一种二硫键交联透明质酸凝胶中交联剂残留的检测方法与流程

技术特征：
1.一种二硫键交联透明质酸凝胶中交联剂残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）交联剂的标准溶液：精密称取一定量的交联剂标准品，纯水稀释配制成不少于4个浓度梯度、范围为1～10 ppm的交联剂的标准溶液；步骤（2）待测样品的降解：精密称取一定体积的二硫键交联透明质酸凝胶用酶降解，酶降解产物溶液为均一透明溶液，无明显的颗粒；步骤（3）降解产物的超滤分离：步骤（2）得到的降解产物置于超滤离心管中，离心后降解产物中的交联剂残留进入滤液；步骤（4） ntsb试剂显色反应：步骤（3）得到的滤液调ph至3~4，再取等体积的滤液和ntsb试剂混合，室温下反应25分钟，412nm
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2nm测定吸光度；步骤（5）标准曲线的建立：步骤（1）得到的标准品溶液分别按步骤（2）的方法降解，再分别按步骤（3）超滤分离、步骤（4）显色后测定吸光度，并与交联剂的标准溶液的浓度进行线性回归产生标准曲线；步骤（6）交联剂残留的测定：将步骤（4）中的得到的吸光度带入步骤（5）的标准曲线，得到交联剂的残留含量；所述吸光度测定采用紫外-可见分光光度计。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述交联剂是胱胺二盐酸盐或3,3
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二硫代双。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述二硫键交联透明质酸凝胶的浓度为3～30 mg/ml。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酶是透明质酸酶。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述透明质酸酶采用0.9%氯化钠溶解，酶活为25～75 u/ml。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述二硫键交联透明质酸凝胶与所述透明质酸酶的体积比（v/v）是1：（1～3）。7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述透明质酸酶的降解条件是在37℃的温度下降解20 分钟。8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述离心的条件是在6000转/分钟的转速下离心15分钟。9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述调ph至3～4可调换到步骤（3）的离心前。10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述交联剂的标准溶液的浓度梯度分别为1、2、3、4和5 ppm。11.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超滤离心管的截留分子量不大于10kda。12.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述室温的范围是10℃～30℃。

技术总结
本发明公开了一种二硫键交联透明质酸凝胶中交联剂残留的检测方法，包括以下步骤：步骤（1）交联剂的标准溶液；步骤（2）待测样品的降解；步骤（3）降解产物的超滤分离；步骤（4）NTSB试剂显色反应；步骤（5）标准曲线的建立；步骤（6）交联剂残留的测定。交联剂（以胱胺二盐酸盐为例）残留的最低检测限可达到0.0539 ppm，定量限可达到0.1634 ppm，1～5 ppm的线性相关系数（R2）为0.9999，是一种精确度高、操作方法简单易行、线性范围广、成本低、能够满足实际需求的二硫键交联透明质酸凝胶中交联剂微量残留的显色检测方法。的显色检测方法。的显色检测方法。


技术研发人员：宋文俊 张红晨 王云云 王昕宇 舒晓正
受保护的技术使用者：常州百瑞吉生物医药有限公司
技术研发日：2022.11.01
技术公布日：2022/11/29