一种发酵修护乳及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，特别涉及一种发酵修护乳及其制备方法和应用。


背景技术：

2.牡丹籽油，又称牡丹油，是由牡丹籽提取的木本坚果植物油，牡丹籽油中含有丰富的不饱和脂肪酸、维生素a、维生素e、胡萝卜素等组分，对皮肤具有极好的护理作用，可明显抑制脂质过氧化，抑制炎症反应，促进皮肤毛细血管的微循环，改善新陈代谢，延缓皮肤衰老过程。不过由于牡丹籽油中不饱和脂肪酸占油脂肪酸的比例较高，约91％，存储过程容易有酸败的风险。且酸败过程产生的氧自由基以及醛、酸、酮类物质会对皮肤产生一定刺激性。
3.目前，牡丹籽油在化妆品领域的应用时，主要通过添加二丁基羟基甲苯(bht)和丁基大茴香醚(bha)等抗氧化剂以延缓储存期，然而，过多抗氧化剂的加入容易刺激皮肤，甚至有引发癌症的风险。因此，本领域亟需在不添加抗氧化剂情况下，最大化的降低牡丹籽油本身的酸败速率，并保证牡丹籽油保湿、抗氧化、抗皱、修护的功效，对肌肤无刺激作用，以更好地满足其商品化的需求。


技术实现要素：

4.针对上述现有技术涉及的不足之处，本发明将提供一种发酵修护乳及其制备方法和应用。
5.为实现上述目的，具体包括以下技术方案：
6.一种发酵修护乳，包括如下重量份的制备原料：1～100份
7.大米发酵产物滤液，1～100份乳酸菌发酵产物提取物，1～20份酵母发酵产物提取物，1～20份牡丹籽油。
8.作为本发明优选的实施方式，包括如下重量份的制备原料：40～60份大米发酵产物滤液，10～30份乳酸菌发酵产物提取物，3～10份酵母发酵产物提取物，7～12份牡丹籽油。
9.本发明通过定向生物转化技术，采用特定菌种、特定生物发酵技术，得到高活性、多功效的发酵修护乳。其中，乳酸菌和酵母菌发酵(培养)后，一方面，生物大分子转化为更小的氨基酸、多肽类物质，更有利于皮肤更好的吸收利用；另一方面，发酵产生具有疏水基团的生物大分子，不仅使发酵修护乳获得了超强的水润感，而且可以在不添加乳化剂的条件下，形成稳定的乳液。同时存在的牡丹籽油，赋予发酵修护乳良好的滋润感，最终使得该发酵修护乳具有较好的保湿、抗氧化、抗皱、修护的多重功效。此外，发酵修护乳无需不添加抗氧化剂等化学试剂，也能使得其中的牡丹籽油酸败速率大大降低，同时具备较好的使用安全性，稳定性，属于纯天然植物原料，在化妆品领域具有很好的应用前景。
10.作为本发明优选的实施方式，所述发酵修护乳还包括0.2～2重量份数的防腐剂。
11.作为本发明进一步优选的实施方式，所述防腐剂的重量份数为0.1份
12.作为本发明优选的实施方式，所述防腐剂包括1，2-己二醇、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、苯氧乙醇、苯甲酸钠、山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯中的至少一种。
13.一种发酵修护乳的制备方法，包括如下步骤：
14.(1)将酵母菌接种于大米与水的混合物中进行发酵，再经过灭菌、固液分离后得到大米发酵产物滤液；
15.(2)将乳酸菌接种于培养基进行培养，再经过灭菌、固液分离后得到乳酸菌发酵产物提取物；
16.(3)将酵母菌接种于培养基进行培养，再经过灭菌、固液分离后得到酵母发酵产物提取物；
17.(4)将所述大米发酵产物滤液、乳酸菌发酵产物提取物、酵母发酵产物提取物、牡丹籽油和防腐剂混合，灭菌，得到发酵修护乳。
18.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)所述大米为大米干粉，所述大米干粉的目数为20～50目。
19.作为本发明进一步优选的实施方式，所述大米干粉的目数为30目。
20.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)所述酵母菌为酿酒酵母菌。
21.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)所述酵母菌的菌液浓度为106～109cfu/ml。
22.作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(1)所述酵母菌的菌液浓度为107～108cfu/ml。
23.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)中，所述大米和水的质量比为(1～2):20，酵母菌的菌液和水的质量比为(1～10):500。
