一种评估长白母猪繁殖潜能的方法

一种评估长白母猪繁殖潜能的方法
(一)技术领域
1.本发明涉及一种评估长白母猪繁殖潜能的方法，属于动物遗传育种技术领域。
(二)

背景技术：

2.抗缪勒氏管激素(anti-mμllerian hormone，amh)也被称为缪勒氏管抑制物质(mμllerian inhibiting substance，mis)，最早由alfred(1966)在哺乳动物的雄性胎儿中发现。amh是转化生长因子β(transforming growth fatcor，tgf-β)超家族的一员，只在性腺中表达，具有调控缪勒氏管退化、颗粒细胞分化及抑制原始细胞募集等作用。
3.近年来研究发现amh在血清中含量相对稳定，对卵泡发育起重要调控作用，在人类临床医学中，研究发现amh是众多内分泌激素中随年龄的改变最早发生改变的激素，因此能更好地评价卵巢储备能力。正常排卵的女性血清amh比抑制素b、雌二醇、卵泡刺激素、促黄体生成素等更好地反应卵巢窦卵泡的数量。研究者认为amh是因为与卵子的产量有很强的关联才与辅助生殖有关，因此，amh可以用来预测卵巢的反应能力，也就是说amh能够预测卵泡和胚胎的质量，而其它的标记物则不具备这种功能。测定血清amh值已经用于卵巢疾病的辅助诊断，成为评价卵巢功能储备的一种常用手段，对评价妇女的生育能力具有重要的意义。在畜牧业中，对荷斯坦奶牛的血浆amh浓度研究时发现，牛的血浆amh水平与其胚胎数量成正相关，在发情周期第12天测得的血浆amh水平可以作为选择最适合胚胎生产的牛的最佳参考，在实际生产中，amh检测可以预测和评估牛卵巢储备能力及个体对超数排卵的应答效果，从而选择最佳的供体牛进行卵子供应。
(三)

技术实现要素：

4.本发明目的是提供一种评估长白母猪繁殖潜能的方法。
5.本发明采用的技术方案是：
6.一种评估长白母猪繁殖潜能的方法，所述方法为：长白后备母猪在6月龄时采集血液、制备血清，利用猪amh elisa检测试剂盒检测血清中amh浓度，amh浓度大于6.5ng/ml的母猪优先留种，视育种研究或繁殖生产需要优先使用，amh浓度6.5ng/ml的母猪可考虑淘汰。
7.母猪繁殖潜能的高低直接影响猪场的生产力，但对猪繁殖潜能的测定还未包含在现有的种猪重要经济性状测定中。本发明通过确定利用血清amh浓度评估长白后备母猪繁殖潜能的时间以及检测长白母猪的血清amh浓度与繁殖潜能的相关，最终确定出可以用于长白后备母猪繁殖潜能评估的血清amh浓度范围。
8.具体的，所述方法包括：
9.(1)6月龄长白后备母猪前腔静脉或耳组织采血、离心，取上清制备血清；
10.(2)利用采用猪amh elisa检测试剂盒，elisa法测定血清中amh含量；
11.(3)结果判断：amh浓度大于6.5ng/ml的母猪优先留种(在此范围内血清amh浓度越高的母猪具有更高的优先选留权)，视育种研究或繁殖生产需要优先使用，amh浓度6.5ng/
ml的母猪可考虑淘汰。
12.所述步骤(2)方法如下：(1)设置标准孔、待测样品孔、空白孔，标准品梯度浓度为0、0.25、0.5、1、2、4g/ml；(2)标准品或样品加样50μl后，立即加入检测溶液a 50μl，37℃孵育1h；(3)甩干，洗板3次；(4)加检测溶液b 100μl，37℃孵育30min；(5)洗板5次；(6)加tmb底物90μl，37℃孵育10～20min；(7)加终止液50μl，立即450nm读数。
13.本发明的有益效果主要体现在：采用本发明方法对母猪的繁殖潜能进行早期评估可以大大缩短种畜禽选育时间，能实现母猪的早期选择，尽早淘汰繁殖性能差的母猪，从而节约饲料、能源和水电等消耗，还可节省饲养管理成本，减轻环境污染，使种猪养殖生产提质增效，节本增收，因此具有重要意义。
(四)附图说明
14.图1为1～6月龄长白母猪血清amh变化。
(五)具体实施方式
15.下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
16.实施例1：
17.1、血样采集及血清制备
18.母猪前腔静脉采血5ml，1000
×
g离心20min，取上清制备血清。
19.2、血清amh含量测定。
20.采用猪amh elisa检测试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司)，测定方法为竞争抑制酶联免疫分析法(elisa法)。
21.操作流程为：(1)设置标准孔、待测样品孔、空白孔，稀释标品(0、0.25、0.5、1、2、4g/ml)(2)加样(标准品及样品)50μl后，立即加入检测溶液a 50μl，37℃孵育1h；(3)甩干，洗板3次；(4)加检测溶液b 100μl，37℃孵育30min；(5)洗板5次；(6)加tmb底物90μl，37℃孵育10-20min；(7)加终止液50μl，立即450nm读数。
22.3、确定6月龄长白后备母猪繁殖潜能评估时血清amh的浓度范围。
23.3.1利用血清amh浓度评估长白后备母猪繁殖潜能的时间
24.选择出生相差3天内的长白仔母猪74头，统一饲养管理，检测1～6月龄每个月龄段的amh浓度，结果见图1。利用sas软件的shapiro-wilk检验和kolmogorov-smirnov检验，发现4月龄、5月龄和6月龄中猪血清amh浓度都服从正态分布(p》0.05)，6月龄amh浓度范围更稳定集中。因此，选用6月龄血清amh浓度评估长白后备母猪繁殖潜能较好。3.2血清amh浓度可做为长白母猪繁殖潜能评估的指标
25.测定682头经产母猪的amh浓度，记录采血时的状态(怀孕、哺乳或空怀期)、当前月龄、当前胎次、胎均产仔、总胎次、累计总产仔数、最高产仔数、最低产仔数等各项繁殖性能，结果见表1。
26.数据显示，经产母猪amh浓度与当前胎次、总胎次、累计总产仔、测定月龄、胎均产仔、最高产仔呈正相关，说明amh与母猪的卵巢储备有关，可以作为早期繁殖潜能的检测指标。
27.表1：血清amh与经产母猪各性能之间的相关性分析
[0028][0029][0030]
**p《0.01,*p《0.05
[0031]
3.3长白后备母猪繁殖潜能评估的血清amh浓度范围
[0032]
从前面的研究发现，amh值与母猪的卵巢储备功能有关，在生长发育阶段4月龄后开始稳定，到6月龄时血清amh值最稳定且波动范围较小。结合种猪性能测定时间，用6月龄的amh水平评估母猪的繁殖潜能最佳。
[0033]
收集6月龄长白母猪血液，连续跟踪每头母猪后续4～5胎的繁殖记录，最终得到145头母猪的有效数据。对血清amh含量进行分组，以胎均产仔数作为繁殖潜能的代表指标进行t检验，发现血清amh大于6.5ng/ml的6月龄后备母猪胎均产仔数显著高于小于6.5ng/ml的后备母猪。因此，在后备母猪选留时优先选用amh浓度高于6.5ng/ml的母猪进入核心群种用(amh浓度越高的母猪具有更高的优先选择权)，小于6.5ng/ml的母猪可考虑淘汰。
[0034]
表2：6月龄后备母猪血清amh范围
[0035][0036]
以上所述仅为本技术的优选实施例而已，并不用于限制本技术，对于本领域的技
术人员来说，本技术可以有各种更改和变化。凡在本技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。