治疗癌症的组合物和方法与流程

治疗癌症的组合物和方法
优先权要求和相关申请
1.本技术要求2020年2月28日提交的美国临时申请(no.62/983,238)的优先权，并通过引用将其全部内容并入本技术中。
技术领域
2.本发明总体上涉及药物和治疗方法。具体地，本发明提供了一种半胱天冬酶抑制剂、凋亡诱导剂和/或pd-1途径抑制剂的新型药物组合物，以及用于治疗癌症和相关疾病和病症的方法。发明背景
3.癌症是一组关于异常细胞生长的疾病，有可能侵袭或扩散到身体的其他部位。癌症可以局部或全身治疗。局部治疗有时可诱导全身性疗效，如放射治疗中的远位效应。然而，远位效应极其罕见且难以实现(seiwert ty,j clin oncol.2020；jco2002046)。
4.细胞凋亡是多细胞生物正常发育、组织稳态和完整性的重要过程。在变形、胚胎形成、发病原和组织更新的过程中，需要除去受损的细胞(jan r.adv pharm bull.2019,9:205)。细胞凋亡与肿瘤的形成和繁殖有关(huang q,et al.nat med.2011；17:860-6)and immune escape(han c,et al.nat immunol.2020；21:546-54)。
5.半胱天冬酶被认为是细胞凋亡的“执行者”，通过降解正常细胞功能所需的细胞成分(如细胞骨架和核蛋白)进行。半胱天冬酶属于一类结构相关的半胱氨酸蛋白酶，包含植物元胱天蛋白酶、豆科哺乳动物和植物蛋白酶、真核生物蛋白酶分离酶和几种细菌蛋白酶。半胱天冬酶在p1处表现出极少的偏好性，主要识别天冬氨酸，但也在谷氨酸和磷酸丝氨酸残基后切割底物(kasperkiewicz p,et al.febs j.2017；284:1518-39)。响应于凋亡刺激，例如生长因子匮乏、细胞骨架破坏、氧化应激、dna损伤和未折叠蛋白质的积累，凋亡启动子半胱天冬酶(半胱天冬酶-2、-8、-9或-10)被激活以切割和激活“执行者”半胱天冬酶的酶原形式(例如半胱天冬酶-3或-7)，导致特定细胞底物的溶蛋白性裂解，从而细胞死亡(duckett cs.et al.mol cell biol.1998；18:608
–
15)。
6.虽然逃避凋亡信号被认为是癌症的标志(hanahan d,weinberg ra.cell2011；144:646-74)，半胱天冬酶突变在癌症中是罕见的，表明肿瘤内稳态的重要作用(boudreau mw,et al.acs chem biol.2019；14:2335-48)。活化的半胱天冬酶是凋亡形成必需的，但它们对于体内细胞死亡和细胞凋亡清除不是必要的。矛盾的是，细胞凋亡还能引起有害的影响，甚至可能通过细胞凋亡诱导的增殖促使癌症发展(ichim g，et al.nat rev cancer.2016；16:539)。半胱天冬酶可通过细胞周期的自主调节以及通过诱导分泌信号来促进增殖，这对邻近组织具有极大的影响(p
é
rez-garijo a,et al.seminars in cell&developmental biology2018；82:86-95.academic press)。肿瘤中半胱天冬酶的基因敲除降低了肿瘤适应性和肿瘤再增殖(zhao m,et al.aging2020；12:21758)。
7.人体内每天有数十亿个细胞发生凋亡，此过程中，dna被释放到胞质溶胶中。为了宿主的存活，保持免疫沉默是很重要的。凋亡细胞积极地与它们的环境交互，以抑制抗炎免
疫反应，并指示特定的吞噬细胞亚群清除死亡的细胞碎片(fogarty ce,et al.curr topics dev biol2015；114:241-265.academic press)。
8.半胱天冬酶在逃避凋亡细胞的免疫反应中起作用。应激细胞中基因组dna和mtdna(线粒体dna)的释放触发干扰素基因的环gmp-amp合成酶刺激因子(cgas-sting)信号传导、irf3激活和i型干扰素(ifn)产生。然而，细胞色素c的同时释放、凋亡体的形成、下游效应子半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7的激活减轻了这种免疫激活信号，导致沉默的凋亡细胞死亡(chen y,et al.front physiol.2018；18:1487).
9.然而，在没有半胱天冬酶激活的情况下，有观察到对dna和rna病毒感染的深度保护(rongvaux a,et al.cell2014；159:1563-77)。还发现了半胱天冬酶在卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒(kshv，艾滋病相关肿瘤卡波济氏肉瘤(ks)的病原体)的复制性感染过程中阻止抗病毒因子ifnβ的诱导和分泌。ifnβ产量的减少使高病毒基因表达和病毒复制成为可能(tabtieng t,et al.j virol.2018；92:e00078-18)。还发现了半胱天冬酶参与调节dna和rna病毒触发的宿主防御，通过切割关键sting通路成分如cgas、mavs和irf3来防止细胞因子过量产生。凋亡半胱天冬酶的缺乏与病毒感染期间ifn产生的增加有关。(ning x,et al.mole cell.mole cell.2019；74:19-31)。
10.虽然促进细胞凋亡的化学药物如维奈托克(venetoclax)已被fda批准作为一些血液癌症的癌症治疗药物，但细胞凋亡阻断剂可能通过各种非细胞凋亡机制(所谓的半胱天冬酶非依赖性细胞死亡，cicd)诱导肿瘤控制。瘤内给药显著增加了肿瘤药物暴露量，以实现化学消融并降低全身副作用。更重要的是，局部注射引发免疫反应的半胱天冬酶抑制剂可诱导远位效应并起到原位疫苗的作用。
11.免疫检查点抑制剂(icis)如pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)拮抗剂、pd-l1(程序性细胞死亡配体1)拮抗剂和ctla4拮抗剂在一些转移性癌症中产生了持久和深度的反应，且显著延长了患者的生存期。然而，这些疗法的总体缓解率较低。在乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌等几种主要癌症中，icis作为最后一线疗法的缓解率可以忽略不计(arnaud-coffin p.et al.intl.j.cancer2019；145:639-648)。局部免疫疗法结合全身ici可能可以改善癌症治疗。
12.目前可用于治疗癌症的疗法和手段还不够有效。人们仍然迫切地需要新型的、改进的疗法来有效地治疗癌症以及相关相关疾病。


技术实现要素：

13.本发明部分基于意外发现的一种半胱天冬酶抑制剂、凋亡诱导剂和/或pd-1途径抑制剂的新型药物组合物，以及用于治疗癌症和相关疾病和病症的方法。
14.在一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括同时或依次向有需要的受试者瘤内施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂和凋亡诱导剂。在一些实施例中，该方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的pd-1途径抑制剂。
15.在另一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的受试者瘤内施用治疗有效量的恩利卡生(emricasan)，或其药学上可接受的形式。
16.在又一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的受试者皮下施用治疗有效量的恩利卡生，或其药学上可接受的形式，以及向所述受试者静脉内施用
治疗有效量的多西他赛(docetaxel)，或其药学上可接受的形式。
17.在又一方面，本发明总体上涉及一种药物组合物，包括恩利卡生或其药学上可接受的形式，和多西他赛或其药学上可接受的形式，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
18.在又一方面，本发明总体上涉及一种单位剂型，包括本发明公开的药物组合物。
19.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式在制备用于治疗癌症或相关疾病或病症的药物中的应用。
20.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式，和多西他赛或其药学上可接受的形式在制备用于治疗癌症或相关疾病或病症的药物中的应用。
21.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式在用于治疗癌症或相关疾病或病症的应用。
22.在又一方面，本发明总体上涉及一种固体形式的恩利卡生ch3n(ch2ch2oh)2盐。
附图说明
23.图1示出了mc38细胞中恩利卡生阻断细胞凋亡的示例性数据。
24.图2示出了mc38细胞中辛伐他汀(simvastatin)诱导的恩利卡生阻断细胞凋亡的示例性数据。
25.图3示出了mc38细胞中维奈托克(venetoclax)诱导的恩利卡生阻断细胞凋亡的示例性数据。
26.图4示出了mc38细胞中阿霉素(doxorubicin)诱导的恩利卡生阻断细胞凋亡的示例性数据。
27.图5示出了mc38细胞中多西他赛(docetaxel)诱导的恩利卡生阻断细胞凋亡的示例性数据。
28.图6示出了恩利卡生略微提高了mc38细胞中ifnβ的产生的示例性数据。
29.图7示出了恩利卡生显著提高了辛伐他汀处理的mc38细胞中ifnβ的产生的示例性数据。
30.图8示出了恩利卡生显著提高了阿霉素处理的mc38细胞中ifnβ的产生的示例性数据。
31.图9示出了恩利卡生显著提高了多西他赛处理的mc38细胞中ifnβ的产生的示例性数据。
32.图10a(mc38)、10b(a549)、10c(miapaca-2)示出了多西他赛在约1μm和10μm的恩利卡生的条件下完全抑制肿瘤细胞中的半胱天冬酶活性，更有效地激活半胱天冬酶的示例性数据。
33.图11a(mc38)、11b(a549)、11c(miapaca-2)示出了多西他赛在约1μm和10μm的恩利卡生条件下更有效地杀死肿瘤细胞的示例性数据。
34.图12示出了mc38模型中瘤内持续4天施用10mpk(q.d)的恩利卡生胺盐，在治疗注射部位肿瘤的体内疗效的示例性数据。
35.图13示出了mc38模型中瘤内持续4天施用10mpk(q.d)的恩利卡生胺盐，在治疗远端肿瘤的体内疗效的示例性数据。
36.图14示出了在mc38模型中多西他赛(腹膜内，30mpk，单剂量)和恩利卡生(肿瘤内，在施用多西他赛后，10mpk，q.d，持续3天)的组合的体内疗效的示例性数据。
37.图15示出了在mc38模型中多西他赛(静脉内，30mpk，单剂量)和恩利卡生(肿瘤内，在施用多西他赛后，10mpk，q.d，持续4天)的组合的体内疗效的示例性数据。
38.图16示出了图15所示mc38模型中治愈小鼠中的再激发肿瘤的体内疗效的示例性数据(5只小鼠来自恩利卡生组，e1，e2，e3，e4，e5；1只小鼠来自组合组，c1)。
39.图17示出了mc38模型中多西他赛(1mpk,1d；5mpk,5d,q.d)和恩利卡生(10mpk,10e,q.d)的组合联合瘤内给药4天的体内疗效的示例性数据。
40.图18示出了在mc38模型中多西他赛(静脉内，50mpk，单剂量)和恩利卡生(腹膜内，在施用多西他赛后，20mpk，b.i.d，持续3天)的组合的体内疗效的示例性数据。
41.图19示出了在b16模型中以5mpk和10mpk(q.d),在瘤内施用恩利卡生胺盐4天的体内疗效的示例性数据。
42.图20示出了在ct26模型中以5mpk和10mpk(q.d),在瘤内施用恩利卡生胺盐4天的体内疗效的示例性数据。
43.图21示出了mc38细胞中多西他赛(1μm)及其与恩利卡生(10μm)的组合上调pd-l1表达的示例性数据。定义
44.本技术的技术和科学术语具体定义如下。除非另有定义，本技术所使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。关于有机化学的一般原理，以及特定的功能基元和反应，在《有机化学》托马斯
·
索雷尔，大学科学书籍，索萨利托:2006中有描述。在冲突的情况下，以本说明书为准，包括定义在内。
45.用于定义组合物和方法时，用语“包括”是指组合物和方法包括所述的要素，但不排除其它成分。定义组合物和方法时，用语“基本上由
……
组成”是指所述组合物和方法包括所列举要素，且排除对所述组合物和方法具有实质影响的其它要素。例如，“基本上由
……
组成”是指明确列举的药理学活性剂的施用，不包括未明确列举的药理学活性剂。用语“基本上由”不排除药理学上无活性或惰性的试剂，例如,药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。定义组合物和方法时，“由
……
组成”是指排除了其它微量的成分要素和实质方法步骤。由这些过渡语所定义的实施例均被包括在本发明的范围内。
46.除非上下文另有说明，本技术中的单数用语包括复数，反之亦然。
47.用语“例如”或“例子”之后的任何示例并不指全部列举或限制.
