稳定的无环糊精的卡非佐米配制品的制作方法

稳定的无环糊精的卡非佐米配制品
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年1月10日提交的美国临时专利申请号62/959,833的优先权益，该临时专利申请通过引用以其全文并入。
技术领域
3.本披露提供了一种适于注射的在水性溶液中稳定的无环糊精的卡非佐米配制品，一种包含所述无环糊精的卡非佐米配制品的试剂盒，以及用于制备所述无环糊精的卡非佐米的方法。这种配制品、试剂盒和方法大幅提高卡非佐米在水性溶液中的溶解度和稳定性，并且促进它们的制造和施用。


背景技术：

4.卡非佐米是经批准用于治疗多发性骨髓瘤的选择性蛋白酶体抑制剂。卡非佐米是具有以下化学结构的四肽环氧酮蛋白酶体抑制剂：
[0005][0006]
其不可逆地结合20s蛋白酶体的n-末端含有苏氨酸的活性位点，以及26s蛋白酶体中的蛋白水解核心颗粒。在实体和血液肿瘤细胞中，卡非佐米具有体外抗增殖和促凋亡活性。动物中，卡非佐米抑制血液和组织中的蛋白酶体活性并且延迟多发性骨髓瘤、血液和实体肿瘤模型中的肿瘤生长。
[0007]
卡非佐米在含有10mg、30mg或60mg活性成分的单次剂量小瓶中以名称进行商业销售。除了冻干的卡非佐米，每小瓶还含有用于ph调整(目标ph 3.5)的磺丁基醚-β-环糊精、柠檬酸和氢氧化钠。
[0008]
为获得改善的卡非佐米组合物已付出了许多努力。例如，已经探索经取代的环糊精添加剂以增强活性成分的溶解度。然而，经取代的环糊精的高成本和受限的可及性限制它们在药物组合物中的使用。


技术实现要素：

[0009]
卡非佐米具有极低的水溶解度，其ph和浓度易受影响，并且具有易受亲核攻击的环氧化物环，所有这些都对制备不使用环糊精的稳定的卡非佐米配制品提出了许多挑战。仍然需要改善的卡非佐米配制品，这些卡非佐米配制品具有改善的易制性、施用方式和随
时间的稳定性。仍然需要易于健康护理提供者制备和施用的配制品。仍然需要尤其当在环境条件下储存时，具有改善的随时间的稳定性的无环糊精的卡非佐米配制品。
[0010]
本发明的目的是提供稳定的、随时可用的或随时可稀释的无环糊精的卡非佐米配制品。
[0011]
本发明的另一目的是提供包含稳定的、随时可用的或随时可稀释的(例如冻干粉或冻干饼)无环糊精的卡非佐米配制品的试剂盒。
[0012]
本发明的另一目的是提供用于制备稳定的、随时可用的或随时可稀释的无环糊精的卡非佐米配制品的方法。
[0013]
本发明的另一目的是提供稳定的、随时可用的或随时可稀释的适于注射的无环糊精的卡非佐米配制品，并且其中注射经静脉内或皮下施用。
[0014]
本发明的又另一目的是提供通过施用稳定的随时可用的或随时可稀释的无环糊精的卡非佐米配制品治疗多发性骨髓瘤患者的方法。
[0015]
在一个实施例中，本发明提供了一种无环糊精的药物组合物，该药物组合物包含：
[0016]
(i)具有如下化学结构的卡非佐米：
[0017]
或其药学上可接受的盐；
[0018]
(ii)包含适于注射的药学上可接受的溶剂的溶剂系统，该溶剂系统选自由以下组成的组：二甲亚砜(dmso)、n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)、二甲基乙酰胺或乳酸乙酯；任选地在第一共增溶剂的存在下，共溶剂系统选自c
1-4
烷基醇、聚乙二醇(peg)；以及任选地在第二共增溶剂的存在下，ph在2.5至4.5之间的水性溶液；
[0019]
其中所述组合物是随时可用的注射剂或作为冻干粉或冻干饼获得；并且其中该注射剂经静脉内或皮下施用。
[0020]
在实施例2中，本发明提供了根据实施例1所述的无环糊精的药物组合物，其中该溶剂系统是二甲亚砜、n-甲基-2-吡咯烷酮或二甲基乙酰胺。
[0021]
在实施例3中，本发明提供了根据实施例1或2中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中任选地在该第一共增溶剂的存在下，该共溶剂系统是乙醇和聚乙二醇的混合物或叔丁醇和聚乙二醇的混合物。
[0022]
在实施例4中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该共溶剂系统是75％至92％peg400:乙醇(1:1，w/w)并且在不存在第一共增溶剂的情况下。
[0023]
在实施例5中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该共溶剂系统在第一共增溶剂的存在下是乙醇和peg400的混合物，该第一共增溶剂选自酸、酯、有机盐、有机碱或c
1-4
烷基醇。
[0024]
在实施例6中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该第一共增溶剂是选自以下的酸或酯：乳酸、马来酸、柠檬酸、苯甲酸、苯磺酸、乙酸或蔗糖椰油酸酯。
[0025]
在实施例7中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该共溶剂系统是选自苯扎氯铵或硫酸鱼精蛋白的有机盐。
[0026]
在实施例8中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该第一共增溶剂是乙醇胺或异丙醇。
[0027]
在实施例9中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该共溶剂系统选自由以下组成的组：75％至92％peg400:乙醇(1:1，w/w)；在peg400:乙醇中1.2％至5％乳酸；在peg400:乙醇中1.2％至5％马来酸；在peg400:乙醇中4.6％苯扎氯铵；在peg400:乙醇中1％至3.3％硫酸鱼精蛋白；在peg400:乙醇中28％至30％hs solutol 15；在peg400:乙醇中32％蔗糖椰油酸酯；在peg400:乙醇中5％苯甲酸；5％苯磺酸、peg400:乙醇；10％异丙醇、peg400:乙醇；在peg400:乙醇中1％至5％柠檬酸；在peg400:乙醇中1.2％至5％乙酸；或在peg400:乙醇中5％乙醇胺。
[0028]
在实施例10中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该共溶剂系统是在peg400:乙醇中1.2％至5％乳酸。
[0029]
在实施例11中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为1.5:2。
[0030]
在实施例12中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为0.4:2。
[0031]
