一种可美白祛斑的油包水纳米乳面膜的制作方法

1.本发明属于皮肤学领域，更具体地为一种可美白祛斑的油包水纳米乳。尤其涉及一种香水莲花及菟丝子提取物制备成油包水的纳米乳加入到面膜液中，使其能更好的让皮肤吸收。


背景技术：

2.随着经济社会的健康持续发展，人们的生活质量逐步提升，国内消费群体护肤意识逐渐增强。面膜消费量也因此不断增长，区域热度持续上升，年轻消费群体逐渐成为面膜消费主力军。面膜的作用机制主要分为三点：第一，面膜敷在面部，阻断了面部皮肤和空气的接触，可以防止面部水分的过度蒸发，保留住面部肌肤的营养成分，维持弹性；第二，针对不同的功效，面膜中含有的多种营养成分，其中的小分子物质可在敷面膜的过程中透过皮肤浸入到皮肤内部，从而促进面部上皮组织细胞的新陈代谢，达到一定的美容效果；第三，面膜使用完毕揭下后，可以将原来附着在皮肤表面的灰尘、代谢产物甚至残余的化妆品等一并揭掉，达到清洁的作用。因此，通过使用面膜可以使我们的面部肌肤得到充分的保养，合理的改善，可以提髙皮肤弹性，改善褶皱、暗沉等现象。
3.现在市场上流行着许多类型的面膜，其中功效性面膜成为现代面膜的新宠。功效型面膜是针对不同的肌肤问题，一款面膜就相当于一个肌肤问题的解决方案，以良好的功效为特点，可以更快速安全有效的解决各种不同女性的肌肤问题。功效型面膜可以理解成一种天然安全专业型的面膜，适用于不同类型的肌肤，安全性比较高基本不会出现过敏现象，吸引了大多学者的目光。亚洲人因为其自身肤质和肤色的限制，更倾向于选择带有美白效果的面膜。美白面膜，是指添加了可以促进黑色素代谢、抑制及破坏黑色素生成、阻止络氨酸酶活化或还原黑色素中间体等功效的成分的面膜。美白成分一定要能有效渗入皮肤的基底层，才能发挥作用，产品最好添加有促进细胞新陈代谢的成分。目前有多种皮肤美白面膜，如含有纯化学物氢醌，天然植物提取物熊果苷、甘草提取物等的面膜。但面膜液为纯化学物的美白效果较好，但往往会带来一些副作用，而天然植物提取物由于安全性高，越来越得到研发者和消费者的青睐。
4.为了制备出一种含天然提取物的美白补水面膜，本发明制备了一种包含香水莲花（多糖）及菟丝子提取物（多糖和黄酮）制备成油包水的纳米乳，将这种纳米乳加入到面膜液中，利用香水莲花的提取物和菟丝子提取物间的协同做用，使其能更好的让皮肤吸收。


技术实现要素：

5.以天然植物和中草药为原料制成的美白化妆品，以温和、安全性能高受到消费者的喜爱。东方女性历来崇尚白皙肌肤，欧美人虽不追求美白，但钟情于对各种色斑的祛除。决定皮肤颜色的要素是黑色素、类黑色素、叶红素等色素，以及表皮厚度、皮下血管和光的散射度等。而黑色素是决定皮肤颜色的关键因素，当黑色素增多时，皮肤由浅褐色变为黑色。黑色素的生成机理：体内的酪氨酸由酪氨酸酶氧化，成为多巴，再由酪氨酸氧化酶氧化
为多巴醌，进而氧化为 5，6－二羟氮峁，最后聚合成黑色素。目前以天然植物和中草药为原料制成的美白化妆品，主要是通过在皮肤形成一层薄薄的膜，避免水分的蒸发、减少黑色素含量直接增白，抗氧化保护肤色及抑制黑色素细胞的增殖来达到美白祛斑的效果。
6.为抑制人体黑色素的产生，锁住皮肤水分，本发明提供如下技术方案：s1、制备香水莲花提取物：分别取晒干后的香水莲花花瓣，去除虫害、霉变部分后粉碎，过50目筛。按照1 g∶20ml料液质量体积比，分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液（体积比）在25℃温度下超声60min，所得溶液9 000 r/min离心10min，取上清液过滤，再重复离心步骤3次，再经减压旋蒸除去丙酮，在冷冻干燥机中冻干24 h，得到香水莲花花瓣提取物粉末（多糖）。测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
7.s2、制备菟丝子提取物：称取10g净制菟丝子药材，置于研钵中，将所有菟丝子捣碎后装袋待用。称取上述捣碎的菟丝子5g，置于坩埚内，用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声，取出放凉，密闭保存备用。称取上述菟丝子1 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流提取2次，每次60min，抽滤，浓缩蒸干，得菟丝子提取物（多糖和黄酮）。测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
