一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法与流程

1.本发明属于食品添加剂检测技术领域，涉及分类号为g01n的技术领域，更具体的涉及一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法。


背景技术：

2.酱腌菜由于具有鲜甜脆嫩或咸鲜辛辣等味道，已经发展成为人们日常饮食中的主要调味菜。通过添加食品添加剂不仅能够提高酱腌菜中的鲜甜脆嫩或咸鲜辛辣的味道，还能延长酱腌菜的保质期。我国对酱腌菜中的食品添加剂的含量有严格的规定，但是在检测方法上，由于所使用的检测仪器以及对样品的处理方法不同，一般是对不同的添加剂进行单独检测分析，这种检测方法会耗费大量的检测时间。
3.专利申请号为cn201710231448.8的专利中公开了一种同时快速测定食品中丙酸、山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸含量的方法，该方法对样品经过多步预处理，不仅提高了检测的复杂性，而且降低了检测过程中的精确度。
4.酱腌菜中如腌制甜蒜，腌制甜蒜常用的食品添加剂有山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸，尤其糖精钠的使用量偏多，但是山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的混合检测方法未见报道，现亟需一种能够同时检测腌制甜蒜中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的混合添加剂的方法。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法，至少包括以下步骤：
6.配制标准储备溶液：分别配制山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的标准储备溶液；
7.配制混合标准中间液：通过山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的标准储备溶液加水稀释配制混合标准中间液；
8.配制混合标准工作液：使用混合标准中间液配制成浓度分别为0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml的混合标准工作液；
9.标准曲线的绘制：将各个不同浓度的混合标准工作液于液相色谱仪中进行进样，进样量为10μl，各标准物质以峰面积对应的标准浓度绘制成标准曲线；
10.试样制备：通过不锈钢高速均质器进行均质，得到均质酱腌菜；
11.试样提取：称取3g均质的酱腌菜于50ml的离心管中，加水至20ml后加入1ml氢氧化钠溶液，2.0ml亚铁氰化钾溶液，再加入2.0ml乙酸锌溶液，接着加水至20ml，超声提取15-20min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至50ml容量瓶中，在剩余的试样残渣中加水20ml，超声提取15-20min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至同一50ml容量瓶中，然后用水定容至刻度线，混匀，经孔径在0.2
±
0.05μm滤膜过滤，得到待测液；
12.待测液的测定：将待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测
液中山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的质量浓度。
13.本技术方案在试样提取的过程中加入适量氢氧化钠，提高试样提取过程中的ph值，使待测物中需要检测的食品添加剂以盐的形式更好的溶于处理液中，提高提取的准确性和稳定性。
14.作为一种优选的技术方案，所述液相色谱的测试条件为：采用安捷伦1200液相色谱仪，c
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不锈钢色谱柱(250mm
×
4.6mm，10μm)，柱温：30℃，流动a相为甲醇，流动b相为烷基磺酸钠和磷酸二氢铵溶液的混合物，流速为1.0-2ml/min，检测波长为230-240nm，进样量为10-15μl。
15.作为一种优选的技术方案，所述烷基磺酸钠选自己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠中的至少一种。
16.作为一种优选的技术方案，所述烷基磺酸钠为十二烷基磺酸钠。
17.作为一种优选的技术方案，所述磷酸二氢铵溶液的浓度为3-4g/l。
18.作为一种优选的技术方案，所述十二烷基磺酸钠在磷酸二氢铵溶液中的浓度为6-8mg/l。
19.发明人在测试过程中发现糖精酸钠与脱氢乙酸的液相色谱峰存在重叠的现象，发明人认为可能的原因是糖精酸钠与脱氢乙酸的分子量以及极性均相近，因而糖精酸钠与脱氢乙酸在检测过程中的保留时间也相近，故会出现糖精酸钠与脱氢乙酸之间的重峰现象。发明人意外发现通过在磷酸二氢铵溶液中添加一定的十二烷基磺酸钠，能够提高待分析物在液相色谱中的分离度，使各物质的色谱峰相互独立。发明人认为可能的原因是由于少量氢氧化钠的加入使山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸形成盐的形式，十二烷基磺酸钠能够与糖精钠，山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸形成的盐，结合成中性离子对，使其在色谱柱固定相中的溶解度增加，提高分配系数，由于各中性离子对与c
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的相互作用差异性较大，从而使各物质的色谱峰相互独立，提高分离度，提高检测过程中的精确度和稳定性。
