用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物的制作方法

技术特征：
1.一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，其具有如式ⅱ所示的化学结构式：其中，z＝1-10，m＝20-50，n＝10-30；aie荧光单体的结构式如ⅰ所示：其中，r基团为h、n(ch3)2或n(ch2ch3)2。2.根据权利要求1所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，所述aie荧光单体的制备路线为：3.根据权利要求2所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，所述aie荧光单体的制备方法包括以下步骤：将4-羟基四苯基乙烯、4-氯甲基苯乙烯、碳酸钾和碘化钾溶于丙酮中，并加入一滴硝基苯，搅拌下回流过夜；反应溶液冷却至室温后过滤，去除溶剂并以的二氯甲烷和石油醚为层析液，通过二氧化硅硅胶柱进行柱层析分离；旋干溶剂后所得固体干燥即得aie荧光单体。
二(2-甲基丁腈)、2-巯基-s-硫代苯甲酰乙酸加入到干燥的无水n,n-二甲基甲酰胺中，体系用液氮进行冷冻除氧循环三次，除氧完成后氮气保护下加热搅拌反应；2-2)反应结束后冷却至室温，反应产物加入到乙醚中沉淀，所得固体溶于n,n-二甲基甲酰胺，并再次用乙醚沉淀，过滤后真空干燥过夜，得固体聚合物；2-3)将固体聚合物溶于n,n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺、dota，氮气下搅拌过夜；2-4)除去n,n-二甲基甲酰胺，加入三氟乙酸，搅拌过夜；2-5)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，用透析管透析所得水溶液，并用水洗，将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得嵌段共聚物产品；3)连接侧链马来酰胺：3-1)将步骤2-5)得到的嵌段共聚物产品溶于含dl-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，并在加热下搅拌反应，调节ph值至4；3-2)用透析管透析，并用水洗；3-3)向所得溶液中加入磷酸缓冲液，并加入含1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的n,n-二甲基甲酰胺溶液，常温下搅拌反应；3-4)过滤，所得溶液用析管透析；3-5)将所得溶液分装冻干，即得聚集诱导发光聚合物；4)标记稀土金属：将步骤3-5)得到的聚集诱导发光聚合物溶于pbs缓冲液中，加入lncl3，孵育,得到最终产品：稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物。8.根据权利要求7所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：1)制备aie荧光单体：将4-羟基四苯基乙烯、4-氯甲基苯乙烯、碳酸钾和碘化钾溶于丙酮中，并加入一滴硝基苯，搅拌下回流过夜；反应溶液冷却至室温后过滤，去除溶剂并以的二氯甲烷和石油醚为层析液，通过二氧化硅硅胶柱进行柱层析分离；旋干溶剂后所得固体干燥即得aie荧光单体；2)合成嵌段共聚物：2-1)将n,n-二甲基丙烯酰胺、aie荧光单体、n-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、2,2
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偶氮-二(2-甲基丁腈)、2-巯基-s-硫代苯甲酰乙酸加入到干燥的无水n,n-二甲基甲酰胺中，体系用液氮进行冷冻除氧循环三次，除氧完成后氮气保护下90℃搅拌反应1小时；2-2)反应结束后冷却至室温，反应产物加入到乙醚中沉淀，所得固体溶于n,n-二甲基甲酰胺，并再次用乙醚沉淀，过滤后真空干燥过夜，得固体聚合物；2-3)将固体聚合物溶于n,n-二甲基甲酰胺，加入三乙胺、dota，氮气下搅拌过夜；2-4)除去n,n-二甲基甲酰胺，加入三氟乙酸，搅拌过夜；2-5)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，用透析管透析所得水溶液，并用水洗，将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得嵌段共聚物产品；3)连接侧链马来酰胺：3-1)将步骤2-5)得到的嵌段共聚物产品溶于含dl-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，并在50℃下搅拌反应1小时，调节ph值至4；3-2)用透析管透析，并用水洗；