24.作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(1)中，所述大米和水的质量比为1.2:20。
25.作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(1)中，所述酵母菌的菌液和水的质量比为5:500。
26.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)所述发酵的温度为25℃～40℃，发酵时间为10h～48h。
27.作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(1)所述发酵的温度为37℃，发酵时间为24h。
28.作为本发明优选的实施方式，步骤(1)所述发酵还在震荡的条件下进行，所述震荡的频率为150～300rpm/min。
29.作为本发明进一步优选的实施方式，所述震荡的频率为200rpm/min。
30.作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述乳酸菌为植物乳酸杆菌。
31.作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述乳酸菌的菌液的浓度106～109cfu/ml。
32.作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(2)所述乳酸菌的菌液的浓度107～108cfu/ml。
33.作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述培养基为mrs培养基。
34.所述mrs培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养基中的质量分数为：蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸氢二铵[(nh4)2hc6h5o7]0.2％，葡萄糖
2％，吐温80 0.1％，乙酸钠(ch3coona
·
3h2o)0.5％，磷酸氢二钾(k2hpo4·
3h2o)0.2％，硫酸镁(mgso4·
7h2o)0.05％g，硫酸锰(mnso4·
h2o)0.025％；ph值为6.2～6.6。
[0035]
作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述乳酸菌的接种量为培养基的体积的0.2％～1％。
[0036]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(2)所述乳酸菌的接种量为培养基的体积的0.5％。
[0037]
作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述培养的温度为28℃～38℃，时间为8h～16h。
[0038]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(2)所述培养的温度为35℃，时间为12h。
[0039]
作为本发明优选的实施方式，步骤(2)所述培养还在震荡的条件下进行，所述震荡的频率为150-300rpm/min。
[0040]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述酵母菌为酿酒酵母菌。
[0041]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述酵母菌的菌液浓度为106～109cfu/ml。
[0042]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(3)所述酵母菌的菌液浓度为107～108cfu/ml。
[0043]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述酵母菌的接种量为培养基的体积的0.1％～1％。
[0044]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(3)所述酵母菌的接种量为培养基的体积的0.2％。
[0045]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述培养的温度为25℃～40℃，培养时间为20h～35h。
