一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法与流程

1.本发明属于药物组合物技术领域，尤其涉及一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。


背景技术：

2.突发性耳聋是指突然发生的、原因不明的感音神经性听力损失，主要临床表现为单侧听力下降，可伴有耳鸣、耳堵塞感、眩晕、恶心、呕吐等。很多致病因素都可能导致突发性耳聋，比如病毒感染、循环障碍、自身免疫等。
3.目前普遍认为内耳供血障碍是突发性耳聋的主要病因，患者的听力损失程度与耳蜗血流速度、血流量和血管横截面积有关。内耳的血液供应来自迷路动脉，内耳毛细胞生理活动耗氧量较高，对缺氧耐受差，血压或循环二氧化碳分压下降都可能引起耳蜗外淋巴氧张力减小，从而降低内耳供氧量，引起听力下降。
4.突发性耳聋治疗目前多采用综合治疗的方法，有效率在70％左右。开始治疗的时间与预后有一定的关系，因此应该在发病后7～10天内尽早治疗。治疗常采用糖皮质激素、溶栓和抗凝药物、神经营养类药物等。
5.天麻素是从兰科植物天麻的干燥根块中提取的有机化合物，天麻素具有较好的镇静和安眠作用，对神经衰弱、失眠、头痛症状有缓解作用，还可用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、惊痛抽搐。天麻素能扩张脑血管、提高细胞抗缺氧能力、增加血流量、减少血管阻力，但天麻素主要采用口服或静脉途径给药，药物在体内分布全身，血-迷路屏障使药物很难在内耳达到有效治疗浓度，因此，将天麻素用于治疗突发性耳聋仍需要更有效的给药方式。


技术实现要素：

6.为解决口服或静脉注射天麻素无法在内耳达到突发性耳聋的有效治疗浓度的问题，本发明提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
7.本发明的技术方案：
8.一种含有天麻素的复方制剂，所述复方制剂为滴耳剂，包括质量百分含量为0.2～1.5％的天麻素脂质体，还包括药学上可接受的辅料。
9.进一步的，所述天麻素脂质体包括如下质量份的组分：
[0010][0011]
进一步的，所述天麻素脂质体的制备方法如下：
[0012]
将天麻素溶于纯化水中，将蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于适量无水乙醇中并将其与所得天麻素水溶液混合，旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜得到脂质膜，加入depc生理盐水对所述脂质膜溶解水化，对所得水化体系进行超声处理和过膜处理，透析后得到天麻素脂
质体。
[0013]
进一步的，所述超声处理的条件为300～500w超声功率处理5～8min；所述过膜处理的条件为100nm孔径的聚碳酸酯膜对超声处理后的水化体系反复挤出10～15次；所述天麻素脂质体的粒径为100～150nm。
[0014]
进一步的，所述天麻素脂质体包括如下质量份的组分：
[0015][0016]
进一步的，所述天麻素脂质体的制备方法如下：
[0017]
将天麻素溶于depc生理盐水中，将蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇中，减压旋转蒸发去除溶剂后得到第一脂质膜，将所得第一脂质膜用无水乙醇重溶并再次旋转蒸发去除溶剂后得到第二脂质膜，将所得第二脂质膜用含有天麻素的depc生理盐水溶解水化处理，对所得水化体系进行超声处理和过膜处理，得到脂质体悬液，将壳聚糖溶解于冰醋酸水溶液中，得到质量百分含量为0.2～1.0％的壳聚糖溶液，室温下，将壳聚糖溶液逐滴滴入搅拌状态的脂质体悬液中，持续搅拌1h后，4℃孵育过夜，得到壳聚糖修饰的天麻素脂质体。
[0018]
进一步的，所述超声处理的条件为300～500w超声功率处理5～8min；所述过膜处理的条件为100nm孔径的聚碳酸酯膜对超声处理后的水化体系反复挤出10～15次；所述壳聚糖修饰的天麻素脂质体的粒径为100～150nm，表面电位为 12.6
±
0.5mv。
[0019]
进一步的，所述壳聚糖的分子量为100～2000kda，所述用于溶解壳聚糖的冰醋酸的体积浓度为0.1～1.0％，所述脂质体悬液与壳聚糖溶液的体积比为1:10～5:4。
[0020]
进一步的，所述药学上可接受的辅料包括质量百分含量为0.5～1.0％的卡波姆、0.4～1.2％的聚乙二醇2000、20～30％的甘油，余量为注射用水。
[0021]
一种含有天麻素的复方制剂的制备方法，进一步的，包括如下步骤：
[0022]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0023]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0024]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0025]
步骤4、搅拌状态下，将天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0026]
本发明提供的含有天麻素的复方滴耳液的使用方法为：
[0027]