48.单数形式“一个”、“该”和“所述”包括复数引用，除非上下文另有明确说明.
49.除非特别说明或文中显而易见，本技术的用语“约”应理解为“在本领域中的正常公差范围内”，例如在平均值的2个标准偏差内。“约”可理解为在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％以内。除非文中另有说明，本技术中的所有数值均可用“约”描述。
50.如本文所用，用语“至少”一个特定值应理解为该值以及大于该值的所有值。用语“至少一个”要素或“一个或多个”要素各自包括从列表中选择的单个要素以及从列表中选择的两个或多个要素的混合物。
51.如本文所用，对本公开的化合物进行“施用”或“给药”是指采用本技术所述的任何
合适的制剂或施用途径，将本技术所述的化合物或其前药或其它药学上可接受的形式输送给受试者。本技术中与药物给药相关的用语“单独给药”是指在不同时间(通过相同或可替代的途径单独给药。本文中的与药物给药相关的用语“同时给药”是指使得单独给药的药物同时存在于一受试者体内。用语“全身给药”是指口服或肠胃外给药。
52.如本文所用，用语“半胱天冬酶抑制剂”指结合并抑制半胱天冬酶活性的任何化学化合物或生物分子.
53.如本文所用，用语“免疫应答”是指以下任何一种或多种:特异性免疫应答、非特异性免疫应答、特异性和非特异性应答、先天应答、初级免疫应答、适应性免疫、次级免疫应答、记忆免疫应答、免疫细胞活化、免疫细胞增殖、免疫细胞分化和细胞因子表达。
54.如本文所用，用语“组合”是指使用一种以上的疗法(例如，半胱天冬酶抑制剂和其他药物)。用语“组合”的使用不限制对患有疾病的受试者进行治疗(例如，半胱天冬酶抑制剂和其他药物)的顺序。首次治疗的进行(例如，引发细胞凋亡的药物和其它药物)可以在(如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)，同时或对患有疾病的受试者施用其它疗法(例如，半胱天冬酶抑制剂和其它药剂)之后(如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)。
55.如本文所用，用语“瘤内给药”是指将溶液或悬浮液直接注射(如，通过针)到肿瘤病变或肿瘤块中。
56.如本文所用，用语“pd-1拮抗剂”或“pd-1途径拮抗剂”指阻断癌细胞上表达的pd-11与免疫细胞(如t细胞、b细胞或nk细胞)上表达的pd-1结合的任何化合物或生物分子.
57.本文所用的公开化合物的“药学上可接受的形式”包括但不限于公开化合物的药学上可接受的盐、水合物、酯、溶剂化物、异构体、前药和同位素标记的衍生物。在一个实施例中，“药学上可接受的形式”包括但不限于所公开化合物的药学上可接受的盐、酯、前药和同位素标记的衍生物。在某些实施例中，“药学上可接受的形式”包括但不限于所公开化合物的药学上可接受的盐、酯、立体异构体、前药和同位素标记的衍生物。
58.在某些实施例中，药学上可接受的形式是药学上可接受的盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适合与受试者的组织接触而没有产生过度毒性、刺激、过敏反应等的盐，与合理的效益/风险比相称。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，berge等人，在《药物科学》(1977)66:1-19中详细描述了药学上可接受的盐。本文提供的化合物的药学上可接受的盐包括那些衍生自适当的无机和有机酸和碱的盐。医药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为，由无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸或有机酸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的氨基盐，或通过使用本领域的其它方法，如离子交换形成的氨基盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐，油酸盐，草酸盐，棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸
盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸酯、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。在一些实施例中，可衍生出盐的有机酸包括，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、丙二酸、丁二酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
59.盐可以在分离和纯化所公开的化合物的过程中原位制备，或者单独制备，例如通过母体化合物的游离碱或游离酸分别与合适的碱或酸反应。衍生自适当碱的药学上可接受的盐包括碱金属、碱土金属、铵和n

(c
1-4
alkyl)4盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等。其它药学上可接受的盐包括，无毒铵、季铵和伯胺阳离子，其由抗衡离子如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐形成。可衍生出盐的有机碱包括，例如伯胺、仲胺和叔胺，取代胺，包括天然存在的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施例中，药学上可接受的碱加成盐可以选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
60.在某些实施例中，药学上可接受的形式为药学上可接受的酯。如本文所用，术语“药学上可接受的酯”是指在体内水解的酯，包括那些在人体内容易分解而留下母体化合物或其盐的酯。这种酯可以作为本技术定义的前药。药学上可接受的酯包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基和环烷基酯等酸性基团，包括但不限于羧酸、磷酸、次膦酸、亚磺酸、磺酸和硼酸。酯的例子包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。这些酯可以由母体化合物的羟基或羧酸基团形成。
61.在某些实施例中，药学上可接受的形式是“溶剂化物”(例如水合物)。如本文所用，术语“溶剂化物”是指进一步包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的溶剂的化合物。溶剂化物可以是公开的化合物或其药学上可接受的盐。当溶剂是水时，溶剂化物是“水合物”。药学上可接受的溶剂化物和水合物是复合物，其可包括，例如约1至100、1至10、1至2、3或4的溶剂或水分子。应当理解，本文使用的术语“化合物”包括化合物和化合物的溶剂化物，以及它们的混合物。
62.在某些实施例中，药学上可接受的形式是前药。如本文所用，术语“前药”(或“前体药物”)是指在体内转化产生本文公开的化合物或该化合物的药学上可接受的形式的化合物。前药在施用给受试者时是无活性的，但可在体内通过水解(例如血液中的水解)转化为活性化合物。在某些情况下，前药比母体化合物具有更好的物理和/或输送性能。给药于受试者时，前药可增加所述化合物的生物药效率(例如，通过口服给药增强血液的吸收)，相对于母体化合物，其提高了到目的生物间室(例如脑或淋巴系统)的输送效率。相对于母体化合物，示例性前药包括具有较强水溶性或跨肠膜主动转运的所公开化合物的衍生物。
63.前药化合物在哺乳动物有机体中通常具有溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见，bundgard,h,《前药设计》(1985年)，第7-9、21-24页(埃尔塞维尔，阿姆斯特丹)。关于前药，higuchi，t等人《前药
‑‑
新型给药系统》，a.c.s.symposiumseries,vol.14，和药物设计中的生物可逆转载体，edward b.roche，美国医药协会和培格曼出版社，1987年，均提供了讨论，两者均被充分引用并入本文。前体药物的示例性优点，包括但不限于其物理性质，例如与母体化合物相比，其在生理ph下肠胃外给药的水溶性增强，或其可以增强消化道的吸收，或其可以增强药物长期储存的稳定性。
64.如本文所用，术语“药学上可接受的”赋形剂、载体或稀释剂是指药学上可接受的材料、组合物或运载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料，参与将所述受试药物从身体的一个器官或部分运送或转运到身体的另一个器官或部分。每种载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容，并且对患者无害。载体可以是抗粘剂、粘合剂、包衣、分解剂、填充剂或稀释剂、防腐剂(如抗氧化剂、抗菌剂或抗真菌剂)、甜味剂、吸收延迟剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。合适的药学上可接受的载体包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、葡萄糖、植物油(如橄榄油)、盐水、缓冲液、缓冲盐水和等渗剂，例如糖、多元醇、山梨醇和氯化钠。
65.如本文所用，用语“放射疗法”，也称为放射肿瘤学、放射治疗或治疗放射学，指使用电离辐射破坏癌细胞。
66.如本文所用，用语“受试者”(或者“患者”)是指作为治疗、观察或实验对象的哺乳动物。哺乳动物可以是雄性或雌性。该哺乳动物可选自人类、非人类灵长类动物、牛(如奶牛)、猪属(如猪)、绵羊属(如绵羊)、山羊属(如山羊)、马属(如马)、犬科动物(如家狗)、猫科动物(如家猫)、兔形目动物(如兔子)、啮齿类动物(如大鼠或小鼠)、浣熊属(如浣熊)的一种或多种。在特定的实施例中，所述受试者为人类。
67.如本文所用，用语“治疗有效量”是指足以达到预期治疗效果且副作用最小或没有副作用的一种或多种治疗剂的剂量。所述治疗有效量可以由该领域的医师确定，例如，先施用低剂量，然后逐渐增加剂量，直到达到期望的治疗效果，且副作用最小或无副作用。
68.如本文所用，某种疾病或障碍的“疗法”或“治疗”是指在疾病或障碍发生之前或之后减轻、延缓或改善该病症的方法。治疗可以是针对疾病和/或潜在病变的一种或多种效果或症状。治疗旨在获得有益的或期望的结果，包括但不限于治疗效果和/或预防效果。治疗效果是指被治疗的潜在疾病的根除或改善。此外，通过根除或改善一种或多种与潜在疾病相关的生理症状来实现治疗效果，进而在患者中观察到改善，尽管患者仍可能患有该潜在疾病。至于预防效果，可将药物化合物和/或组合物施用于有发展成某种特定疾病风险的病人，或者施用于告知有一种或多种疾病生理症状的患者，即使可能尚未做出该疾病的诊断。治疗可以是针对疾病和/或潜在病变的一种或多种效果或症状。治疗可以是减轻，且可以是，但不限于，疾病或疾病症状的完全消退。与同等的未经处理的对照组相比，不管通过何种标准技术测量，这种减轻或预防的程度至少为5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％或100％。
