一种盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐检测方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐检测方法。


背景技术：

2.盐酸伊托必利是一种可口服制剂的胃动力促进药物，最早由北陆制药株式会社研发，其化学命名为n-[4-[2-(二甲胺基)乙氧基]苯甲基]-3,4-二甲氧基苯甲酰胺盐酸盐，2-二甲氨基氯乙烷是盐酸伊托必利起始物料4-[2-(二甲氨基)乙氧基]苄胺合成工艺中所引入的杂质，可能会以盐酸盐的形式残留在盐酸伊托必利成品中。
[0003]
2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐，cas no.：4584-46-7，结构式：，是盐酸伊托必利合成过程中的一种工艺杂质，因其具有卤代烃的基因毒性警示结构，需要对该类杂质进行控制。
[0004]
杂质作为药品的一项关键质量属性，是贯穿于研发始终的一项重要研究内容，杂质分析是杂质研究工作的基础，通过全面的杂质分析，可指引药品制备工艺的开发和优化、质量控制策略的制定；可使杂质检查工作有的放矢，是建立合理可行检查方法的基础。
[0005]
目前文献鲜有报道2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测方法，本发明公开了盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测方法，通过2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐与衍生试剂苯胺（苯胺结构式：）衍生化得到2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐衍生物（结构式：）后，使用lcms方法进行检测，为解决盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的含量，从而有效保障用药安全，便于盐酸伊托必利的质量控制。


