一类具有免疫调节功能的化合物的制备和应用的制作方法

1.本发明涉及小分子蛋白抑制剂领域，具体地，本发明提供了一种具有免疫调节功能的化合物的制备和应用。


背景技术：

2.免疫系统具有监视、防御、调控等作用。细胞免疫主要参与对胞内寄生的病原微生物的免疫应答及对肿瘤细胞的免疫应答，参与迟发型变态反应和自身免疫病的形成，参与移植排斥反应及对体液免疫的调节。t淋巴细胞被抗原递呈细胞的激活通常受两种不同信号的调节。初级信号由apc细胞上的主要组织相容性复合体(mhc)呈递外来抗原肽通过t细胞受体(tcr)转导。次级信号，又称共刺激信号，通过apc细胞上的共刺激分子与t细胞表面受体结合，传递给t细胞，调节t细胞增殖，细胞因子分泌和效应功能。次级信号包括正调节和负调节两种方式，正调节信号促进t细胞激活，负调节信号诱导t细胞耐受，对人体适应和调整自身免疫细胞对外界不同抗原的反应作用至关重要。
3.程序性细胞死亡蛋白配体1(programmed death-ligand 1，pd-l1)，又可称为分化簇274(cluster of differentiation 274，cd274)或者b7同源蛋白1(b7 homolog1，b7-h1)，属于肿瘤坏死因子超家族，是由290个氨基酸残基组成的i型跨膜糖蛋白，包含一个igv样区、一个igc样区、一个跨膜疏水区和一个30个氨基酸的胞内尾部，完整分子量为40kda。pd-l1 mrna在几乎所有组织中都有，但pd-l1蛋白只在少部分组织中持续表达，包括肝脏、肺脏、扁桃体以及免疫特赦组织如眼、胎盘等。pd-l1也表达于活化的t细胞，b细胞，单核细胞，树突状细胞，巨噬细胞等。
4.pd-l1的受体为pd-1，主要表达于活化的cd4 t细胞、cd8 t细胞、nk细胞、b细胞和活化的单核细胞等免疫细胞表面。pd-l1与pd-1结合可以促使pd-1胞浆内的itsm(免疫受体酪氨酸转换基序)结构中的酪氨酸发生磷酸化，招募shp1/2,使下游syk和pi3k发生去磷酸化，限制抗原呈递细胞或者树突状细胞与t细胞的相互作用。这种结合还可以进一步抑制t细胞的代谢，减少效应细胞因子il-2，ifn-γ的分泌，诱导t细胞耗竭和凋亡，从而降低t细胞参与的免疫应答，行使负调节功能。
5.t细胞识别抗原并活化后会分泌ifn-γ。t细胞来源的ifn-γ会扩增和维持t细胞功能，比如上调mhc分子，增强目标细胞的抗原处理和呈递，促进t细胞分化。ifn-γ同时也会诱导免疫炎症部位组织的pd-l1表达，防止过度免疫对组织造成伤害。在ifn-γ刺激下，pd-l1表达在抗原提呈细胞(dc细胞、巨噬细胞等)，以及血管内皮细胞的表面。ifn-γ诱导产生的干扰素调节因子1(irf-1)也可以与pd-l1转录起始位点前200bp和320bp处的干扰素调节因子结合位点结合，从转录水平调节pd-l1。pd-l1可以与t细胞表面的pd-1结合行使负调节功能，从而保护炎性部位。
6.pd-l1的负性调控功能在肿瘤免疫中发挥着重要作用。2004年，konishi等率先在非小细胞肺癌病人的组织样本中发现pd-l1的表达，随后pd-l1被发现表达于各种肿瘤病人的组织中，包括胃癌，肺癌，肝癌，肝内胆管癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，乳腺癌，子宫颈癌，
头颈鳞状细胞癌，鼻咽癌，食管癌，膀胱癌，肾细胞癌，皮肤癌，口腔鳞状细胞癌等。细胞恶变过程中，由于基因突变、外源基因(病毒)表达或静止基因激活等原因会产生新的蛋白分子，这些蛋白质在细胞内降解后，某些降解的肽段可以表达于细胞表面，成为肿瘤抗原。免疫系统可以通过免疫监察识别肿瘤抗原并清除肿瘤细胞，而肿瘤细胞则利用pd-l1逃避免疫攻击。
7.肿瘤部位pd-l1的表达可以通过多种途径保护肿瘤细胞免受伤害。肿瘤浸润淋巴细胞(til)分泌ifn-γ可诱导肿瘤细胞及周围基质细胞表达pd-l1。而肿瘤细胞的pd-l1可以与til上pd-1结合，抑制til细胞的活化，并进一步导致其凋亡。体外实验证明，肿瘤细胞相关pd-l1可以增加肿瘤特异t细胞的调亡，而pd-l1单克隆抗体可以减弱这种作用。肿瘤相关pd-l1可以促进t细胞表达il-10，进一步抑制免疫反应。pd-l1不仅仅是pd-1的配体，他也可以作为受体传递反向的信号保护肿瘤细胞免受fas-fasl等其他抗肿瘤途径诱导的凋亡。
8.目前多个已上市的靶向pd-1或者pd-l1的单克隆抗体药物证实pd-1/pd-l1的阻断剂可用于多种肿瘤的临床治疗。然而抗体药物有其自身的特点，如生产成本高，稳定性较差，需经注射给药及易产生免疫原性等。而小分子药物具有组织渗透性好，储存运输方便，生产成本较低，无免疫原性及通常可口服给药等优势，因此研究开发pd-1/pd-l1的小分子阻断剂具有显著的应用价值和社会价值。
9.综上所述，本领域迫切需要开发小分子的pd-1/pd-l1阻断剂。