69.特别地，癌症的“疗法”或“治疗”是指达到至少一种积极的治疗效果，例如减少癌细胞的数量、减小肿瘤的大小、降低癌细胞渗入外周器官的速率、或降低肿瘤转移或肿瘤生长的速率。这种“治疗”可以减缓、中断、阻止、控制或停止本文所述的细胞增殖症状的发展，但不一定表示细胞增殖障碍或细胞增殖症状的根除。达到的积极治疗效果可以是pr(部分反应)、cr(完全反应)、or(总体反应)、pfs(无进展生存期)、dfs(无病生存期)和os(总体生存期)中的任何一种。pfs，也称为“肿瘤进展时间”，指治疗期间和治疗后癌症不生长的时期，包括患者经历cr或pr的时间，以及患者经历sd的时间。dfs是指治疗期间和治疗后患者保持无疾病状态的时期。os是指与未治疗的个体或患者相比，平均寿命的延长。
70.如本文所用，当用语“肿瘤”应用于被诊断患有或怀疑患有癌症的受试者时，指的是任何大小的恶性或潜在恶性肿瘤或组织块，包括原发性肿瘤和继发性肿瘤。实体肿瘤是
一种异常生长或组织块，通常不包括囊肿或液体区域。不同类型的实体肿瘤以形成它们的细胞类型来命名。实体肿瘤的例子有肉瘤、癌和淋巴瘤。白血病(血液癌症)一般不会形成实体肿瘤。
具体实施方式
71.本发明提供了一种半胱天冬酶抑制剂、凋亡诱导剂和/或pd-1途径抑制剂的新型药物组合物，以及用于治疗癌症和相关疾病和病症的方法。具体地，本发明提供了一种新型的癌症治疗方法，该方法基于这样的发现，即活化的半胱天冬酶在诱导的和自发的细胞凋亡过程中，在刺激肿瘤生长和逃避局部和全身性免疫监视中起着关键作用。
72.半胱天冬酶属于一类结构相关的半胱氨酸蛋白酶，其在凋亡过程中降解正常细胞功能所需的细胞成分，如细胞骨架和核蛋白。半胱天冬酶的活性可被在正性结合位点或变构位点与蛋白质结合的化合物抑制。该抑制剂可以是可逆的，也可以是不可逆的。不可逆抑制剂与半胱天冬酶蛋白结合，与半胱氨酸残基形成共价键，并阻断内源性底物的结合及其降解。
73.半胱天冬酶激活是细胞凋亡和其他基本过程中不可或缺的步骤。低水平的半胱天冬酶活性促使肿瘤形成、肿瘤再生和免疫逃逸，而高水平的半胱天冬酶活性导致细胞凋亡。凋亡引发剂自发或诱导细胞凋亡后，半胱天冬酶的抑制可通过阻断肿瘤再增殖和经由i型干扰素产生和其它炎症效应如nf-kb活化增强先天免疫来控制肿瘤。瘤内施用半胱天冬酶抑制剂可显著增加肿瘤药物浓度并减少全身性副作用。pd-1途径拮抗剂的添加进一步增强了对肿瘤生长的局部和全身性控制。本发明提供了一种使用半胱天冬酶抑制剂及其与凋亡引发剂和pd-1途径拮抗剂的组合来治疗癌症的方法。
74.在一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括同时或依次向有需要的受试者瘤内施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂和凋亡诱导剂。
75.在一些实施例中，该方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的pd-1途径抑制剂。
76.在一些实施例中，半胱天冬酶抑制剂抑制至少一种以下半胱天冬酶的活性，选自半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-6、半胱天冬酶-7、半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-9和半胱天冬酶-10。
77.示例性的半胱天冬酶抑制剂包括cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(pralnacasan,vx-740)、贝尔纳卡桑(belnacasan,vx-765)、vx-043198、恩利卡生(emricasan,idn-6556)、尼沃卡桑(nivocasan,gs-9450)和ncx-1000。
78.在一些实施例中，该半胱天冬酶抑制剂为恩利卡生(emricasan,idn-6556)，(s)-3-((s)-2-(2-((2-(叔丁基)苯基)氨基)-2-氧代乙酰胺基)丙酰胺基)-4-氧代-5-(2，3，5，6-四氟苯氧基)戊酸)，由下面的式i表示，或其药学上可接受的形式。
79.在一些实施例中，恩利卡生为碱加成盐的形式。在一些实施例中，该碱加成盐由恩利卡生和ch3n(ch2ch2oh)2(n-甲基二乙醇胺)形成。
80.此外，通过接头将半胱天冬酶抑制剂与e3连接酶连接形成蛋白水解靶向嵌合体(protac),可以抑制半胱天冬酶的活性。在一些实施例中，半胱天冬酶抑制剂选自由e3连接酶、化学接头和选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000的分子制成的蛋白水解靶向嵌合体，及其药学上可接受的形式。
81.细胞凋亡可由不同类型的细胞应激引发，包括但不限于氧化应激、辐射、物理创伤、化疗药物、以及包括病毒和细菌毒素在内的感染因子、基因组dna和mtdna。
82.在一些实施例中，细胞凋亡由微管稳定剂引发。在一些实施例中，细胞凋亡是由紫杉烷类化疗药物引发的。紫杉烷稳定微管蛋白聚合，导致细胞周期的g2/m期停滞和凋亡细胞死亡。在另一实施例中，细胞凋亡由选自紫杉醇、多西他赛(多西紫杉醇)、卡巴他赛或蛋白结合型紫杉醇的紫杉烷引发。在另一实施例中，细胞凋亡是由多西他赛引发的。
83.在一些实施例中，该细胞凋亡诱导剂为多西他赛，或其药学上可接受的形式。
84.在一些实施例中，细胞凋亡是由放射治疗引发的。放射治疗会损伤dna并使线粒体通透化，导致dna释放到胞质溶胶中并引发细胞凋亡。在一实施例中，放射疗法采用由x射线或伽马射线产生的电离辐射。在另一实施例中，放射疗法采用由电子、质子、中子、碳离子、α粒子和β粒子产生的电离辐射。
85.在一些实施例中，细胞凋亡由3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂(他汀类)及其药学上可接受的形式引发。他汀类药物通过降低线粒体跨膜电位，增强半胱天冬酶-9和半胱天冬酶的活化，增强bim表达，以及通过抑制ras/细胞外信号调节激酶和雷帕霉素途径的ras/哺乳动物靶标在g1期诱导细胞周期停滞来诱发细胞凋亡。
86.示例性的hmgcoa还原酶抑制剂包括阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀，及其药学上可接受的形式。在另一实施例中，hmgcoa还原酶抑制剂为辛伐他汀及其药学上可接受的形式。
87.在某些实施例中，细胞凋亡由bcl抑制剂引发。bcl蛋白家族是已知的抗凋亡蛋白，且它们的抑制剂会引发细胞凋亡过程。示例性的bcl抑制剂包括apg-2575、那维克拉(navitoclax，abt-263)、abt-737、维奈托克，及其药学上可接受的形式。在某些实施例中，该bcl抑制剂为维奈托克。其他直接和间接的bcl抑制剂包括棉酚、表没食子儿茶素没食子酸酯、甘草查尔酮a、ha14-1、tw-37、em20-25。
88.在某些实施例中，细胞凋亡是由dna破坏剂引发的。在一实施例中，细胞凋亡是由蒽环类化疗药物家族引发的。蒽环类药物通过嵌入dna引发细胞凋亡并激活半胱天冬酶。在另一实施例中，细胞凋亡由选自阿霉素、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌、柔比星，
及其药学上可接受的形式的蒽环类抗生素引发。在另一实施例中，细胞凋亡由阿霉素及其药学上可接受的形式引发。
89.其他几种化疗剂，包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性剂、烷化剂、血管生成抑制剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、生长因子受体拮抗剂、活性氧发生剂，这些也能引发凋亡。在另一方面，细胞凋亡是由选自aee788和奥曲肽、amg510、amg706、氨基蝶呤、蒽二酮、arq197、奈拉滨、天冬酰胺酶、阿西替尼、阿扎胞苷、azd0530、azd2171、azd6244、贝洛替康、苯达莫司汀、β-拉帕酮、贝伐单抗、bi2536、bibf1120、博莱霉素、bms-275183、硼替佐米、博舒替尼、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡波醌、卡莫司汀、cep701、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、氯甲亚胺、ci-1033、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达卡那霉素、达沙替尼、多西他赛、ekb-569、emd-72000、依诺西他滨、恩扎他林、表柔比星、埃罗替尼、et-743、依托泊苷、依维莫司、exel0999、exel7647、氟尿苷、磷酸氟达拉滨、福莫司汀、吉非替尼、吉西他滨、gx15-070、hki-272、羟基脲、icr-62、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、伊立替康、伊斯平斯、伊沙匹隆、拉帕替尼、拉罗他赛、醛氢叶酸、洛莫司汀、洛伐他汀、甘露聚糖、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素c、米托蒽醌、mln-518、ms-275、纳帕布卡辛、奈达铂、尼罗替尼、尼莫司汀、奥他赛、奥西替尼、奥沙利铂、紫杉醇、帕尼单抗、帕唑帕尼、pd0325901、培美曲塞、喷司他丁、pkc-412、普卡霉素、泼尼莫司汀、甲基苄肼、ptk787、雷替曲塞、雷诺氮芥、鲁比替康、沙帕他滨、赛特铂、塞利克里布、司莫司汀、索拉非尼、链脲佐菌素、舒尼替尼、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、泰素、硫鸟嘌呤、硫替派、拓扑替康、曲奥舒凡、三亚胺醌、三亚乙基乙醇胺、四硝酸三铂、曲洛磷胺、乌拉莫司汀、尿喃唳氮芥、凡德他尼、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、长春利定、xl119、xl880、zd6474。
90.pd-1途径是一种主要的免疫抑制途径，pd-1拮抗剂可促进免疫反应，在医疗实践中用于治疗癌症。“pd-1拮抗剂”或“pd-1途径拮抗剂”是指阻断在癌症或免疫细胞上表达的pd-1与在免疫细胞(t细胞、b细胞或nk细胞)上表达的pd-1的结合的任何化合物或生物分子。pd-1及其配体的替代名称或同义词包括:pd-1：pdcd1、pd1、cd279、sleb2-ll；pd-ll：pdcd1l1、pdl1、b7h1、b7-4、cd274、b7-h。在所公开的用于治疗人类个体的任何治疗方法、药物和应用中，pd-1拮抗剂阻断人pd-ll与人pd-1的结合，优选地，阻断人pd-ll、pd-l2与人pd-1的结合。