20.作为一种优选的技术方案，所述液相色谱的洗脱程序为：0-3min，流动a相和流动b相的体积比在5：95，3-13min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，13-20min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，20-25min，流动a相和流动b相的体积比在5：95。
21.作为一种优选的技术方案，所述氢氧化钠溶液的浓度在10-14g/l。
22.作为一种优选的技术方案，所述亚铁氰化钾溶液的浓度在100-105g/l。
23.作为一种优选的技术方案，所述乙酸锌溶液的浓度在200-210g/l。
24.有益效果：
25.本技术方案中的发明人在试样提取的过程中加入适量氢氧化钠，提高试样提取过程中的ph值，使待测物中需要检测的食品添加剂以盐的形式更好的溶于处理液中。通过在流动b相中加入离子对试剂，提高待分析物在液相色谱中的分离度，使各物质的色谱峰相互独立，提高分析测试过程的准确性和稳定性。
具体实施方式
26.实施例1
27.本实施例的第一个方面提供了一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法，包括以下步骤：
28.配制标准储备溶液：分别配制山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸浓度为1mg/ml的标准储备溶液，所述山梨酸购买自阿拉丁，牌号为：s101106 ar 99％，所述苯甲酸购买自阿拉丁，牌号为：b302170，＞99％，所述糖精钠购自阿拉丁，牌号为：f283794，所述脱氢乙酸购自阿拉丁，牌号：d170376，＞99％；
29.配制混合标准中间液：通过山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的标准储备溶液加水稀释配制成各浓度为100μg/ml的混合标准中间液；
30.配制混合标准工作液：使用混合标准中间液配制成浓度分别为0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml的混合标准工作液；
31.标准曲线的绘制：将各个不同浓度的混合标准工作液于液相色谱仪中进行进样，进样量为10μl，各标准物质以峰面积对应的标准浓度绘制成标准曲线；
32.试样制备：通过不锈钢高速均质器进行均质，得到均质酱腌菜，本实施例中的酱腌菜为酱腌甜蒜，所述酱腌甜蒜为市售；
33.试样提取：称取3g均质的酱腌菜于50ml的离心管中，加水至20ml后加入1ml氢氧化钠溶液，2.0ml亚铁氰化钾溶液，再加入2.0ml乙酸锌溶液，接着加水至20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至50ml容量瓶中，在剩余的试样残渣中加水20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至同一50ml容量瓶中，然后用水定容至刻度线，混匀，经孔径在0.2μm滤膜过滤，得到待测液；
34.待测液的测定：将待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的质量浓度。
35.所述液相色谱的测试条件为：采用安捷伦1200液相色谱仪，c
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不锈钢色谱柱(250mm
×
4.6mm，10μm)，柱温：30℃，流动a相为甲醇，流动b相为烷基磺酸钠和磷酸二氢铵溶液的混合物，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，进样量为15μl。所述烷基磺酸钠为十二烷基磺酸钠。所述磷酸二氢铵溶液的浓度为3.5g/l。所述十二烷基磺酸钠在磷酸二氢铵溶液中的浓度为7mg/l。所述液相色谱的洗脱程序为：0-3min，流动a相和流动b相的体积比在5：95，3-13min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，13-20min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，20-25min，流动a相和流动b相的体积比在5：95。所述氢氧化钠溶液的浓度为12g/l，所述亚铁氰化钾溶液的浓度在103g/l，所述乙酸锌溶液的浓度在205g/l。所述甲醇购于阿拉丁，牌号为：m116126，≥99.9％，所述氢氧化钠购于阿拉丁，牌号为：s111509，≥99％，所述亚铁氰化钾购于阿拉丁，牌号为：亚铁氰化钾，三水，p112417，≥99％，所述乙酸锌购于阿拉丁，牌号为：乙酸锌，二水，ar z110779，≥99％，所述磷酸二氢铵购于阿拉丁，牌号为：a141011，≥99％。
36.实施例2
37.本实施例的第一个方面提供了一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法，包括以下步骤：
38.配制标准储备溶液：分别配制山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸浓度为1mg/ml的标准储备溶液，所述山梨酸购买自阿拉丁，牌号为：s101106ar 99％，所述苯甲酸购买自阿拉丁，牌号为：b302170，＞99％，所述糖精钠购自阿拉丁，牌号为：f283794，所述脱氢乙酸购自阿拉丁，牌号：d170376，＞99％；
39.配制混合标准中间液：通过山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的标准储备溶液加
水稀释配制成各浓度为100μg/ml的混合标准中间液；
40.配制混合标准工作液：使用混合标准中间液配制成浓度分别为0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml的混合标准工作液；
41.标准曲线的绘制：将各个不同浓度的混合标准工作液于液相色谱仪中进行进样，进样量为10μl，各标准物质以峰面积对应的标准浓度绘制成标准曲线；
