一种防治新型冠状病毒感染的中药组合物的制作方法

1.本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种防治新型冠状病毒感染的药物 组合物。


背景技术：

2.目前新型冠状病毒肺炎(covid-19)尚无特效治疗药物，唯一有效的策略 是早期发现、早期隔离、早期诊治、早期预防。中医中药在新冠肺炎患者的治 疗中就表现出了良好特效，大大减少了病死率。为预防新冠感染，针对新冠发 病特点，各地相继推出了用于预防的中药汤剂、香囊、熏洗剂等，都对疫情的 控制起到了很大的帮助。
3.中医中药的核心是辨证论治，因时因地因人制宜，虽然全国各个地区推出 了用于预防新冠感染的中药处方，但是对于其确切的抗感染或预防机制尚不明 确，在全国甚至全球范围内推广中药预防方均为不利，从而限制了中医药的优 势发挥。因此，急需更多药效及预防机制明确的用于预防新冠感染的中药处方， 供民众进行选择。


技术实现要素：

4.基于此，本发明的目的在于提供一种中药组合物，其能有效改善 sars-cov-2的s蛋白诱导的肺细胞和肠细胞损伤，且调节细胞释放的炎性状 态，有效防治新型冠状病毒的感染引起的肺炎。
5.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
6.一种中药组合物，所述中药组合物按重量份计，包含以下组分：黄芪15～30 份、炒苍术5～15份、防风5～15份、太子参25～40份、甘草5～15份、紫苏叶5～15 份、藿香5～15份、青蒿5～15份、桔梗5～15份、红枣15～30份、柴胡5～15份、 神曲5～15份。
7.在一些实施例中，所述中药组合物按重量份计，包含以下组分：黄芪20～30 份、炒苍术10～15份、防风10～15份、太子参30～40份、甘草10～15份、紫苏 叶10～15份、藿香10～15份、青蒿10～15份、桔梗10～15份、红枣20～30份、 柴胡10～15份、神曲10～15份。
8.优选地，在一些实施例中，所述中药组合物按重量份计，包含以下组分： 黄芪20～25份、炒苍术10～15份、防风10～15份、太子参30～35份、甘草10～15 份、紫苏叶10～15份、藿香10～15份、青蒿10～15份、桔梗10～15份、红枣20～25 份、柴胡10～15份、神曲10～15份。
9.更优选地，在一些实施例中，所述中药组合物按重量份计，包含以下组分： 黄芪20份、炒苍术10份、防风10份、太子参30份、甘草10份、紫苏叶10 份、藿香10份、青蒿10份、桔梗10份、红枣20份、柴胡10份、神曲10份。
10.本发明还提供了上述中药组合物在制备防治冠状病毒感染的药物中的应用。
11.在一些实施例中，所述冠状病毒为sars-cov-2。
12.本发明还提供一种防治冠状病毒感染的药物，所述药物包含上述中药组合 物和药物学上可接受的辅料。
13.在一些实施例中，所述药物的剂型为汤剂、胶囊剂、颗粒剂、水蜜或大蜜 丸剂、口服液。
14.在一些实施例中，所述药物的剂型为汤剂。
15.在一些实施例中，所述汤剂的制备方法包括以下步骤：所述汤剂的制备方 法包括以下步骤：按配方取各组分，用水浸泡30～60min，加热至沸腾，继续煎 煮15～45min，然后弃渣取上清，得所述汤剂。
16.在其中一些实施例中，所述汤剂的制备方法包括以下步骤：按配方取各组 分，用水浸泡30min，加热至沸腾，继续煎煮20min，然后弃渣取上清，得所述 汤剂
17.本发明中药组合物包含黄芪、炒苍术、防风、太子参、甘草、紫苏叶、藿 香、青蒿、桔梗、红枣、柴胡、神曲；其中，黄芪为君药，防风、苍术为臣药， 藿香、青蒿、紫苏叶、桔梗、柴胡为佐药，太子参、甘草、红枣、神曲为使药。 各组分相互配合，相辅相成，能明显改善sars-cov-2的s蛋白诱导的肺细胞 和肠细胞损伤；降低s蛋白诱导的细胞死亡；降低s蛋白诱导的il-6、tnf-α、 il-10水平，同时提高nf-κb、il-13和tgf-β1水平。因此，所述中药组合物能 有效防治sars-cov-2感染引起的肺炎，用于制备防治sars-cov-2感染的药 物。
附图说明
18.图1为含药血清对s蛋白诱导的肺泡上皮细胞损伤的改善作用结果图。
19.图2为含药血清对s蛋白诱导的结肠上皮细胞损伤的改善作用结果图。
20.图3为含药血清对s蛋白诱导的小肠上皮细胞损伤的改善作用结果图。
21.图4为含药血清显著降低s蛋白诱导的肺泡上皮细胞通透性增加的结果图。
22.图5为含药血清显著降低s蛋白诱导的结肠上皮细胞通透性增加的结果图。
23.图6为含药血清显著降低s蛋白诱导的小肠上皮细胞通透性增加的结果图。
24.图7为含药血清保护s蛋白诱导的肺泡上皮细胞死亡的结果图。
