一种细胞保护剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种细胞保护剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.间充质干细胞(mscs)，最早在骨髓中发现，随着对mscs的广泛应用，逐渐在多种组织中也发现了mscs，包括脂肪、胎盘、脐带、脐血、羊膜及肌肉等。目前，由于人脐带间充质干细胞(uc-msc)的增殖能力、免疫调节作用及多向分化能力被广泛用于细胞移植治疗。
3.不论是在疾病治疗还是保健领域，细胞治疗都已经显示出巨大的作用。但是，细胞产业作为一个新兴的产业，也表现出了其不成熟的一面，表现之一便是细胞制品的容器、细胞分散体系、细胞输注过程等处理流程的粗放。
4.在现有技术中，制备完成后，直接将细胞分散在生理盐水中，或加入人血白蛋白用以保护，然后装入盐水袋或转移袋中。需要运输时，放置在疫苗箱中运输，然后直接给病人输注。这个过程存在一些问题，比如生理盐水可以维持渗透压，但不能提供稳定的酸碱度，生理盐水无营养物质，而无氧呼吸对葡萄糖的需求较大，所以此过程肯定会降低细胞的活性。
5.在实际治疗中，输注前的细胞处理过程比较简单，而间充质干细胞在输注过程中容易成团，故此法无法保证使用过程中细胞的稳定性，也不能长时间保持细胞的活性，因此不适于远距离运输。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种细胞保护剂及其制备方法和应用，能够用以保护可临床注射的细胞，保证细胞的活力和稳定性，能够维持细胞活性24h左右，且配制好的细胞保护剂有效期为3个月或以上，避免出现现配现用的保护剂对试剂的批次和安全难以控制的情况。
7.为实现上述目的，本发明提供了一种细胞保护剂，所述细胞保护剂包括终浓度为0.7-0.9ml/ml的复方电解质、终浓度为0.1-0.3ml/ml的人血白蛋白，还包括能量剂；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
8.优选的，所述能量剂包括终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖。
9.优选的，所述细胞保护剂包括终浓度为0.71ml/ml的复方电解质、终浓度为0.28ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
10.优选的，所述细胞保护剂包括终浓度为0.79ml/ml的复方电解质、终浓度为0.19ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为
0.9％氯化钠溶液。
11.优选的，所述细胞保护剂包括终浓度为0.89ml/ml的复方电解质、终浓度为0.10ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
12.本发明还提供了一种细胞保护剂的制备方法，步骤如下：
13.s1、按照一定浓度将能量剂与复方电解质溶液混合，用naoh调节ph；
14.s2、按照一定浓度将人血白蛋白加入步骤s2所得的溶液中，混匀；
15.s3、将步骤s2所得的溶液通过过滤器过滤后，用0.9％氯化钠溶液定容，即得。
16.优选的，所述ph值为7.1-7.5。
17.本发明还提供了一种细胞保护剂在制备用于保护细胞或制备保护细胞的产品中的应用。
18.优选的，保护细胞的产品是维持临床注射细胞的活性或制备维持临床注射细胞的活性的产品。
19.优选的，所述细胞保护剂在间充质干细胞中的应用。
20.因此，本发明采用上述一种细胞保护剂及其制备方法和应用，能够维持远距离运输的细胞活率和细胞表型；而且，配制好的细胞保护剂有效期长达3个月或以上，便于保存；并且，产品成分中不含血清，没有外源污染物感染的风险，保证了产品安全；同时，所用试剂便宜、制备简单，制造成本低，能进行批量生产。
21.下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
22.图1是本发明的实验测试中经细胞保护剂处理后的细胞活率变化趋势图；
23.图2是本发明的实验测试中保护剂处理的间充质干细胞中相关基因的流式结果图。
具体实施方式
24.以下通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
25.实施例一
26.一种细胞保护剂，包括终浓度为0.71ml/ml的复方电解质、终浓度为0.28ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
27.实施例二
28.一种细胞保护剂，包括终浓度为0.79ml/ml的复方电解质、终浓度为0.19ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
29.实施例三
30.一种细胞保护剂，包括终浓度为0.89ml/ml的复方电解质、终浓度为0.10ml/ml的人血白蛋白、终浓度为0.09μmol/ml的肌酐、终浓度为2.47mg/ml的还原性谷胱甘肽、终浓度为25ug/ml的胰岛素、终浓度为2.5mg/ml的葡萄糖；所述细胞保护剂的溶剂为0.9％氯化钠溶液。
31.实验测试
32.选取实施例二中的细胞保护剂，其中保护细胞为脐带间充质干细胞，检测在3个月有效期内，配制的保护剂对脐带间充质干细胞活率及相关基因表达率的影响。步骤如下：
33.s1、制备细胞保护剂，并平均分为四份；
34.s2、复苏冻存的脐带间充质干细胞，洗涤；
35.s3、取1
×
107个细胞，用配制一个月的细胞保护剂重悬后，取样，检测处理后的细胞活率；
36.s4、将细胞转移至50ml的转移袋中，4℃保存；
37.s5、每隔一定时间检测一次细胞活率，共检测48h；
38.s6、重复s2-s5，分别用配制第一个月、第二个月和第三个月的细胞保护剂替代现配制的细胞保护剂进行重悬处理；
39.s7、分别取用现配、配制第一个月、配制第二个月、配制第三个月的细胞保护剂保存的细胞，进行干细胞活率检测；
40.s8、取用配制第一个月的细胞保护剂保存的细胞，对干细胞中相关基因的表达进行流式细胞检测。
41.表1细胞保护剂处理的干细胞中相关基因表达的流式检测结果表
42.基因流式结果cd90

99.61cd105

99.53cd29

99.76cd73

99.32cd34

0.24cd45

0.27hla-dr

0.48cd14

0.4cd19

0.47
43.如图1-2、表1所示，使用本细胞保护剂进行脐带间充质干细胞的保存，在24h内能稳定保持脐带间充质干细胞的活率，甚至，在有效期内，稳定保持细胞活率的时间长达48h；而且，用本细胞保护剂处理的间充质干细胞，其有益基因的表达率逐渐上升，有害基因的表达率逐渐下降。即本发明的保护剂对脐带间充质干细胞具有很好的保护作用，且不含血清，成分更安全，成本更低，且保证了保存效果。
44.因此，本发明采用上述一种细胞保护剂及其制备方法和应用，能够长期稳定保存，维持远距离运输的细胞活率和细胞表型，保证了产品安全，具有制造成本低、适合大批量生产的特点。
45.最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，
尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。