8.s3、蛋白多肽的合成：4倍过量的fmoc-氨基酸经过4倍过量的活化剂(hbtu)和6倍过量的n,n-二异丙基乙胺活化后进行缩合反应；每步缩合反应结束后，用n,n二甲基甲酰胺(dmf)和二氯甲烷(dcm)各洗涤三次；然后20%哌啶(dmf)，脱去fmoc保护基；重复缩合反应和脱保护步骤，直至完成目标多肽序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的合成；目标序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2合成结束后，需要用25%的乙酸酐(dmf)溶液，对n端封端20分钟；将多肽从树脂上切割下来，切割液配比为tfa:tis:h2o=90:3:7，切割时间为6小时；然后用无水乙醚沉淀多肽并离心，弃上清留沉淀，醚洗3次，得到目标粗肽；然后将粗肽通过c18反相高相液相色谱柱纯化，通过质谱确认目标产物，最终得到多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2s4、创建缺水性黑色素瘤小鼠模型：本发明使用小鼠的动物实验许可证号为gdpulac2015595，购自于南方医科大学动物实验中心。小鼠的体重约为20
±
2g，实验前，所有小鼠适应性喂养一周，保证其自由饮食。将所有小鼠置于干燥环境中喂养，并向小鼠照射不同强度的紫外线，增强小鼠体内黑色素瘤的产生。
9.s5、降低小鼠体内黑色素：称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳化后产物与s3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳。从 s4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中，对细胞进行前期培养24h后，加入稀释后的油包水纳米乳，继续培养，定期测定细胞内黑色素含量。
10.s6、锁住小鼠皮肤表面的水分：称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳化后产物与s3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳。从 s4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中，对细胞进行前期培养24h后，加入稀释后的油包水纳米乳，继续培养，定期测定细胞保湿率。
11.优选地：本发明中所选用的香水莲花为浙江省四季都有的香水莲花。
12.优选地：本发明中所选用的菟丝子为店铺购买所得。
13.优选地：本发明所述s3中选用紫外线照射而诱导小鼠体内黑色素瘤变，更贴切人体经紫外线照射而产生的黑色素。
14.优选地：本发明所述s4中称取0.3g的香水莲花提取物和0.3g的菟丝子提取物和1ml磷酸盐-次磷酸盐缓冲液一起配制成样品液。
附图说明
15.图1为本发明实施例1和对比例1-3所得到经诱变小鼠表皮细胞黑色素含量柱状图。
16.图2为本发明实施例2和对比例4、5所得到的小鼠表皮细胞保湿率柱状图。
17.图3为本发明实施例3和对比例6、7所得到的小鼠表皮细胞保湿率柱状图。
18.图4为本发明实施例4和对比例8、9的水分含量折线图。
19.图5为本发明合成的多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2分子结构式。
20.图6为本发明合成的多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的氢谱。
21.图7为本发明合成的多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的碳谱。
22.有益效果：1、香水莲花中含有较多的多糖，能够在皮肤形成一层薄薄的膜，避免水分的蒸发。
23.2、香水莲花和菟丝子提取物协同作用，能够很好的抑制络氨酸酶的活性，从而抑制黑色素的生成，达到美白祛斑的效果。
24.3、本发明所合多肽为蛋白多肽，大部分采用疏水性氨基酸为小分子氨基酸合成，且重复序列增强多肽的锁水功能。
25.4、香水莲花和菟丝子提取物协同作用，能够很好的抑制５α－还原酶活性，从而抑制痤疮的形成，达到祛痘的效果。
26.5、将天然植物合蛋白多肽相结合，合成的油包水纳米乳在美白祛痘的成分上增添锁水功能。
具体实施方式
27.黑色素是决定皮肤颜色的关键因素，当黑色素增多时，皮肤由浅褐色变为黑色。黑色素的生成机理：体内的酪氨酸由酪氨酸酶氧化，成为多巴，再由酪氨酸氧化酶氧化为多巴醌，进而氧化为 5，6－二羟氮峁，最后聚合成黑色素。目前以天然植物和中草药为原料制成的美白化妆品，主要是通过促进血液循环改善肤色、减少黑色素含量直接增白，抗氧化保护肤色及抑制黑色素细胞的增殖来达到美白祛斑的效果。以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