技术实现要素：

10.本发明的目的是提供一种小分子的pd-1/pd-l1阻断剂。
11.本发明的第一方面，提供了一种如下式i所示的化合物，其立体异构体或其互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物：
[0012][0013]
其中，
[0014]
a环选自下组：5-12元杂芳基(优选为6元杂芳基)、c6-c10芳基(优选为苯基)、5-12元杂环烷基(包括饱和或部分不饱和的单环、双环、螺环或桥环)、c3-c12(优选为c5-c12)环烷基，其中，所述的杂环烷基具有1-3个选自n、o、s的杂原子；
[0015]
r1、r4各自独立地选自下组：h、卤素、cn、c1-c3烷基、c1-c3烷氧基；
[0016]
r5独立地选自下组：h、卤素、cn、c1-c6烷基、卤代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤代的c1-c6烷氧基、c3-c6环烷基、卤代的c3-c6环烷基；
[0017]
r2独立选自下组：c1-c4烷基、n1为0、1、2、3或4；
[0018]
ra和rb各自独立地选自下组：h、c1-c8烷基、c3-c8环烷基(包括单环、并环、螺环和桥环)、具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂环基(包括单环、并环、螺环和桥环)或-(ch2)
n2-rc；其中，所述的rc为5-7元的含氮饱和环、c3-c8元环烷基，n2为0、2、3或4；或ra和
rb与相连的n原子共同构成5-10元的饱和杂环；
[0019]
其中，ra、rb、rc，或ra和rb其共同形成的环可进一步被1-3个选自下组基团取代：卤素，cooh，c(r6r7)
m1-cooh，c1-c3烷基，c1-c6酰胺基(-c(＝o)-n(rd)2或-nh-c(＝o)(rd)，rd为h或c1-c5的烷基)；其中m1为1、2或3，r6和r7各自独立地选自h，卤素，c1-c3烷基；
[0020]
r3独立选自下组：4-8元含氮杂环，n3为0、1或2；
[0021]
所述4-8元含氮杂环可被ch
2-re取代，其中，所述的re为5-7元的含氮饱和环；
[0022]
ra’和rb’各自独立地选自下组：h、c1-c3烷基、或ch
2-re；其中，所述的re为5-7元的含氮饱和环；
[0023]
其中，ra’、rb’和re上的碳原子可任选地被羰基取代；
[0024]
n为0、1或2；
[0025]
m为0、1、2或3；
[0026]
各个l各自独立地选自下组：化学键、c2-c4亚烯基、卤代的c2-c4亚烯基；
[0027]
或所述的共同构成如下式所示的结构：其中，x和y各自独立地选自下组：o、s、n、ch、nh、ch2；虚线为单键或双键；
[0028]
为基团的连接位点；
[0029]
各个各自独立地为单键或双键；
[0030]
附加条件是式i化合物为化学上稳定的结构。
[0031]
在另一优选例中，r1和r4各自独立地选自下组：卤素、甲基。
[0032]
在另一优选例中，r1和r4各自独立地选自下组：cl、br。
[0033]
在另一优选例中，所述的r5中至少包括一个选自下组的基团：-ochf2、-och2f、环丙基、cn、乙基、-ch2cf3。
[0034]
在另一优选例中，所述的r2和r3各自独立地选自下组：各自独立地选自下组：其中，所述的e环为氮杂5-7元饱和环，p，r和s各自独立地为0、1、2或3，且所述的r选自下组：氧代(＝o)、羧基。
[0035]
在另一优选例中，所述的化合物具有如下式所示的结构：
[0036]
[0037]
其中，x1和x2各自独立地为ch或n，且当x1或x2为ch时，所述的r5或r5'可以位于ch上(此时对应的x1或x2为c)；
[0038]
r5为选自下组的基团：未取代或卤代的c2-c6烷基、卤代的c1-c6烷氧基、氰基取代的c1-c6烷氧基、未取代或卤代的c3-c6环烷基；优选为卤代的c1-c6烷氧基、未取代或卤代的c2-c6烷基；
[0039]
r5'为选自下组的基团：h、未取代或卤代的c1-c6烷基、未取代或卤代的c1-c6烷氧基、未取代或卤代的c3-c6环烷基；优选为未取代或卤代的c1-c6烷基、未取代或卤代的c1-c6烷氧基、未取代或卤代的c3-c6环烷基。在另一优选例中，所述的r5中至少包括一个选自下组的基团：-ochf2、-och2f、环丙基、cn，乙基，-ch2cf3、-och2cn。
[0040]
在另一优选例中，所述的ra和rb各自独立地选自下组：h、c1-c8烷基、c3-c8环烷基(包括单环、并环、螺环和桥环)、具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂环基(包括单环、并环、螺环和桥环)；或ra和rb与相连的n原子共同构成5-10元的饱和杂环；
[0041]
其中，ra、rb、和ra与rb共同形成的饱和杂环可进一步被1-3个选自下组基团取代：卤素，c1-c3烷基，c1-c6酰胺基，cooh，c(r6r7)
m1-cooh；其中，m1为1、2或3，r6和r7各自独立地选自h，卤素，c1-c3烷基。
[0042]
在另一优选例中，所述的ra选自下组：h、c1-c3烷基；
[0043]
所述的rb选自下组：c3-c8环烷基(包括单环、并环、螺环和桥环)、具有1-3个选自n、s和o的杂原子的5-10元杂环基(包括单环、并环、螺环和桥环)；
[0044]
或ra和rb与相连的n原子共同构成5-10元的饱和杂环；
[0045]
其中，ra、rb、或ra与rb共同形成的饱和杂环可进一步被1-3个选自下组基团取代：卤素，c1-c3烷基，c1-c6酰胺基，cooh，c(r6r7)
m1-cooh；其中，m1为1、2或3，r6和r7各自独立地选自h，卤素，c1-c3烷基。
[0046]
在另一优选例中，所述的ra选自下组：h、c1-c3烷基；
[0047]
所述的rb选自下组：c1-c8烷基，或选自下组的基团：
[0048][0049]
或ra和rb与相连的n原子共同构成选自下组的饱和杂环：或ra和rb与相连的n原子共同构成选自下组的饱和杂环：
[0050]
且所述的ra、rb或其共同形成的基团可进一步被1-3个选自下组基团取代：c1-c3烷基，cooh，c(r6r7)
m1-cooh；其中，m1为1、2或3，r6和r7各自独立地选自h，卤素，c1-c3烷基。
[0051]
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
[0052]
[0053]
[0054]
[0055][0056]
在另一优选例中，各个l各自独立地选自下组：c2-c4亚烯基、卤代的c2-c4亚烯基。
[0057]
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
[0058][0059]
在另一优选例中，所述的化合物具有如下式所示的结构：
[0060][0061]
在另一优选例中，所述的x和y各自独立地选自下组：o、n、ch、nh、ch2。
[0062]
在另一优选例中，所述的环选自下组：
[0063]
在另一优选例中，所述的环选自下组：
[0064]
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
[0065][0066]
在另一优选例中，所述的ra、rb、或ra与rb共同形成的含氮杂环选自下组的基团：
[0067][0068]
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
[0069][0070]
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含(1)如本发明第一方面所述的化合物或其立体异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；(2)药学上可接受的载体。
[0071]
本发明的第三方面，提供了一种如本发明第一方面所述的化合物或其立体异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物或如本发明第二方面所述的药物组合物的用途，其用于制备预防和/或治疗与pd-1/pd-l1的活性或表达量相关的疾病的药物组合物；较佳地，所述的疾病选自下组：肿瘤、病原体感染、自身免疫应答相关疾病。
[0072]
在另一优选例中，所述的疾病选自下组：肿瘤、病原体感染、自身免疫应答相关疾病。
[0073]
在另一优选例中，所述的药物组合物用于选自下组的疾病的治疗：黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素不应性前列腺腺癌)、乳癌、结肠癌和肺癌(例如非小细胞肺癌)。骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素
瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃肠、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、曱状旁腺癌、肾上腺癌、软組织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包括急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)的赘生物/肿瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴(spinalaxis)肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(kaposi)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些癌症)、及所述癌症的组合。转移性癌症，尤其是表达pd-ll的转移性癌症
[0074]
在另一优选例中，所述的药物组合物用于联合用药方案，较佳地，所述的联合用药方案包括：联合肿瘤化疗方案，其他肿瘤免疫治疗剂(小分子化合物及抗体等)，放疗方案，肿瘤靶向药，肿瘤疫苗(如人类乳头瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波西疱疹肉瘤病毒(khsv))。
[0075]
在另一优选例中，所述的药物组合物用于单独或联合使用用于治疗暴露于特定毒素或病原体的患者的治疗。其中包括但不限于各种病毒，病原体细菌，病原体真菌，病原体寄生虫等的治疗。如hiv、肝炎病毒(甲、乙、丙)、流感病毒、疱疹病毒、贾第虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等病原体已建立的感染。
[0076]
在另一优选例中，所述的药物组合物用于诱导治疗性自身免疫应答。
[0077]
在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗具有不恰当的其他自身抗原积累的患者，如淀粉状蛋白沉积物，包括阿尔茨海默病中的αβ、细胞因子如tnfa和ige。
[0078]
本发明的第四方面，提供了一种pd-1/pd-l1抑制剂，所述抑制剂包含本发明第一方面所述的化合物、或其立体异构体或互变异构体、或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0079]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0080]
本发明人经过长期而深入的研究，设计并合成了一类新型pd-1小分子抑制剂。在此基础上，发明人完成了本发明。
[0081]
术语
[0082]
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0083]
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于5％。例如，如本文所用，表述“约100”包括95和105和之间的全部值(例如，95.1、95.2、95.3、95.4等)。
[0084]
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由
…
构成”、或“由
…
构成”。
[0085]
定义
[0086]
如本文所用，术语“烷基”包括直链或支链的烷基。例如c
1-c8烷基表示具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。
[0087]
如本文所用，术语“烯基”包括直链或支链的烯基。例如c
2-c6烯基指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
[0088]
如本文所用，术语“炔基”包括直链或支链的炔基。例如c
2-c6炔基是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、或类似基团。
[0089]
如本文所用，术语“c
3-c8环烷基”指具有3-8个碳原子的环烷基。其可以是单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或类似基团。也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。
[0090]
如本文所用，术语“c
1-c8烷氧基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链的烷氧基；例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
[0091]
如本文所用，术语“具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的3-10元杂环烷基”是指具有3-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组n、s和o的杂原子的饱和或部分饱和的环状基团。其可以是单环，也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。具体的实例可以为氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢-2h-吡喃基、哌啶基、四氢呋喃基、吗啉基和吡咯烷基等。
[0092]
如本文所用，术语“c
6-c
10
芳基”是指具有6-10个碳原子的芳基，例如，苯基或萘基等类似基团。
[0093]
如本文所用，术语“具有1-3个选自下组n、s和o的杂原子的5-10元杂芳基”指具有5-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组n、s和o的杂原子的环状芳香基团。其可以是单环，也可以是稠环形式。具体的实例可以为吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-三唑基以及(1,2,4)-三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异恶唑基、噻唑基、恶唑基等。
[0094]
除非特别说明，否则本发明的基团均可被选自下组的取代基所取代：卤素、腈基、硝基、羟基、氨基、c
1-c6烷基-胺基、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、c
1-c6烷氧基、卤代c
1-c6烷基、卤代c
2-c6烯基、卤代c
2-c6炔基、卤代c
1-c6烷氧基、烯丙基、苄基、c
6-c
12
芳基、c
1-c6烷氧基-c
1-c6烷基、c
1-c6烷氧基-羰基、苯氧羰基、c
2-c6炔基-羰基、c
2-c6烯基-羰基、c
3-c6环烷基-羰基、c
1-c6烷基-磺酰基等。
[0095]
如本文所用，“卤素”或“卤原子”指f、cl、br、和i。更佳地，卤素或卤原子选自f、cl和br。“卤代的”是指被选自f、cl、br、和i的原子所取代。
[0096]
除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
[0097]
如本文所用，术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1h-吲唑与2h-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。
[0098]
如本文所用，术语“溶剂合物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。
[0099]
式i化合物的制备
[0100]
本发明还提供了一种制备如本发明第一方面所述化合物的方法，下面展示以化合物i-a的合成，其他式i化合物可类似地合成。其合成包括如下步骤：在适当的溶剂中，化合物1和化合物2在钯催化剂作用下，在碱和膦化合物存在下，反应得到化合物3，同时在合适的溶剂中，化合物4和化合物5在酸存在下，反应得到化合物6，然后在合适的溶剂中，化合物3和化合物6在钯催化剂作用下，在碱和膦化合物存在下，反应得到化合物i-a。
[0101][0102]
药物组合物和施用方法
[0103]
由于本发明化合物具有优异的pd-1的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗与pd-1/pd-l1信号通路相关的疾病(例如，癌症)。
[0104]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
[0105]“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0106]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内注射、吸入或皮下)。
[0107]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂
酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0108]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0109]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0110]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0111]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0112]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0113]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0114]
联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种其他药学上可接受的化合物。该其他药学上可接受的化合物中的一种或多种可与本发明的化合物同时、分开或顺序地给药。
[0115]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0116]
在本发明的优选实施方式中，所述的药物组合物可以用于：
[0117]
(1)用于治疗各种肿瘤，包括但不限制于黑素瘤(例如转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素不应性前列腺腺癌)、乳癌、结肠癌和肺癌(例如非小细胞肺癌)。骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃肠、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、曱状旁腺癌、肾上腺癌、软組织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包括急性髓细胞样白血病、慢性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、儿童期实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)的赘生物/肿瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管发生、脊髓轴(spinalaxis)肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(kaposi)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些癌症)、及所述癌症的组合。转移性癌症，尤其是表达pd-ll的转移性癌症
[0118]
(2)用于联合用药方案，例如联合肿瘤化疗方案，其他肿瘤免疫治疗剂(小分子化
合物及抗体等)，放疗方案，肿瘤靶向药，肿瘤疫苗等，如人类乳头瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波西疱疹肉瘤病毒(khsv)。可以在所述药剂之前、之后或同时施用，或者可以与其它已知疗法共施用。
[0119]
(3)用于单独或联合使用用于治疗暴露于特定毒素或病原体的患者的治疗。其中包括但不限于各种病毒，病原体细菌，病原体真菌，病原体寄生虫等的治疗。如hiv、肝炎病毒(甲、乙、丙)、流感病毒、疱疹病毒、贾第虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等病原体已建立的感染。
[0120]
(4)用于诱导治疗性自身免疫应答，以治疗具有不恰当的其他自身抗原积累的患者，如淀粉状蛋白沉积物，包括阿尔茨海默病中的αβ、细胞因子如tnfa和ige。
[0121]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比按重量计算，柱层析纯化时使用的试剂比例按体积比计算。
[0122]
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
[0123]
中间体a的合成：
[0124]
n-(3-溴-2-氯苯基)-2-(溴甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0125][0126]
3-溴-2-氯苯胺
[0127][0128]
将3-溴-2-氯硝基苯(18克，76.1毫摩尔)和铁(21.3克，380.6毫摩尔)加入氯化铵(4克，76.1毫摩尔)的乙醇(50毫升)/水(25毫升)溶液中，在60℃下搅拌4个小时。反应液过滤并减压浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙醇＝20:1)得到标题化合物3-溴-2-氯苯胺(22克，84.6％)，为淡黄色液体。ms(esi):m/z＝207.9[m h]