在实施例13中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中最终最大乳酸浓度是0.15％。
[0032]
在实施例14中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该水性溶液的ph在3.0至3.5之间，并且在不存在第二共增溶剂的情况下。
[0033]
在实施例15中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该水性溶液的ph在3.0至3.5之间。
[0034]
在实施例16中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该水性溶液的ph在3.0至3.5之间，并且第二共增溶剂选自有机糖、水溶性聚合物、酸、或氨基酸或其任何组合。
[0035]
在实施例17中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该第二共增溶剂是右旋糖、甘露醇、甘氨酸、n-乙烯基吡咯烷酮聚合物、丁酸、己二酸、苯丙氨酸、精氨酸hcl、色氨酸、或n-乙酰基色氨酸、或其任何组合。
[0036]
在实施例18中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该第二共增溶剂是n-乙烯基吡咯烷酮聚合物、甘露醇、或甘氨酸、或其任何组合。
[0037]
在实施例19中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中该第二共增溶剂是聚维酮(1-ethenylpyrrolidin-2-one)(pvp；也称为聚乙烯吡咯烷酮)、甘露醇、或甘氨酸、或其任何组合。各种pvp是本领域技术人员已知的，例如参见https://www.brenntag.com/media/documents/bsi/product_data_sheets/material_science/ashland_polymers/pvp_polymers_brochure.pdf。pvp有若干等级的分子量和k值
(1％溶液的粘度)，例如pvp k-12、k-15、k17、k-30、k-60、k-90、或k-120。
[0038]
在实施例20中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述pvp的分子量范围是3,000mw至40,000mw。
[0039]
在实施例21中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述pvp的分子量范围是10,000mw至17,000mw。
[0040]
在实施例22中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述pvp的分子量范围是10,000mw。
[0041]
在实施例23中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述pvp选自由以下组成的组：24％pvp 10,000mw、29％pvp 10,000mw、10％pvp 12,000mw、20％pvp 12,000mw、24％pvp 12,000mw、或24％pvp 17,000mw。
[0042]
在实施例24中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物包含0.75％至1％的二甲亚砜、1.0％至1.8％的peg400、1.0％至1.8％的乙醇、0.10％至0.25％乳酸、20％至30％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0043]
在实施例25中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物包含0.2％至2％的二甲亚砜、0.5％至2.5％的peg400、0.5％至2.5％的乙醇、0.05％至0.5％乳酸、10％至40％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0044]
在实施例26中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物包含0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1.0％、1.05％、1.1％、1.15％、或1.2％的二甲亚砜；1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的peg400；1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的乙醇；0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、和0.35％乳酸；约25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、和33％pvp 10,000mw；并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0045]
在实施例27中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物包含约0.85％的二甲亚砜、约1.4％的peg400、约1.4％的乙醇、约0.15％乳酸、约28.8％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0046]
在实施例28中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物具有200mosmo至600mosmo的溶液渗透压。
[0047]
在实施例29中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物具有250mosmo至400mosmo的溶液渗透压。
[0048]
在实施例30中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物具有280mosmo至320mosmo的溶液渗透压。
[0049]
在实施例31中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物具有280、290、300、310、或320mosmo的溶液渗透压。
[0050]
在实施例32中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物是随时可用的注射剂。