滴药时，取坐位侧偏头或侧卧于床上，外耳道口向上，牵拉耳郭，将外耳道拉直，使药液沿外耳道缓缓流入耳内。每次滴3～5滴，每日滴2-3次。滴液后，保持原体位10-15分钟，并用手指轻轻按压耳屏5～10次，通过外力作用使药液经鼓膜穿孔处流入鼓室。
[0028]
本发明的有益效果：
[0029]
本发明提供的含有天麻素的复方制剂为滴耳液制剂，经鼓室施用，鼓室内给药比较温和，与注射给药相比对内耳的损伤程度低，相对比较安全。本发明将天麻素制成脂质体
制剂，更易于被鼓室内黏膜吸收，使天麻素在局部达到有效药物浓度，起到扩张血管、增加血流量、提高内耳毛细胞抗缺氧能力的作用，提高内耳的供血量，从而为内耳神经提供充足的营养，修复神经损伤，使得因内耳供血障碍引起的突发性耳聋能够尽快恢复听力。
[0030]
本发明进一步将天麻素脂质体制备成壳聚糖修饰的脂质体，通过壳聚糖修饰使脂质体带有正电荷，不但能够避免脂质体颗粒的聚集，增加其在滴耳液中的稳定性，还更有利于脂质体与鼓室内黏膜的结合，延长脂质体在黏膜表面的滞留时间，从而延长了药物作用时间，提高了药物的生物利用度。脂质体的缓释效果还能够减少给药次数，提高患者的顺从性。
具体实施方式
[0031]
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置，若未特别指明，本发明实施例中所用的原料等均可市售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0032]
实施例1
[0033]
本实施例提供了一种天麻素脂质体及其制备方法。
[0034]
本实施例中天麻素脂质体包括如下质量分的组分：
[0035]
天麻素1.3份、
[0036]
蛋黄卵磷脂24份、
[0037]
胆固醇10份。
[0038]
本实施例中天麻素脂质体的制备方法如下：
[0039]
将天麻素溶于纯化水中，将蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于适量无水乙醇中并将其与所得天麻素水溶液缓慢混合，于20℃温水浴中旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜得到脂质膜，加入depc生理盐水对所述脂质膜溶解水化，20℃摇床水化1h后，将所得水化体系500w超声功率处理5min，使脂质体充分分散在水化体系中，通过孔径为100nm的聚碳酸酯膜对超声处理后的水化体系进行过膜处理，反复挤出15次，然后将所得脂质体混合溶液置于截留分子量为30kda的透析袋中，以生理盐水透析30min，去除透过液中未包封的游离天麻素，收集透析袋内的液体得到粒径为100～150nm的天麻素脂质体。
[0040]
本实施例得到的天麻素脂质体悬液在4℃避光保存3个月，粒径电位没有实质性变化，具有良好的稳定性。
[0041]
实施例2
[0042]
本实施例提供了一种壳聚糖修饰的天麻素脂质体及其制备方法。
[0043]
本实施例中壳聚糖修饰的天麻素脂质体包括如下质量分的组分：
[0044]
[0045]
本实施例中壳聚糖修饰的天麻素脂质体的制备方法如下：
[0046]
将天麻素溶于depc生理盐水中，将蛋黄卵磷脂和胆固醇溶解于无水乙醇中，减压旋转蒸发去除溶剂后得到第一脂质膜，将所得第一脂质膜用无水乙醇重溶并再次旋转蒸发去除溶剂后得到第二脂质膜，将所得第二脂质膜用含有天麻素的depc生理盐水溶解水化，20℃摇床水化1h后，将所得水化体系500w超声功率处理5min，使脂质体充分分散在水化体系中，通过孔径为100nm的聚碳酸酯膜对超声处理后的水化体系进行过膜处理，反复挤出15次，然后将所得脂质体混合溶液置于截留分子量为30kda的透析袋中，以生理盐水透析30min，去除透过液中未包封的游离天麻素，得到脂质体悬液；将壳聚糖溶解于冰醋酸水溶液中，得到质量百分含量为0.5％的壳聚糖溶液，室温下，将壳聚糖溶液逐滴滴入搅拌状态的脂质体悬液中，持续搅拌1h后，4℃孵育过夜，得到粒径为100～150nm的壳聚糖修饰的天麻素脂质体。
[0047]
本实施例使用的壳聚糖的分子量为1000kda，用于溶解壳聚糖的冰醋酸的体积浓度为0.5％，脂质体悬液与壳聚糖溶液的体积比为5:4。
[0048]
本实施例得到的天麻素脂质体悬液在4℃避光保存6个月，粒径电位没有实质性变化，具有良好的稳定性。
[0049]
分别测量实施例1和实施例2得到的脂质体的包封率、表面点位和粒径，包封率的具体测量方法如下：
[0050]
分别取2ml实施例1和实施例2得到的脂质体，以20000
×
g，离心30分钟，将上清液保留。以蛋黄卵磷脂25份、胆固醇10份制备的空白脂质体的离心上清液为对照，利用荧光分光分度计检测甘草酸二铵的吸光度值，并绘制标准吸收曲线，根据如下公式计算包封率：
[0051]
包封率＝(甘草酸二铵的总加入量-上清液中甘草酸二铵的量)/甘草酸二铵的总加入量
×
100％。
[0052]
脂质体的包封率和粒径测量结果见表1。
[0053]
表1
[0054]
检测项目平均粒径(nm)表面点位(mv)包封率(％)实施例1脂质体121.6
±
1.38-22.1
±
2.472.33％实施例2脂质体148.3
±
2.80 62.3
±
3.578.67％
[0055]
由表1数据可以看出，实施例1和实施例2制备的脂质体的平均粒径均为100～150nm，包封率均达到70％以上。
[0056]
实施例3