.
[0129]
n-(3-溴-2-氯苯基)-2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0130][0131]
将3-溴-2氯苯胺(30克，145.6毫摩尔)，n-(3-溴-2-氯苯基)-2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(29克，133.6毫摩尔)和对甲苯磺酸(9克，52.3毫摩尔)的2-戊醇(15毫
升)溶液依次加入封管中，100℃搅拌24小时。反应液加入水(400毫升)，二氯甲烷/甲醇(110毫升
×
3，v/v＝10/1)萃取，有机相依次用水洗，食盐水洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残留物通过正相柱层析纯化(石油醚:二氯甲烷＝1:1)得到标题化合物a-2(23克，45％)，为黄色固体。ms(esi):m/z＝385.9[m h]

.
[0132]
n-(3-溴-2-氯苯基)-2-(溴甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0133][0134]
将a-2(23克，59.8毫摩尔)的氢溴酸醋酸溶液(150毫升)在80℃下搅拌15小时。反应液在冰浴下用碳酸钾中和，析出的固体用石油醚：乙酸乙酯(100毫升：10毫升)的混合溶液打浆得到标题化合物a(24克，93％)，为黄色固体。ms(esi):m/z＝433.8[m h]

.
[0135]
中间体b的合成：
[0136]
2,2'-(2-氯-1,3-亚苯基)二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环)
[0137][0138]
2,2'-(2-氯-1,3-亚苯基)二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环)
[0139][0140]
在氮气保护下将2-氯-1,3-2溴苯(25克，92.4毫摩尔)，联硼酸频哪醇酯(58.5克，231毫摩尔)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
·
二氯甲烷(10克，12.2毫摩尔)和醋酸钾(36.3克，370毫摩尔)混合均匀，加入1,4-二氧六环(400毫升)，反应混合物在80℃搅拌18个小时。反应液过滤，滤饼用甲醇冲洗两遍，滤液浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到标题化合物b(21克，62.3％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝365.2[m h]

.
[0141]
中间体c的合成：
[0142]
6-氯-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0143][0144]
甲基2,6-二氯-4-甲基尼古丁酸酯
[0145]
[0146]
往2,6-二氯-4-甲基尼古丁酸(90克，436.9毫摩尔)的n,n-二甲基甲酰胺(0.5升)溶液中加入碳酸钾(90.4克，655.3毫摩尔)，反应混合物用冰浴冷却到0℃，缓慢滴加碘甲烷(186克，1.31摩尔)，移去冰浴，自然升至室温后搅拌13小时。反应液加入水(1升)，然后用乙酸乙酯(1升)萃取三次，有机相用饱和食盐水洗涤(800毫升
×
4)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到标题化合物c-1(105克，99％)粗品，为白色固体。ms(esi):m/z＝219.9[m h]

.
[0147]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.16(d,j＝0.6hz,1h),3.97(s,3h),2.35(d,j＝0.5hz,3h).
[0148]
甲基6-氯-2-甲氧基-4-甲基尼古丁酸酯
[0149][0150]
冰浴下，往c-1(87.6克，398.2毫摩尔)的二氯甲烷(900毫升)溶液中分批加入甲醇钠固体(21.5克，398.2毫摩尔)，搅拌，移去冰浴在室温下反应6小时。液相质谱检测有原料剩余，向反应液中补加甲醇钠固体(4.3克，79.64毫摩尔)，继续搅拌13小时后再次补加甲醇钠固体(4.3克，79.64毫摩尔)，再反应6小时后液相质谱检测原料完全消失。反应液倒入碳酸氢钠(500毫升)水溶液中，用二氯甲烷(1升)萃取三次，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到标题化合物c-2(84.4克，98.3％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝215.9[m h]

.
[0151]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.81
–
6.78(m,1h),3.96(s,3h),3.91(s,3h),2.29(s,3h).
[0152]
甲基6-氯-2-羟基-4-甲基尼古丁酸酯
[0153][0154]
将c-2(87.4克，405.4毫摩尔)加入33％氢溴酸的醋酸溶液(450毫升)中并在60℃下搅拌30分钟。反应液浓缩除去部分溴化氢和乙酸，残留物在冰浴下用碳酸氢钠溶液调节ph到4-5，过滤，滤饼用柱层析(二氯甲烷：甲醇＝100:1)纯化得到标题化合物c-3(57克，69.6％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝201.9[m h]

.
[0155]
甲基6-氯-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁酸酯
[0156][0157]
将60％氢化钠(13.4克，334.8毫摩尔)加入乙腈(270毫升)中，室温下搅拌10分钟后加入c-3(27克，133.9毫摩尔)，继续搅拌30分钟后向反应液中快速注入2-氟磺酰基二氟乙酸(40.5克，227.7毫摩尔)，此时反应液温度快速升至50℃以上。加料完成后继续搅拌一小时至反应液恢复到室温。液相质谱检测到90％的原料消失。将反应液缓慢倒至冰浴冷却的饱和碳酸氢钠水溶液(1.5升)中淬灭，边倒边搅拌，用乙酸乙酯(1升)萃取三次，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩,残留物通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:9)纯化得到标题化合物c-4(31克，纯度80％，收率46％)，为黄色油状物。ms(esi):m/z＝251.9[m h]

.
[0158]
(6-氯-2-(二氟甲氧基)-4-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0159][0160]
在-60℃下，往c-4(30克，119.2毫摩尔)的二氯甲烷(300毫升)溶液中滴加二异丁基氢化铝的甲苯溶液(1.5摩尔/升，159毫升，238.5毫摩尔)，滴加完毕后两小时内反应液缓慢升温至室温，液相质谱检测反应完全。反应液用酒石酸钾钠(500毫升)水溶液淬灭，硅藻土过滤。将硅藻土上层的固体用稀盐酸溶解后用二氯甲烷(300毫升)萃取三次，有机相用氢氧化钠水溶液(0.5摩尔/升，250毫升
×
2)洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩得到标题化合物c-5(19.3克，72.6％)，为红色固体。ms(esi):m/z＝223.9[m h]

.
[0161]
6-氯-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0162][0163]
在冰浴下往c-5(18.3克，81.84毫摩尔)的二氯甲烷(200毫升)溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(52克，122.76毫摩尔)，室温搅拌三小时。将反应液倒入碳酸氢钠(300毫升)水溶液中淬灭，硅藻土过滤，二氯甲烷(200毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。残留物通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1:9)纯化，得到标题化合物c(15.3克，84.6％)，为白色固体。
[0164]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.40(d,j＝0.4hz,1h),7.66(s,0.25h),7.48(s,0.5h),7.30(s,0.25h),6.99(s,1h),2.57(d,j＝0.5hz,3h).
[0165]
中间体d的合成：
[0166]
(s)-1-((3-氯-5-醛基-6-甲氧基吡啶)-2-氧)-2,3-二氢-1h-茚-4-三氟甲磺酸酯
[0167][0168]
4-(叔丁基二甲基硅氧基)-2,3-二氢-1h-茚-1-酮
[0169][0170]
将4-羟基-2,3-二氢-1h-茚-1-酮(20.54克，138.8毫摩尔)，叔丁基二甲基氯硅烷(31.45克，208.7毫摩尔)，咪唑(18.92克，278.2毫摩尔)溶于二氧六环(300毫升)中，反应液
在20℃搅拌16小时。液相质谱检测反应结束后，反应液用1摩尔/升盐酸调节ph为中性，并用水(100毫升)稀释，乙酸乙酯萃取(50毫升
×
3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)得到标题化合物d-1(35克，》99％)，为无色油状物。ms(esi):m/z＝263.1[m h]

.
[0171]
(s)-4-(叔丁基二甲基硅氧基)-2,3-二氢-1h-茚-1-醇
[0172][0173]
将(r)-2-甲基-cbs-恶唑硼烷(1.61克，5.81毫摩尔)溶于甲苯(3毫升)，向上述溶液中加入硼烷二甲硫醚(10摩尔/升，21毫升)，反应液在室温搅拌30分钟，加入二氯甲烷(40毫升)，然后冷却到-20℃，滴加d-1(10克，38.16毫摩尔)的二氯甲烷(40毫升)溶液。保持反应液在-15℃到-5℃间搅拌3小时。液相质谱检测反应结束后，反应液用甲醇(40毫升)淬灭，浓缩，柱层析纯化(石油醚:二氯甲烷＝10:1)得到d-2(8.29克，82％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝247.1[m-oh]

.
[0174]1h nmr(cdcl3,400mhz)δ7.12(t,1h),7.02(d,j＝7.2hz,1h),6.70(d,j＝7.6hz,1h),5.21(s,1h),3.03-2.96(m,1h),2.76-2.68(m,1h),2.49-2.41(m,1h),1.94-1.84(m,2h),1.00(s,9h),0.20(s,6h).
[0175]
(s)-6-(4-叔丁基二甲基硅氧基)-2,3-二氢-1h-茚-1-氧-2-甲氧基尼古丁醛
[0176][0177]
将d-2(2.07克，7.84毫摩尔)和6-氯-2-甲氧基尼古丁醛(2.72克，15.9毫摩尔)溶于甲苯(70毫升)，向上述溶液中持续鼓入氩气10分钟，加入醋酸钯(0.36克，1.61毫摩尔)，2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(1.33克，3.14毫摩尔)，碳酸铯(10.21克，31.41毫摩尔)。反应液在35℃搅拌48小时。反应液浓缩，残留物通过柱层析(石油醚:二氯甲烷＝1:1)纯化得到标题化合物d-3(3.01克，96％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝247.1[m-152]

.
[0178]1h nmr(cdcl3,400mhz):δ10.25(s,1h),8.07(d,j＝8.4hz,1h),7.15(t,j＝7.6hz,1h),7.08(d,j＝7.6hz,1h),6.78(d,j＝7.6hz,1h),6.61(dd,j＝6.8hz,4.4hz,1h),6.40(d,j＝8.4hz,1h),4.12(s,3h),3.14-3.03(m,1h),2.93-2.86(m,1h),2.71-2.62(m,1h),2.27-2.19(m,1h),1.04(s,9h),0.25(s,6h).
[0179]
(s)-6-(4-羟基)-2,3-二氢-1h-茚-1-氧-2-甲氧基尼古丁醛
[0180][0181]
将d-3(2.79克，6.99毫摩尔)溶于四氢呋喃(50毫升)中，反应液冷却至-78℃，向上述溶液中滴加四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1摩尔/升，7.0毫升)，反应液自动缓慢恢复至室温。反应结束后，用醋酸(460毫克)萃灭反应，在乙酸乙酯/饱和柠檬酸混合溶液(30毫升/40毫升)中分离有机相，再用乙酸乙酯萃取(50毫升
×
3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，
残留物用柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到d-4(1.78克，89％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝308.1[m 23]