28.实施例1s1、制备香水莲花提取物：分别取晒干后的香水莲花花瓣，去除虫害、霉变部分后
粉碎，过50目筛。按照1 g∶20ml料液质量体积比，分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液（体积比）在25℃温度下超声60min，所得溶液9 000 r/min离心10min，取上清液过滤，再重复离心步骤3次，再经减压旋蒸除去丙酮，在冷冻干燥机中冻干24 h，得到香水莲花花瓣提取物粉末（多糖）。测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
29.s2、制备菟丝子提取物：称取10g净制菟丝子药材，置于研钵中，将所有菟丝子捣碎后装袋待用。称取上述捣碎的菟丝子5g，置于坩埚内，用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声，取出放凉，密闭保存备用。称取上述菟丝子1 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流提取2次，每次60min，抽滤，浓缩蒸干，得菟丝子提取物（多糖和黄酮）。测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
30.s3、蛋白多肽的合成：4倍过量的fmoc-氨基酸经过4倍过量的活化剂(hbtu)和6倍过量的n,n-二异丙基乙胺活化后进行缩合反应；每步缩合反应结束后，用n,n二甲基甲酰胺(dmf)和二氯甲烷(dcm)各洗涤三次；然后20%哌啶(dmf)，脱去fmoc保护基；重复缩合反应和脱保护步骤，直至完成目标多肽序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的合成；目标序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2合成结束后，需要用25%的乙酸酐(dmf)溶液，对n端封端20分钟；将多肽从树脂上切割下来，切割液配比为tfa:tis:h2o=90:3:7，切割时间为6小时；然后用无水乙醚沉淀多肽并离心，弃上清留沉淀，醚洗3次，得到目标粗肽；然后将粗肽通过c18反相高相液相色谱柱纯化，通过质谱确认目标产物，最终得到多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2s4、创建缺水性黑色素瘤小鼠模型：本发明使用小鼠的动物实验许可证号为gdpulac2015595，购自于南方医科大学动物实验中心。小鼠的体重约为20
±
2g，实验前，所有小鼠适应性喂养一周，保证其自由饮食。将所有小鼠置于干燥环境中喂养，并向小鼠照射不同强度的紫外线，增强小鼠体内黑色素瘤的产生。
31.s5、降低小鼠体内黑色素：称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳化后产物与s3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳。从 s4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中，对细胞进行前期培养24h后，加入稀释后的油包水纳米乳，继续培养，定期测定细胞内黑色素含量。
32.s6、将细胞在25℃、体积分数5%co 2
饱和湿度条件下培养24 h，倾去培养液，用次磷酸盐缓冲液洗1次，质量分数0.25%胰酶消化，再用次磷酸盐缓冲液吹打沉淀细胞，备用。取备用细胞悬液加次磷酸盐缓冲液，各吸取1 ml细胞悬液分别置于离心管中，低速离心15min后弃去上清液，先加入2ml蒸馏水使细胞重新悬浮，然后加入1 ml v（乙醇）∶v（乙醚液）=1∶1，在室温下放置15 min，9000 r/min离心5 min并弃去上清液，加入1 ml含体积分数10%二甲基亚砜的1 mol/l naoh溶液，然后置于80℃水浴30 min，最后转移到96孔板中，用分光光度计在470 nm波长处测定吸光度，单个细胞内相对黑素质量分数=（a实验组/a对照组）/细胞增殖率
×
100%。
33.对比例1 除将步骤s5中的0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，替换成纯普通培养液外，其各步骤均与实施例1相同。
34.对比例2 除将步骤s5中的0.3g的香水莲花提取物去掉外，其各步骤均与实施例1相同。其各步骤均与实施例1相同。
35.对比例3 除将步骤s5中的0.3g的菟丝子提取物去掉外，其各步骤均与实施例1相同。其各步骤均与实施例1相同。
36.表1检测项目对比例1对比例2对比例3实施列1黑色素含量（%）82
±
0.135