91.示例性的pd-1途径拮抗剂包括派姆单抗(pembrolizumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、西米普利单抗(cemiplimab)，及其药学上可接受的形式。其他pd-1途径拮抗剂包括但不限于斯巴达珠单抗(spartalizumab,pdr001)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab,shr1210)、信迪利单抗(sintilimab,ibi308)、替雷利珠单抗(tislelizumab,bgb-a317)、特瑞普利单抗(toripalimab,js 001)、多塔利单抗(dostarlimab)、incmga00012、amp-224、amp-514、kn035、ck-301、aunp12、ca-170、bms-986189。
92.本发明提供的方法所治疗的癌症可以是局部的或转移性的。在某些实施例中，所述癌症是局部的。在某些实施例中，所述癌症是转移性的。
93.在某些实施例中，所述癌症选自乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、胰腺导管癌、头颈部鳞状细胞癌、唇鳞状细胞癌、颊粘膜鳞状
细胞癌、口腔舌鳞状细胞癌、口腔鳞状细胞癌、唾液粘液表皮样癌和子宫内膜癌。
94.在某些实施例中，所述癌症选自乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、头颈鳞状细胞癌、肾细胞癌、肝细胞癌和黑色素瘤。
95.在另一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的受试者瘤内施用治疗有效量的恩利卡生(emricasan)，或其药学上可接受的形式。
96.在某些实施例中，该方法还包括向所述受试者瘤内施用治疗有效量的多西他赛，或其药学上可接受的形式。
97.在某些实施例中，所述治疗有效量的恩利卡生和所述治疗有效量的多西他赛作为一种瘤内给药被协同施用。
98.在某些实施例中，所述治疗有效量的恩利卡生和所述治疗有效量的多西他赛作为分开的瘤内给药被协同施用。
99.在某些实施例中，多西他赛和恩利卡生的重量比在约1∶20至约1∶2的范围内(例如，约1:20-1:5、约1:20-1:7、约1:20-1:10、约1:15-1:2、约1:10-1:2、约1:7-1:2)。
100.在一些实施例中，该方法还包括向受试者局部进行治疗有效量的放射疗法。
101.在某些实施例中，远离所述瘤内给药的位点处的癌症生长受到抑制。
102.在某些实施例中，所述瘤内给药带来癌症生长的全身性抑制。
103.在某些实施例中，该方法还包括向受试者施用pd-1途径抑制剂。
104.在某些实施例中，所述癌症是局部的。在某些实施例中，所述癌症是转移性的。
105.在某些实施例中，所述癌症选自乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、鲍温病、胰腺导管癌、头颈部鳞状细胞癌、唇鳞状细胞癌、颊粘膜鳞状细胞癌、口腔舌鳞状细胞癌、口腔鳞状细胞癌、唾液粘液表皮样癌和子宫内膜癌。
106.在某些实施例中，所述癌症选自乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、头颈鳞状细胞癌、肾细胞癌、肝细胞癌和黑色素瘤。
107.在某些实施例中，以约0.5mg至100mg的日剂量施用恩利卡生(例如，约1mg-100mg、约5mg-100mg、约10mg-100mg、约25mg-100mg、约0.5mg-50mg、约0.5mg-25mg、约0.5mg-10mg、约0.5mg-2mg)，持续约1天至10天(例如，约1天-7天、约7天-10天)。
108.在某些实施例中，以约0.5mg至50mg的日剂量施用多西他赛(例如，约1mg-50mg、约5mg-50mg、约10mg-50mg、约25mg-50mg、约0.5mg-25mg、约0.5mg-10mg、约0.5mg-2mg)，持续约1天至10天(例如，约1天-7天、约7天-10天)。
109.在又一方面，本发明总体上涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的受试者皮下施用治疗有效量的恩利卡生，或其药学上可接受的形式，以及向所述受试者静脉内施用治疗有效量的多西他赛(docetaxel)，或其药学上可接受的形式。
110.在又一方面，本发明总体上涉及一种药物组合物，包括恩利卡生或其药学上可接受的形式，和多西他赛或其药学上可接受的形式，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
111.在某些实施例中，该药物组合物是水溶液。
112.在某些实施例中，该药物组合物包括tween80和peg300的混合物和/或tween80和乙醇的混合物，其可在注射前被稀释成水溶液。
113.在某些实施方案中，该药物组合物的特征在于恩利卡生的浓度在约1mg/ml至约40mg/ml的范围内(例如，约5mg/ml-40mg/ml、约10mg/ml-40mg/ml、约1mg/ml-25mg/ml、约1mg/ml-10mg/ml)，多西他赛的浓度在约1mg/ml至约20mg/ml的范围内(例如，约5mg/ml-20mg/ml、约10mg/ml-20mg/ml、约1mg/ml-10mg/ml、约1mg/ml-5mg/ml)且ph在约5.0至7.0的范围内(例如，约5.5-7.0、约5.0-6.5、约5.5-6.5)。
114.在某些实施例中，本发明的药物组合物在-20℃条件下稳定至少6个月。
115.在又一方面，本发明总体上涉及一种单位剂型，包括本发明公开的药物组合物。
116.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式在制备用于治疗癌症或相关疾病或病症的药物中的应用。
117.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式，和多西他赛或其药学上可接受的形式在制备用于治疗癌症或相关疾病或病症的药物中的应用。
118.在又一方面，本发明总体上涉及一种恩利卡生或其药学上可接受的形式在用于治疗癌症或相关疾病或病症的应用。
119.在某些实施例中，恩利卡生或其药学上可接受的形式与多西他赛或其药学上可接受的形式联合应用，用于治疗癌症或相关疾病或病症。在某些实施例中，这种应用进一步与pd-1途径抑制剂组合使用，用于治疗癌症或相关疾病或病症。
120.在又一方面，本发明总体上涉及一种固体形式的恩利卡生ch3n(ch2ch2oh)2盐。
121.在某些实施例中，该固体形式基本上是纯的。在某些实施例中，该固体形式基本上是结晶的。
122.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过增强有需要的受试者的先天免疫反应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、伊达比星、米托蒽醌、柔比星及其药物上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
123.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过增强有需要的受试者的先天免疫反应来实现，包括以下步骤:(1)给受试者施用治疗有效量的阿霉素及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普拉那卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
124.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过增强有需要的受试者的先天免疫反应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自紫杉醇、多西他赛(多烯紫杉醇)、卡巴他赛、蛋白结合型紫杉醇及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
125.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过增强有需要的受试者的先天免疫反应来实现，包括以下步骤:(1)给受试者施用治疗有效量的多西他赛及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑
制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普拉那卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
126.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过增强有需要的受试者的先天免疫反应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的多西他赛及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的恩利卡生及其药学上可接受的形式。
127.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂及其药物上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
128.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的辛伐他汀及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的恩利卡生及其药学上可接受的形式。
129.在一具体实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、伊达比星、米托蒽醌、柔比星及其药物上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
130.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)给受试者施用治疗有效量的阿霉素及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普拉那卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
131.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的阿霉素及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的恩利卡生及其药学上可接受的形式。
132.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自微管稳定剂及其药物上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
133.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的凋亡引发剂，所述凋亡引发剂选自紫杉醇、多西他赛(多烯紫杉醇)、卡巴他赛、蛋白结合型紫杉醇
及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普雷卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