.
[0182]1h nmr(cdcl3,400mhz)δ10.22(s,1h),8.05(d,j＝8.0hz,1h),7.14(t,j＝8.0hz,1h),7.04(d,j＝7.6hz,1h),6.78(d,j＝8.0hz,1h),6.60(dd,j＝6.8hz,4.0hz,1h),6.38(dd,j＝8.0hz,0.8hz,1h),5.30(s,1h),4.10(s,3h),3.15-3.07(m,1h),2.93-2.86(m,1h),2.74-2.64(m,1h),2.31-2.23(m,1h).
[0183]
(s)-1-((5-醛基-6-甲氧基吡啶)-2-氧)-2,3-二氢-1h-茚-4-三氟甲磺酸酯
[0184][0185]
将d-4(1.78克，6.24毫摩尔)，三乙胺(1.73毫升，12.47毫摩尔)，吡啶(1.0毫升，12.41毫摩尔)，4-二甲氨基吡啶(77克，0.63毫摩尔)的二氯甲烷(40毫升)溶液冷却至-78℃，滴加三氟甲磺酸酐(2.03克，7.20毫摩尔)。反应液搅拌15分钟后移去干冰浴，自然升到室温并搅拌1小时。反应液中加入饱和柠檬酸溶液(50毫升)后分液，水层再以乙酸乙酯萃取(20毫升
×
2)，合并有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩。残留物用柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得到标题化合物d-5(2.01克，77％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝440.1[m 23]

.
[0186]
(s)-1-((3-氯-5-醛基-6-甲氧基吡啶)-2-氧)-2,3-二氢-1h-茚-4-三氟甲磺酸酯
[0187][0188]
将d-5(200毫克，0.48毫摩尔)溶于二氯甲烷/n,n-二甲基甲酰胺(4毫升/2毫升)混合溶液中，向上述溶液中加入三氟乙酸(11毫克，0.10毫摩尔)，帕劳氯(palau’chlor，cbmg)(82毫克，0.39毫摩尔)。反应液在室温搅拌16小时，加入饱和硫代亚硫酸钠(2毫升)和碳酸氢钠(4毫升)淬灭反应，并以二氯甲烷萃取(5毫升
×
3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物柱层析(石油醚/二氯甲烷＝1/4)纯化得到标题化合物d(150克，70％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝474.1[m 23]

.
[0189]1h nmr(cdcl3,400mhz)δ10.19(s,1h),8.11(s,1h),7.51-7.48(d,j＝7.6hz,1h),7.35(t,j＝7.6hz,1h),7.24(s,1h),6.63-6.61(m,1h),4.10(s,3h),3.34-3.27(m,1h),3.12-3.04(m,1h),2.85-2.77(m,1h),2.39-2.30(m,1h).
[0190]
中间体e的合成：
[0191][0192]
甲基6-氯-2-(氟甲氧基)-4-甲基尼古丁酸酯
[0193][0194]
在室温下，在20毫升微波管中将c-3(500毫克,2.48毫摩尔)溶于乙腈(5毫升)后，加入60％氢化钠(200毫克，4.96毫摩尔)封闭后置换氮气，插上氮气球后，反应混合物在室温下被搅拌30分钟。后加入氟溴甲烷(0.32毫升,4.96毫摩尔)，反应混合物在40℃下继续搅拌24小时后液相检测原料转化30％，冷却至室温后补加氟溴甲烷(0.5毫升,7.8毫摩尔)，继续在40℃下反应24小时后液相检测原料转化80％。冷却至室温后，将反应液倒至30毫升甲醇中，充分搅拌后过滤，用20毫升甲醇洗涤，滤液浓缩后得到800毫克粗品e-1(纯度88％)。ms(esi):m/z＝234.2，236.2[m h]。
[0195]
(6-氯-2-(氟甲氧基)-4-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0196][0197]
在-60℃下，向e-1(579.3毫克，2.48毫摩尔)的二氯甲烷(10毫升)溶液中滴加1.5摩尔/升的二异丁基氢化铝的甲苯溶液(3.3毫升，4.96毫摩尔)，-60℃滴加完毕后，在两小时内反应液缓慢升温至室温，液相检测反应完全。冰浴下反应液用50毫升饱和酒石酸钾钠水溶液淬灭，加入二氯甲烷30毫升，室温搅拌两小时后，二氯甲烷萃取(30毫升
×
2)，有机相被浓缩，残留物过柱(石油醚：乙酸乙酯＝0～30％)得到标题化合物e-2(333毫克，纯度：90％，收率：65.5％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝206.1，208.1[m h]

。
[0198]
6-氯-2-(氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0199][0200]
在冰浴下，往e-2(330毫克，1.62毫摩尔)的二氯甲烷(20毫升)溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(1克，2.43毫摩尔)，反应混合物在室温下被搅拌半小时，tlc检测反应完全。冰浴下，向反应液中加入50毫升碳酸氢钠水溶液淬灭，反应液调至中性，二氯甲烷50毫升萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤,滤液被浓缩,浓缩液通过正相硅胶层析柱，用溶剂(石油醚：乙酸乙酯＝0～20％)洗脱,得到标题化合物e(280毫克，纯度：95％，收率：85％)为白色固体。ms(esi):m/z＝204.1，206.1[m h]

。
[0201]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.51(s,1h),6.99(s,1h),6.22(s,1h),6.09(s,1h),2.62(s,3h).
[0202]
中间体f的合成：
[0203][0204]
5-溴-2-氯-4-环丙基吡啶
[0205][0206]
在氮气保护下，将5-溴-2-氯-4-碘吡啶(5克，15.7毫摩尔)和环丙基硼酸(1.48克，17.2毫摩尔)，碳酸钠(4.99克，47.1毫摩尔)和pd(dppf)cl2(574毫克,0.785毫摩尔)混合均匀后，加入1,4-二氧六环(40毫升)和水(10毫升)，混合物升温至100℃后搅拌16小时，lcms检测反应完成，将反应物降至室温过滤，滤液浓缩后经快速硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0～20％)得到白色固体产物(1.3克，产率35.6％)。ms(esi):m/z＝233.9[m h]

。
[0207]
2-氯-4-环丙基-5-乙烯基吡啶
[0208][0209]
将化合物f-1(1.1克，4.73毫摩尔)在微波管中溶于1,4-二氧六环(10毫升)和水(2毫升)，然后再加入乙烯基三氟硼酸钾(760毫克,5.67毫摩尔),碳酸钾(1.63克，11.8毫摩尔)和pd(dppf)cl2(173毫克,0.236毫摩尔)，将混合物置换氮气保护后升温至80℃搅拌16小时，将反应物降至室温过滤，滤液浓缩后用快速硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0～2％)得到白色油状产物(180毫克,产率21.1％)。ms(esi):m/z＝179.9[m h]

。
[0210]
6-氯-4-环丙基尼古丁醛
[0211][0212]
将化合物f-2(180毫克,1.00毫摩尔)溶于四氢呋喃(2毫升)和水(0.5毫升)后加入锇酸钾二水合物(18毫克,0.05毫摩尔)，在冰浴下降温至0℃后氮气保护下加入高碘酸钠(643毫克,3.00毫摩尔)，将混合物0℃下搅拌半小时后升至室温继续搅拌2小时，lcms检测反应完成，向反应物加入水(30毫升)，用乙酸乙酯(30毫升
×
2)萃取,合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到黄色油状产物(199毫克,产率100％)。ms(esi):m/z＝182.1[m h]

。
[0213]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.37(s,1h),8.68-8.65(m,1h),6.89(s,1h),2.95(m,1h),1.28-1.25(m,2h),0.93-0.88(m,2h)。
[0214]
中间体g的合成：
[0215][0216]
6-氯-2-乙基尼古丁醛
[0217][0218]
在氮气保护下将2,6-二氯尼古丁醛(10克,56.8毫摩尔)、碳酸钾(15.7克,113.6毫摩尔)、乙基硼酸(4.6克,62.4毫摩尔)和pdcl2dppf(2克,2.84毫摩尔)混合均匀，加入1,4-二氧六环(50毫升)和水(10毫升)，混合物在90℃下反应5小时，液相检测反应完全。反应液浓缩后加水150毫升，乙酸乙酯200毫升萃取三次，无水硫酸钠干燥过滤后浓缩，粗品用石油醚/乙酸乙酯(0～8％)过柱得到500毫克的无色油状产物(纯度：90％，收率：10.3％)。ms(esi):m/z＝169.9[m h]

。
[0219]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.31(s,1h),8.07(dd,j＝0.7,8.1hz,1h),7.33(d,j＝8.2hz,1h),3.19(q,j＝7.5hz,2h),1.36-1.32(m,3h)。
[0220]
中间体h的合成：
[0221][0222]
乙基6-氯-4-甲氧基-2-甲基尼古丁酸酯
[0223][0224]
往乙基4,6-二氯-2-甲基尼古丁酸酯(5克,21.36毫摩尔)的四氢呋喃溶液(50毫升)中加入甲醇钠(1.15克，21.36毫摩尔)、碘化亚铜(419毫克，2.2毫摩尔)，氮气置换后反应混合物在70℃下反应3小时，液相检测反应完全。反应液浓缩后用石油醚/乙酸乙酯(0～10％)过柱得到3克的无色油状中间体h-1(纯度：90％，收率：61.1％)。ms(esi):m/z＝230.1[m h]

。
[0225]
(6-氯-4-甲氧基-2-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0226][0227]
将中间体h-1(2克,8.73毫摩尔)溶于二氯甲烷(100毫升)，氮气置换后降温至-70℃，滴加二异丁基氢化铝的甲苯溶液(11.7毫升，17.5毫摩尔)，反应在两小时内缓慢升至室温后，液相质谱检测原料反应完全。将酒石酸钾钠饱和溶液(50毫升)加入反应液中并搅拌一小时，然后用二氯甲烷(100毫升)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤,滤液被浓缩并用石油醚/乙酸乙酯(0～30％)过柱得到1.5克的白色固体中间体h-2(纯度：90％，收率：
91.6％)。ms(esi):m/z＝187.9[m h]