[0051]
在实施例33中，本发明提供了根据前述实施例中任一项所述的无环糊精的药物组合物，其中所述组合物作为冻干粉或冻干饼获得。
[0052]
在实施例34中，本发明提供了根据实施例33所述的无环糊精的药物组合物，其中所述冻干粉或冻干饼可以在不到5分钟内复原。
[0053]
在实施例35中，本发明提供了卡非佐米注射剂试剂盒，其包含：
[0054]
(i)包含稳定的冻干粉或冻干饼的产物小瓶药物组合物，该冻干粉或冻干饼通过包括以下步骤的方法制备：
[0055]
(a)将所述卡非佐米或其药学上可接受的盐溶解于二甲亚砜、c
1-4
烷基醇和聚乙二醇的混合物、以及乳酸中以形成溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在20mg/ml至50mg/ml之间；
[0056]
(b)用ph在2.5至4.5之间的水溶性聚合物与糖混合物的酸性水性溶液将所述卡非佐米溶液稀释以形成溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间；以及
[0057]
(c)冷冻干燥在步骤(b)获得的溶液；以及
[0058]
(ii)包含无菌水的复原小瓶组合物。
[0059]
其中所述药物组合物是无环糊精的，并且该注射剂经静脉内或皮下施用。
[0060]
在实施例36中，本发明提供了根据实施例35所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中所述水溶性聚合物是聚维酮(pvp)，并且所述糖是甘露醇或甘氨酸或其组合。
[0061]
在实施例37中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中所述水溶性聚合物是pvp，其分子量范围是3,000mw至40,000mw；10,000mw至17,000mw；或10,000mw；并且所述糖是甘露醇或甘氨酸。
[0062]
在实施例38中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中所述水溶性聚合物是24％pvp 10,000mw、29％pvp 10,000mw、10％pvp 12,000mw、20％pvp 12,000mw、24％pvp 12,000mw、或24％pvp 17,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0063]
在实施例39中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw、或24％pvp 12,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0064]
在实施例40中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0065]
在实施例41中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中所述酸性水性溶液的ph范围在3.0-3.5之间。
[0066]
在实施例42中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.75％至1％的二甲亚砜、1.0％至1.8％的peg400、1.0％至1.8％的乙醇、0.10％至0.25％乳酸、20％至30％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0067]
在实施例43中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.2％至2％的二甲亚砜、0.5％至2.5％的peg400、0.5％至2.5％的乙醇、0.05％至0.5％乳酸、10％至40％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0068]
在实施例44中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1.0％、1.05％、1.1％、1.15％、或1.2％的二甲亚砜；1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的
peg400；1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的乙醇；0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、和0.35％乳酸；约25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、和33％pvp 10,000mw；并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0069]
在实施例45中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液包含约0.85％的二甲亚砜、约1.4％的peg400、约1.4％的乙醇、约0.15％乳酸、约28.8％pvp10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0070]
在实施例46中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液具有200mosmo至600mosmo的溶液渗透压。
[0071]
在实施例47中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液具有250mosmo至400mosmo的溶液渗透压。
[0072]
在实施例48中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液具有280mosmo至320mosmo的溶液渗透压。
[0073]
在实施例49中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中形成的溶液具有280、290、300、310或320mosmo的溶液渗透压。
[0074]
在实施例50中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中在步骤(b)中卡非佐米或其所述盐的浓度是2mg/ml。
[0075]
在实施例51中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为1.5:2。
