一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂及应用的制作方法

1.本发明涉及医疗器械技术领域，尤其涉及一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂及应用。


背景技术：

2.降钙素原(pct)是一种含116个氨基酸的无激素活性糖蛋白，是20世纪90年代首先在脓毒血症病人的血清中检测到的蛋白。在生理情况下由甲状腺-c细胞产生，含量极少在健康人群的血清中几乎不能被检出；当身体当中有严重感染的时候，包括细菌、真菌等感染，以及多脏器功能衰竭时，降钙素原的水平会升高，所以在临床上，通常将降钙素原作为细菌性感染的鉴别诊断，是儿童及老年患者细菌感染最强指标，可用于有效鉴别细菌与病毒感染。
3.临床研究表明，口腔样本中降钙素原水平与血液样本中将骨钙素原水平具有相关性，而且口腔样本取样属于无创方式，不用担心有创取样可能导致的伤害或感染。
4.降钙素原在儿童感染疾病诊断中应用广泛，而现有降钙素原检测产品均为血液检测，需要经历静脉采血，这也是儿童较难适应、家长不愿接受的一个比较痛苦的过程。甚至引起许多儿童的恐惧和家长的忧虑。与血液样本采样相比，口腔样本采样具有易于采集、不存在对身体的伤害、儿童更易于接受等优势。且本发明检测试剂具有方便携带、检测效率高、操作难度低等优势，具有广泛的临床应用价值。


技术实现要素：

5.针对上述问题，本发明的目的是提供一种效率高、使用方便一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂。为实现上述目的，本发明提供一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂，由口腔样本采样结构、待检样本提取结构、免疫检测反应结构和免疫检测检测结构组成。
6.进一步的，所述口腔样本采样结构由采样头和采样手柄组成，所述采样头和采样手柄之间为可拆装式连接；
7.进一步的，所述待检样本提取结构为管状结构和弹性结构及由置于所述弹性结构内的含有酪蛋白的液相组成；
8.进一步的，所述免疫检测反应结构为免疫层析检测结构，包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和支撑底片，所述样品垫上设有被指示剂标记的抗人降钙素原抗体,指示剂标记抗人降钙素原抗体与待测样本中的降钙素原抗原结合形成指示剂-抗人降钙素原抗体-降钙素原抗原复合物，所述样品垫与所述硝酸纤维素膜连接；所述硝酸纤维素膜的近端与所述结合垫连接，远端与所述吸水垫连接，所述硝酸纤维素膜上设有检测t线,所述t线是用与所述样品垫上设有被指示剂标记的抗人降钙素原抗体具有配对免疫结合活性的抗人降钙素原抗体在所述硝酸纤维素膜上包被制备；
9.进一步的，所述免疫检测结构为用于免疫检测反应结果的检测结构，包括胶体金检测器、荧光检测器、目测检测中的至少一种。
10.进一步的，所述采样头为口腔无菌采样拭子、生物取样棉签、植绒拭子中的至少一种。
11.本发明还提供如下应用方案，一种用于采集来自人体的病毒检测的样本的采样装置，具有如下特征，其应用包括如下步骤：
12.1)将采样头含于口中，充分收集唾液；
13.2)然后剐蹭牙龈部位，进行牙龈取样；
14.3)推动采样手柄，将样本集中到样本提取结构内；
15.4)样本经由提取结构流动到免疫检测反应结构内；
16.5)反应并测定样本中降钙素原的水平。
17.本发明由于采取以上技术方案，其具有以下优点：
18.(1)与血液样本采样相比，本发明采样方式更容易被接受，具有易于采集、不存在对身体的伤害和儿童更易于接受等优势；
19.(2)本发明检测试剂具有方便携带、检测效率高、操作难度低等优势。
附图说明
20.图1是本发明的采样头示意图；
21.图2是本发明的采样手柄示意图；
22.图3是本发明的待检样本提取结构示意图；
23.图4是本发明的免疫检测反应结构示意图；
24.图5是本发明的免疫检测卡扣示意图；
25.图6是本发明的采样手柄横切面示意图。
具体实施方式
26.为更进一步阐述本发明为达成预定目的所采取的技术手段及功效，以下下述实施例结合附图对本发明进行进一步说明，但本发明并不局限于以下说明。
27.实施例一、拭子采样及样本收集
28.(1)取样：捏住拭子头的无菌外包装，从拭子手柄端撕开包装塑封袋，去除拭子手柄，将连接杆1(如图1所示)连接到采样手柄3(如图2所示)端，握住采样手柄，将拭子头放入受检者口腔，充分吸收唾液，然后剐蹭左右两边牙龈部位，充分取样。
29.(2)样本收集和处理：取样完毕后，继续手握采样手柄，与待检样本提取结构4(如图3所示)端连接，使充满样本的拭子头与弹性结构5(如图3所示)内的含有酪蛋白的液相混合，挤压弹性结构5，使液相流入到免疫检测反应结构6(如图4所示)上。
30.实施例二、降钙素原检测
31.(1)样品垫的制备
32.样品垫选用玻璃纤维素膜，用缓冲液tris等溶解nacl、bsa等盐离子和蛋白，然后加入少量的表面活性剂tween20，调节ph到7-8，按玻纤吸水量均匀铺于玻纤上，置于37℃干燥8小时即得。
33.(2)结合垫的制备
34.取出玻璃纤维素膜，将胶体金标记的鼠抗降钙素原单克隆抗体转载在印膜仪上，启动印膜仪，设定喷笔移动速度30mm/s，液体推进量1ul/mm。然后装载羊抗降钙素原多克隆抗体，调节印膜喷头在玻璃纤维素膜上的位置，开始印膜，后将喷涂好的玻璃纤维素膜取出，放入电热真空干燥箱内，37℃下干燥8小时即得结合垫。
35.(3)降钙素原硝酸纤维素膜的包被与干燥
36.将羊抗鼠igg抗体用50mm ph7.2的pb缓冲液稀释到1.0mg/ml的浓度，0.8ul/cm的划线速率在nc膜上端c线标注位置划线得到质控线；将羊抗人降钙素原多克隆抗体也用稀释包被液稀释至1.0mg/ml的浓度，0.8ul/cm的划线速率在nc膜上t线标注位置划线得到定量检测线，检测线和质控线间隔为5mm，划线完毕后置于37℃干燥8小时即得。
37.(4)吸水纸的制备：将吸水纸裁剪成30cm
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2.7cm每条。
38.(5)将上述处理好的样品垫、微球标记结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴于pvc底板上，贴好后用切条机切成宽4mm的试纸条，置于检测管状结构内。
39.(6)挤压存有经实施例1制备的样本处理液的弹性结构6，使样本处理液流入检测部位，进行检测，读取检测结果。
40.实施例三、临床应用研究
41.使用本发明的用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂(最低检出限为50ng/ml)对30例8-12岁儿童进行口腔样本采样和检测，同时采用血清样本检测结果进行验证，结果显示本发明的口腔样本与血液样本检测检测结果符合率达到100％。
[0042][0043]