。
[0228]
6-氯-4-甲氧基-2-甲基尼古丁醛
[0229][0230]
在冰浴下，将戴斯-马丁试剂(5.1克，12毫摩尔)加入到h-2(1.5克，8毫摩尔)的二氯甲烷(30毫升)溶液中，反应液在室温下搅拌30分钟，点板监测原料反应完全。反应液用碳酸氢钠溶液(50毫升)调节ph到弱碱性，二氯甲烷(80毫升)萃取三次后，干燥过滤,有机相用正相硅胶层析柱(石油醚：乙酸乙酯＝0～20％)过柱，得到1.12克白色固体产物(纯度：90％，收率：75.4％)。ms(esi):m/z＝186.2[m h]

。
[0231]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.53(d,j＝1.1hz,1h),6.85(s,1h),3.98(d,j＝1.1hz,3h),2.73(s,3h)。
[0232]
中间体k的合成：
[0233][0234]
乙基4-甲基-2-乙烯基尼古丁酸酯
[0235][0236]
将乙基2-溴-4-甲基尼古丁酸酯(5克,21.7毫摩尔)和乙烯基三氟硼酸钾(5.82克，43.4毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(50毫升)和水(10毫升)，然后再加入pd(dppf)cl2(794毫克,1.08毫摩尔)和碳酸钾(7.5克，54.2毫摩尔)，置换氮气保护后微波90℃搅拌90分钟，反应物降至室温过滤，滤液浓缩后经快速硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0～15％)得到无色油状产物k-1(4.17克，产率100％)。ms(esi):m/z＝192.0[m h]

。
[0237]
乙基2-乙基-4-甲基尼古丁酸酯
[0238][0239]
将化合物k-1(4.17克,21.8毫摩尔)溶于甲醇(40毫升)，然后再加入pd/c(400毫克)，将混合物在15psi的h2氛围下在室温搅拌2小时，lcms检测检测反应完成，将反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到无色油状产物k-2(4.13克,产率98.0％)。
[0240]
ms(esi):m/z＝194.0[m h]

。
[0241]
3-(乙酯基《乙氧羰基》)-2-乙基-4-甲基吡啶1-氧化物
[0242][0243]
将化合物k-2(4.13克,21.3毫摩尔)溶于dcm(40毫升)后加入m-cpba(9.22克,53.4毫摩尔)，将混合物室温下搅拌16小时后，lcms检测反应完成，将反应物浓缩后用快速硅胶柱分离纯化(二氯甲烷：甲醇＝0～10％)得到无色油状产物k-3(3.78克,产率84.8％)。ms(esi):m/z＝210.0[m h]

。
[0244]
乙基6-氯-2-乙基-4-甲基尼古丁酸酯
[0245][0246]
将化合物k-3(400毫克,1.91毫摩尔)溶于三氯氧磷(2毫升)后加入diea(0.33毫升,1.91毫摩尔)，将混合物升温至120℃下搅拌2小时，lcms检测反应完成，将反应液降至室温后浓缩除去三氯氧磷，然后用快速硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯
[0247]
＝0～15％)得到黄色油状产物k-4(120毫克,产率52.7％)。ms(esi):m/z＝228.7[m h]

。
[0248]
(6-氯-2-乙基-4-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0249][0250]
将化合物k-4(190毫克,0.834毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)后降温至-60℃，然后在氮气保护下缓慢加入二异丁基氢化铝的甲苯溶液(1.5摩尔/升,1.7毫升,2.50毫摩尔)，将混合物-60℃下搅拌1小时，lcms检测反应完成，向反应物加入酒石酸钾钠溶液(50毫升)后室温下搅拌1小时，用二氯甲烷(30毫升
×
2)萃取,合并有机相用无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到无色油状产物k-5(154毫克,产率100％)。ms(esi):m/z＝185.9[m h]

。
[0251]
6-氯-2-乙基-4-甲基尼古丁醛
[0252][0253]
将化合物k-5(154毫克,0.836毫摩尔)溶于二氯甲烷(3毫升)后加入戴斯-马丁试剂(530毫克,1.25毫摩尔)，反应液在室温搅拌1小时，lcms检测反应完成，向反应物加入饱和亚硫酸钠溶液(50毫升)，用二氯甲烷(30毫升
×
2)萃取,合并有机相用饱和碳酸氢钠溶液(50毫升)洗涤后无水硫酸钠干燥过滤浓缩得到粗品，粗品用快速硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0～10％)得到黄色油状产物k(140毫克,产率91.4％)。
[0254]
ms(esi):m/z＝184.2[m h]

。
[0255]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.55(s,1h),7.10(s,1h),3.12(q,j＝7.6hz,2h),2.58(s,3h),1.32(t,j＝7.5hz,3h)。
[0256]
中间体j的合成：
[0257][0258]
甲基6-氯-4-羟基尼古丁酸酯
[0259][0260]
将甲基6-氯-4-甲氧基尼古丁酸酯(3.7克，18.35毫摩尔)溶于200毫升甲苯中，加入无水三氯化铝(7.34克，55.1毫摩尔)，反应液在100℃下搅拌1小时，液相检测显示反应完全。反应液浓缩，残留物在冰浴下冷却后用碳酸氢钠溶液调节ph到弱碱性，150毫升二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥后过滤,滤液浓缩后用正相硅胶层析柱纯化，用溶剂(石油醚：乙酸乙酯＝0～20％)洗脱得到1.8克红色固体j-1(纯度：90％，收率：52.3％)。ms(esi):m/z＝187.9[m h]

。
[0261]
甲基6-氯-4-(二氟甲氧基)尼古丁酸酯
[0262][0263]
将中间体j-1(2.25克，12毫摩尔)、二氟氯乙酸钠(2.74克，18毫摩尔)、碳酸钾(1.66克，12毫摩尔)溶于n,n-二甲基甲酰胺(50毫升)中，氮气置换后反应液在90℃下搅拌1小时，液相检测显示反应完全。反应液冷却后用50毫升水淬灭，100毫升乙酸乙酯萃取，饱和食盐水(80毫升
×
3)洗涤，无水硫酸钠干燥后过滤，,滤液浓缩后用正相硅胶层析柱纯化，用溶剂(石油醚：乙酸乙酯＝0～20％)洗脱得到1.1克红色固体中间体j-2(纯度：90％，收率：38.6％)。ms(esi):m/z＝237.9[m h]

。
[0264]
(6-氯-4-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)甲醇
[0265][0266]
在-60℃下，往j-2(1.1克，4.63毫摩尔)的二氯甲烷(50毫升)溶液中滴加1.5摩尔/升的二异丁基氢化铝的甲苯溶液(7.1毫升，11.5毫摩尔)，-60℃滴加完毕后，在两小时内反应液缓慢升温至室温，液相检测反应完全。反应液用50毫升酒石酸钾钠水溶液淬灭，室温搅拌一小时后，用二氯甲烷(100毫升)萃取三次。有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品用正相硅胶层析柱，用溶剂(石油醚：乙酸乙酯＝0～40％)洗脱得到红色油状中间体j-3共670毫克(纯度：90％，收率：69％)。ms(esi):m/z＝210.1[m h]

。
[0267]
6-氯-4-(二氟甲氧基)尼古丁醛
基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯
[0276][0277]
在氮气保护下将甲基(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(8.02克，15.73毫摩尔),2,2'-(2-氯-1,3-亚苯基)二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环)(10.03克，27.53毫摩尔),四三苯基膦钯(0.91克，0.79毫摩尔)和无水碳酸钾(5.43克，39.33毫摩尔)混合均匀，加入1,4二氧六环(150毫升)和水(15毫升)，在80℃搅拌4小时。反应结束后，反应液过滤，浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝40:60)，得到标题化合物甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(7.00克，59％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝667.2[m h]

.
[0278]
甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-甲酰基-4-甲基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯。
[0279][0280]
在氮气保护下将甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(6941毫克，10.40毫摩尔),6-氯-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(1773毫克，8.00毫摩尔),四三苯基膦钯(462毫克，0.40毫摩尔)和无水碳酸钾(2764毫克，20.00毫摩尔)混合均匀，加入1,4二氧六环(15毫升)和水(1.5毫升)中后，90℃搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯稀释(50毫升)，过滤，滤液用食盐水和水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝42:58)，得到标题化合物甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-甲酰基-4-甲基吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(5235毫克，83％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝726.1[m h]

.
[0281]
甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯
[0282][0283]
将甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-甲酰基-4-甲基吡
啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(5086毫克，7.00毫摩尔)和(s)-5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮盐酸(2108毫克，14.00毫摩尔)的混合物加入n-乙基-n-异丙基丙烷-2-胺(904毫克，7.00毫摩尔)的无水二氯甲烷(14毫升)的溶液中，室温搅拌3小时。然后三乙酰氧基硼氢化钠(2968毫克，14.00毫摩尔)分批加入反应液中，室温搅拌1小时。反应用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯(500毫升)稀释。过滤，滤液依次用盐水、水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝5:95)和反相柱层析纯化(90％乙腈的碳酸氢铵水溶液)得到标题化合物甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(3400毫克，58％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝824.2[m h]

.
[0284]
(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0285][0286]
将甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(730毫克，0.89毫摩尔)，氢氧化锂一水合物(149毫克，3.56毫摩尔),加入到甲醇(2毫升),四氢呋喃(1毫升)和水(0.5毫升)的混合溶液中，室温搅拌4小时。反应液用稀盐酸(1摩尔/升)中和，过滤，浓缩。残渣通过反相快速分离柱纯化获得标题化合物(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(400毫克，55％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝810.2[m h]

.
[0287]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.90(d,j＝8.3hz,1h),8.64(s,1h),8.11(d,j＝5.6hz,1h),7.72(t,j＝73hz,1h),7.67(dd,j＝7.7,1.5hz,1h),7.65(s,1h),7.59(s,1h),7.56(dd,j＝11.6,3.9hz,2h),7.50
–
7.42(m,3h),7.05(dd,j＝7.5,1.1hz,1h),4.19(s,2h),3.77(s,2h),3.66
–
3.58(m,1h),2.61
–
2.55(m,2h),2.51(s,3h),2.47
–
2.42(m,1h),2.20
–
2.02(m,4h),1.96(d,j＝10.6hz,2h),1.88(d,j＝11.5hz,2h),1.74
–
1.62(m,1h),1.39
–
1.19(m,2h),1.18
–
1.03(m,2h)。
[0288]
实施例2:(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-4-甲基-5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(180毫克，0.26毫摩尔)和5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮(59毫克，0.52毫摩尔)的混合物加入两滴冰醋酸的无水二氯甲烷(3毫升)的溶液，室温搅拌4小时。然后三乙酰氧基硼氢化钠(66毫克，0.31毫摩尔)分批加入反应液中，室温搅拌2小时。反应用饱和的碳酸氢钠溶液(10毫升)淬灭，搅拌30分钟，萃取，有机相水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝6:94)得到标题化合物甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-4-甲基-5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(145毫克，71％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝788.1[m h]

