骤2：聚丙烯酸接枝改性
38.2.1将经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅和聚丙烯酸加入水中，磁力搅拌；
39.2.2加入复合引发剂溶液，反应5-10min，再加入n,n-亚甲基双丙烯酰胺溶液，在氮气保护下磁力搅拌；
40.2.3离心，反复冲洗离心后的沉淀物，烘干得到所述改性介孔二氧化硅。
41.介孔二氧化硅纳米作为研究相对成熟的纳米材料，具有生成可控、比表面积大、生物相容性优异、表面易功能化修饰、靶向给药等优势，在药物递送体系中发挥巨大的作用和
广泛的前景。
42.首先，本发明的介孔二氧化硅经过氨基化改性，进一步提高了介孔二氧化硅的载药能力，并且改善了紫杉醇的水溶性，使其能充分发挥效果。经过聚丙烯酸接枝改性后，使紫杉醇缓释微胶囊具有了ph响应性。ph响应性主要是依靠环境ph的刺激来改变材料的构象，从而达到药物的控释。其内部常携带对h

或oh-敏感的可电离基团或特定条件下可断裂的化学键，从而实现在特定ph条件或离子强度下，使材料本身发生形态改变或化学键断裂，达到药物的ph智能响应性释放。当人体内发生的感染性疾病、恶性肿瘤时均会引起微环境的酸碱度改变，而微环境的ph梯度差为靶向给药提供了可能。健康的阴道ph值是3.8-4.4左右，发生炎症或其他疾病的情况下，阴道的ph值会升高，而炎症或癌细胞所处的细胞外环境ph为5.7-7.0，因此，利用该特性，本发明利用聚丙烯酸在低ph值时接受质子，在中性和高ph值时去质子化溶胀的特性制备了一种ph响应型缓释凝胶。
43.进一步的，复合引发剂溶液为过硫酸铵和亚硫酸氢钠混合溶液，所述混合溶液中过硫酸铵和亚硫酸氢钠的质量百分比比例为(1.8-2.5)：1。
44.进一步的，交联壳聚糖和明胶的质量百分比比例为1：(0.8-1.2)。
45.进一步的，交联壳聚糖的制备方法为：将壳聚糖溶于冰醋酸中，磁力搅拌，加入交联剂溶液，将溶液ph调至4.8-5.2反应5-8h，离心，将离心后的沉淀物反复冲洗，干燥后得到所述交联壳聚糖。
46.进一步的，交联剂选自植酸、六偏磷酸钠中的至少一种，所述交联剂和壳聚糖的质量百分比比例为1：(1-3.5)。
47.在众多的天然材料中，壳聚糖是以β-(1,4)糖苷键连接的带正电荷的多糖，由于其具有良好的生物相容性和降解性，物理、化学性质稳定性，在自组装复合材料、生物聚合物膜和药物递送载体等方面有广泛的应用。壳聚糖经交联后，其微观结构会发生变化，从而影响水凝胶的控释性能。因此，植酸和六偏磷酸钠交联壳聚糖制备的微胶囊具有更高的包封率和更低的释放率，优化了微胶囊的缓释性能。
48.另一方面，提供一种ph响应型抑菌缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
49.s1：制备紫杉醇缓释微胶囊；
50.s2：将辛苯聚糖和苯扎氯铵与水性溶剂混合得到混合物a；
51.s3：将褪黑素和紫杉醇缓释微胶囊与水性溶剂混合到混合物b；
52.s4：将保湿剂与渗透压调节剂混合得到混合物c；
53.s5：将混合物a、混合物b、混合物c与增稠剂加入油性溶剂中，搅拌得到所述抑菌缓释凝胶。
54.本发明，优点具体在于：
55.1)本发明使用辛苯聚糖和苯扎溴铵联用作为本发明杀灭hpv的主要活性成分，辛苯聚糖的破膜功能在病原微生物表明形成孔洞后，苯扎氯铵能够快速进入病原微生物包浆内，进一步破坏其遗传物质而发挥杀灭作用，因此，本发明具有强效的抑菌、抗病毒，保持阴道清洁的功效。
56.2)本发明添加适量紫杉醇结合褪黑素起到预防宫颈的效用。本发明使用经过改性的介孔二氧化硅负载紫杉醇并包覆交联壳聚糖-明胶复合层的方式在凝胶中添加紫杉醇，中空介孔二氧化硅经过氨基化改性，提高了载药能力，改善了紫杉醇的水溶性，经过聚丙烯
酸接枝改性后，使紫杉醇缓释微胶囊具有了ph响应性，在发生炎症或其他疾病的情况阴道的ph值升高时缓释释放，使用交联壳聚糖提高了药物的包埋率，增强了微胶囊的缓释性能，因此，本发明的紫杉醇缓释微胶囊具有优异的缓释性能和ph响应性，结合褪黑素作为强抗氧化剂和清道夫，能够即时清除氧、氮等自由基、氧化剂、机体细胞的代谢产物及外来物质，达到稳定和清洁阴道内环境，避免因持久不良刺激诱发癌前病变的可能性，起到了预防宫颈癌的作用。