技术实现要素：

[0006]
本发明提供一种盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测方法，为解决盐酸伊托必利的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测盐酸伊托
必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的含量，从而有效保障用药安全，便于盐酸伊托必利的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于盐酸伊托必利的质量控制。
[0007]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐检测方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液。
[0008]
（2）测定方法：采用lc-ms测定盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；色谱条件如下:色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，进样量：2
µ
l，柱温：35℃，流速：0.5ml/min，流动相：以甲酸：水体系为流动相a，以甲醇为流动相b，采用梯度洗脱；ms条件如下：干燥气温度：350℃，干燥气流速：8l/min，雾化气压力：45psi，鞘气温度：350℃，鞘气流速：11l/min，毛细管电压：3000v，极性：正极，扫描模式：sim，采集时间：2.5min-5.0min，simion：m/z165.1，fragmentor：76v，dwell：200，加速电压：5v。
[0009]
进一步的，所述空白溶液：取合适的量瓶，先加入适量稀释液，再加入适量苯胺和k2co3溶液，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得；所述稀释液为乙腈：水=60:40（v/v）；所述流动相为：流动相a：甲酸：水=1:1000（v/v），流动相b：甲醇；所述对照品溶液：取适量的2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐溶液，置于量瓶中，先加入适量稀释液，再加入适量苯胺和k2co3溶液，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得；所述灵敏度溶液：取适量对照品溶液，置于容量瓶中，加入适量空白液溶解并稀释至刻度，摇匀；所述供试品溶液：取适量供试品，置于容量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入适量苯胺和k2co3溶液，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得；所述色谱柱为agilentporoshell120sb-c184.6
×
50mm，2.7
µ
m或效能相当的色谱柱。
[0010]
进一步的，所述流动相梯度过程如下：进一步的，本发明所述的测定方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：稀释液：乙腈：水=60:40（v/v）；k2co3溶液（30mg/ml）：取无水碳酸钾约3.0g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻
度摇匀，即得；空白溶液：取50ml量瓶，先加入适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得；2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液：取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液100
µ
l，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：500ng/ml）对照品溶液：精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.0ml，置50ml量瓶中，先加入适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：10ng/ml）灵敏度溶液：精密量取对照品溶液2.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：2ng/ml）供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：1mg/ml）色谱条件如下: 色谱柱：agilent poroshell 120 sb-c18 4.6
×
50mm，2.7
µ
m或效能相当的色谱柱，进样量：2
µ
l，柱温：35℃，流速：0.5ml/min，流动相：以甲酸：水体系为流动相a，以甲醇为流动相b，采用梯度洗脱，梯度表如下：仪器：agilent infinityii 1290 uhplc agilent 6470 esi-qqq-ms、电子分析天平；ms条件如下：
（2）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，空白溶液1针，供试品溶液1针，记录谱图。
[0011]
结果（ppm）=(ru/rs)
×
(cs/cu)其中：ru：供试品溶液图谱中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的峰面积；rs：6针对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的平均峰面积； cs：对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的浓度(ng/ml)；cu：供试品溶液的浓度(mg/ml)。。
[0012]
限度：所述盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为：
本发明公开了盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测方法，为解决盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的含量，从而有效保障用药安全。
附图说明
[0013]
图1为盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐空白溶液图谱；图2为盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐对照品溶液图谱；图3为盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐供试品溶液图谱；图4为盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐灵敏性溶液图谱；图5为盐酸伊托必利中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐选择性溶液图谱。
具体实施方式
[0014]
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
[0015]
实施例1：（1）配制溶液：乙腈：hplc，甲醇：hplc，水：超纯水，甲酸：ar及以上，苯胺：ar及以上，无水碳酸钾：ar及以上，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐：外购；稀释液：乙腈：水=60:40（v/v）；k2co3溶液（30mg/ml）：取无水碳酸钾约3.0g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度摇匀，即得；空白溶液：取50ml量瓶，先加入适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得；2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液：取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液100
µ
l，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：500ng/ml）对照品溶液：精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.0ml，置50ml量瓶中，先加入适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，于水浴加热10min，取出放冷至室温即得浓度10ng/ml。
[0016]
灵敏度溶液：精密量取对照品溶液2.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀。（浓度：2ng/ml）供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：1mg/ml）选择性溶液：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.0ml置该量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：1mg/ml）loq溶液：根据灵敏度溶液所得的2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的s/n值，调节稀释比例至2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的s/n值不小于10。同法配制6份。
[0017]
lod溶液：精密量取loq溶液3.0ml，置10ml量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，摇匀；线性溶液-50%：精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液500μl置50ml量瓶中，先加适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：5.0ng/ml）
线性溶液-80%：精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液800μl置50ml量瓶中，先加适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：8.0ng/ml）线性溶液-100%：2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.0ml置50ml量瓶中，先加适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：10.0ng/ml）线性溶液-120%：2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.2ml置50ml量瓶中，先加适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：12.0ng/ml）线性溶液-150%：2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.5ml置50ml量瓶中，先加适量稀释液，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：15.0ng/ml）准确度溶液-100%：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.0ml置该量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：盐酸伊托必利1.0mg/ml、2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐10ng/ml）同法配制3份。
[0018]
准确度溶液-150%：取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密量取2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐储备液1.5ml置该量瓶中，先加适量稀释液溶解，再加入苯胺2ml和k2co3溶液1ml，最后加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；于60℃水浴加热10min，取出放冷至室温即得。（浓度：盐酸伊托必利1.0mg/ml、2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐15ng/ml）同法配制3份。
[0019]
色谱条件如下: 色谱柱：agilent poroshell 120 sb-c18 4.6
×
50mm，2.7
µ
m或效能相当的色谱柱，进样量：2
µ
l，柱温：35℃，流速：0.5ml/min，流动相：以甲酸：水体系为流动相a，以甲醇为流动相b，采用梯度洗脱，梯度表如下：仪器：agilent infinityii 1290 uhplc agilent 6470 esi-qqq-ms、电子分析天平；ms条件如下：
（2）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，空白溶液1针，供试品溶液1针，记录谱图。
[0020]
结果（ppm）=(ru/rs)
×
(cs/cu)其中：ru：供试品溶液图谱中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的峰面积；rs：6针对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的平均峰面积； cs：对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的浓度(ng/ml)；cu：供试品溶液的浓度(mg/ml)。
[0021]
限度：实施例2：系统适用性系统适用性是通过测定灵敏度溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的s/n值及6针对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐峰面积的rsd而实现的，要求灵敏度溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的s/n值应≥10；6针对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐峰面积的rsd应不大于10.0%。为确认序列运行过程中的系统适用性，在验证过程中每隔约8小时及序列的最后，进1针对照品溶液，要求后连续6针对照品溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐峰面积的rsd应不大于10.0%；如超出该范围，应做评估调查。
[0022]
实施例3：专属性方法的专属性是通过测定空白溶液对检测无干扰；选择性溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐与相邻峰之间的分离度而实现的，要求空白溶液对检测应无干扰，选择性溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐与相邻峰之间的分离度应不小于1.5。
[0023]
实施例4：精密度重复性：重复性是精密度是通过测试6份供试品溶液（加标）测定结果的rsd而实现的，要求6份供试品溶液（加标）中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐测定结果的rsd应不大于10.0%。
[0024]
实施例5：检测限和定量限定量限和检测限是通过检测响应信号与噪声之比而实现的，定量限的信噪比（s/n）应不小于10：1，检测限的信噪比（s/n）应不小于3：1；在定量限浓度水平下，重复考察6份定量限溶液，要求6份loq溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐单位浓度峰面积的rsd应不大于20.0%；loq
2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐
应不大于5ng/ml（5ppm），s/n≥10；lod溶液中2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的s/n≥3，且lod＜loq。
[0025]
实施例6：线性和范围在loq～150%限度浓度范围内，取6个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标画曲线。要求在loq～150%限度浓度范围内应呈线性，要求曲线的线性相关系数r的平方（r2）应不小于0.99，y轴截距的绝对值在100%浓度响应值的25%以内。
[0026]
实施例7：准确度准确度是通过被测组分实测浓度和理论浓度之间的回收率及回收率的总rsd（n=9）而实现的，要求加入loq浓度、100%限度浓度、150%限度浓度的准确度溶液中，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的回收率应在70.0%～130.0%之间，回收率的总rsd（n=9）应不大于20.0%。
[0027]
实施例8：耐用性考察对照品溶液、供试品溶液和选择性溶液在室温下放置一段时间后进样，检测结果随时间变化的规律，为检测时对照品溶液和供试品溶液的放置时间提供参考。
[0028]
要求：与0hr对照品溶液相比较，对照品溶液在室温考察期间，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的回收率在80.0%～120.0%之间，且无明显的变化趋势，则对照品溶液在室温考察期间稳定；若供试品溶液0hr有检出2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐，供试品溶液在室温下放置一段时间内，测定结果变化值在2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐限度的20%以内，且无明显的变化趋势，则供试品溶液在室温考察期间稳定；若供试品溶液0hr未检出2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐，供试品溶液在室温下放置一段时间内，仍无2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐检出，则供试品溶液在室温考察期间稳定；选择性溶液在室温下放置一段时间内，2-二甲氨基氯乙烷盐酸盐的回收率在80.0%～120.0%之间，且无明显的变化趋势，则选择性溶液在室温考察期间稳定。
[0029]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。