[0076]
在实施例52中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为0.4:2。
[0077]
在实施例53中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中该注射剂经静脉内施用。
[0078]
在实施例54中，本发明提供了根据实施例36所述的卡非佐米注射剂试剂盒，其中该注射剂经皮下施用。
[0079]
在实施例55中，本发明提供了一种制备复原后适于注射的无环糊精的卡非佐米冻干粉或冻干饼的方法，该方法包括以下步骤：
[0080]
(a)将该卡非佐米或其药学上可接受的盐溶解于二甲亚砜、c
1-4
烷基醇和聚乙二醇的混合物、以及乳酸中以形成溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在20mg/ml至50mg/ml之间；
[0081]
(b)用ph在2.5至4.5之间的水溶性聚合物与糖混合物的酸性水性溶液将该卡非佐米溶液稀释以形成溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间；以及
[0082]
(c)冷冻干燥在步骤(b)获得的溶液。
[0083]
在实施例56中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中所述水溶性聚合物是聚维酮(pvp)并且所述糖是甘露醇或甘氨酸或其组合。
[0084]
在实施例57中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中所述水溶性聚合物pvp的分子量范围是3,000mw至40,000mw；10,000mw至17,000mw；或10,000mw；并且所述糖是甘露醇或甘氨酸。
[0085]
在实施例58中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中所述水溶性聚合
物是24％pvp 10,000mw、29％pvp 10,000mw、10％pvp 12,000mw、20％pvp 12,000mw、24％pvp 12,000mw、或24％pvp 17,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0086]
在实施例59中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw、或24％pvp 12,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0087]
在实施例60中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw，并且所述糖是甘露醇。
[0088]
在实施例61中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中所述酸性水性溶液的ph范围在3.0-3.5之间。
[0089]
在实施例62中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.75％至1％的二甲亚砜、1.0％至1.8％的peg400、1.0％至1.8％的乙醇、0.10％至0.25％乳酸、20％至30％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0090]
在实施例63中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.2％至2％的二甲亚砜、0.5％至2.5％的peg400、0.5％至2.5％的乙醇、0.05％至0.5％乳酸、10％至40％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0091]
在实施例64中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液包含0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1.0％、1.05％、1.1％、1.15％、或1.2％的二甲亚砜；1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的peg400；1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的乙醇；0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、和0.35％乳酸；约25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、和33％pvp 10,000mw；并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0092]
在实施例65中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液包含约0.85％的二甲亚砜、约1.4％的peg400、约1.4％的乙醇、约0.15％乳酸、约28.8％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0093]
在实施例66中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液具有200mosmo至600mosmo的溶液渗透压。
[0094]
在实施例67中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液具有250mosmo至400mosmo的溶液渗透压。
[0095]
在实施例68中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液具有280mosmo至320mosmo的溶液渗透压。
[0096]
在实施例69中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中形成的溶液具有280、290、300、310或320mosmo的溶液渗透压。
[0097]
在实施例70中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中该卡非佐米或其所述盐的浓度是2mg/ml。
[0098]
在实施例71中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为1.5:2。
[0099]