134.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)给受试者施用治疗有效量的多西他赛及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的半胱天冬酶抑制剂，所述半胱天冬酶抑制剂选自cbz-vad-fmk(zvad)、ac-yvad-cho、普拉那卡桑(vx-740)、贝尔纳卡桑(vx-765)、vx-043198、恩利卡生、尼沃卡桑(gs-9450)、ncx-1000及其药学上可接受的形式。
135.在某些实施例中，本发明提供了一种治疗癌症的方法,其通过在有需要的受试者中促进癌细胞中的dna感应来实现，包括以下步骤:(1)向受试者施用治疗有效量的多西他赛及其药学上可接受的形式；(2)向受试者施用治疗有效量的恩利卡生及其药学上可接受的形式。
136.联合治疗还可以包括一种或多种额外治疗剂。放射治疗可通过使用辐射改性剂和防护剂来增强。在一实施例中，辐射改性剂选自烟酰胺和依他硝唑、米索硝唑、尼莫拉唑、丝裂霉素-c、替拉扎明、莫特沙芬钆、二氧化铪纳米颗粒(如pep503或nbtxr3)、局部麻醉剂(如普鲁卡因和利多卡因)、镇静剂(如氯丙嗪)、反式西红花酸钠、高压氧(如nvx-108)、卡波金(95％氧气和5％二氧化碳的混合物)、氨磷汀(wr-2721)、伊立替康、紫杉烷类、热疗、n-乙基马来酰亚胺、联氨、马来酸二乙酯、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、溴脱氧尿苷、碘脱氧尿苷、5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷。
137.额外治疗剂可以是，例如，化疗剂、生物治疗剂(包括但不限于vegf、vegfr、egfr、her2/neu、其他生长因子受体、cd20、cd40、cd-40l、ctla-4、ox-40、4-1bb、icos的抗体)、免疫原性剂(例如，减毒的癌细胞、肿瘤抗原、抗原呈递细胞如用肿瘤衍生的抗原或核酸脉冲的树突细胞、免疫刺激细胞因子(如，il-2、ifna2、gm-csf)，以及用编码免疫刺激细胞因子(如，但不限于gm-csf)的基因转染的细胞)。额外活性剂可以以单一剂型与一种或多种协同施用的药物一起施用，所述协同施用的药物选自细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂、pd-1拮抗剂；或所述额外的活性药物可以与单独的剂型分开施用，所述剂型含有细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂和/或pd-1拮抗剂。
138.本技术公开的治疗组合可与一种或多种其它活性剂联合使用，包括但不限于用于预防、治疗、控制、改善或降低特定疾病或病症(例如细胞增殖障碍)风险的其它抗癌剂。在一实施例中，本技术公开的化合物与一种或多种其它抗癌剂组合，用于预防、治疗、控制、改善或降低特定疾病或病症的风险，本技术公开的化合物对于该疾病或病症是有用的。这些其它活性剂可按常用的途径和用量与本发明的化合物同时或依次施用。
139.额外活性剂可选自以下一种或多种试剂：抗病毒化合物、抗原、佐剂、抗癌剂、sting(干扰素基因的刺激因子)激动剂、tlr(toll样受体)激动剂、ctla-4、lag-3和pd-1途径拮抗剂、脂质、脂质体、肽、细胞毒素剂、化疗剂、免疫调节细胞系、检查点抑制剂、血管内皮生长因子(vegf)受体抑制剂、拓扑异构酶ii抑制剂、平滑抑制剂、烷化剂、抗肿瘤抗生素、抗代谢物、类视黄醇类、以及免疫调节剂，包括但不限于抗癌疫苗。应当理解，上述额外活性剂的描述可能是重叠的。还应该理解的是，该治疗组合可进行优化，且需根据患者的个体需要来确定细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂、pd-1拮抗剂和一种或多种额外活性剂的最
佳使用组合。
140.本技术公开的治疗组合与一种或多种其它活性剂同时使用时，细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂、pd-1拮抗剂可以与一种或多种其它活性剂同时给药，或在一种或多种其它活性剂之前或之后给药。任何细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂、pd-1拮抗剂可以通过相同或不同的给药途径分别给药，或者与其它试剂相同的药物组合物一起给药。
141.任何细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂、pd-1拮抗剂的重量比可能不同，取决于每种试剂的治疗有效剂量。通常使用各种试剂的治疗有效剂量。包括至少一种细胞凋亡引发剂、至少一种半胱天冬酶抑制剂和/或至少一种pd-1拮抗剂，以及其它活性剂的组合通常包括各种活性剂的治疗有效剂量。这种组合中，细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂和/或本技术公开的pd-1拮抗剂以及其它活性剂可分别或联合给药。此外，一种成分的给药可在其它试剂之前、同时或之后进行。
142.在一实施例中，本发明提供了细胞凋亡引发剂、半胱天冬酶抑制剂和/或pd-1拮抗剂以及至少一种其它活性剂，作为在治疗中同时、分别或依次使用的联合制剂。在一实施例中，所述治疗指的是癌症治疗。
143.在一实施例中，本发明提供了一种包括两种或多种单独的药物组合物的试剂盒，其中一种药物组合物含有细胞凋亡引发剂，另一种药物组合物含有半胱天冬酶抑制剂，和/或另一种药物组合物含有pd-1拮抗剂。在一实施例中，所述试剂盒包括用于分开保存所述组合物的工具，例如容器、分开的瓶子或分开的箔包。本发明的试剂盒可用于不同剂型的给药，例如口服和胃肠外给药，或用于以不同剂量间隔分开施用单独的组合物，或用于各单独的组合物之间的滴定。本发明的试剂盒通常包括给药说明，有助于用药依从性。
144.本发明还提供了一种细胞凋亡引发剂和半胱天冬酶抑制剂的组合在治疗细胞增殖障碍中的应用，其中患者先前(如，在24小时内)已经用pd-1拮抗剂进行了治疗。本公开还提供了一种pd-1拮抗剂用于治疗细胞增殖障碍的应用，其中患者先前(如，在24小时内)已经用细胞凋亡引发剂和半胱天冬酶抑制剂的组合进行了治疗。
145.可与本技术公开的治疗组合联合使用的抗病毒化合物包括：乙型肝炎病毒(hbv)抑制剂、丙型肝炎病毒(hcv)蛋白酶抑制剂、hcv聚合酶抑制剂、hcv ns4a抑制剂、hcv ns5a抑制剂、hcv ns5b抑制剂、人类免疫缺陷病毒(hiv)抑制剂。
146.可与本技术公开的治疗组合联合使用的抗原和佐剂包括：b7协同刺激分子、白介素-2、干扰素-γ、gm-csf、ctla-4拮抗剂、ox-40/0x-40配体、cd40/cd40配体、沙格司亭、左旋咪唑、痘苗病毒、卡介苗(bcg)、脂质体、明矾、弗氏完全或不完全佐剂、脱毒内毒素、矿物油、表面活性物质如脂卵磷脂、复合多元醇、聚阴离子、肽、油、烃乳液。
147.可以加入佐剂，如氢氧化铝或磷酸铝，以提高疫苗触发、增强或延长免疫反应的能力。额外的材料，如细胞因子、趋化因子和细菌核酸序列，如cpg，toll样受体(tlr)激动剂，以及额外激动剂tlr-2、tlr-4、tlr-5、tlr-7、tlr-8、tlr-9、sting，包括脂蛋白、脂多糖(lps)、单磷酰脂a、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫德，以及额外的维甲酸诱导基因i(rig-i)激动剂，如poly i:c也是可以用的佐剂，单独或组合使用。
148.可与本技术公开的治疗组合联合使用的细胞毒性剂的示例包括但不限于三氧化二砷、天冬酰胺酶(也称为l-天冬酰胺酶和欧文氏菌l-天冬酰胺酶)。可与本文公开的治疗组合联合使用的化疗剂包括aee788和醋酸阿比特龙、奥曲肽、amg510、amg706、氨基蝶呤、脱
水长春碱、蒽二酮、arq197、奈拉滨、天冬酰胺酶、阿托伐他汀、澳瑞他汀、阿西替尼、阿扎胞苷、azd0530、azd2171、azd6244、贝洛替康、苯达莫司汀、β-拉帕酮、贝伐单抗、bi2536、bibf1120、博莱霉素、bms-275183、硼替佐米、博舒替尼、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡波醌、卡莫司汀、cep701、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、氯甲亚胺、ci-1033、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达卡那霉素、达沙替尼、多西他赛、ekb-569、emd-72000、依诺西他滨、恩扎他林、表柔比星、埃罗替尼、et-743、依托泊苷、依维莫司、exel0999、exel7647、氟尿苷、磷酸氟达拉滨、福莫司汀、吉非替尼、吉西他滨、gx15-070、hki-272、羟基脲、icr-62、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、伊立替康、伊斯平斯、伊沙匹隆、拉帕替尼、拉罗他赛、醛氢叶酸、洛莫司汀、洛伐他汀、甘露聚糖、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素c、米托蒽醌、mln-518、ms-275、纳帕布卡辛、奈达铂、尼罗替尼、尼莫司汀、奥他赛、奥西替尼、奥沙利铂、紫杉醇、帕尼单抗、帕唑帕尼、pd0325901、培美曲塞、喷司他丁、pkc-412、普卡霉素、泼尼莫司汀、甲基苄肼、ptk787、雷替曲塞、雷诺氮芥、鲁比替康、沙帕他滨、赛特铂、塞利克里布、司莫司汀、索拉非尼、链脲佐菌素、舒尼替尼、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、泰素、硫鸟嘌呤、硫替派、拓扑替康、曲奥舒凡、三亚胺醌、三亚乙基乙醇胺、四硝酸三铂、曲洛磷胺、乌拉莫司汀、尿喃唳氮芥、凡德他尼、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、长春利定、xl119、xl880、zd6474。
149.本公开提供的治疗剂和组合物可通过任何合适的肠内途径或肠胃外途径给药。用语“肠内途径”给药是指通过胃肠道的任何部分给药。肠内途径的例子包括口服、粘膜、口腔和直肠途径，或胃内途径。“肠胃外途径”给药是指除肠内给药途径以外的给药途径。肠胃外给药途径的例子包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、肿瘤内、膀胱内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、经气管、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内、皮下或局部给药。本公开的治疗剂和组合物可以使用任何合适的方法给药，例如通过口服、鼻胃管、胃造口管、注射、输注、可植入输注泵和渗透泵。合适的给药途径和方法可以根据多种因素而变化，例如所用的特定抗体、所需的吸收速率、所用的特定制剂或剂型、所治疗疾病的类型或严重程度、作用的特定部位和患者的状况，且对本领域普通技术人员来说容易选择。