3-3)向所得溶液中加入磷酸缓冲液，并加入含1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的n,n-二甲基甲酰胺溶液，常温下搅拌反应1小时；3-4)过滤，所得溶液用析管透析；3-5)将所得溶液分装冻干，即得聚集诱导发光聚合物；4)标记稀土金属：将步骤3-5)得到的聚集诱导发光聚合物溶于pbs缓冲液中，加入lncl3，37℃下孵育30分钟,得到最终产品：稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物。9.根据权利要求8所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：1)制备aie荧光单体：将2.87mmol 4-羟基四苯基乙烯、5.74mmol 4-氯甲基苯乙烯、11.48mmol碳酸钾和碘化钾溶于50ml丙酮中，并加入一滴硝基苯，搅拌下回流过夜；反应溶液冷却至室温后过滤，去除溶剂并以体积比为1:2的二氯甲烷和石油醚为层析液，通过二氧化硅硅胶柱进行柱层析分离；旋干溶剂后所得固体干燥即得aie荧光单体；2)合成嵌段共聚物：2-1)将0.96g n,n-二甲基丙烯酰胺、0.5gaie荧光单体、2.46g n-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯、16mg 2,2
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偶氮-二(2-甲基丁腈)、54mg 2-巯基-s-硫代苯甲酰乙酸加入到45ml干燥的无水n,n-二甲基甲酰胺中，体系用液氮进行冷冻除氧循环三次，除氧完成后氮气保护下90℃搅拌反应1小时；2-2)反应结束后冷却至室温，反应产物加入到400ml乙醚中沉淀，所得固体溶于5ml n,n-二甲基甲酰胺，并再次用400ml乙醚沉淀，过滤后真空干燥过夜，得固体聚合物3.0g；2-3)取100mg固体聚合物溶于3ml n,n-二甲基甲酰胺，加入1ml三乙胺、300mg dota，氮气下搅拌过夜；2-4)除去n,n-二甲基甲酰胺，加入1ml三氟乙酸，搅拌过夜；2-5)将所有溶剂在真空下除去，用水提取反应产物，用透析管透析所得水溶液，并用水洗，将透析管中所剩溶液蒸干，真空干燥，得嵌段共聚物产品120mg；3)连接侧链马来酰胺：3-1)将步骤2-5)得到的嵌段共聚物产品溶于含20mm dl-二硫苏糖醇的磷酸缓冲液中，并在50℃下搅拌反应1小时，调节ph值至4；3-2)用透析管透析，并用水洗；3-3)向所得溶液中加入磷酸缓冲液，并加入含150mg 1,8-二(马来酰亚胺)-3,6-二氧杂辛烷的n,n-二甲基甲酰胺溶液，常温下搅拌反应1小时；3-4)过滤，所得溶液用析管透析；3-5)将所得溶液分装冻干，即得聚集诱导发光聚合物；4)标记稀土金属：将100mg步骤3-5)得到的聚集诱导发光聚合物溶于400ul pbs缓冲液中，加入5mm lncl3，37℃下孵育30分钟,得到最终产品：稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物。10.根据权利要求9所述的用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其特征在于，其中，ln为169tm、159tb、165ho或141pr。

技术总结
本发明公开了一种用于质谱流式细胞术的稀土金属配位的聚集诱导发光聚合物，其具有如式Ⅱ所示的化学结构式：其中，z＝1-10，m＝20-50，n＝10-30；AIE荧光单体的结构式如Ⅰ所示：其中，R基团为H、N(CH3)2或N(CH2CH3)2。本发明不同于现有的传统流式荧光标签和质谱流式聚合物金属螯合标签，通过向聚合物链中引入荧光单体的方法将两者结合在一起，制备出了既有荧光性能又有稀土信号的金属/荧光双模标签，能够同时作为荧光标签和金属标签进行传统荧光流式细胞术和新型质谱流式细胞术的检测；本发明所采用的荧光单体为聚集诱导发光(AIE)单体，规避了传统荧光材料荧光聚集淬灭的缺陷。淬灭的缺陷。淬灭的缺陷。


技术研发人员：刘志周 王彤 何良 南雪燕 胡玮 白鹏利
受保护的技术使用者：天津国科医工科技发展有限公司
技术研发日：2022.02.22
技术公布日：2022/11/10