57.3)本发明使用卡波姆钠和羟丙基甲基纤维素保证凝胶中的活性成分能够较长时间停留在体内，提供药物缓释的介质，借以延长药物发挥的时长，并避免局部药物浓度过高。
58.4)本发明的抑菌缓释凝胶的渗透压为250-340mosm/kg
·
h2o，使胶体渗透压利于凝胶的较长时间体内滞留，并避免产生不适感，避免发生应激反应，影响凝胶效果。
具体实施方式
59.为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明作进一步地详细描述。
60.一种ph响应型抑菌缓释凝胶，按份数计，抑菌缓释凝胶包括以下组分：
[0061][0062]
辛苯聚糖包括辛基酚聚醚-9、辛基酚聚醚-10、辛基酚聚醚-11、辛基酚聚醚-12、辛基酚聚醚-13、辛基酚聚醚-16、辛基酚聚醚-20、辛基酚聚醚-25、辛基酚聚醚-30、辛基酚聚醚-33、辛基酚聚醚-40和辛基酚聚醚-70中的至少一种。保湿剂为卡波姆钠，增稠剂为羟丙基甲基纤维素，溶剂包括水性溶剂和油性溶剂，水性溶剂为双蒸水，油性溶剂为甘油。
[0063]
紫杉醇缓释微胶囊的芯材为改性介孔二氧化硅负载紫杉醇，壁材为交联壳聚糖-明胶复合壁材；其中，改性介孔二氧化硅为依次经过氨基化改性和聚丙烯酸接枝改性的纳米级中空介孔二氧化硅，交联壳聚糖为交联植酸或六偏磷酸钠的壳聚糖。芯材和壁材的质量百分比比例为1：(2-4)；介孔二氧化硅和紫杉醇的质量百分比比例为1：(0.6-1.2)，交联壳聚糖和明胶的质量百分比比例为1：(0.8-1.2)。
[0064]
抑菌缓释凝胶还包括渗透压调节剂，渗透压调节剂选自氯化钠盐、氯化钾盐中的至少一种，添加渗透压调节剂，使抑菌缓释凝胶的渗透压为250-340mosm/kg
·
h2o。
[0065]
一种ph响应型抑菌缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0066]
s1：制备紫杉醇缓释微胶囊：
[0067]
s1.1制备芯材
[0068]
(1)制备改性介孔二氧化硅
[0069]
1.氨基化改性
[0070]
1.1将纳米级中空介孔二氧化硅加入无水乙醇中超声分散20-30min；
[0071]
1.2加热至80-95℃，持续通入氩气，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，磁力搅拌5-7h；
[0072]
1.3以11000-13000rpm的速度离心25-35min，用无水乙反复清洗，冷冻干燥得到经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅；
[0073]
2.聚丙烯酸接枝改性
[0074]
2.1将经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅和聚丙烯酸加入水中，在40-50℃下，磁力搅拌2-4h；
[0075]
2.2加入质量百分比比例为(1.8-2.5)：1的过硫酸铵和亚硫酸氢钠复合引发剂溶液，反应5-10min，再加入质量分数为6-8％的n,n-亚甲基双丙烯酰胺溶液，在氮气保护下磁力搅拌6-8h；
[0076]
2.3在9000-11000rpm的速度下离心20-30min，将离心后的沉淀物反复冲洗后烘干，得到改性介孔二氧化硅；
[0077]
(2)将改性介孔二氧化硅加入有机溶剂中超声分散5-10min，加入紫杉醇，磁力搅拌10-12h，有机溶剂为二甲基亚砜、二氯甲烷、丙酮中的任意一种；
[0078]
(3)以10000-12000rpm的速度离心15-25min，将离心后的沉淀物反复洗涤后冷冻干燥，得到芯材；
[0079]
s1.2将充分溶胀的质量分数为20-25％明胶溶液加热至50-60℃，加入甘油，经高剪切分散乳化机10000-12000rpm剪切20-30s；
[0080]