在实施例72中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中在步骤(b)中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为0.4:2。
[0100]
在实施例73中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中该注射剂经静脉内施用。
[0101]
在实施例74中，本发明提供了根据权利要求55所述的方法，其中该注射剂经皮下施用。
[0102]
在实施例75中，本发明提供了一种在需要治疗的受试者中治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括施用治疗有效量的根据实施例1至34中任一项所述的无环糊精的药物组合物、或根据实施例35至54中任一项所述的试剂盒。
[0103]
在实施例76中，本发明提供了根据实施例75所述的方法，该方法进一步包括同时、顺序或分开施用治疗有效量的化学治疗药剂。
[0104]
在实施例77中，本发明提供了一种在需要治疗的受试者中治疗实体瘤的方法，其包括施用治疗有效量的根据实施例1至34中任一项所述的无环糊精的药物组合物、或根据实施例35至54中任一项所述的试剂盒。
[0105]
在实施例78中，本发明提供了根据实施例77所述的方法，该方法进一步包括同时、顺序或分开施用治疗有效量的化学治疗药剂。
[0106]
在实施例79中，本发明提供了卡非佐米注射剂试剂盒，其包含：(a)稳定的冷冻的卡非佐米或其药学上可接受的盐的药物组合物以及(b)溶解药物组合物，其中所述试剂盒通过包含以下步骤的方法制备：
[0107]
(i)将所述卡非佐米或其药学上可接受的盐溶解于二甲亚砜(dmso)中以形成dmso溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在200mg/ml至250mg/ml之间；
[0108]
(ii)将所述dmso溶液在2℃至8℃下冷冻以形成所述冷冻的卡非佐米药物组合物；以及任选地将该冷冻的组合物在2℃至8℃下储存；
[0109]
(iii)将所述冷冻的卡非佐米药物组合物在dmso熔点、优选至少在18℃的温度下解冻，以形成解冻的卡非佐米组合物，并且将所述液体卡非佐米组合物与溶解药物组合物混合以形成溶液，其中该卡非佐米的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间；
[0110]
其中所述药物组合物是无环糊精的，并且该注射剂经静脉内或皮下施用。
[0111]
在实施例80中，本发明提供了根据实施例79所述的试剂盒，其中所述药物组合物包括共溶剂小瓶，该共溶剂小瓶可以溶解所述解冻的卡非佐米药物组合物以形成溶液，其中该卡非佐米的浓度范围在20mg/ml至50mg/ml之间；以及额外的赋形剂小瓶，该额外的赋形剂小瓶可以溶解所述解冻的卡非佐米药物组合物以形成溶液，其中该卡非佐米的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间。
[0112]
在实施例81中，本发明提供了根据实施例80所述的试剂盒，其中该冷冻的卡非佐米组合物在2℃至8℃下储存；并且所述稀释步骤(iii)是在临床设施中进行的。
[0113]
在实施例82中，本发明提供了根据实施例81所述的试剂盒，其中该冷冻的卡非佐米组合物在无水分的储存容器或装置中储存。
[0114]
在实施例83中，本发明提供了根据实施例82所述的试剂盒，其中所述无水分的容器是带有冻干塞子和波纹性封口的0.5ml微量离心机艾本德离心管(eppendorf tube)和3cc玻璃肖特(schott)1a小瓶。
[0115]
在实施例84中，本发明提供了根据实施例80所述的试剂盒，其中所述共溶剂小瓶含有共溶剂系统，任选地在第一共增溶剂的存在下，该共溶剂系统选自c
1-4
烷基醇、聚乙二醇、或其组合。
[0116]
在实施例85中，本发明提供了根据实施例80所述的试剂盒，其中所述共溶剂小瓶
含有共溶剂系统，在为乳酸的第一共增溶剂的存在下，该共溶剂系统选自乙醇和peg组合。
[0117]
在实施例86中，本发明提供了根据实施例80所述的试剂盒，其中任选地在为水溶性聚合物的第二共增溶剂的存在下，所述额外的赋形剂小瓶含有ph在2.5至4.5之间的水性溶液。
[0118]
在实施例87中，本发明提供了根据实施例86所述的试剂盒，其中所述水溶性聚合物是聚维酮(pvp)。
[0119]
在实施例88中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中所述水溶性聚合物是pvp，其分子量范围是3,000mw至40,000mw；10,000mw至17,000mw；或10,000mw。
[0120]
在实施例89中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中所述水溶性聚合物是24％pvp 10,000mw、29％pvp 10,000mw、10％pvp 12,000mw、20％pvp 12,000mw、24％pvp 12,000mw、或24％pvp 17,000mw。
[0121]
在实施例90中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw或24％pvp 12,000mw。
[0122]
在实施例91中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw。
[0123]
在实施例92中，本发明提供了根据实施例86所述的试剂盒，其中所述水性溶液的ph范围在3.0-3.5之间。
[0124]
在实施例93中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液包含0.75％至1％的二甲亚砜、1.0％至1.8％的peg400、1.0％至1.8％的乙醇、0.10％至0.25％乳酸、20％至30％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0125]
在实施例94中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液包含0.2％至2％的二甲亚砜、0.5％至2.5％的peg400、0.5％至2.5％的乙醇、0.05％至0.5％乳酸、10％至40％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0126]