技术特征：
1.一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂，其特征在于,所述免疫检测试剂包括口腔样本采样结构、待检样本提取结构、免疫检测反应结构和免疫检测反应结构：所述口腔样本采样结构由采样头和采样手柄组成，所述采样头和采样手柄之间为可拆装式连接；所述待检样本提取结构为管状和弹性结构及由置于所述弹性结构内的含有酪蛋白的液相组成；所述免疫检测反应结构为免疫层析检测结构，包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和支撑底片，所述样品垫上设有被指示剂标记的抗人降钙素原抗体,指示剂标记抗人降钙素原抗体与待测样本中的降钙素原抗原结合形成指示剂-抗人降钙素原抗体-降钙素原抗原复合物，所述样品垫与所述硝酸纤维素膜连接；所述硝酸纤维素膜的近端与所述结合垫连接，远端与所述吸水垫连接，所述硝酸纤维素膜上设有检测t线,所述t线是用与所述样品垫上设有被指示剂标记的抗人降钙素原抗体具有配对免疫结合活性的抗人降钙素原抗体在所述硝酸纤维素膜上包被制备；所述免疫检测结构为用于免疫检测反应结果的检测结构，包括胶体金检测器、荧光检测器、目测检测中的至少一种。2.如权利要求1所述的用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂，其特征在于，采样头为口腔无菌采样拭子、生物取样棉签、植绒拭子中的至少一种。3.一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂的应用，其特征在于，包括如下步骤：1)将采样头含于口中，充分收集唾液；2)然后剐蹭牙龈部位，进行牙龈取样；3)推动采样手柄，将样本集中到样本提取结构内；4)样本经由提取结构流动到免疫检测反应结构内；5)反应并测定样本中降钙素原的水平。

技术总结
本发明公开了一种用于口腔样本中降钙素原水平测试的免疫检测试剂及应用，由口腔样本采样结构、待检样本提取结构、免疫检测反应结构和免疫检测检测结构组成。将采样头浸置于口腔样本中，推动采样手柄，将样本集中到样本提取结构内，样本经由提取结构流动到免疫检测反应结构内，反应并对样本中降钙素原的水平进行检测。本发明提供了降钙素原的口腔采样方式和检测试剂，提高了检测的效率和准确性，具有重要的临床意义。要的临床意义。要的临床意义。


技术研发人员：章燕 刘冰 成艳
受保护的技术使用者：常州博闻迪医药股份有限公司
技术研发日：2021.05.27
技术公布日：2022/11/29