s1.3制备交联壳聚糖：将壳聚糖溶于质量分数为1-1.5％的冰醋酸中，20-30℃下磁力搅拌0.5-1h，加入浓度为0.8-1.5％的交联剂溶液，将溶液ph调至4.8-5.2反应5-8h，以8000-10000r/min的速度离心10-15min，将离心后的沉淀物反复冲洗后干燥得到交联壳聚糖；
[0081]
s1.4加入经过预热温度为50-60℃预热的质量分数为2-2.5％的交联壳聚糖溶液，以400-500rpm搅拌10-15min；
[0082]
s1.5加入芯材，一边搅拌一边加入温度为50-60℃的蒸馏水，再加入质量分数为1.5-2％的氢氧化钠溶液，调节ph为5.9-6.2，在温度为50-60℃下，持续反应20-30min；
[0083]
s1.6将温度降至15-25℃，加入质量分数为4.5-5.5％的戊二醛溶液，5-10min后在30-35℃下静置固化25-30min；
[0084]
s1.7反复清洗，干燥后得到所述紫杉醇缓释微胶囊；
[0085]
s2：将辛苯聚糖和苯扎氯铵与水性溶剂混合搅拌，得到混合物a,搅拌的速率为200-300r/min，搅拌时间为30-40min；
[0086]
s3：将褪黑素和紫杉醇缓释微胶囊与水性溶剂混合搅拌，得到混合物b，搅拌的速率为500-600r/min，搅拌时间为30-40min；
[0087]
s4：将保湿剂与渗透压调节剂混合搅拌，得到混合物c，搅拌的速率为400-500r/
min，搅拌时间为30-40min；
[0088]
s5：将混合物a、混合物b、混合物c与增稠剂加入油性溶剂中，搅拌得到所述抑菌缓释凝胶，搅拌的速率为400-500r/min，搅拌时间为30-40min。
[0089]
步骤s2、s3、s4搅拌后均需静置10-12h，步骤s2、s3、s4中溶剂的体积比为(2-3)：(2-3)：1。
[0090]
实施例1
[0091]
一种ph响应型抑菌缓释凝胶，按份数计，抑菌缓释凝胶包括以下组分：
[0092][0093]
辛苯聚糖为质量比为1:1:1的辛基酚聚醚-10、辛基酚聚醚-30和辛基酚聚醚-33。保湿剂为卡波姆钠，增稠剂为羟丙基甲基纤维素，溶剂为水性溶剂双蒸水，油性溶剂甘油。
[0094]
紫杉醇缓释微胶囊的芯材为改性介孔二氧化硅负载紫杉醇，壁材为交联壳聚糖-明胶复合壁材；其中，改性介孔二氧化硅为依次经过氨基化改性和聚丙烯酸接枝改性的纳米级中空介孔二氧化硅，交联壳聚糖为交联植酸或六偏磷酸钠的壳聚糖。芯材和壁材的质量百分比比例为1：3；介孔二氧化硅和紫杉醇的质量百分比比例为1：1，交联壳聚糖和明胶的质量百分比比例为1：1。
[0095]
抑菌缓释凝胶还包括渗透压调节剂，渗透压调节剂为氯化钠盐，抑菌缓释凝胶的渗透压为300mosm/kg
·
h2o。
[0096]
一种ph响应型抑菌缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0097]
s1：制备紫杉醇缓释微胶囊：
[0098]
s1.1制备芯材
[0099]
(1)制备改性介孔二氧化硅
[0100]
1.氨基化改性
[0101]
1.1将纳米级中空介孔二氧化硅加入无水乙醇中超声分散25min；
[0102]
1.2加热至90℃，持续通入氩气，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，磁力搅拌6h；
[0103]
1.3以12000rpm的速度离心30min，用无水乙反复清洗，冷冻干燥得到经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅；
[0104]
2.聚丙烯酸接枝改性
[0105]
2.1将经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅和聚丙烯酸加入水中，在40℃
下，磁力搅拌3h；
[0106]
2.2加入质量百分比比例为2：1的过硫酸铵和亚硫酸氢钠复合引发剂溶液，反应8min，再加入质量分数为7.5％的n,n-亚甲基双丙烯酰胺溶液，在氮气保护下磁力搅拌6h；
[0107]