25.图8为含药血清保护s蛋白诱导的结肠上皮细胞死亡的结果图。
26.图9为含药血清保护s蛋白诱导的小肠上皮细胞死亡的结果图。
27.图10为含药血清对s蛋白诱导的肺泡上皮细胞炎性因子释放水平影响结果 图。
28.图11为含药血清对s蛋白诱导的结肠上皮细胞炎性因子释放水平影响结果 图。
29.图12为含药血清对s蛋白诱导的小肠上皮细胞炎性因子释放水平影响结果 图。
具体实施方式
30.本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或 按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售 产品。
31.除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技 术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是 为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。
32.本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包 含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列 出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这 些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
33.以下结合具体实施例对本发明进行说明。
34.黄芪、炒苍术、防风针对体虚易感之体，存在正气不足、卫表不固之证， 宜益气固表；太子参、紫苏叶针对气虚卫表不固，易受外界六淫泄气及瘟毒、 疫疠之气侵袭之证，宜益气解表；藿香、青蒿、炒苍术宜芳香化湿、辟秽化浊； 太子参、红枣、甘草针对易感患者脾虚证，宜补中益气、健脾和中；桔梗针对 外感邪气侵袭卫表，卫阳被遏，郁而发热之证，宜解表退热；柴胡针对外感邪 气侵袭卫表，卫阳被遏，郁而发热之证，宜解表退热；神曲针对防止六淫、瘟 毒、疫疠之邪直中脏腑，损害脾胃，导致食滞内停，影响气血生化。其中，黄 芪为君药，防风、苍术为臣药，藿香、青蒿、紫苏叶、桔梗、柴胡为佐药，太 子参、甘草、红枣、神曲为使药。各组分相互配合，相辅相成，能明显改善 sars-cov-2的s蛋白诱导的肺细胞和肠细胞损伤；降低s蛋白诱导的细胞死 亡；降低s蛋白诱导的il-6、tnf-α、il-10水平，同时提高nf-κb、il-13和 tgf-β1水平，有效防治sars-cov-2感染引起的肺炎。
35.本发明所述“防治”为预防和/或治疗。
36.实施例1
37.本实施例提供一种汤剂，其包含以下组分：黄芪20g炒苍术10g防风10g 太子参30g甘草10g紫苏叶10g藿香10g(后下)青蒿10g(后下)桔梗10g 红枣20g柴胡10g神曲10g。
38.上述汤剂的制备方法如下：将上述组分用清水(加水量为没过药材约 2～3cm)事先浸泡半小时后，先用武火加热至沸腾，再用文火继续煎煮20分钟， 然后弃渣取上清，得所述汤剂。
39.实施例2
40.本实施例研究实施例1所述汤剂对新型冠状病毒感染的防治效果。
41.一、实验方法
42.1、先将实施例1所述汤剂(以下简称防感汤)进行大鼠灌胃5天，获取中 药含药血清；灌胃剂量为2.5ml/只，每天灌胃1次。
43.2、5天后，采集大鼠血清，得到含药血清，将中药含药血清先预处理体外 培养的肺泡上皮细胞、小肠上皮细胞和结肠上皮细胞，48小时后，再加入一定 浓度(500ng/ml)的重组型sars-cov-2的s蛋白(p2331，上海碧云天)，处 理48小时；
44.3、通过细胞活力、细胞通透性、细胞凋亡和炎性因子指标的变化来判断防 感汤对sars-cov-2的s蛋白诱导的肺细胞和肠细胞损伤的保护效应及机制。
45.(1)细胞活力检测方法如下：采用cell counting kit简称cck-8试剂盒的 方法检测。将细胞(1
×
104/孔)接种于96孔板中，每组5个重复，加入s蛋白 和含药血清处理后，加入cck-8液100μl/孔，37℃、5％co2培养箱中孵育3小 时，使用酶标仪在450nm波长处测定od值。
46.(2)细胞通透性检测方法如下：采用hrp法：1)将细胞培养基、0.25％胰 酶和pbs平衡至室温。2)弃掉旧培养基，pbs洗2遍，加入适量的胰酶，置于 37℃消化1～2分钟。3)加入培养基终止消化，吹打收集细胞。调节细胞密度，将 细胞接种在双层通透的培养皿(transwell，0.4μm)的小室中，细胞接种密度为 3
