一种测定植株中硼含量的方法

1.本发明涉及测定植株中硼含量的技术领域，特别的，是一种测定植株中硼含量的方法。


背景技术：

2.硼是植物必需的微量元素之一，测定植株中硼的方法有甲亚胺比色法、姜黄素比色法、等离子发射光谱法、原子吸收分光光度法。由于硼的原子化温度较高，原子吸收分光光度法测硼已很少用。姜黄素比色法由于硼与姜黄素的显色是在脱水过程中完成，脱水速度的快慢对显色极其重要，为保证脱水速度不对显色产生影响，样品与标准系列的脱水条件必须保证严格一致，显色条件要求严格，不易操作。目前应用最广泛的是甲亚胺比色法和等离子发射光谱法，等离子发射光谱法对试验仪器有所要求，其使用的电感耦合等离子光谱仪，该仪器价格昂贵，且该方法前处理为干灰化法，过程繁琐，需要用马弗炉高温灰化。现有的甲亚胺比色法前处理与等离子发射光谱法前处理类似，需要马弗炉高温灰化2小时左右，弱掌握不好灰化时间与温度，易造成硼提取不完全或损失，现有技术的缺陷和不足：现有的甲亚胺比色法前处理过程繁琐，试样需在马弗炉中高温灰化2小时左右，且弱掌握不好灰化时间与温度，易造成硼提取不完全或损失。