2.3在10000rpm的速度下离心25min，将离心后的沉淀物反复冲洗后烘干，得到改性介孔二氧化硅；
[0108]
(2)将改性介孔二氧化硅加入二甲基亚砜中超声分散7min，加入紫杉醇，磁力搅拌11h；
[0109]
(3)以11000rpm的速度离心20min，将离心后的沉淀物反复洗涤后冷冻干燥，得到芯材；
[0110]
s1.2将充分溶胀的质量分数为23％明胶溶液加热至55℃，加入甘油，经高剪切分散乳化机11000rpm剪切25s；
[0111]
s1.3制备交联壳聚糖：将壳聚糖溶于质量分数为1.5％的冰醋酸中，25℃下磁力搅拌1h，加入浓度为1.0％的六偏磷酸钠溶液，将溶液ph调至4.9反应6h，以10000r/min的速度离心10min，将离心后的沉淀物反复冲洗后干燥得到交联壳聚糖；
[0112]
s1.4加入经过预热温度为55℃预热的质量分数为2.5％的交联壳聚糖溶液，以500rpm搅拌15min；
[0113]
s1.5加入芯材，一边搅拌一边加入温度为55℃的蒸馏水，再加入质量分数为2％的氢氧化钠溶液，调节ph为5.9，在温度为55℃下，持续反应25min；
[0114]
s1.6将温度降至15℃，加入质量分数为5.5％的戊二醛溶液，10min后在30℃下静置固化30min；
[0115]
s1.7反复清洗，干燥后得到所述紫杉醇缓释微胶囊；
[0116]
s2：将辛苯聚糖和苯扎氯铵与水性溶剂混合搅拌，得到混合物a,搅拌的速率为200r/min，搅拌30min；
[0117]
s3：将褪黑素和紫杉醇缓释微胶囊与水性溶剂混合搅拌，得到混合物b，搅拌的速率为600r/min，搅拌30min；
[0118]
s4：将保湿剂与渗透压调节剂混合搅拌，得到混合物c，搅拌的速率为400r/min，搅拌30min；
[0119]
s5：将混合物a、混合物b、混合物c与增稠剂加入油性溶剂中，搅拌得到所述抑菌缓释凝胶，搅拌的速率为500r/min，搅拌30min。
[0120]
步骤s2、s3、s4搅拌后均需静置12h，步骤s2、s3、s4中溶剂的体积比为2：2：1。
[0121]
实施例2
[0122]
本实施例与实施例1的区别在于，凝胶各组分的份数不同，具体包括：
[0123][0124]
实施例3
[0125]
本实施例与实施例1的区别在于，凝胶各组分的份数不同，具体包括：
[0126][0127][0128]
实施例4
[0129]
本实施例与实施例1的区别在于辛苯聚糖包括质量比为7:1的辛基酚聚醚-11和辛基酚聚醚-25。
[0130]
实施例5
[0131]
本实施例与实施例1的区别在于，通过如下步骤制备得到：
[0132]
一种ph响应型抑菌缓释凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0133]
s1：制备紫杉醇缓释微胶囊：
[0134]
s1.1制备芯材
[0135]
(1)制备改性介孔二氧化硅
[0136]
1.氨基化改性
[0137]
1.1将纳米级中空介孔二氧化硅加入无水乙醇中超声分散25min；
[0138]
1.2加热至90℃，持续通入氩气，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，磁力搅拌6h；
[0139]
1.3以12000rpm的速度离心30min，用无水乙反复清洗，冷冻干燥得到经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅；
[0140]
2.聚丙烯酸接枝改性
[0141]
2.1将经过氨基化改性的纳米级中空介孔二氧化硅和聚丙烯酸加入水中，在40℃下，磁力搅拌3h；
[0142]
2.2加入质量百分比比例为2：1的过硫酸铵和亚硫酸氢钠复合引发剂溶液，反应8min，再加入质量分数为7.5％的n,n-亚甲基双丙烯酰胺溶液，在氮气保护下磁力搅拌6h；
[0143]
2.3在10000rpm的速度下离心25min，将离心后的沉淀物反复冲洗后烘干，得到改性介孔二氧化硅；
[0144]