在实施例95中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液包含0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1.0％、1.05％、1.1％、1.15％、或1.2％的二甲亚砜；1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的peg400；1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的乙醇；0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、和0.35％乳酸；约25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、和33％pvp 10,000mw；并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0127]
在实施例96中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液包含约0.85％的二甲亚砜、约1.4％的peg400、约1.4％的乙醇、约0.15％乳酸、约28.8％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0128]
在实施例97中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液具有200mosmo至600mosmo的溶液渗透压。
[0129]
在实施例98中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液具有250mosmo至400mosmo的溶液渗透压。
[0130]
在实施例99中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液具有280mosmo至320mosmo的溶液渗透压。
[0131]
在实施例100中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中
形成的溶液具有280、290、300、310或320mosmo的溶液渗透压。
[0132]
在实施例101中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中在步骤(iii)中形成的溶液，该卡非佐米或其所述盐的浓度是2mg/ml。
[0133]
在实施例102中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为1.5:2。
[0134]
在实施例103中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为0.4:2。
[0135]
在实施例104中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中该注射剂经静脉内施用。
[0136]
在实施例105中，本发明提供了根据实施例87所述的试剂盒，其中该注射剂经皮下施用。
[0137]
在实施例106中，本发明提供了一种制备无环糊精的冷冻的卡非佐米组合物的方法，其包含以下步骤：
[0138]
(i)将所述卡非佐米或其药学上可接受的盐溶解于二甲亚砜(dmso)中以形成dmso溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在200mg/ml至250mg/ml之间；
[0139]
(ii)将所述dmso溶液在2℃至8℃下冷冻以形成所述冷冻的卡非佐米药物组合物；以及任选地将该冷冻的组合物在2℃至8℃下储存。
[0140]
在实施例107中，本发明提供了根据实施例106所述的方法，该方法进一步包括：将所述冷冻的卡非佐米药物组合物在dmso熔点、优选至少在18℃的温度下解冻，以形成解冻的卡非佐米组合物，并且将所述液体卡非佐米组合物与溶解药物组合物混合以形成溶液，其中该卡非佐米的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间；其中所述药物组合物是无环糊精的，并且适于注射。
[0141]
在实施例108中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述溶解药物组合物在乳酸的存在下包含c
1-4
烷基醇和聚乙二醇的混合物；以形成溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在20mg/ml至50mg/ml之间。
[0142]
在实施例109中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述溶解药物组合物进一步包含第二小瓶，该第二小瓶包含ph在2.5至4.5之间的水溶性聚合物的酸性水性溶液，其可以进一步稀释所述溶液以形成更稀释的溶液，其中该卡非佐米或其所述盐的浓度范围在1mg/ml至3mg/ml之间。
[0143]
在实施例110中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述水溶性聚合物是聚维酮(pvp)。
[0144]
在实施例111中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述水溶性聚合物是pvp，其分子量范围是3,000mw至40,000mw；10,000mw至17,000mw；或10,000mw。
[0145]
在实施例112中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述水溶性聚合物是24％pvp 10,000mw、29％pvp 10,000mw、10％pvp 12,000mw、20％pvp 12,000mw、24％pvp 12,000mw、或24％pvp 17,000mw。
[0146]
在实施例113中，本发明提供了根据实施例107所述的方法，其中所述水溶性聚合物是20％pvp 12,000mw或24％pvp 12,000mw。
[0147]
在实施例114中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中所述水溶性聚合
物是20％pvp 12,000mw。
[0148]
在实施例115中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中所述酸性水性溶液的ph范围在3.0-3.5之间。
[0149]