[0046]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(3)所述培养的温度为37℃，培养时间为24h。
[0047]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述培养还在震荡的条件下进行，所述震荡的频率为150～300rpm/min。
[0048]
作为本发明优选的实施方式，步骤(3)所述培养基为ypd培养基。
[0049]
作为本发明优选的实施方式，所述ypd培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养基中的质量分数为：酵母粉1％，胰蛋白胨2％，葡萄糖2％，ph值为6.2～7.0。
[0050]
作为本发明优选的实施方式，步骤(1)～(4)中，所述灭菌的温度为110℃～125℃，灭菌时间为15min～30min。
[0051]
作为本发明进一步优选的实施方式，步骤(1)～(4)中，所述灭菌的温度为115℃，灭菌时间为20min。
[0052]
作为本发明优选的实施方式，步骤(1)～(3)中，所述固液分离的方式为离心和/或过滤。
[0053]
作为本发明优选的实施方式，所述离心的转速为2000～5000r/min，离心时间为20～50min。
[0054]
作为本发明进一步优选的实施方式，所述离心的转速为3000r/min，时间为30min。
[0055]
作为本发明优选的实施方式，所述过滤的过滤孔径为0.45μm。
[0056]
本发明所述发酵修护乳液在化妆品中的应用，能够具有较好的保湿、抗氧化、抗皱、修护等多重功效。
[0057]
相对于现有技术，具有如下有益效果：
[0058]
(1)本发明的发酵修护乳具有较好的保湿、抗氧化、抗皱、修护等多重功效，而且本发明发酵修护乳无化学残留，属于纯天然植物原料，对肌肤零负担，具备较好的使用安全性和稳定性，在化妆品领域具有很好的应用前景。
[0059]
(2)本发明的发酵修护乳具有较好的稳定性，能够使得其中的牡丹籽油酸败速率大大降低，更适合长期保存。
具体实施方式
[0060]
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将通过具体对比例和实施例对本发明作进一步说明。
[0061]
以下实施例和对比例所涉及各原料均为本领域现有材料，可通过商业渠道购买或通过现有方法制得。
[0062]
实施例1
[0063]
本实施例的发酵修护乳液包括如下质量份数的制备原料：50份大米发酵产物滤液、25份乳酸菌发酵产物提取物、5份酵母发酵产物提取物、10份牡丹籽油、0.5份1，2-己二醇、0.5份对羟基苯乙酮。
[0064]
具体的制备步骤包括如下步骤：
[0065]
(1)选取30目大米干粉30g和水500g作为底物，接入浓度为107cfu/ml酿酒酵母菌5ml(saccharomyces cerevisiae菌株)，将发酵体系在37℃摇床中，200rpm/min震荡24小时，将得到的大米发酵液115℃高压灭菌20min，灭菌后在3000r/min条件下离心30min，收集上清液，0.45μm滤膜加压过滤，得到大米发酵产物滤液a。
[0066]
(2)将浓度为107cfu/ml的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum菌株)以0.5vol％的比例接种于mrs培养基，37℃、200rpm/min条件下震荡培养12小时，将得到的植物乳酸菌发酵液115℃高压灭菌20min，灭菌后在3000r/min条件下离心30min，收集上清液，得到植物乳酸菌发酵产物提取物b。
[0067]
(3)将浓度为107cfu/ml的酿酒酵母菌(saccharomyces cerevisiae菌株)以0.2vol％的比例接种于ypd培养基，将发酵体系在37℃摇床中，200rpm/min震荡24小时，将得到的酿酒酵母菌发酵液115℃高压灭菌20min，灭菌后在3000r/min条件下离心30min，收集上清液，得到酵母发酵产物提取物c。
[0068]
(4)将50份大米发酵产物滤液a、25份植物乳酸菌发酵产物提取物b和5份酵母发酵产物提取物c，然后加入10份牡丹籽油、0.5份1，2-己二醇、0.5份对羟基苯乙酮，搅拌混合均匀后115℃灭菌20min，制得发酵修护乳液。
[0069]
实施例2
[0070]
与实施例1相比，区别在于：仅将大米发酵产物滤液的份数替换为40。
[0071]
实施例3
[0072]
与实施例1相比，区别在于：仅将大米发酵产物滤液的份数替换为60。
[0073]