(2)将改性介孔二氧化硅加入二甲基亚砜中超声分散7min，加入紫杉醇，磁力搅拌11h；
[0145]
(3)以11000rpm的速度离心20min，将离心后的沉淀物反复洗涤后冷冻干燥，得到芯材；
[0146]
s1.2将充分溶胀的质量分数为23％明胶溶液加热至55℃，加入甘油，经高剪切分散乳化机11000rpm剪切25s；
[0147]
s1.3制备交联壳聚糖：将壳聚糖溶于质量分数为1.5％的冰醋酸中，25℃下磁力搅拌1h，加入浓度为1.0％的六偏磷酸钠溶液，将溶液ph调至4.9反应6h，以10000r/min的速度离心10min，将离心后的沉淀物反复冲洗后干燥得到交联壳聚糖；
[0148]
s1.4加入经过预热温度为55℃预热的质量分数为2.5％的交联壳聚糖溶液，以500rpm搅拌15min；
[0149]
s1.5加入芯材，一边搅拌一边加入温度为55℃的蒸馏水，再加入质量分数为2％的氢氧化钠溶液，调节ph为5.9，在温度为55℃下，持续反应25min；
[0150]
s1.6将温度降至15℃，加入质量分数为5.5％的戊二醛溶液，10min后在30℃下静置固化30min；
[0151]
s1.7反复清洗，干燥后得到所述紫杉醇缓释微胶囊；
[0152]
s2：将辛苯聚糖和苯扎氯铵与水性溶剂混合搅拌，得到混合物a,搅拌的速率为300r/min，搅拌30min；
[0153]
s3：将褪黑素和紫杉醇缓释微胶囊与水性溶剂混合搅拌，得到混合物b，搅拌的速率为500r/min，搅拌30min；
[0154]
s4：将保湿剂与渗透压调节剂混合搅拌，得到混合物c，搅拌的速率为500r/min，搅拌30min；
[0155]
s5：将混合物a、混合物b、混合物c与增稠剂加入油性溶剂中，搅拌得到所述抑菌缓释凝胶，搅拌的速率为400r/min，搅拌30min。
[0156]
步骤s2、s3、s4搅拌后均需静置12h，步骤s2、s3、s4中溶剂的体积比为2：2：1。
[0157]
实施例6
[0158]
本实施例与实施例1的区别在于，步骤s2、s3、s4搅拌后均不静置，直接进行下一步骤。
[0159]
对比例1
[0160]
本对比例与实施例1的区别在于，不含有褪黑素。
[0161]
对比例2
[0162]
本对比例与实施例1的区别在于，单独添加紫杉醇，不以微胶囊的形式添加。
[0163]
对比例3
[0164]
本对比例与实施例1的区别在于，不含有紫杉醇缓释微胶囊。
[0165]
将实施例1-6与对比例1-3进行以下实验测试：
[0166]
实验1砷、汞、铅含量检测
[0167]
仪器设备：ja5003n型电子天平；北京吉天afs-8220型原子荧光光度计；岛津aa-6300c型原子吸收光度计。
[0168]
试剂名称、级别：硝酸(gr)、盐酸(gr)、氢氧化钠(gr)、硼氢化钠(gr)、硫脲(ar)、抗坏血酸(gr)、纯水。
[0169]
标准溶液及浓度：100μg/l砷，20μg/l汞，10mg/l铅。
[0170]
检测依据：《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章理化检验方法1.4砷第一法、1.2汞第一法、1.3铅第一法。
[0171]
检测条件：温度26℃，湿度62％rh。
[0172]
结果见下表：
[0173]
组别砷汞铅实施例1＜0.010＜0.0020＜1.5实施例2＜0.010＜0.0020＜1.5实施例3＜0.010＜0.0020＜1.5实施例4＜0.010＜0.0020＜1.5实施例5＜0.010＜0.0020＜1.5实施例6＜0.010＜0.0020＜1.5对比例1＜0.010＜0.0020＜1.5对比例2＜0.010＜0.0020＜1.5对比例3＜0.010＜0.0020＜1.5
[0174]
从实验1可以看出，通过本发明制备方法得到的抑菌缓释凝胶中砷、汞、铅的含量极低，使用安全，符合要求。
[0175]
实验2稳定性测定
[0176]
仪器设备：ja5003n型电子天平，岛津lc-20at型液相色谱仪，lhs-250hc-i型恒温恒湿箱。
[0177]