×
105/孔。4)细胞融合成单层时，按组别加入相应的含不同浓度sars-cov-2 的培养基进行培养。5)分别在培养24、36、48h时，更换上下室培养基，将含有 0.5um hrp的无血清培养基加入transwell的上室中，37℃孵育1h后收集池底 液体，测定hrp通透率。6)在96孔板内加入10ul细胞收集液；7)加入100ultmb 显
色液；8)避光孵育3分钟，直至显色至预期深浅；9)加入100ultmb显色终止 液，在450nm测定吸光度以表示细胞单层通透性变化。
47.(3)细胞凋亡蛋白检测方法如下：弃掉原培养基，用pbs洗2遍。加入ripa (含1％pmsf)，用细胞刮刀刮下细胞，收集在1.5mlep管中，冰上摇晃60分 钟，于4℃、12000rpm下离心20分钟，取上清移至新的ep管中，采用bradford 法进行蛋白浓度测定，以及sds－page电泳，80v跑过浓缩胶后转换电压至 120v，待溴酚兰跑至胶板底部刚好没有跑出即可，转膜：将电流调整到恒流 200ma，转移约1-3h。5％脱脂牛奶封闭液室温封闭2h，用封闭液将对应的 caspase3和bcl-2一抗稀释成一定的浓度(1：1000)，内参gapdh一抗的稀 释终浓度为1：1000，然后温育1.5h或4℃孵育过夜。用tbst洗3次，每次 5min。用封闭液将二抗稀释成一定的浓度(1：10000)，然后温育1.5h。用tbst 清洗4次，每次5min，然后曝光。
48.(4)炎性因子指标包括il-6、tnf-α、il-10、nf-κb、il-13和tgf-β1采 用elisa法检测，检测方法如下：将细胞处理后在4℃、2500rpm/min离心 20min，收集上清。按照说明书配制标准品溶液。实验分别设空白对照孔(不加 标准品、样品及酶标试剂，其余操作相同)、标准孔、待测样品孔。每孔加入 50μl，封板膜封板后置于37℃温育30min。弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液， 静置30s后，甩干，重复5次，拍干。每孔加入50μl酶标试剂，封板膜封板后 置于37℃温育30min。弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后，甩干， 重复5次，拍干。每孔先加入50μl显色试剂a，再加入50μl显色试剂b，轻 轻震荡混匀，37℃避光显色10min。再加入50μl终止液。450nm波长下检测吸 收值。
49.二、实验结果
50.不同浓度含药血清(drug serum)明显提高s蛋白处理后的肺泡上皮细胞、 小肠上皮细胞和结肠上皮细胞活力，改善s蛋白诱导的肺细胞损伤和肠细胞损 伤，结果如图1～3所示。
51.如图4～6所示，防感汤中药含药血清可以显著降低s蛋白诱导的细胞通透 性增加，表明肺泡上皮细胞、小肠上皮细胞和结肠上皮细胞受损受到了保护。
52.防感汤中药含药血清保护了s蛋白诱导的肺泡上皮细胞、小肠上皮细胞和 结肠上皮细胞死亡，在其干预下，促凋亡蛋白caspase3表达减少，而抗凋亡蛋 白bcl-2表达增加，结果如图7～9所示。
53.防感汤改善了s蛋白诱导的炎性因子释放水平，调节着整体的炎性状态， 防感汤含药血清降低了s蛋白诱导的il-6、tnf-α、il-10水平，同时提高了 nf-κb、il-13和tgf-β1水平，结果如图10～12所示。
54.上述结果表明，实施例1所述汤剂能明显改善sars-cov-2的s蛋白诱导 的肺细胞和肠细胞损伤；降低s蛋白诱导的细胞死亡；降低s蛋白诱导的il-6、 tnf-α、il-10水平，同时提高nf-κb、il-13和tgf-β1水平。因此，本发明中 药组合物能有效防治sars-cov-2感染引起的肺炎。
55.本发明中药组合物尤其适用于防治气候温暖潮湿的岭南地区的新型冠状病 毒感染。
56.以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对 以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技 术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
57.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细， 但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和 改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附 权利要求为准。