42.试样制备：通过不锈钢高速均质器进行均质，得到均质酱腌菜，本实施例中的酱腌菜为酱腌甜蒜，所述酱腌甜蒜为市售；
43.试样提取：称取3g均质的酱腌菜于50ml的离心管中，加水至20ml后加入2.0ml亚铁氰化钾溶液，再加入2.0ml乙酸锌溶液，接着加水至20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至50ml容量瓶中，在剩余的试样残渣中加水20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至同一50ml容量瓶中，然后用水定容至刻度线，混匀，经孔径在0.2μm滤膜过滤，得到待测液；
44.待测液的测定：将待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的质量浓度。
45.所述液相色谱的测试条件为：采用安捷伦1200液相色谱仪，c
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不锈钢色谱柱(250mm
×
4.6mm，10μm)，柱温：30℃，流动a相为甲醇，流动b相为烷基磺酸钠和磷酸二氢铵溶液的混合物，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，进样量为15μl。所述烷基磺酸钠为十二烷基磺酸钠。所述磷酸二氢铵溶液的浓度为3.5g/l。所述十二烷基磺酸钠在磷酸二氢铵溶液中的浓度为7mg/l。所述液相色谱的洗脱程序为：0-3min，流动a相和流动b相的体积比在5：95，3-13min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，13-20min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，20-25min，流动a相和流动b相的体积比在5：95。所述氢氧化钠溶液的浓度为12g/l，所述亚铁氰化钾溶液的浓度在103g/l，所述乙酸锌溶液的浓度在205g/l。所述甲醇购于阿拉丁，牌号为：m116126，≥99.9％，所述氢氧化钠购于阿拉丁，牌号为：s111509，≥99％，所述亚铁氰化钾购于阿拉丁，牌号为：亚铁氰化钾，三水，p112417，≥99％，所述乙酸锌购于阿拉丁，牌号为：乙酸锌，二水，ar z110779，≥99％，所述磷酸二氢铵购于阿拉丁，牌号为：a141011，≥99％。
46.实施例3
47.本实施例的第一个方面提供了一种检测酱腌菜中混合食品添加剂的方法，包括以下步骤：
48.配制标准储备溶液：分别配制山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸浓度为1mg/ml的标准储备溶液，所述山梨酸购买自阿拉丁，牌号为：s101106ar 99％，所述苯甲酸购买自阿拉丁，牌号为：b302170，＞99％，所述糖精钠购自阿拉丁，牌号为：f283794，所述脱氢乙酸购自阿拉丁，牌号：d170376，＞99％；
49.配制混合标准中间液：通过山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的标准储备溶液加水稀释配制成各浓度为100μg/ml的混合标准中间液；
50.配制混合标准工作液：使用混合标准中间液配制成浓度分别为0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml的混合标准工作液；
51.标准曲线的绘制：将各个不同浓度的混合标准工作液于液相色谱仪中进行进样，进样量为10μl，各标准物质以峰面积对应的标准浓度绘制成标准曲线；
52.试样制备：通过不锈钢高速均质器进行均质，得到均质酱腌菜，本实施例中的酱腌菜为酱腌甜蒜，所述酱腌甜蒜为市售；
53.试样提取：称取3g均质的酱腌菜于50ml的离心管中，加水至20ml后加入1ml氢氧化钠溶液，2.0ml亚铁氰化钾溶液，再加入2.0ml乙酸锌溶液，接着加水至20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至50ml容量瓶中，在剩余的试样残渣中加水20ml，超声提取15min，之后3000r/min离心10min，取上清液转移至同一50ml容量瓶中，然后用水定容至刻度线，混匀，经孔径在0.2μm滤膜过滤，得到待测液；
54.待测液的测定：将待测液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的质量浓度。
55.所述液相色谱的测试条件为：采用安捷伦1200液相色谱仪，c
18
不锈钢色谱柱(250mm
×
4.6mm，10μm)，柱温：30℃，流动a相为甲醇，流动b相为磷酸二氢铵溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，进样量为15μl。所述磷酸二氢铵溶液的浓度为3.5g/l。所述十二烷基磺酸钠在磷酸二氢铵溶液中的浓度为7mg/l。所述液相色谱的洗脱程序为：0-3min，流动a相和流动b相的体积比在5：95，3-13min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，13-20min，流动a相和流动b相的体积比在35：65，20-25min，流动a相和流动b相的体积比在5：95。所述氢氧化钠溶液的浓度为12g/l，所述亚铁氰化钾溶液的浓度在103g/l，所述乙酸锌溶液的浓度在205g/l。所述甲醇购于阿拉丁，牌号为：m116126，≥99.9％，所述氢氧化钠购于阿拉丁，牌号为：s111509，≥99％，所述亚铁氰化钾购于阿拉丁，牌号为：亚铁氰化钾，三水，p112417，≥99％，所述乙酸锌购于阿拉丁，牌号为：乙酸锌，二水，ar z110779，≥99％，所述磷酸二氢铵购于阿拉丁，牌号为：a141011，≥99％。
56.性能测试
57.使用实施例1-3中的测试方法分别重复三次，计算三次所测量的山梨酸、苯甲酸、糖精钠与脱氢乙酸的质量浓度的精密度，表征试验方法的准确性和稳定性。
58.