±
0.243
±
0.212
±
0.01图1为本发明实施例1和对比例1-3所得到经诱变小鼠表皮细胞黑色素含量柱状图。表1为本发明实施例1和对比例1-3， 5次测量经诱变小鼠表皮细胞黑色素含量的统计表格。从图1和表1中可以看出实施例1中小鼠的黑色素含量远远低于对比例1-3。该结果表明，将香水莲花及菟丝子提取物制备成油包水的纳米乳加入到细胞培养液中，能很好抑制黑色素产生。
37.实施例2s1、制备香水莲花提取物：分别取晒干后的香水莲花花瓣，去除虫害、霉变部分后粉碎，过50目筛。按照1 g∶20ml料液质量体积比，分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液（体积比）在25℃温度下超声60min，所得溶液9 000 r/min离心10min，取上清液过滤，再重复离心步骤3次，再经减压旋蒸除去丙酮，在冷冻干燥机中冻干24 h，得到香水莲花花瓣提取物粉末。测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
38.s2、制备菟丝子提取物：称取10g净制菟丝子药材，置于研钵中，将所有菟丝子捣碎后装袋待用。称取上述捣碎的菟丝子5g，置于坩埚内，用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声，取出放凉，密闭保存备用。称取上述菟丝子1 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流提取2次，每次60min，抽滤，浓缩蒸干，得菟丝子提取物。测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
39.s3、蛋白多肽的合成：4倍过量的fmoc-氨基酸经过4倍过量的活化剂(hbtu)和6倍过量的n,n-二异丙基乙胺活化后进行缩合反应；每步缩合反应结束后，用n,n二甲基甲酰胺(dmf)和二氯甲烷(dcm)各洗涤三次；然后20%哌啶(dmf)，脱去fmoc保护基；重复缩合反应和脱保护步骤，直至完成目标多肽序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的合成；目标序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2合成结束后，需要用25%的乙酸酐(dmf)溶液，对n端封端20分钟；将多肽从树脂上切割下来，切割液配比为tfa:tis:h2o=90:3:7，切割时间为6小时；然后用无水乙醚沉淀多肽并离心，弃上清留沉淀，醚洗3次，得到目标粗肽；然后将粗肽通过c18反相高相液相色谱柱纯化，通过质谱确认目标产物，最终得到多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2s4、创建缺水性黑色素瘤小鼠模型：本发明使用小鼠的动物实验许可证号为gdpulac2015595，购自于南方医科大学动物实验中心。小鼠的体重约为20
±
2g，实验前，所有小鼠适应性喂养一周，保证其自由饮食。将所有小鼠置于干燥环境中喂养，并向小鼠照射不同强度的紫外线，增强小鼠体内黑色素瘤的产生。
40.s5、锁住小鼠皮肤表面的水分：称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳
化后产物与s3中合成的多肽一块制得一种油包水纳米乳。从 s4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中，对细胞进行前期培养24h后，加入稀释后的油包水纳米乳，继续培养，定期测定细胞保湿率。
41.s6、将细胞在25℃、体积分数5%co 2
饱和湿度条件下培养24 h，倾去培养液，用次磷酸盐缓冲液洗1次，质量分数0.25%胰酶消化，再用次磷酸盐缓冲液吹打沉淀细胞，备用。取备用细胞悬液加次磷酸盐缓冲液，加入10ml的去离子水、3ml稀释后油包水纳米乳置于干燥器内。每隔一段时间，分别称量样品，平行3次实验。 根据下式计算保湿率：保湿率=hn /ho
×
100%(式中，ho为样品放置前含水量，hn为放置一段时间后样品含水量）。
42.对比例4 除步骤s5中制备油包水纳米乳时加入0.2g的香水提取物，其余各步骤均与实施例2相同。
43.对比例5 除步骤s5中制备油包水纳米乳时加入0.4g的香水提取物，其余各步骤均与实施例2相同。
44.表2检测项目对比例4对比例5实施例2保湿率（%）75
±
0.0180
±
0.0192
±
0.01图2为本发明实施例2和对比例4、5所得到的小鼠表皮细胞保湿率柱状图。表2为本发明实施例2和对比例4、5， 5次测量经诱变小鼠表皮细胞保湿率含量的统计表格。从图2和表2中可以看出实施例2中小鼠表皮细胞保湿率高于对比例4、5。该结果表明，两种适量的香水莲花含量保湿性更好。