实施例4
[0074]
与实施例1相比，区别在于：仅将植物乳酸菌发酵产物提取物的份数替换为10。
[0075]
实施例5
[0076]
与实施例1相比，区别在于：仅将植物乳酸菌发酵产物提取物的份数替换为30。
[0077]
实施例6
[0078]
与实施例1相比，区别在于：仅将酵母发酵产物提取物的份数替换为3。
[0079]
实施例7
[0080]
与实施例1相比，区别在于：仅将酵母发酵产物提取物的份数替换为10。
[0081]
实施例8
[0082]
与实施例1相比，区别在于：仅将牡丹籽油份数替换为7。
[0083]
实施例9
[0084]
与实施例1相比，区别在于：仅将牡丹籽油份数替换为12。
[0085]
对比例1
[0086]
与实施例1相比，区别在于：发酵修护乳液仅缺少大米发酵产物滤液。
[0087]
对比例2
[0088]
与实施例1相比，区别在于：发酵修护乳液仅缺少乳酸菌发酵产物提取物。
[0089]
对比例3
[0090]
与实施例1相比，区别在于：发酵修护乳液仅缺少酵母发酵产物提取物。
[0091]
对比例4
[0092]
与实施例1相比，区别在于：仅缺少牡丹籽油。
[0093]
效果例1
[0094]
稳定性测试
[0095]
油脂在贮藏时不饱和脂肪酸会发生自动氧化，产生过氧化物，进一步分解产生异臭味的现象。高温储存可加速这一反应，高温加速试验的理论根据是描述化学反应速度常数与温度之间关系的arrhenius方程，即温度增加10℃，大多数化学反应速度加倍。
[0096]
实验方法：将实施例1～9和对比例1～4发酵修护乳液样品，以及市售牡丹籽油(含0.1％抗氧化剂二丁基羟基甲苯)分别置于25℃和50℃培养箱中恒温放置2个月后，评价发酵修护乳样品和市售牡丹籽油于50℃下放置2个月后的颜色、气味的变化，实验结果见表1。
[0097]
表1发酵修护乳样品和市售牡丹籽油于50℃下放置2个月后的稳定性测试结果
[0098]
[0099][0100]
对比实施例1～9和市售牡丹籽油的稳定性测试结果可知，本发明所述的发酵修护乳在50℃下放置2个月，其颜色和气味相比于25℃下放置2个月的发酵修护乳无明显的变化。但是在50℃下放置2个月市售的牡丹籽油，相比在25℃下放置2个月的市售的牡丹籽油，出现了颜色变色(即颜色加深)和有明显的酸败味的现象。可见，本发明的发酵修护乳具有良好的稳定性，其酸败速率显著低于含抗氧化剂的牡丹籽油。
[0101]
效果例2
[0102]
自由基清除测试
[0103]
dpph(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)是一种很稳定的氮中心自由基。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收值，吸光度与浓度呈线性关系。当有自由基清除剂存在时，可以结合或替代dpph，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，由此可评价样品清除自由基的能力，即抗氧化活性的强弱。
[0104]
实验方法：将受试样品用蒸馏水配成1mg/ml的样品溶液，备用。用95％的乙醇溶液配置0.12mg/ml dpph乙醇溶液作为dpph标准溶液，取2ml dpph标准溶液于试管中，加入2ml样品溶液，混合均匀，室温放置30min后，在517nm测定吸收光度a，用浓度1mg/ml的vc作为阳性对照，蒸馏水为空白对照(作为阴性对照)。每个实验重复三次，取其平均值作为最后结果。根据下列公式测定dpph清除率，结果见表2。
[0105]
dpph清除率＝[1-(a1-a2)/a0]
×
100％；
[0106]
a1：2ml样品溶液 2mldpph标准溶液的吸光度；a2：2ml样品溶液 2ml95％乙醇的吸光度；a0：2ml95％乙醇 2mldpph标准溶液的吸光度。
[0107]
表2 dpph清除率
[0108][0109]
从实施例1～9的dpph清除率可看出，本发明的发酵修护乳清除自由基的效果均高于vc，具有良好的抗氧化效果。
[0110]
另外，从实施例1与对比例1～4的对比可看出，大米发酵产物滤液、乳酸菌发酵产物提取物、酵母发酵产物提取物、牡丹籽油在抗氧化方面具有显著的协同增效作用。
[0111]
效果例3
[0112]
人体皮肤斑贴试验
[0113]
选取30名年龄为18～55岁之间的无皮肤病、无过敏史的健康受试者，参照《化妆品安全技术规范》(2015版)规定的人体皮肤斑贴试验方法，对实施例1所制得的发酵修护乳进行人体皮肤型斑贴试验。