.
[0296]
(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-4-甲基-5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0297][0298]
将甲基(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-4-甲基-5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(145毫克，0.18毫摩尔)，氢氧化锂一水合物(30毫克，0.72毫摩尔),加入到甲醇(2毫升),四氢呋喃(2毫升)和水(0.5毫升)的混合溶液中，室温搅拌16小时。反应液用稀盐酸(1摩尔/升)中和，浓缩。残渣通过反相柱层析纯化(85％甲醇的0.1％的碳酸氢铵水溶液)纯化获得标题化合物(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-(6-甲氧基-4-甲基-5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(85毫克，61％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝774.1[m h]

.
[0299]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),8.61(s,1h),8.08(d,j＝5.6hz,1h),7.64
–
7.59(m,2h),7.55(d,j＝5.6hz,1h),7.51(t,j＝7.6hz,1h),7.45(t,j＝8.0hz,1h),7.40(dd,j＝7.5,1.7hz,1h),7.10(s,1h),7.02(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),4.16(s,2h),3.87(s,3h),3.72(s,2h),3.63
–
3.56(m,1h),2.60
–
2.52(m,2h),2.45
–
2.41(m,1h),2.38(s,3h),2.17
–
2.00(m,4h),1.99
–
1.90(m,2h),1.90
–
1.80(m,2h),1.71
–
1.61(m,1h),1.35
–
1.20(m,2h),1.15
–
1.01(m,2h).
[0300]
实施例3:(s)-5-((((5-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0301][0302]
6-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0303][0304]
在氮气保护下将6-溴-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(500毫克，1.88毫摩尔),2,2'-(2-氯-1,3-亚苯基)二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环)(1.37克，3.76毫摩尔)，四(三苯基膦)钯(77毫克，0.066毫摩尔)和醋酸钾(461毫克，4.70毫摩尔)混合均匀，加入1,4-二氧六环(10毫升，)然后在80℃搅拌5小时。反应液过滤浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:4)得到标题化合物6-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(900毫克，62％，纯度66％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝424.0[m h]

.
[0305]
n-(3-溴-2-氯苯基)-2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0306][0307]
将n-(3-溴-2-氯苯基)-2-(溴甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(500毫克，1.15毫摩尔)的二甲基亚砜(20毫升)溶液在0℃下搅拌并加入硼氢化钠(430毫克，11.5毫摩尔)，室温搅拌2小时。反应液加二氯甲烷(100毫升)稀释，然后盐水洗，水洗。有机相浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝60:40)得到标题化合物n-(3-溴-2-氯苯基)-2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(160毫克，39％)，为黄色固体。ms(esi):m/z＝356.0
[0308]
[m h]

.
[0309]
6-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0310][0311]
在氮气保护下将6-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(248毫克，0.59毫摩尔)，n-(3-溴-2-氯苯基)-2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-胺(160毫克，0.45毫摩尔)，四(三苯基膦)钯(52毫克，0.045毫摩尔)和碳酸钾(155毫克，1.12毫摩尔)混合均匀后，加入1,4-二氧六环(5毫升)和水(1毫升)，然后在90℃搅拌2小时，反应液过滤浓缩。残渣通过正相柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝84:16)纯化获得目标产物6-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(140毫克，54％)，为黄色固体。ms(esi):m/z＝571.1[m h]

.
[0312]
(s)-5-((((5-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0313][0314]
将6-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(140毫克，0.25毫摩尔)和(s)-5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮(56毫克，0.49毫摩尔)，乙酸(0.1毫升)，无水二氯甲烷(2毫升)的混合物在室温搅拌16小时。然后三乙酰氧基硼氢化钠(104毫克，0.49毫摩尔)分批加入，反应继续在室温搅拌2小时。反应液用二氯甲烷溶解，盐水洗，水洗并浓缩。残渣通过制备高效液相柱层析纯化获得标题化合物(s)-5-((((5-(2,2'-二氯-3'-((2-甲硫基唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-3-(二氟甲氧基)吡嗪-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(11.4毫克，7％)为白色固体。ms(esi):m/z＝669.2[m h]

.
[0315]1h nmr(400mhz,meod)δ8.87(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),8.09(d,j＝5.7hz,1h),7.65(s,1h),7.63(dd,j＝7.7,1.6hz,1h),7.52(t,j＝7.6hz,1h),7.48
–
7.38(m,4h),7.02(dd,j＝7.5,1.4hz,1h),3.96(s,1h),3.87(t,j＝12.2,1h),2.89(s,3h),2.77(qd,j＝12.1,6.0hz,2h),2.55(s,3h),2.39
–
2.26(m,3h),1.90
–
1.80(m,1h).
[0316]
实施例4:(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0317][0318]
(s,e)-5-(((3-(3-溴-2-氯苯乙烯基)-4-(三氟甲基)苯甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0319][0320]
将(e)-3-(3-溴-2-氯苯乙烯基)-4-(三氟甲基)苯甲醛(1000毫克，1.75毫摩尔,68％)和(s)-5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮盐酸(527毫克，3.50毫摩尔)的混合物加入到n-乙基-n-异丙基丙烷-2-胺(226毫克，1.75毫摩尔)的无水二氯甲烷(3毫升)和甲醇(9毫升)溶液中,室温下搅拌16小时。然后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(1133毫克，5.25毫摩尔)，继续在室温下搅拌4小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并在常温搅拌半小时，二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和盐水溶液洗涤两次，干燥，浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝3:97)得到标题化合物(s,e)-5-(((3-(3-溴-2-氯苯乙烯基)-4-(三氟甲基)苯甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(750毫克，78％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝487.0[m h]

.
[0321]
(s,e)-(2-氯-3-(5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)硼酸
[0322][0323]
在氮气保护下将(s,e)-5-(((3-(3-溴-2-氯苯乙烯基)-4-(三氟甲基)苯甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(488毫克，1.00毫摩尔),4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二噁硼戊环)(381毫克，1.50毫摩尔),[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(41毫克，0.05毫摩尔)和无水乙酸钾(245毫克，2.50毫摩尔)混合均匀后加入1,4二氧六环(5毫升)，然后在100℃搅拌10小时。反应液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，过滤，滤液用食盐水和水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝3:97)，得到标题化合物(s,e)-(2-氯-3-(5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)硼酸(113毫克，25％)为白色固体。ms(esi):m/z＝535.1[m h]

.
[0324]
(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0325]
[0326]
在氮气保护下将(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(65毫克，0.13毫摩尔),(s,e)-5-(((3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯乙烯基)-4-(三氟甲基)苯甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(77毫克，0.17毫摩尔),，四三苯基膦钯(8毫克，0.0065毫摩尔)和无水碳酸钾(46毫克，0.33毫摩尔)混合均匀后加入1,4二氧六环(3毫升)和水(0.5毫升)，然后在90℃搅拌2小时。反应液通过乙酸乙酯(50毫升)稀释，过滤，滤液用盐水、水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝8:92)和反相柱层析纯化(60％乙腈的碳酸氢铵水溶液)得到标题化合物(1r,4r)-4-(((4-((2,2'-二氯-3'-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(35毫克，33％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝823.3[m h]

.
[0327]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(d,j＝7.1hz,1h),8.59(s,1h),8.07(d,j＝5.6hz,1h),7.92(s,1h),7.83(d,j＝6.8hz,1h),7.69(d,j＝8.1hz,1h),7.62(s,1h),7.59
–
7.51(m,2h),7.50
–
7.38(m,3h),7.34(d,j＝6.3hz,1h),6.98(d,j＝6.3hz,1h),4.15(s,2h),3.80(q,j＝14.8hz,2h),3.62
–
3.55(m,1h),2.52
–
2.47(m,2h),2.43
–
2.38(m,1h),2.15
–
1.98(m,4h),1.92(d,j＝10.2hz,2h),1.84(d,j＝13.2hz,2h),1.69
–
1.62(m,1h),1.32
–
1.19(m,2h),1.13
–
0.99(m,2h).
[0328]
实施例5:(s)-1-(5-氯-4-(((s)-4-(2-氯-3-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸
[0329][0330]
(s)-1-(4-(((s)-4-溴-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-5-氯-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸
[0331][0332]
将(s)-5-((5-((4-溴-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-4-氯-2-甲酰基苯氧基)甲基)尼古丁腈(300毫克，0.62毫摩尔)，(s)-哌啶-3-羧酸(240毫克，1.86毫摩尔)和催化量的
冰醋酸，无水二氯甲烷(3毫升)的混合物，室温下搅拌16小时。然后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(262毫克，1.24毫摩尔)，反应继续在室温下搅拌2小时。反应液用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯(50毫升)稀释，过滤，滤液用盐水、水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残渣通过正相柱层析纯化(乙酸乙酯:石油醚＝60:40)得到标题化合物((s)-1-(4-(((s)-4-溴-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-5-氯-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸(110毫克，30％)为白色固体。ms(esi):m/z＝596.1[m h]

.
[0333]
(s)-1-(5-氯-4-(((s)-4-(2-氯-3-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸
[0334][0335]
在氮气保护下将(s)-1-(4-(((s)-4-溴-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-5-氯-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸(110毫克，0.18毫摩尔),(s,e)-(2-氯-3-(5-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)硼酸(109毫克，0.24毫摩尔),四三苯基膦钯(46毫克，0.04毫摩尔)和无水碳酸钾(62毫克，0.45毫摩尔)混合均匀后加入1,4二氧六环(3毫升)和水(0.5毫升)，然后在90℃搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，过滤，滤液用盐水、水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝13:87)和prep-hplc纯化，得到标题化合物(s)-1-(5-氯-4-(((s)-4-(2-氯-3-((e)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)-2-(三氟甲基)苯乙烯基)苯基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)-2-((5-氰基吡啶-3-基)甲氧基)苯甲基)哌啶-3-羧酸(45毫克，27％)为白色固体。ms(esi):m/z＝924.3[m h]