45.实施例3s1、制备香水莲花提取物：分别取晒干后的香水莲花花瓣，去除虫害、霉变部分后粉碎，过50目筛。按照1 g∶20ml料液质量体积比，分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液（体积比）在25℃温度下超声60min，所得溶液9 000 r/min离心10min，取上清液过滤，再重复离心步骤3次，再经减压旋蒸除去丙酮，在冷冻干燥机中冻干24 h，得到香水莲花花瓣提取物粉末。测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
46.s2、制备菟丝子提取物：称取10g净制菟丝子药材，置于研钵中，将所有菟丝子捣碎后装袋待用。称取上述捣碎的菟丝子5g，置于坩埚内，用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声，取出放凉，密闭保存备用。称取上述菟丝子1 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流提取2次，每次60min，抽滤，浓缩蒸干，得菟丝子提取物。测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
47.s3、蛋白多肽的合成：4倍过量的fmoc-氨基酸经过4倍过量的活化剂(hbtu)和6倍过量的n,n-二异丙基乙胺活化后进行缩合反应；每步缩合反应结束后，用n,n二甲基甲酰胺(dmf)和二氯甲烷(dcm)各洗涤三次；然后20%哌啶(dmf)，脱去fmoc保护基；重复缩合反应和脱保护步骤，直至完成目标多肽序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的合成；目标序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2合成结束后，需要用25%的乙酸酐(dmf)溶液，对n端封端20分钟；将多肽从树脂上切割下来，切割液配比为tfa:tis:h2o=90:3:7，切割时间为6小时；然后用无水乙醚沉淀多肽并离心，弃上清留沉淀，醚洗3次，得到目标粗肽；然后将粗肽通过c18反相高相液相色谱柱纯化，通过质谱确认目标产物，最终得
到多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2s4、创建缺水性黑色素瘤小鼠模型：本发明使用小鼠的动物实验许可证号为gdpulac2015595，购自于南方医科大学动物实验中心。小鼠的体重约为20
±
2g，实验前，所有小鼠适应性喂养一周，保证其自由饮食。将所有小鼠置于干燥环境中喂养，并向小鼠照射不同强度的紫外线，增强小鼠体内黑色素瘤的产生。
48.s5、锁住小鼠皮肤表面的水分：称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳化后产物与s3中合成的0.1g多肽一块制得一种油包水纳米乳。从 s4创建的缺水性黑色素瘤的小鼠皮肤表面取出细胞置于培养皿中，对细胞进行前期培养24h后，加入稀释后的油包水纳米乳，继续培养，定期测定细胞保湿率。
49.s6、将细胞在25℃、体积分数5%co 2
饱和湿度条件下培养24 h，倾去培养液，用次磷酸盐缓冲液洗1次，质量分数0.25%胰酶消化，再用次磷酸盐缓冲液吹打沉淀细胞，备用。取备用细胞悬液加次磷酸盐缓冲液，加入10ml的去离子水、3ml稀释后油包水纳米乳置于干燥器内。每隔一段时间，分别称量样品，平行3次实验。 根据下式计算保湿率：保湿率=hn /ho
×
100%(式中，ho为样品放置前含水量，hn为放置一段时间后样品含水量）。
50.对比例6 除步骤s5中制备油包水纳米乳时不加入0.3g的菟丝子提取物，其余各步骤均与实施例3相同。
51.对比例7 除步骤s5中制备油包水纳米乳时不加入0.3g的香水莲花提取物，其余各步骤均与实施例3相同。
52.对比例8 除步骤s5中制备油包水纳米乳时不加入0.1g的合成的多肽，其余各步骤均与实施例3相同。
53.表3检测项目对比例6对比例7对比例8实施例3保湿率（%）72
±
0.0160
±
0.0140
±
0.0192
±