[0057]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0058]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0059]
实施例1制备的天麻素脂质体
ꢀꢀꢀ
0.5wt％、
[0060]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0061]
聚乙二醇2000
ꢀꢀ
1.0wt％、
[0062]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0063]
余量为注射用水。
[0064]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0065]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0066]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0067]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0068]
步骤4、搅拌状态下，将实施例1得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0069]
实施例4
[0070]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0071]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0072]
实施例1制备的天麻素脂质体
ꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0073]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0074]
聚乙二醇2000 1.0wt％、
[0075]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0076]
余量为注射用水。
[0077]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0078]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0079]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0080]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0081]
步骤4、搅拌状态下，将实施例1得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0082]
实施例5
[0083]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0084]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0085]
实施例1制备的天麻素脂质体
ꢀꢀ
1.5wt％、
[0086]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0087]
聚乙二醇2000
ꢀꢀ
1.0wt％、
[0088]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0089]
余量为注射用水。
[0090]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0091]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0092]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0093]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0094]
步骤4、搅拌状态下，将实施例1得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0095]
实施例6
[0096]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0097]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0098]
实施例2制备的天麻素脂质体
ꢀꢀꢀꢀ
0.5wt％、
[0099]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0100]
聚乙二醇2000
ꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0101]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0102]
余量为注射用水。