技术实现要素：

3.针对上述问题，本发明提供一种测定植株中硼含量的方法。
4.为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种测定植株中硼含量的方法，包括甲基红指示剂、缓冲液、0.025m edta溶液、甲亚胺溶液；所述甲基红指示剂：称取0.1g甲基红,用乙醇溶解稀释到100ml,可得1g/l的所述甲基红指示剂；所述缓冲液：称取250g醋酸铵于500ml去离子水中，慢慢加入冰醋酸（约100ml），不断搅拌，使溶液的ph值调节至5.5；所述0.025m edta溶液：称取9.3gedta二钠盐溶于去离子水中，并用去离子水定容至1000ml；所述甲亚胺溶液：称取0.5g甲亚胺-h和1.0g抗坏血酸于10ml去离子水中，在30℃水浴上加热，使其溶解，冷却后用去离子水稀释至100ml。
5.作为本发明的进一步改进，称取烘干磨碎的植株样品1.0~1.5g于150ml三角瓶中，加入hno3：hclo4=15ml：3ml，插上小漏斗，调节可控温电炉保持溶液微沸并摇动三角瓶防止溶液溢出，消煮至溶液澄清（若消煮液不够可继续添加以上比例hno3、hclo4），约2~5ml为止。
6.作为本发明的进一步改进，将消煮液转移至100ml容量瓶并定容，吸10ml于25ml容量瓶中，加入两滴甲基红指示剂，用氨水调节溶液至浅橙色（ph为7左右），定容，同时做空白试验。
7.作为本发明的进一步改进，吸取5ml溶液于试管中，依次加入2ml缓冲液，2mledta
溶液和2ml甲亚胺溶液，注意每加一种试剂后要充分摇匀，此混合溶液静置1h后，于430nm波长处测定吸光度。
8.作为本发明的进一步改进，称取h3bo30.5715g于1000ml容量瓶中，加蒸馏水溶解后，稀释至刻度，摇匀，转入塑料瓶中保存，此为100ug/ml标准母液。
9.作为本发明的进一步改进，分别吸取此标准母液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，用蒸馏水补至5ml（此标准系列b含量为0ug、20ug、40ug、60ug、80ug、100ug），依次加入2ml缓冲液，2mledta溶液和2ml甲亚胺溶液。
10.本发明的优点：针对现有甲亚胺比色法干灰化法前处理过程繁琐，试样需在马弗炉中高温灰化2小时左右，且若掌握不好灰化时间与温度，易造成硼提取不完全或损失等缺点，本发明采取湿灰化法进行处理：在试样中加入hno3：hclo4=15ml：3ml，插上小漏斗，调节可控温电炉保持溶液微沸并摇动三角瓶防止溶液溢出，消煮2小时左右，至溶液澄清，约2~5ml为止，若提前一天将hno3、hclo4加入试样浸泡一晚，可缩短消煮时间半小时左右，植物试样经湿灰化法处理后，在弱酸性条件下，试样溶液中硼与甲亚胺-h酸生成黄色复合物，用分光光度计在波长430nm出测定吸光度，吸光度与硼含量成正比，与标准系列比较能定量出试样中硼含量。
附图说明
11.图1为湿灰化法、干灰化法测定植株中硼含量结果的示意图。
具体实施方式
12.为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式以及附图说明，进一步阐述本发明的优选实施方案。
实施例
13.如图1所示，本发明提供一种测定植株中硼含量的方法，包括甲基红指示剂、缓冲液、0.025m edta溶液、甲亚胺溶液；所述甲基红指示剂：称取0.1g甲基红,用乙醇溶解稀释到100ml,可得1g/l的所述甲基红指示剂；所述缓冲液：称取250g醋酸铵于500ml去离子水中，慢慢加入冰醋酸（约100ml），不断搅拌，使溶液的ph值调节至5.5；所述0.025m edta溶液：称取9.3gedta二钠盐溶于去离子水中，并用去离子水定容至1000ml；所述甲亚胺溶液：称取0.5g甲亚胺-h和1.0g抗坏血酸于10ml去离子水中，在30℃水浴上加热，使其溶解，冷却后用去离子水稀释至100ml。
14.作为本发明的进一步改进，称取烘干磨碎的植株样品1.0~1.5g于150ml三角瓶中，加入hno3：hclo4=15ml：3ml，插上小漏斗，调节可控温电炉保持溶液微沸并摇动三角瓶防止溶液溢出，消煮至溶液澄清（若消煮液不够可继续添加以上比例hno3、hclo4），约2~5ml为止。
15.作为本发明的进一步改进，将消煮液转移至100ml容量瓶并定容，吸10ml于25ml容量瓶中，加入两滴甲基红指示剂，用氨水调节溶液至浅橙色（ph为7左右），定容，同时做空白
试验。
16.作为本发明的进一步改进，吸取5ml溶液于试管中，依次加入2ml缓冲液，2mledta溶液和2ml甲亚胺溶液，注意每加一种试剂后要充分摇匀，此混合溶液静置1h后，于430nm波长处测定吸光度。
17.作为本发明的进一步改进，称取h3bo30.5715g于1000ml容量瓶中，加蒸馏水溶解后，稀释至刻度，摇匀，转入塑料瓶中保存，此为100ug/ml标准母液。
18.作为本发明的进一步改进，分别吸取此标准母液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，用蒸馏水补至5ml（此标准系列b含量为0ug、20ug、40ug、60ug、80ug、100ug），依次加入2ml缓冲液，2mledta溶液和2ml甲亚胺溶液。
19.具体实验步骤如下：1、试剂：甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，用乙醇溶解稀释到100ml，可得1g/l的甲基红指示剂。
20.缓冲液：称取250g醋酸铵于500ml去离子水中，慢慢加入冰醋酸（约100ml），不断搅拌，使溶液的ph值调节至5.5。
21.0.025m edta溶液：称取9.3gedta二钠盐溶于去离子水中，并用去离子水定容至1000ml。
22.甲亚胺溶液：称取0.5g甲亚胺-h和1.0g抗坏血酸于10ml去离子水中，在30℃水浴上加热，使其溶解，冷却后用去离子水稀释至100ml。此试剂需现用现配。
23.2、试验仪器无硼石英三角瓶、容量瓶、移液管、可控温电炉、电子天平、紫外可见分光光度计。
24.3、测定步骤：3.1称取烘干磨碎的植株样品1.0~1.5g于150ml三角瓶中，加入hno3：hclo4=15ml：3ml，插上小漏斗，调节可控温电炉保持溶液微沸并摇动三角瓶防止溶液溢出，消煮至溶液澄清（若消煮液不够可继续添加以上比例hno3、hclo4），约2~5ml为止。
25.3.2将消煮液转移至100ml容量瓶并定容，吸10ml于25ml容量瓶中，加入两滴甲基红指示剂，用氨水调节溶液至浅橙色（ph为7左右），定容。同时做空白试验。
26.3.3吸取5ml溶液于试管中，依次加入2ml缓冲液，2mledta溶液和2ml甲亚胺溶液。注意每加一种试剂后要充分摇匀。此混合溶液静置1h后，于430nm波长处测定吸光度。
27.4、标准曲线的制作：称取h3bo30.5715g于1000ml容量瓶中，加蒸馏水溶解后，稀释至刻度，摇匀，转入塑料瓶中保存，此为100ug/ml标准母液。分别吸取此标准母液0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，用蒸馏水补至5ml（此标准系列b含量为0ug、20ug、40ug、60ug、80ug、100ug），依次加入2ml缓冲液，2mledta溶液和2ml甲亚胺溶液。注意每加一种试剂后要充分摇匀。此混合溶液静置1h后，于430nm波长处测定吸光度。以硼含量（ug）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
28.5.5结果计算：
c—由标准曲线得b含量（ug）c0—空白试样中b含量（ug）d—分取倍数m—称样量（g）b标准系列（ug）:0,20,40,60,80,100；对应的吸光度分别为：0,0.097,0.193,0.299,0.425,0.555。以b含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，所得曲线公示为y=0.0055x-0.0146，r2=0.9953。
29.湿灰化法、干灰化法测定植株中硼含量结果以干灰化法测定结果为横坐标，湿灰化法测定结果为纵坐标绘制曲线，r为两结果间的相关性。由以上结果可得曲线方程为：y=1.06x-3.7392，r=0.9989。
30.下面对上述技术方案中的测定植株中硼含量的方法的工作原理作如下说明：本发明采取湿灰化法进行处理：在试样中加入hno3：hclo4=15ml：3ml，插上小漏斗，调节可控温电炉保持溶液微沸并摇动三角瓶防止溶液溢出，消煮2小时左右，至溶液澄清，约2~5ml为止，若提前一天将hno3、hclo4加入试样浸泡一晚，可缩短消煮时间半小时左右；本发明植物试样经湿灰化法处理后，在弱酸性条件下，试样溶液中硼与甲亚胺-h酸生成黄色复合物，用分光光度计在波长430nm出测定吸光度，吸光度与硼含量成正比，与标准系列比较能定量出试样中硼含量。
31.以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。