0.01图3为本发明实施例3和对比例6、7所得到的小鼠表皮细胞保湿率柱状图，图5为本发明的多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2分子结构式，图6为其分子结构式的h谱，图7为c谱。表3为本发明实施例3和对比例6、7，5次测量经诱变小鼠表皮细胞保湿率含量的统计表格。从图3和表3中可以看出实施例3中小鼠表皮细胞保湿率高于对比例6、7。为了达到合成具有特定功能的氨基酸序列多肽的目的，需要保护暂不参与到形成酰胺键的氨基——后一个待连接的氨基酸的氨基和羧基——即前一个已连接的氨基酸的羧基，与此同时，也需要保护氨基酸侧链上的活性基因，直到反应结束后再将其脱除。α-氨基的保护基大多采用烷氧羰基，因为这样的保护可以使氨基酸不容易发生消旋，增加多肽的合成产率和多肽的美白祛斑的效果。该结果表明，香水莲花提取物和菟丝子提取物对诱变小鼠表皮细胞保湿率的提高起协同作用。
54.实施例4s1、制备香水莲花提取物：分别取晒干后的香水莲花花瓣，去除虫害、霉变部分后粉碎，过50目筛。按照1 g∶20ml料液质量体积比，分别用蒸馏水、体积分数20%、40%、60%、80%、100%的丙酮溶液（体积比）在25℃温度下超声60min，所得溶液9 000 r/min离心10min，取上清液过滤，再重复离心步骤3次，再经减压旋蒸除去丙酮，在冷冻干燥机中冻干24 h，得
到香水莲花花瓣提取物粉末。测定时将其与菟丝子提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
55.s2、制备菟丝子提取物：称取10g净制菟丝子药材，置于研钵中，将所有菟丝子捣碎后装袋待用。称取上述捣碎的菟丝子5g，置于坩埚内，用酒精灯加热直至表面微黄且有爆裂声，取出放凉，密闭保存备用。称取上述菟丝子1 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流提取2次，每次60min，抽滤，浓缩蒸干，得菟丝子提取物。测定时将其与香水莲花提取物经过超声重溶配制成所需浓度的溶液待用。
56.s3、蛋白多肽的合成：4倍过量的fmoc-氨基酸经过4倍过量的活化剂(hbtu)和6倍过量的n,n-二异丙基乙胺活化后进行缩合反应；每步缩合反应结束后，用n,n二甲基甲酰胺(dmf)和二氯甲烷(dcm)各洗涤三次；然后20%哌啶(dmf)，脱去fmoc保护基；重复缩合反应和脱保护步骤，直至完成目标多肽序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2的合成；目标序列（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2合成结束后，需要用25%的乙酸酐(dmf)溶液，对n端封端20分钟；将多肽从树脂上切割下来，切割液配比为tfa:tis:h2o=90:3:7，切割时间为6小时；然后用无水乙醚沉淀多肽并离心，弃上清留沉淀，醚洗3次，得到目标粗肽；然后将粗肽通过c18反相高相液相色谱柱纯化，通过质谱确认目标产物，最终得到多肽（pro-ser-gly）2（asn-glu-gly）2（pro-ser-gly）2s4、皮肤测试：招募10名志愿者，进行皮肤测试。称取0.3g的香水莲花提取物、0.3g的菟丝子提取物和5ml的次磷酸盐缓冲液（ph=7），20ml的去离子水配制成的样品液，随后进行提取乳化，乳化后产物与s3中合成的0.1g多肽一块制得一种油包水纳米乳。将这种油包水纳米乳和水以1：10的剂量混合，将湿敷棉放入上述稀释乳中浸泡10分钟后取出，敷于志愿者的手部10分钟，每间隔10分钟测试手敷地的皮肤水分，为期1h。
57.对比例9 招募10名志愿者，进行皮肤测试。将湿敷棉放入矿泉水中浸泡10分钟后取出，敷于志愿者的手部10分钟，每间隔10分钟测试手敷地的皮肤水分，为期1h。
58.对比例10 招募10名志愿者，进行皮肤测试。将从市面上所售的透明质酸以1：10的剂量混合，将湿敷棉放入上述稀释液中浸泡10分钟后取出，敷于志愿者的手部10分钟，每间隔10分钟测试手敷地的皮肤水分，为期1h。
59.图4为本发明实施例4和实施例9、10的水分含量折线图，从图中可以看出，实施例4中皮肤含水量下降最慢，保湿性略优于现在公认的透明质酸。表明从香水莲花和菟丝子提取物中多糖有一个协同作用，能够在皮肤形成一层薄薄的膜，避免水分的蒸发。
60.实施例1-4根据不同受体和不同实验方案，综合证明将香水莲花及菟丝子提取物制备成油包水的纳米乳加入到面膜液中，香水莲花中含有较多的多糖，能够在皮肤形成一层薄薄的膜，避免水分的蒸发。香水莲花和菟丝子提取物协同作用，能够很好的抑制５α－还原酶活性，从而抑制痤疮的形成，达到祛痘的效果。制备的面膜不仅能够起到美白祛斑的效果，而且其能够显著改善皮肤水润程度。
61.最后应说明的是：以上所述的各实施例仅用于说明本发明技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或全部技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。