[0114]
选用合格斑贴材料，取0.02～0.025g样品于斑贴器内，对照区为空白(不置任何物质)。将样品和空白对照均贴于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，24小时后去除受试物。在去除受试物斑试器后分别于0.5小时、24小时和48小时检查样品区和对照区的皮肤状况。
[0115]
受试区皮肤不良反应的分级标准：0分为阴性反应；1分为可疑：仅有微弱红斑；2分为弱阳性反应：红斑、浸润、水肿、可有丘疹；3分为强阳性反应：红斑、浸润、水肿、可有丘疹，反应超出受试区；4分为极强的阳性反应：明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹，反应超出受试区，测试结果见表3。
[0116]
表3去除斑试器观察结果
[0117]
[0118]
从表3可看出，30名受试者都通过斑贴试验，样品受试区去除受试物斑试器0.5小时、24小时和48小时，都未观察到皮肤红疹、丘疹、水疱等不良反应。另外，对其他实施例2～9的发酵修护乳也进行了斑贴试验，结果均显示对人皮肤无不良反应，由此可判断本发明所制得的发酵修护乳温和，引起皮肤刺激的可能性低。
[0119]
效果例4
[0120]
保湿和修护效果测试
[0121]
皮肤角质层水分含量测试原理是基于水和其它物质的介电常数变化相当大，按照含水量的不同，适当形状的测量用电容器会随着皮肤角质层的电容量的变化而变化，而角质层的电容量又是在测量的范围内，这样就可以测量出皮肤的水分含量。
[0122]
经皮水分丢失(tewl)通过测定皮肤表面的水蒸气压梯度表明水分散失的情况，从而反映皮肤的水通透屏障。当屏障功能受损时，tewl值增高；相反地，tewl降低，反应屏障修护。
[0123]
选取20～60岁面部有一定泛红、经皮水分流失值tewl基础值＞12g/mg2h、角质层水分含量小于60c.u的敏感肌志愿者180名，志愿者平均分为14组，分别分发实施例1～9和对比例1～4制得的样品，以及市售牡丹籽油。志愿者每天早晚清洁脸部皮肤后，用手将适量样品涂抹于全脸，受试期间脸部不涂抹其他的化妆品或药物，连续使用4周，用ck多功能皮肤测试仪(德国)评测受试者使用相应的产品前后皮肤水分含量变化率和tewl值变化率，从而确定产品的保湿和修护效果，测试结果见表4。
[0124]
水分含量变化率＝[(使用样品后-使用样品前)/使用样品前]
×
100％。
[0125]
tewl值变化率＝[(使用样品后-使用样品前)/使用样品前]
×
100％。
[0126]
表4角质层水分含量和tewl值变化率
[0127][0128]
从表4中可看出，由本发明所述的发酵修护乳能够显著增加角质层水分含量并减少皮肤水分流失，其中实施例1的发酵修护乳为最佳实施方案，能够最为显著的增加角质层水分含量和减少皮肤水分流失。
[0129]
从实施例1与对比例1～4的对比可看出，大米发酵产物滤液、乳酸菌发酵产物提取物、酵母发酵产物提取物、牡丹籽油在提高角质层水分含量和降低tewl值方面具有显著的协同增效作用。
[0130]
效果例5
[0131]
抗皱效果测试
[0132]
采用图像采集仪器获得条纹光投影下皮肤的三维图像，分析图像得到皱纹参数，是化妆品抗皱功效测试的常用方法。
[0133]
选取35～60岁眼周皱纹较为明显的志愿者140名，平均分为14组，分别分发实施例1～9和对比例1～4制得的样品，以及市售牡丹籽油。志愿者每天早晚清洁脸部皮肤后，用手将适量样品涂抹于全脸，受试期间脸部不涂抹其他的化妆品或药物，连续使用4周，用ck多功能皮肤测试仪(德国)评测受试者使用相应的产品前后眼周皱纹数量值变化率，从而确定产品的抗皱效果，测试结果见表5。
[0134]
皱纹数量变化率＝[(使用样品后-使用样品前)/使用样品前]
×
100％。
[0135]
表5皱纹数量变化率
[0136][0137]
从表5中可看出，本发明所述的发酵修护乳具有显著抗皱效果，其中实施例9为最佳实施方案，能够最为显著的降低皱纹数量。
[0138]
实施例1、实施例8、实施例9以及对比例4中，皱纹数量改善程度由大到小，依次是实施例9、实施例1、实施例8、对比例4，说明本发明所述的发酵修护乳的抗皱功效与牡丹籽油剂量具有一定依赖效应。
[0139]
综上所述，本发明所述的发酵修护乳具有不易酸败和安全无刺激的特点，且同时具有抗氧化、保湿、修护、抗皱多重功效，适用于各种肤质。
[0140]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。