.
[0336]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01
–
8.95(m,2h),8.39(s,1h),7.92(s,1h),7.79(d,j＝6.5hz,1h),7.69(d,j＝8.2hz,1h),7.62(s,1h),7.56(d,j＝15.7hz,1h),7.51
–
7.40(m,3h),7.40
–
7.30(m,3h),7.29(s,1h),7.24
–
7.20(m,1h),7.09(s,1h),6.09
–
5.95(m,2h),5.38
–
5.28(m,2h),3.80(q,j＝14.9hz,2h),3.61
–
3.55(m,1h),3.47
–
3.39(m,2h),2.91
–
2.72(m,3h),2.71
–
2.52(m,4h),2.42
–
2.33(m,1h),2.19
–
1.91(m,6h),1.82
–
1.71(m,1h),1.72
–
1.55(m,3h),1.50
–
1.40(m,1h),1.37
–
1.28(m,1h).
[0337]
实施例6:(1r,4r)-4-(((4-((2-氯-3-(2-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)苯并[d]噁唑-5-基)苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0338][0339]
5-溴-2-(氯甲基)苯并[d]噁唑
[0340][0341]
将2-氨基-4-溴苯酚(2克，10.64毫摩尔),2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.64克，10.64毫摩尔)的乙醇(10毫升)溶液加热到60℃并搅拌3小时。反应液浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙醇＝100:5)得到标题化合物5-溴-2-(氯甲基)苯并[d]噁唑(2.3克，88％)，为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝247.9[m h]

.
[0342]
5-((((5-溴苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0343][0344]
将5-溴-2-(氯甲基)苯并[d]噁唑(1克，4.00毫摩尔),5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮(2.8克，24.4毫摩尔)，碳酸钾(1.12克，8.1毫摩尔)，四氢呋喃(5毫升)和乙腈(毫升)的混合物加热到55℃并搅拌3.5小时。反应液过滤，滤饼用甲醇冲洗两遍，滤液浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得到标题化合物5-((((5-溴苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(780毫克，59％)，为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝324.0[m h]

.
[0345]
5-((((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0346][0347]
在氮气保护下将5-((((5-溴苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(700毫克，2.16毫摩尔)，联硼酸频哪醇酯(1.10克，4.32毫摩尔)，[1,1'-双(二-苯基膦基)二茂铁]氯化钯(ii)的二氯甲烷复合物(1:1)(106毫克，0.13毫摩尔)和醋酸钾(424毫克，3.07毫摩尔)混合均匀，加入1,4-二氧六环(6毫升)，然后在80℃搅拌5个小时。反应液浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(石油醚:乙酸乙酯＝82:18)得到标题化合物5-((((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(350毫克，43％)，为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝372.2[m h]

.
[0348]
(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)
环己烷-1-羧酸
[0349][0350]
将甲基(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸酯(400毫克，0.78毫摩尔)和氢氧化锂水合物(128毫克，3.2毫摩尔)加入到四氢呋喃(0.4毫升)，甲醇(2毫升)和水(0.4毫升)的混合溶液中，室温搅拌2小时。反应液用2摩尔/升盐酸中和，旋干溶剂，残留物正相柱层析纯化(二氯甲烷:甲醇＝100:6)得到标题化合物(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(300毫克，77％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝496.9[m h]

.
[0351]
(1r,4r)-4-(((4-((2-氯-3-(2-(((((s)5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)苯并[d]噁唑-5-基)苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸
[0352][0353]
在氮气保护下将5-((((5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮(350毫克，0.94毫摩尔)，(1r,4r)-4-(((4-((3-溴-2-氯苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(437毫克，0.88毫摩尔)，四(三苯基膦)钯(100毫克，0.086毫摩尔)和碳酸钾(237毫克，1.72毫摩尔)混合均匀，加入1,4-二氧六环(5毫升)和水(1毫升)，然后在80℃搅拌2个小时。反应液过滤，滤饼并用甲醇冲洗两遍，滤液浓缩，残渣通过制备型高效液相色谱纯化获得目标产物(1r,4r)-4-(((4-((2-氯-3-(2-((((5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)苯并[d]噁唑-5-基)苯基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)氨基)环己烷-1-羧酸(24.0毫克，4％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝660.2[m h]

.
[0354]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),8.67(s,1h),8.07(d,j＝5.6hz,1h),7.76(d,j＝8.4hz,1h),7.74(d,j＝1.4hz,1h),7.62(s,1h),7.53(d,j＝5.6hz,1h),7.46
–
7.38(m,2h),7.07(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),4.15(s,2h),4.02(q,j＝15.8hz,3h),3.58(s,1h),2.65
–
2.55(m,3h),2.50(s,1h),2.46-2.36(m,1h),2.10-2.04(m,4h),1.93(d,j＝9.9hz,2h),1.85(d,j＝10.6hz,2h),1.70
–
1.62(m,1h),1.26(dd,j＝25.1,12.2hz,2h),1.07(dd,j＝23.2,10.5hz,2h).
[0355]
实施例7:(s)-1-((5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)吡啶-3-基)甲基)哌啶-3-羧酸
基)甲基)吡咯烷-2-酮(445毫克，81％)为黄色固体。ms(esi):m/z＝426.2[m h]

.
[0366]
5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)尼古丁醛
[0367][0368]
在氮气保护下将(s)-5-((4-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)苯并[d]噁唑-2-基)哌啶-1-基)甲基)吡咯烷-2-酮(98毫克，0.23毫摩尔),(s)-1-((3-氯-5-甲酰基-6-甲氧基吡啶-2-基)氧代)-2,3-二氢-1h-茚-4-基4-甲基苯磺酸酯(70毫克，0.15毫摩尔),四三苯基膦钯(8毫克，0.0075毫摩尔)和无水碳酸钾(62毫克，0.45毫摩尔)混合均匀，加入1,4二氧六环(4毫升)和水(0.5毫升)，然后在90℃搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯稀释，过滤，滤液通过水和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残渣通过正相柱层析纯化(甲醇:二氯甲烷＝3:97)得到标题化合物5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)尼古丁醛(85毫克，83％)，为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝690.2[m h]

.
[0369]
(s)-1-((5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)吡啶-3-基)甲基)哌啶-3-羧酸
[0370][0371]
将5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)尼古丁醛(40毫克，0.067毫摩尔)，(s)-哌啶-3-羧酸(43毫克，0.335毫摩尔)的混合物加入到催化量的冰醋酸的无水二氯甲烷(1毫升)和甲醇(0.5毫升)的溶液中，常温搅拌16个小时。然后将三乙酰氧基硼氢化钠(28毫克，0.13毫摩尔)加入反应液中，继续在室温下搅拌2小时。反应液用饱和的碳酸氢钠溶液淬灭，浓缩，残渣通过prep-hplc纯化，得到标题化合物(s)-1-((5-氯-2-甲氧基-6-(((s)-4-(2-(1-(((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)哌啶-4-基)苯并[d]噁唑-5-基)-2,3-二氢-1h-茚-1-基)氧代)吡啶-3-基)甲基)哌啶-3-羧酸(15毫克，31％)为白色固体。ms(esi):m/z＝714.1[m h]

.
[0372]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.76(s,1h),7.71(d,j＝8.4hz,1h),7.68(s,1h),7.53(s,1h),7.44(d,j＝8.5hz,1h),7.41(d,j＝6.9hz,1h),7.39
–
7.30(m,2h),6.54
–
6.47(m,1h),3.91(s,3h),3.70
–
3.64(m,1h),3.36(s,2h),3.11
–
3.05(m,1h),3.01
–
2.94(m,2h),2.92
–
2.82(m,2h),2.74(d,j＝10.9hz,1h),2.65
–
2.56(m,2h),2.43
–
2.29(m,3h),2.28
–
2.00(m,11h),1.93
–
1.79(m,3h),1.79
–
1.54(m,4h),1.47
–
1.31(m,3h).
[0373]
实施例8-15采用与实施例1-7类似的方法制备：
[0374]
[0375][0376]
实施例16:2-(1-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡嗪-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)乙酸
[0377][0378]
乙基2-(1-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡嗪-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)
甲基)吡咯烷-3-基)乙酸酯
[0379][0380]
按照实施例1的合成方法，替换相应的原料合成可得。ms(esi):m/z＝811.3[m h]

.
[0381]
乙基2-(1-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡嗪-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)乙酸酯
[0382][0383]
将乙基2-(1-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡嗪-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)乙酸酯(50毫克,0.06毫摩尔)和盐酸(1摩尔/升，2毫升)的混合物加热到40℃并搅拌18小时。反应液用饱和碳酸氢钠中和，旋干，残渣通过制备型高效液相柱层析获得目标产物2-(1-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡嗪-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)吡咯烷-3-基)乙酸(19.5毫克,40％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝783.1[m h]

.
[0384]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(d,j＝7.3hz,1h),8.81(s,1h),8.67(s,1h),8.13(d,j＝5.6hz,1h),7.80(s,1h),7.78(dd,j＝7.7,1.6hz,1h),7.70
–
7.58(m,3h),7.55(dd,j＝7.6,1.5hz,1h),7.50(dd,j＝8.0，8.0hz,1h),7.07(dd,j＝7.5,1.3hz,1h),4.14
–
4.10(m,2h),3.96(s,2h),3.67-2.60(m,1h),2.88(m,1h),2.73(m,2h),2.69
–
2.62(m,2h),2.48-2.43(m,1h),2.43
–
2.37(m,1h),2.27(m,2h),2.15
–
1.95(m,4h),1.76-1.67(m,1h),1.48-1.38(m,1h).
[0385]
实施例17:8-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸
[0386][0387]
n-(2,2'-二氯-3'-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-胺
[0388][0389]
在氮气保护下把化合物a-2(1克,2.6毫摩尔),化合物b(1.66克,4.5毫摩尔),四三苯基膦钯(300毫克,0.26毫摩尔)和无水碳酸钾(0.9克,6.5毫摩尔)加入到1,4二氧六环(16毫升)和水(3毫升)，混合均匀，然后在80℃搅拌4小时。反应结束以后，反应液过滤，滤液浓缩，残渣通过正相硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝0～30％)，得到目标化合物(470毫克,31％)为黄色固体。ms(esi):m/z＝542.0[m h]

。
[0390]
6-(2,2'-二氯-3'-((2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛
[0391][0392]
在氮气保护下把化合物17-1(11.0克,20.3毫摩尔)，化合物c(4.08克,18.4毫摩尔),四三苯基膦钯(1.06克,0.92毫摩尔)和无水碳酸钾(6.37克,46.08毫摩尔)加入到1,4二氧六环(80毫升)和水(20毫升)混合均匀，，然后在90℃搅拌2个小时。反应结束以后，反应液过滤，滤液浓缩，残渣通过正相硅胶柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝1:2)，得到标题化合物6-(2,2'-二氯-3'-((2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基尼古丁醛(8.00克,72％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝601.2[m h]