150.在一实施例中，半胱天冬酶抑制剂(如恩利卡生)以约0.5mg、约1mg、约5mg、约10mg、约20mg、约40mg、约80mg、约150mg、约200mg、约250mg的剂量给药。这种剂量可通过如肿瘤内、静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌肉内、脑内、脊柱内或吸入来提供。这种剂量可以是每天给药一次、每天给药两次、或每两天给药一次。
151.在另一实施例中，半胱天冬酶抑制剂(如恩利卡生)以约0.5mg-250mg、约1mg-100mg、约5mg-50mg、约0.5mg、约5mg、约25mg的剂量给药。这种剂量可通过如肿瘤内、静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌肉内、脑内、脊柱内或吸入来提供。这种剂量可以是每天给药一次、每天给药两次、或每两天给药一次。
152.在另一实施例中，半胱天冬酶抑制剂(如恩利卡生)以约0.5mg的剂量瘤内递送、约5mg的剂量瘤内递送、约10mg的剂量瘤内递送、约20mg的剂量瘤内递送、约40mg的剂量瘤内递送、约80mg的剂量瘤内递送、约150mg的剂量瘤内递送、约200mg的剂量瘤内递送、约250mg的剂量瘤内递送，例如约250mg/天的剂量递送给药。这种剂量可特别适用于体重在50-120公斤之间的患者，例如70-100公斤。
153.在一些实施例中，半胱天冬酶抑制剂(如恩利卡生)以约0.5mg/天、约1mg/天、约
5mg/天、约10mg/天、约15mg/天、约20mg/天、约25mg/天、约30mg/天、约40mg/天、约50mg/天、约75mg/天、约100mg/天的剂量进行瘤内递送。这种剂量也可通过如肿瘤内、静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌肉内、脑内、脊柱内或吸入来提供。这种给药方案可特别适用于体重在50-120公斤之间的患者，例如70-100公斤。
154.本发明的一些实施例中，半胱天冬酶抑制剂(如恩利卡生)以约0.5mg每日两次、约5mg每日两次、约10mg每日两次、约25mg每日两次、约50mg每日两次、约75mg每日两次、约100mg每日两次的剂量进行瘤内给药。这种剂量也可通过如肿瘤内、静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌肉内、脑内、脊柱内或吸入来提供。
155.在一实施例中，所述药物组合，如固定或自由组合，包括(1)约0.1mg-50mg多西他赛；和(2)约0.5mg-50mg恩利卡生。例如，该药物组合，如固定或自由组合，包括(1)约0.1mg、约5mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约100mg多西他赛，其为游离形式或其药学上可接受的盐；和(2)约0.5mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、250mg恩利卡生，其为游离形式或其药学上可接受的盐。这种组合可以在肿瘤内递送。
156.pd-1拮抗剂可通过连续输注或通过剂量给药来提供，例如每天、每周1-7次、每周、每两周、每月、每两个月、每季度、每半年、每年等。剂量可通过如静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌内、颅内、脊柱内或吸入来提供。治疗间隔的总剂量通常为至少0.05μg/kg(按体重)，更通常为0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg或更多。剂量的提供还可使受试者血清中的pd-1拮抗剂达到预定目标浓度，例如0.1、0.3、1、3、10、30、100、300μg/ml或更高。在一实施例中，该pd-1拮抗剂以200mg的剂量每21天给药一次。在其它实施例中，该pd-1拮抗剂以10、20、50、80、100、200、500、1000或2500mg/受试者每周、每两周、每4周、每月、每两个月或每季度通过皮下或静脉内给药。
157.在一实施例中，对有需要的受试者施用生物等效剂量(bed)的放射疗法。在另一实施例中，对有需要的受试者施用时间调节bed。在另一实施例中，对有需要的受试者进行超分割(减少的分割，每天两次或更多次)剂量的放射治疗。在另一实施例中，对有需要的受试者进行低分割(分割次数较少、单次剂量较大)剂量的放射治疗。
158.在一实施例中，所述放射治疗以约10gy-200 gy的总剂量进行。在另一实施例中，所述放射治疗以约10gy、约20gy、约30gy、约40gy、约50gy、约60gy、约70gy、约80gy、约90gy、约100gy、约110gy、约120gy、约130gy、约140gy、约150gy、约160gy、约170gy、约180gy、约190gy、约200gy的总剂量进行。这种剂量可以每天给药三次、每天给药两次、每天给药一次、每周给药1-7次、每周、每两周、每月、每两个月给药。
159.在一实施例中，该药物组合，例如固定或自由组合，包括(1)约10gy-200 gy的放射治疗总剂量；(2)约0.5mg-250mg恩利卡生；和(3)约0.05μg/kg-50mg/kg(按体重)的pd-1途径拮抗剂。例如，该药物组合，例如固定或自由组合，包括(1)约10gy、约20gy、约30gy、约40gy、约50gy、约60gy、约70gy、约80gy、约90gy、约100gy、约110gy、约120gy、约130gy、约140gy、约150gy、约160gy、约170gy、约180gy、约190gy、约200gy的放射治疗总剂量；(2)约0.5mg、5mg、10mg、20mg、50mg或100mg恩利卡生，其为游离形式或药学上可接受的盐；和(3)约0.05μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg(按体重)的pd-1途径拮抗剂，其为游离形
式或药学上可接受的盐。
160.在一实施例中，该药物组合，例如固定或自由组合，包括(1)0.1mg-100mg多西他赛；(2)约0.5mg-100mg恩利卡生；和(3)约0.05μg/kg-50mg/kg(按体重)的pd-1途径拮抗剂。例如，该药物组合，例如固定或自由组合，包括(1)约0.1mg、约5mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约100mg多西他赛，其为游离形式或药学上可接受的盐；(2)约0.5mg、5mg、10mg、25mg、50mg或100mg恩利卡生，其为游离形式或药学上可接受的盐；和(3)约0.05μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg(按体重)的pd-1途径拮抗剂，其为游离形式或药学上可接受的盐。
161.可以用本技术公开的组合物和方法治疗各种类型的癌症。本技术中的用语“癌症”、“癌性的”或“恶性的”是指或描述哺乳动物的生理状况，其典型特征是细胞生长不受调节。
162.在某些实施例中，可用本技术公开的组合物和方法治疗的癌症选自：肺癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、宫颈癌、食道癌、胃食管结合部癌、胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、脑癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、斑纳扬-佐纳纳综合征、考登病、小脑发育不良性神经节细胞瘤、炎性乳腺癌、威尔姆氏瘤、欧文氏肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、乳腺癌、子宫癌、肾癌、膀胱癌、肝癌、外阴癌、腹膜癌、甲状腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌、黑色素瘤、唾液腺癌、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、gist(胃肠间质)、睾丸癌和原发灶不明的癌症(即，发现转移癌但不知道原发癌部位的癌)。在特定的实施例中，癌症存在于成年患者中；在另外的实施例中，癌症存在于儿科患者中。在特定的实施例中，癌症是艾滋病相关的。
163.在某些实施例中，癌症选自脑癌和脊椎癌。在特定的实施例中，脑和脊髓癌选自间变型星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、星型细胞瘤和嗅神经母细胞瘤(也称为嗅觉母细胞瘤)。在特定实施例中，脑癌选自星型细胞瘤(例如，毛细胞星型细胞瘤、室管膜下巨细胞星型细胞瘤、弥漫性星型细胞瘤、多形性黄色星型细胞瘤、间变性星型细胞瘤、星型细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、继发性胶质母细胞瘤、原发性成人胶质母细胞瘤和原发性儿童胶质母细胞瘤)、少突胶质细胞瘤(例如，少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤)、少突星型细胞瘤(例如，少突星型细胞瘤和间变性少突星型细胞瘤)、室管膜瘤(例如，粘液乳头状室管膜瘤和间变性室管膜瘤)；髓母细胞瘤、原始神经外胚层肿瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、非典型脑膜瘤、间变性脑膜瘤、垂体腺瘤、脑干胶质瘤、小脑星型细胞瘤、脑星型细胞瘤/恶性胶质瘤、视觉途径和下丘脑神经胶质瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤。在这些实施例的具体例子中，所述脑癌选自神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、副神经节瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤(spet)。
164.在某些实施例中，所述癌症选自头颈癌，包括复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc)、鼻咽癌、鼻腔和鼻旁窦癌、下咽癌、口腔癌(例如鳞状细胞癌、淋巴瘤和肉瘤)、唇癌、口咽癌、唾液腺肿瘤、喉癌(例如喉鳞状细胞癌、横纹肌肉瘤)和眼癌或眼部癌症。在特定的实施例中，所述眼部癌症选自眼内黑色素瘤和成视网膜细胞瘤。
165.在某些实施例中，所述癌症选自白血病和血液癌症。在特定的实施例中，所述癌症选自骨髓增生性肿瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、急性髓性白
血病(aml)、骨髓增生异常综合征(mds)、慢性髓性白血病(cml)、骨髓增生性肿瘤(mpn)、post-mpn aml、post-mds aml、mpn后aml、mds后aml、del(5q)相关的高危mds或aml、急变期慢性粒细胞白血病、血管免疫母细胞性淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、毛细胞白血病和浆细胞肿瘤，包括浆细胞瘤和多发性骨髓瘤。这里提到的白血病可以是急性的或慢性的。