试剂名称、级别：0.1mol/l醋酸铵缓冲溶液，乙腈。
[0178]
标准溶液及浓度：100μg/l苯扎氯铵标准溶液。
[0179]
检测依据：《消毒技术规范》2002年版2.2.3.2.1和《化妆品安全技术规范》(2015年版)4.4苯扎氯铵。
[0180]
仪器条件：色谱柱，250*4.6mm，5μm的cn柱；柱温，25℃；进样体积，20μl；流速，1.0ml/min；检测波长，紫外检测器(260nm)；流动相，0.1mol/l醋酸铵缓冲溶液(ph＝5.0) 乙腈＝50 50。
[0181]
样品保存条件：37℃存放3个月。
[0182]
检测条件：温度27℃，湿度60％rh。
[0183]
结果见下表：
[0184][0185]
本发明制备的抑菌缓释凝胶较为稳定，凝胶中的活性成分下降率较低。
[0186]
实验3抑菌实验
[0187]
试验菌株：大肠杆菌(atcc25922)，金黄色葡萄球菌(atcc6538)，白色念珠菌(atcc10231)，以上菌种代数为3-5代，并用含0.03mol/lpbs配制菌悬液。
[0188]
刻度吸管(0.1ml、1.0ml、5.0ml、10.0ml)等。
[0189]
检测方法：参照gb15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录c4进行试验，用样品“凝胶”原液，作用时间2min、5min、10min和20min，试验重复3次。试验温度24℃。
[0190]
抑菌率结果见下表：
[0191][0192]
[0193][0194]
本发明的缓释抑菌凝胶具有较好的抑菌效果和缓释效果，使用凝胶10分钟后抑菌率仍在99.0％以上。
[0195]
实验4对肿瘤细胞的抑制作用
[0196]
将浓度为5
×
104个/ml人宫颈癌hela细胞株分别接种到6孔板中，在dmem(10％胎牛血清)培养基中培养24h，共设10个试验组，分别加入本发明实施例1-7及对比例1-3提供的凝胶，终浓度为1.8
×
10-5
m。各实验组培养24h后弃培养液，pbs洗涤3次，每孔用4％多聚甲醛固定20min后，吸出液体，pbs洗涤，甘油封片，检测hela细胞的存活率，结果如下表所示。
[0197]
组别hela细胞的存活率(％)实施例121.73
±
1.15实施例223.48
±
1.14实施例324.45
±
0.92实施例422.47
±
0.87实施例521.43
±
1.14实施例625.08
±
0.74对比例133.37
±
0.81对比例237.04
±
0.91对比例346.04
±
1.21
[0198]
从实施例和对比例的结果可以看出，本发明对癌细胞具有较好的抑制作用，从实施例和对比例2的结果可以看出，本发明采用的紫杉醇缓释微胶囊比单独添加紫杉醇对癌细胞的抑制效果大大增强。
[0199]
实验5缓释抑菌凝胶不同ph值下药物累积释放率
[0200]
称取3份15mg的紫杉醇缓释微胶囊分别加入到含有5mlph分别为4、5、6的pbs缓冲溶液中，在37℃下进行缓释。在10h后取上清液3ml，测量溶液吸光度，又同时加入3ml对应ph
的新鲜pbs缓冲溶液，维持溶液总体积不变，最终计算药物累积释放率，结果如下表所示：
[0201][0202][0203]
注：本实验的释药率为最大释药率。
[0204]
从本发明的不同ph值下的药物累积释放率可以看出，当ph值较低时，药物释放率较低，随着ph值逐渐增高，药物释放率随之提高，因此，本发明的紫杉醇缓释微胶囊具有ph响应性。
[0205]
综上所述，本发明具有强效的抑菌、抗病毒，保持阴道清洁的功效，在添加了适量的紫杉醇缓释微胶囊结合褪黑素起到预防宫颈的效用，同时，本发明的凝胶缓释效果突出，有效时间持久，并具有优秀的稳定性，保证了活性成分持续发挥作用。
[0206]
以上介绍了本发明的较佳实施方式，旨在使得本发明的精神更加清楚和便于理解，并不是为了限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的修改、替换、改进，均应包含在本发明所附的权利要求概括的保护范围之内。