[0103]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0104]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0105]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0106]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0107]
步骤4、搅拌状态下，将实施例2得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0108]
实施例7
[0109]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0110]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0111]
实施例2制备的天麻素脂质体
ꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0112]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0113]
聚乙二醇2000
ꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0114]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0115]
余量为注射用水。
[0116]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0117]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0118]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0119]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0120]
步骤4、搅拌状态下，将实施例2得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0121]
实施例8
[0122]
本实施例提供了一种含有天麻素的复方制剂及其制备方法。
[0123]
本实施例含有天麻素的复方制剂包括如下质量百分含量的组分：
[0124]
实施例2制备的天麻素脂质体
ꢀꢀꢀꢀ
1.5wt％、
[0125]
卡波姆
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0126]
聚乙二醇2000
ꢀꢀꢀ
1.0wt％、
[0127]
甘油
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
26wt％、
[0128]
余量为注射用水。
[0129]
本实施例含有天麻素的复方制剂的制备方法为：
[0130]
步骤1、将聚乙二醇2000溶解于适量注射用水中，得到聚乙二醇水溶液备用；
[0131]
步骤2、将卡波姆充分浸润于甘油中，加入适量注射用水，混匀后使卡波姆充分溶胀，得到卡波姆溶液备用；
[0132]
步骤3、将步骤1得到的聚乙二醇水溶液与步骤2得到的充分溶胀的卡波姆溶液混合并搅拌均匀，得到混合溶液；
[0133]
步骤4、搅拌状态下，将实施例2得到的天麻素脂质体悬液缓慢加入步骤3混合溶液中，补加注射用水至全量，充分混合均匀，即得到含有天麻素的复方制剂。
[0134]
实验一、考察实施例5和实施例8制备的含天麻素的复方滴耳液对家兔内耳血流变化的改善效果。
[0135]
将16只家兔随机分成4组，每组4只，其中阴性对照组4只每天滴加等量生理盐水，其余12只家兔，在耳根部注射内毒素lps，得到内耳表现出微循环障碍的模型。模型家兔中4只为阳性对照组，每天滴加等量生理盐水；4只为实施例5组，每天向耳道内滴加实施例5制备的滴耳液，每次滴3～5滴，每日滴2-3次；4只为实施例8组，每天向耳道内滴加实施例8制备的滴耳液，每次滴3～5滴，每日滴2-3次。
[0136]
用激光多普勒血流仪分别检测所有家兔给药前和给药后3h的内耳微循环血流灌注量，对比血流灌注量的在给药前和给药后的变化率，结果显示，阴性对照组家兔和阳性对照组家兔的内耳微循环血流灌注量在滴加生理盐水前后均没有明显的变化，实施例5组模型家兔的内耳微循环血流灌注量在滴加实施例5制备的滴耳液3h后提高了4.2倍，实施例8组模型家兔的内耳微循环血流灌注量在滴加实施例8制备的滴耳液3h后提高了5.6倍。
[0137]
结果表明，滴加本发明制备的含有天麻素脂质体的滴耳液能够显著提高家兔内耳的血流量，改善内耳微循环。这说明本发明制备的天麻素脂质体滴入鼓室后，能够快速实现黏膜吸收，进入中耳及内耳的毛细血管，在短时间内达到有效治疗浓度并发挥天麻素扩张血管、增加血流量的作用。而用壳聚糖修饰的脂质体对血流量的改善效果更加显著，这说明壳聚糖修饰脂质体更有利于脂质体与鼓室内黏膜的结合，延长脂质体在黏膜表面的滞留时间，从而延长了药物作用时间，提高了药物的生物利用度。
[0138]
由于本发明制备的含有天麻素脂质体的滴耳液能快速提升内耳微循环血流量，提高供氧水平，从而为内耳神经提供充足的营养，加快神经损伤的修复，使得因内耳供血障碍引起的突发性耳聋能够尽快恢复听力。