166.在某些实施例中，癌症选自皮肤癌。在特定的实施例中，该皮肤癌选自黑色素瘤、鳞状细胞癌和基底细胞癌。在具体实施例中，该皮肤癌是不可切除的或转移性黑色素瘤。
167.在某些实施例中，癌症选自生殖系统癌症。在特定的实施例中，癌症选自乳腺癌、宫颈癌、阴道癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、阴茎癌和睾丸癌。这些实施例的具体例子中，所述癌症为选自导管癌和叶状肿瘤的乳腺癌。这些实施例的具体例子中，所述乳腺癌可以是男性乳腺癌或女性乳腺癌。这些实施例的更具体例子中，所述乳腺癌是三阴性乳腺癌。这些实施例的更具体例子中，所述癌症为选自鳞状细胞癌和腺癌的宫颈癌。这些实施例的更具体例子中，所述癌症为选自上皮癌的卵巢癌。
168.在某些实施例中，癌症选自胃肠系统癌。在特定的实施例中，癌症选自食道癌、胃部癌症(也称为胃癌)、胃肠道类癌瘤、胰腺癌、胆囊癌、结肠直肠癌和肛门癌。这些实施例的例子中，所述癌症选自食管鳞状细胞癌、食管腺癌、胃腺癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、胃淋巴瘤、胃肠道淋巴瘤、胰腺实性假乳头状瘤、胰腺母细胞瘤、胰岛细胞瘤、包括腺泡细胞癌和导管腺癌在内的胰腺癌、胆囊腺癌、结肠直肠腺癌和肛门鳞状细胞癌。
169.在某些实施例中，癌症选自肝癌和胆管癌。在特定的实施例中，癌症为肝癌(也称为肝细胞癌)。在特定的实施例中，癌症是胆管癌(也称为胆道癌)；在这些实施例的例子中，该胆管癌选自肝内胆管癌和肝外胆管癌。
170.在某些实施例中，癌症选自肾癌和膀胱癌。在特定的实施例中，癌症为选自肾细胞癌、肾母细胞瘤和移行细胞癌肾癌。在特定的实施例中，癌症为选自尿路上皮癌(移行细胞癌)、鳞状细胞癌和腺癌的膀胱癌。
171.在某些实施例中，癌症选自骨癌。在特定的实施例中，骨癌选自骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、尤因肉瘤、脊索瘤(沿脊柱的骨癌)。
172.在某些实施例中，癌症选自肺癌。在特定的实施例中，肺癌选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、支气管肿瘤和胸膜肺母细胞瘤。
173.在某些实施例中，癌症选自恶性间皮瘤。在特定实施例中，癌症选自上皮间皮瘤和肉瘤样癌。在具体实施例中，癌症选自肉瘤。在特定的实施例中，肉瘤选自中心性软骨肉瘤、中心性和骨膜软骨瘤、纤维肉瘤、腱鞘透明细胞肉瘤和卡波西肉瘤。
174.在某些实施例中，癌症选自淋巴瘤。在特定的实施例中，癌症选自霍奇金淋巴瘤(如，里德斯特懂根细胞)、非霍奇金淋巴瘤(如，弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、蕈样真菌病、塞扎里综合征、原发性中枢神经系统淋巴瘤)、皮肤t细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤。
175.在某些实施例中，癌症选自腺癌。在特定的实施例中，癌症选自肾上腺皮质癌(也称为肾上腺皮质腺癌或肾上腺皮质细胞癌)、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、垂体瘤、胸腺瘤和胸腺癌。
176.在某些实施例中，癌症选自甲状腺癌。在特定实施例中，甲状腺癌选自甲状腺髓样
癌、甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡状癌。
177.在某些实施例中，癌症选自生殖细胞瘤。在特定实施例中，癌症选自恶性颅外生殖细胞肿瘤和恶性性腺外生殖细胞肿瘤。这些实施例的具体例子，恶性性腺外生殖细胞肿瘤选自非精原细胞瘤和精原细胞瘤。
178.在某些实施例中，癌症选自心脏肿瘤。在特定的实施例中，心脏肿瘤选自恶性畸胎瘤、淋巴瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤、婴儿纤维肉瘤和滑膜肉瘤。
179.在某些实施例中，细胞增殖障碍选自良性乳头状瘤病、良性肿瘤疾病和妊娠滋养细胞疾病。在特定实施例中，良性肿瘤疾病选自皮肤乳头状瘤(疣)和生殖器乳头状瘤。在特定实施例中，妊娠滋养层疾病选自葡萄胎和妊娠滋养细胞肿瘤(如，侵袭性葡萄胎、绒毛膜癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤和上皮样滋养细胞肿瘤)。在实施例中，细胞增殖障碍为已经转移的癌症，例如，结肠直肠癌肝转移。
180.在某些实施例中，细胞增殖障碍选自实体瘤和淋巴瘤。在某些实施例中，细胞增殖障碍选自实体瘤和淋巴瘤。在更具体的实施例中，细胞增殖障碍选自恶性黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、乳腺腺癌和淋巴瘤。这些实施例中，淋巴瘤选自弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、纵隔大b细胞淋巴瘤、脾边缘区b细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织(malt)的结外边缘区b细胞淋巴瘤、结边缘区b细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤(原发性皮肤型)、间变性大细胞淋巴瘤(系统性型)、外周t细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞t细胞淋巴瘤、成人t-细胞淋巴瘤/细胞白血病、鼻型结外k/t细胞淋巴瘤、肠病相关t细胞淋巴瘤、γ/δ肝脾t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、蕈样霉菌病和霍奇金淋巴瘤。
181.在某些实施例中，细胞增殖障碍被分类为癌症iii期或癌症iv期。这些实施例的例子中，癌症无法手术切除。
182.本发明的某些化合物可以以特定的几何或立体异构形式存在。本发明所设想的这些化合物，包括顺式和反式异构体、r-和s-对映异构体、非对映异构体、(d)-同分异构体、(l)-同分异构体、其外消旋混合物和其他混合物，都落在本发明的范围内。额外的不对称碳原子可存在于取代基中，例如烷基。所有这些异构体及其混合物都包括在本发明中。
183.含有任何多种异构体比例的异构体混合物可按照本发明进行使用。例如，在仅结合两种异构体的情况下，本发明考虑了包括50∶50、60∶40、70∶30、80∶20、90∶10、95∶5、96∶4、97∶3、98∶2、99∶1或100∶0异构体比例的混合物。本领域普通技术人员将容易理解，对于更复杂的异构体混合物，可以考虑类似的比例。
184.例如，如果需要本发明化合物的特定对映体，可以通过不对称合成或使用手性助剂衍生物来制备，所得非对映体混合物被分离，助剂基团裂解以提供纯所需对映体。或者，当分子含有碱性官能团如氨基，或酸性官能团如羧基时，用合适的光学活性酸或碱形成非对映体盐，随后通过本领域熟知的分步结晶或色谱法对形成的非对映异构体进行拆分，进而复原纯对映异构体。
185.同位素标记的化合物也在本公开的范围内。如本文所用，“同位素标记的化合物”是指目前公开的化合物，包括其药用盐和前药，如本文所述，一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子质量或质量数的原子所取代。可结合到本技术公开的化合物的同位素例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2h、3h、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl。
186.通过同位素标记本技术公开的化合物，所述化合物可用于药物和/或基质组织分布分析。因其易于制备和检测，可特别优选氚(3h)和碳-14(
14
c)来标记化合物。此外，用较重的同位素如氘(2h)替代可带来一些治疗优势，这些优势得益于较高的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或降低剂量要求，因此在某些情况下是优选的。本技术公开的同位素标记的化合物，以及其药用盐、酯和前药，可通过本领域已知的方法制备。
187.此外，用较重的同位素如氘取代通常丰富的氢(1h)可得到某些治疗方面的益处，例如，改善了吸收、分布、代谢和/或排泄(adme)特性后，所得药物的功效、安全性和/或耐受性得到了改善。用
13
c替换通常丰富的
12
c也可带来益处。(参见，wo 2007/005643、wo 2007/005644、wo 2007/016361和wo 2007/016431。)
188.申请公开的化合物的立体异构体(例如顺式和反式异构体)和所有光学异构体(例如r和s对映异构体)，以及这些异构体的外消旋混合物、非对映异构体和其他混合物都都落入本公开的范围内。
189.本公开的化合物制备完成后，优选地分离和纯化，以获得含有等于或大于95重量％的量(“基本上纯的”)的组合物，然后如本文所述进行使用或配制。在某些实施例中，本发明的化合物纯度大于99％。
190.本发明还考虑了本公开的化合物的溶剂化物和多晶型物。本发明化合物的溶剂化物包括，如水合物。
191.可采用任何合适的给药方式，例如肠胃外、静脉内、皮下、肌内、脑室内、体内、腹膜内、直肠或口服。对于某些患者，最合适的给药方式将取决于所治疗的疾病或病症的性质和严重程度，或所用的治疗方法的性质和活性化合物的性质。
192.用于肠胃外注射的组合物包括药学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散体、悬浮液或乳液，以及用于在使用前重新配制成无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲基纤维素及其合适的混合物、以及植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，可通过使用包衣材料(如卵磷脂)、或通过保持所需的粒度(在分散体的情况下)、或通过使用表面活性剂,来保持适当的流动性。
193.这些组合物还可含有辅助剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。还可能需要在组合物中包含等渗剂，如糖类、氯化钠等。可通过掺入能延迟吸收的物质如单硬脂酸铝和明胶，实现可注射药物形式的延长吸收。
194.本文公开的材料、组合物和成分可用于所公开的方法和组合物、可结合于所公开的方法和组合物、可用于制备所公开的方法和组合物，或是所公开的方法和组合物的产物。应当理解，公开这些材料的组合、子集、相互关系、集合等时，尽管未明确地具体公开这些化合物的每个个体的、集合组合以及排列组合的具体参考，但本文也具体构想和描述了每一种情况。例如，如果公开和讨论了某种方法，并且讨论了可以对该方法中的一些分子进行修改，则该方法的每种组合和变换，以及可能的修改都被具体考虑，除非特别指明并非如此。同样，也具体设想并公开了上述的任何子集或组合。该概念适用于本公开的所有方面，包括但不限于使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果有其他可执行的附加步骤，应当理解，这些附加步骤可以用本公开的方法的任何特定步骤或组合步骤来得到，并且这样的