。
[0393]
(s)-5-((((6-(2,2'-二氯-3'-((2-(甲氧基甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0394][0395]
把化合物17-2(8.0克,13.3毫摩尔)和(s)-5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(6.0克,39.9毫摩尔)和n,n-二异丙基乙胺(2.58克,19.95毫摩尔)的无水二氯甲烷(40毫升)的溶液,在室温下，搅拌12个小时。然后分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(8.46克,39.90毫摩尔)，反应继续在室温下，搅拌3小时。反应结束以后，饱和的碳酸氢铵溶液淬灭，二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，浓缩，残渣通过正相硅胶柱纯化(甲醇：二氯甲烷＝6:100)，得到目标化合物(8.76克,94％)为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝699.3[m h]

。
[0396]
(s)-5-((((6-(3'-((2-(溴甲基)噻唑并[4,5-c]吡啶-4-基)氨基)-2,2'-二氯-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-(二氟甲氧基)-4-甲基吡啶-3-基)甲基)氨基)甲基)吡咯烷-2-酮
[0397][0398]
化合物17-3(2.00克,2.86毫摩尔)加入到氢溴酸(20毫升)的醋酸溶液中，将混合物加热到60℃并搅拌10小时。待反应完成后，将反应液在冰浴下缓慢滴加到饱和的碳酸氢钠的水溶液中，使用二氯甲烷(50毫升)萃取两次，合并的有机相使用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到目标化合物(1.75克,57％)，为黄色固体。ms(esi):m/z＝747.1[m h]

。
[0399]
甲基(1r,5s)-8-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯
[0400][0401]
将碳酸铯(391毫克,1.20毫摩尔)和甲基(1r,5s)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸酯盐酸(165毫克,0.80毫摩尔)溶于四氢呋喃(3毫升)和乙腈(1毫升)中,常温搅拌一个小时。然后将化合物17-4(300毫克,0.40毫摩尔)加入其中，继续常温搅拌，直到原料完全消失。使用二氯甲烷(50毫升)稀释反应液，依次用水和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩，残渣用反相快速分离柱(85％乙腈的碳酸氢铵(0.1％)的水溶液)纯化，得到目标化合物(122毫克,38％)，为淡黄色固体。ms(esi):m/z＝836.4[m h]

。
[0402]
8-((4-((2,2'-二氯-3'-(6-(二氟甲氧基)-4-甲基-5-(((((s)-5-羰基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)甲基)吡啶-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)噻唑并[4,5-c]吡啶-2-基)甲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-羧酸
[0403][0404]
将化合物17-5(122毫克,0.15毫摩尔)和氢氧化锂一水合物(25毫克,0.60毫摩尔),溶于甲醇(1.5毫升),四氢呋喃(0.5毫升)和水(0.5毫升)的混合溶液中，反应液室温搅拌过夜。待反应完成后，用稀盐酸中和，浓缩，残渣通过制备型高效液相色谱纯化获得目标产物(95毫克，80％)，为白色固体。ms(esi):m/z＝822.3[m h]

。
[0405]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.93(d,j＝8.3hz,1h),8.63(s,1h),8.13(d,j＝5.6hz,1h),7.72(t,j＝73hz,,1h),7.70
–
7.65(m,1h),7.65
–
7.55(m,3h),7.48(m,3h),7.05(d,j＝7.5hz,1h),3.98(s,2h),3.78(s,2h),3.67
–
3.59(m,1h),3.38
–
3.33(m,2h),2.62
–
2.57(m,2h),2.56
–
2.53(m,1h),2.49(s,3h),2.18
–
2.05(m,3h),2.04
–
1.92(m,2h),1.82(m,2h),1.74
–
1.58(m,5h)。
[0406]
以下化合物按照实施例17的合成方法，替换相应的原料合成可得。
[0407]
[0408]
[0409]
[0410]
[0411]
tag2-xl 665，室温孵育过夜，用biotek synergy
tm neo2多功能酶标仪检测，获得665nm/620nm比值。用prism拟合ic50曲线。
[0416]
表1本发明部分化合物在测试例1中的ic
50
值
[0417]
化合物编号pd-l1 ic
50
1a2a3a4a5a6a7a8b9a10a11a12a13a14a
[0418]
字母a代表ic
50
小于5nm；
[0419]
字母b代表ic
50
为5nm至1μm；
[0420]
字母c代表ic
50
为大于1μm；
[0421]
结果显示，本发明中化合物可在不同浓度下有效抑制pd-1/pd-l1的结合。因此可用于与pd-1/pd-l1互相结合相关的疾病治疗中。
[0422]
测试例2：细胞学nfat报告基因实验
[0423]
pd-1/pd-l1的细胞学实验需要有两种细胞，pd-1效应细胞和pd-l1 aapc/cho-k1细胞，其中pd-1效应细胞表达人pd-1蛋白和由nfat驱动的荧光素酶报告基因，pd-l1 aapc/cho-k1细胞表达pd-l1蛋白和anti-cd3 antibody。当这两种细胞共培养时，pd-1/pd-l1的相互作用会抑制tcr至nfat-re的信号传递，中断nfat-re介导的荧光信号。当加入pd-1或pd-l1的抑制剂时，阻断了pd-1/pd-l1的相互作用，解除了对tcr至nfat-re通路的信号抑制，使荧光信号增强，通过荧光信号的强弱来判断抑制剂的阻断效果。
[0424]
实验第一天，将复苏的pd-l1 aapc/cho-k1细胞消化处理，离心后用培养基(90％ham’s f-12/10％fbs)将浓度调为2.0
×
105/ml，按每孔40μl，8
×
103细胞的量铺在384孔板中，置于培养箱中过夜培养。第二天，先将待测化合物用检测buffer(99％rpmi1640/1％fbs)按梯度稀释到所需检测浓度的2倍，pd-1细胞离心后用检测buffer稀释至浓度为6.25
×
105/ml。去除过夜培养的384孔板中的培养基后，每孔加入20μl化合物稀释液，及20μl稀释后的pd-1效应细胞，在细胞培养箱中孵育6小时后，每孔再加入20μl bio-glo试剂(promega，cat#g7940)，约10分钟后，用多功能酶标仪读板。每块板需设置阴性对照(只加细胞，不加化合物)，和空白对照(只加检测buffer)。根据荧光值，用prism来分析化合物的抑制活性。
[0425]
表2本发明部分化合物在测试例2中的ec
50
值
[0426]
化合物编号nfat ec
50
1a2a3b4b5a6b7b9a10a11a12a13a14a15b16a
[0427]
字母a代表ic
50
小于100nm；
[0428]
字母b代表ic
50
为100nm至1μm；
[0429]
字母c代表ic
50
为大于1μm；
[0430]
结果显示，本发明化合物能够有效阻断pd-1/pd-l1的相互作用，半数抑制浓度与临床阶段的pd-1/pd-l1抑制剂相当或更佳。
[0431]
测试例3：human pbmc功能学实验
[0432]
seb(toxin technology，cat#bt202)可诱导t细胞活化并分泌产生il-2。在反应系统中加入抗pd-1/pd-l1抗体或小分子抑制剂可促进t细胞活化，增加il-2的分泌。用il-2elisa试剂盒检测细胞上清中il-2的含量，从而评估化合物的活性。
[0433]
实验第一天，配制待测化合物、抗体溶液和对照溶液，每孔加入50μl化合物、抗体或对照溶液，按照说明书的要求复苏人pbmc细胞，用培养基(90％rpmi1640 10％fbs)将细胞浓度调整为3
×
106/ml，按每孔100μl，3
×
105细胞的量铺在96孔细胞培养板中(corning-3599)，置于37℃培养箱中培养4天后以300g离心5分钟收集细胞上清，然后用il-2elisa试剂盒(r&d-dy202-05)检测细胞因子il-2的变化。
[0434]
表3本发明部分化合物在测试例3中的起效浓度
[0435]
化合物编号起效浓度2b10b
[0436]
字母a代表起效浓度小于1nm；
[0437]
字母b代表起效浓度为1-10nm；
[0438]
字母c代表起效浓度为10-100nm；
[0439]
结果显示，本发明化合物能够增加il-2的分泌，并且il-2的分泌与化合物的浓度
呈剂量相关，在高浓度条件下化合物的作用与对照抗体相当。
[0440]
测试例4：本发明中小分子抑制剂治疗肿瘤体内药效实验
[0441]
建立皮下移植肿瘤的小鼠模型，以检查这些化合物对肿瘤生长的体内抑制效果。方法如下：将培养的特定肿瘤细胞消化后离心收集细胞，用无菌生理盐水清洗两遍后计数，用生理盐水调整细胞浓度至所需的浓度，取0.2ml细胞混悬液接种到hpd-l1c57bl/6或者balb/c免疫健全小鼠皮下。接种后观察肿瘤生长至特定大小，动物随机分组，每组6-15只，称重后给药，待测化合物每天给药1次或2次，分组包括：载体组，对照抗pd-1/pd-l1抗体组，待测化合物组。小鼠每周检测肿瘤生长，共大约6周，待肿瘤体积达到肿瘤终点后，称量小鼠体重，并进行安乐死。剥取肿瘤组织，脾脏组织及血液样本。计算肿瘤抑制率，检测肿瘤、脾脏及血液样本中hpd-l1的抑制率和免疫细胞组成，计算待测化合物免疫调节活性。
[0442]
结果显示，本发明化合物能够在荷瘤小鼠中有效抑制肿瘤生长，其抑制效果与临床阶段的pd-1/pd-l1抑制剂相当或更佳。
[0443]
测试例5：本发明中小分子抑制剂小鼠、大鼠和猴药代动力学实验
[0444]
分别单次静脉(iv)和口服(po)给予icr小鼠、大鼠及猴测试化合物，于不同时间点采集血样，lc-ms/ms测定动物血浆中受试物的浓度并计算相关参数。具体如下：取所需量供试品，于20％peg400 80％(20％sbe-β-cd在100mm citrate buffer ph 3.0)中，配成所需浓度的溶液，用于静脉或口服。建立生物样品分析方法及样品检测方法。不同时间点的血药浓度数据，运用phoenix winnonlin 7.0软件计算药代动力学参数，如auc
(0-t)
，auc
(0-∞)
，t
1/2
，c
max
，t
max
、f％和mrt等。
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表4本发明部分化合物的小鼠药代动力学参数
[0446][0447]
表5本发明部分化合物的大鼠药代动力学参数
[0448][0449]
[0450]
表6本发明部分化合物的食蟹猴药代动力学参数
[0451][0452]
结果显示，本发明化合物具有优异的药代动力学性质。
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在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。