组合或组合的子集都已被具体构想，且应视为已公开。
195.以下实施例旨在说明本发明的实际操作，而非以任何方式进行限制。示例
196.本技术描述了示例性的方法和材料，尽管与本技术描述的方法和材料类似或等同的方法和材料也可以用于本公开的实践或试验中。所述材料、方法及实例也仅为说明性的，而非限制性。
197.细胞系和药物：mc38和b16细胞系分别来自c57bl6鼠结肠腺癌和黑色素瘤细胞。将细胞维护在补充有10％热灭活胎牛血清(fbs)和100u/ml青霉素/链霉素的达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(dmem)中。ct26细胞来自鼠结肠腺癌细胞，并在含有10％fbs和2mm glutamax的rpmi1640中培养。3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂辛伐他汀、半胱天冬酶抑制剂恩利卡生、bcl2抑制剂维奈托克、dna损伤剂阿霉素、微管稳定剂多西他赛购自chemscene。
198.细胞凋亡的流式细胞术检测:凋亡检测采用fitc膜联蛋白v细胞凋亡检测试剂盒。将mc38细胞以1x10^5细胞/孔接种在24孔板中，培养过夜。将dmso药物储备在dmem中稀释以制备工作溶液，分别含有3μm维奈托克、1μm阿霉素、10μm多西他赛、10μm辛伐他汀的药物浓度。在药物组合治疗组中，在稀释的维奈托克、阿霉素、多西他赛和辛伐他汀dmem培养基中加入10μm恩利卡生。处理24小时后，收集细胞并解离成单细胞悬液用于膜联蛋白v/pi染色。简言之，用冷biolegend细胞染色缓冲液洗涤细胞两次，然后重悬于100ml膜联蛋白v结合缓冲液中。在每个样品中加入5ml fitc annex v和10ml碘化丙锭(pi)溶液。将样品轻轻涡旋并在室温下、黑暗中孵育15分钟。用细胞染色缓冲液清洗样品一次，然后将细胞重新悬浮在500ml细胞染色缓冲液中，用流式细胞仪分析。将数据记录在bd accuri c6 plus流式细胞仪上，并用flowjo软件进行分析。
199.β-干扰素(ifnβ)酶联免疫吸附试验:在药物处理24小时后收集mc38细胞培养上清液(分别为10μm辛伐他汀、3μm维奈托克、1μm阿霉素、10μm多西他赛)，并储存在-80℃中，用于ifnβelisa检测。按照制造商的说明，用verikine-hs干扰素β血清elisa试剂盒(pbl assay science)测量ifnβ的浓度。使用biotek synergy 4多功能酶标仪在450nm处记录吸光度，并用graphpad软件进行分析。
200.半胱天冬酶-3活性分析:用sigma半胱天冬酶3检测试剂盒，荧光分析法测定半胱天冬酶3的活性。简言之，mc38细胞在96孔板中培养，并分别用多西他赛和多西他赛/恩利卡生组合处理。在mc38细胞中测试多西他赛对半胱天冬酶-3活性的剂量依赖效应；多西他赛/恩利卡生组合用于逆转多西他赛诱导的半胱天冬酶-3活性。药物处理24小时后，将细胞在冰上25μl 1x裂解缓冲液中裂解20分钟，然后加入200μl的16.7μm ac-devd-amc底物溶液，在室温下黑暗中孵育30分钟。用biotek synergy 4酶标仪，在激发为360nm时发射波长460nm处读取荧光信号。
201.pd-l1表达流式细胞术分析:流式细胞术检测细胞表面pd-l1的表达。将细胞接种在24孔板中，并用1μm多西他赛、10μm恩利卡生以及两种药物的组合进行处理。未处理的细胞用作对照组。处理24小时后，分离细胞并收集，用biolegend pe抗小鼠pd-l1抗体(mih7 clone)进行pd-l1染色。用bd accuri c6 plus流式细胞仪测定pd-l1表达，用flowjo v10软件分析pd-l1平均密度。
202.体内研究:从美国缅因州杰克逊实验室获得9周龄的雌性c57bl6和balb/c小鼠。以1∶2的比例每周传代两次，并在补充有10％fbs的dmem:f12培养基中培养。(hyclone,ft.collins,co).接种方面，将大约5-8x105个细胞悬浮在100μl的pbs(becton dickinson labware，bedford，ma)中，并皮下注射到小鼠的侧腹。大多数小鼠在接种后5天内出现可触知的肿瘤。将带有肿瘤的小鼠分组为5-8只小鼠的组群进行给药研究。肿瘤大小为50-100mm3的小鼠在治疗组中随机分。确定基线肿瘤体积，并在第0天开始给药。将恩利卡生以盐的形式，在肿瘤内或腹腔内给药3-4天。如果使用多西他赛，则在施用恩利卡生的前一天，在含pbs的tween80/peg300或tween80/乙醇中经腹腔或静脉给药。恩利卡生和多西他赛在tween80/peg300中共同配制，经pbs稀释后在肿瘤内共同给药。使用标准卡尺每周测量两次肿瘤体积，并按(长度x宽度2)/2计算，长度和宽度分别定义为长轴和短轴。第0天开始测量体重，每周一次。
203.结果证明半胱天冬酶抑制剂恩利卡生部分阻断了mc38细胞中的凋亡，如图1所示。1.3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂辛伐他汀、bcl2抑制剂维奈托克、dna损伤剂阿霉素、微管稳定剂多西他赛均诱导了mc38细胞大量凋亡。如图2、图3、图4和图5所示，10μm的半胱天冬酶抑制剂恩利卡生的添加显著降低了这些药物诱导的细胞凋亡。
204.如图6所示，数据表明半胱天冬酶抑制剂恩利卡生轻微增强了mc38细胞的ifnβ产生。6.用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂辛伐他汀、bcl2抑制剂维奈托克、dna损伤剂阿霉素、微管稳定剂多西他赛处理mc38细胞，均轻微降低了ifnβ产生。然而，如图7、图8、图9所示，10μm的半胱天冬酶抑制剂恩利卡生的添加显著增强了3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶抑制剂辛伐他汀、dna损伤剂阿霉素、微管稳定剂多西他赛处理的mc38细胞中的ifnβ产生。
205.多西他赛在几种肿瘤细胞中表现出细胞毒性，且在～1μm时最有效地激活半胱天冬酶-3活性。恩利卡生在～1μm时开始有效地抑制半胱天冬酶-3活性，但在～10μm时达到最大活性。多西他赛和恩利卡生之间的优选比例为1:20-1:2，其中多西他赛的细胞毒性和恩利卡生的ifn效应都达到峰值(图10a、图10b、图10c、图11a、图11b和图11c)。
206.如图12所示，肿瘤内单独施用恩利卡生能够控制注射部位的小型mc38肿瘤(～50mm3)，但如图13所示，对远端肿瘤的控制一般。
207.为了控制较大的和晚期的肿瘤(》100mm3)，需加入多西他赛以达到理想的疗效。如图14和图15所示，全身性施用多西他赛改善了恩利卡生的肿瘤控制。如图17所示，通过肿瘤内联合施用多西他赛和恩利卡生获得了最大疗效。如图16所示，虽然瘤内注射恩利卡生不能诱导远端效应，但恩利卡生及其与多西他赛联合治疗的小鼠能够排斥再次攻击的肿瘤。
208.控制转移性癌症的一种方法是全身性施用多西他赛和恩利卡生。如图18所示，腹腔内施用恩利卡生改善了静脉内施用高剂量多西他赛的全身性肿瘤控制。如图21所示，肿瘤内施用恩利卡生及其与多西他赛的组合上调了肿瘤细胞上的pd-l1表达，这可能加剧了全身性免疫抑制。另一种控制转移性癌症的方法是联合瘤内施用恩利卡生、多西他赛或放射疗法和pd-1途径拮抗剂。
209.肿瘤内施用恩利卡生在其他肿瘤模型中也产生了肿瘤控制效果，如图19和图20所示。
210.ifnβ是一种关键的早期先天免疫反应信号，负责抗肿瘤免疫中的几个关键步骤，
如cd8 t细胞的交叉激活，且是作为癌症疗法的sting和toll样受体激动剂中的一个组成部分。治疗诱导的细胞凋亡可通过抑制半胱天冬酶来减缓，但是一旦发生凋亡就不能逆转。除了由放射疗法或化疗剂引发的细胞凋亡之外，诱导ifnβ与其他细胞因子如tnfα可组织更有效的免疫反应，通过更具炎性的半胱天冬酶非依赖性细胞死亡来控制肿瘤生长。
211.大多数癌症在局部阶段被诊断出来，但缺乏专门针对这一庞大人群合理设计的抗癌药物。大多数药物是为转移性疾病设计的，其安全性与早期癌症的治疗不相容。恩利卡生是一种共价抑制剂，适用于局部给药，因为短时间的药物覆盖足以完全使得肿瘤组织中的凋亡半胱天冬酶失活。这种机制的免疫原性还有利于局部给药，因为ifn的产生只需要肿瘤组织和免疫系统。
212.尽管肿瘤内单独施用恩利卡生或与肿瘤内或全身施用多西他赛联合施用产生了中度远端效应，但用恩利卡生治愈的小鼠能够更有效地排斥再次攻击的肿瘤。这表明已建立了某种程度的免疫记忆，且可以防止局部肿瘤治疗后的复发。肿瘤内给药的恩利卡生和多西他赛上调pd-l1的表达，可能加剧了全身性免疫抑制，降低了全身性疗效。pd-1途径拮抗剂的加入将更有效地控制局部和全身性疾病。
213.申请人在此的公开内容已通过参照附图在优选实施例中描述，其中相同的数字表示相同或相似的元件。本说明书对“一个实施例”、“实施例”或类似语言的引用表示结合该实施例描述的特定特征、结构或特性被包括在本发明的至少一个实施例中。因此，本说明书的短语“在一个实施例中”、“在实施例中”和类似语言的出现可以但不一定都指同一实施例。应当理解，当用“包括”描述实施例时，也提供了用“由...组成”和/或“基本上由...组成”描述的类似实施例。除非有相反的明确说明，本文引用的所有范围都是包括端值的；即包括该范围的上限和下限的值以及它们之间的所有值。例如，本文所述的剂量范围、百分比等包括该范围的上限和下限以及其间的任何连续值。
214.在一个或多个实施例中，申请人公开的所述特征、结构或特性可以以任何合适的方式组合。在本文的描述中，列举了许多具体细节以提供对本发明实施例的全面理解。然而，相关领域的技术人员将认识到，申请人的组合物和/或方法可以在缺少一个或多个具体细节的情况下，或用其他方法、成分、材料等来实施。在其他情况下，公知的结构、材料或操作没有被详细示出或描述，以避免模糊本公开的诸方面。
215.除非另外定义，否则这里使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料也可用于实践或测试，但这里仅描述了优选的方法和材料。除了所公开的特定顺序之外，本文所述的方法可以逻辑上可能的任何顺序来操作。通过引用并入
216.本公开中，参考和引用了其他文献，例如专利、专利申请、专利出版物、期刊、书籍、论文、网络内容。本文所述所有文件通过引用整合于本技术中。任何材料或其某部分，即通过引用并入本文的，但与本文明确阐述的现有定义、陈述或其他公开材料相冲突的，仅在该并入的材料和本公开材料之间不发生冲突的情况下并入。在发生冲突的情况下，从有利于本技术的角度来解决冲突，将该有利于本技术的公开作为优选实施方式。等同物
217.代表性实施例旨在帮助说明本发明，并非限制本发明的范围，也不应将其解释为
限制本发明的范围。实际上，除了在此示出的和描述的之外，本技术的全部内容，包括申请中包含的例子和对科学和专利文献的引用，使得本发明的各种修改及其多种进一步的实施例对于本领域的技术人员来说是显而易见的。这些实施例包含重要的附加信息、范例和指导，这些信息、范例和指导可适用于本发明的各种实施例及其等同物的实际操作。