在实施例116中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液包含0.75％至1％的二甲亚砜、1.0％至1.8％的peg400、1.0％至1.8％的乙醇、0.10％至0.25％乳酸、20％至30％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0150]
在实施例117中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液包含0.2％至2％的二甲亚砜、0.5％至2.5％的peg400、0.5％至2.5％的乙醇、0.05％至0.5％乳酸、10％至40％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0151]
在实施例118中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液包含0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1.0％、1.05％、1.1％、1.15％、或1.2％的二甲亚砜；1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的peg400；1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、和1.6％的乙醇；0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、和0.35％乳酸；约25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、和33％pvp 10,000mw；并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0152]
在实施例119中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液包含约0.85％的二甲亚砜、约1.4％的peg400、约1.4％的乙醇、约0.15％乳酸、约28.8％pvp 10,000mw，并且其中该卡非佐米的浓度是2mg/ml。
[0153]
在实施例120中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液具有200mosmo至600mosmo的溶液渗透压。
[0154]
在实施例121中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液具有250mosmo至400mosmo的溶液渗透压。
[0155]
在实施例122中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液具有280mosmo至320mosmo的溶液渗透压。
[0156]
在实施例123中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该更稀释的溶液具有280、290、300、310或320mosmo的溶液渗透压。
[0157]
在实施例124中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中在所述更稀释的溶液中该卡非佐米或其所述盐的浓度是2mg/ml。
[0158]
在实施例125中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中在所述更稀释的溶液中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为1.5:2。
[0159]
在实施例126中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中在所述更稀释的溶液中乳酸与卡非佐米的比率按重量计为0.4:2。
[0160]
在实施例127中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该注射剂经静脉内施用。
[0161]
在实施例128中，本发明提供了根据实施例109所述的方法，其中该注射剂经皮下施用。
[0162]
在实施例129中，本发明提供了一种在需要治疗的受试者中治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括施用治疗有效量的从根据实施例79-105中任一项所述的注射剂试剂盒获得的卡非佐米溶液。
[0163]
在实施例130中，本发明提供了根据实施例129所述的方法，该方法进一步包括同时、顺序或分开施用治疗有效量的化学治疗药剂。
[0164]
在实施例131中，本发明提供了一种在需要治疗的受试者中治疗实体瘤的方法，其包括施用治疗有效量的卡非佐米溶液，该卡非佐米溶液从根据实施例79-105中任一项所述的注射剂试剂盒获得。
[0165]
在实施例132中，本发明提供了根据实施例131所述的方法，该方法进一步包括同时、顺序或分开施用治疗有效量的化学治疗药剂。
[0166]
除非另有定义，否则本文所用的所有技术及科学术语均具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所了解的含义相同的含义。本文阐述用于本披露的方法及材料；还可使用本领域已知的其他合适的方法及材料。这些材料、方法及实例仅为说明性且不意欲具有限制性。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库项目及其他参考文献均通过引用以其整体并入本文。倘若出现冲突，则将以本说明书(包括定义)为准。
[0167]
本披露的其他特征及优点将从以下具体实施方式及附图说明及权利要求中变得显而易见。
附图说明
[0168]
图1展示了卡非佐米活性成分在(a)水、(b)环糊精和本发明的无环糊精的配制品中的目视比较。
[0169]
图2展示了溶解cfz-api的溶剂范围的3d溶解度图。
[0170]
图3展示了比较溶解cfz-api的每种溶解度参数的2d溶解度图。
[0171]
图4展示了由汉森(hansen)溶解度参数软件产生的溶剂列表，这些溶剂具有δd＝16至19.5；δp＝5至18；以及δh＝7至19.6。
[0172]
图5展示了由汉森溶解度参数软件产生的溶剂列表，这些溶剂具有δd＝16至24；δp＝8至14；以及δh＝17至24。
[0173]
图6展示了在2℃至8℃(a)和25℃(b)的温度下通过rp-hplc测量的液体、无的配制品没有显著百分比主峰损失。
[0174]
图7展示了在带有和不带有波纹性封口的容器中冷冻的卡非佐米药物产物在2℃至8℃下储存4周的目视差异。
[0175]
图8展示了在2℃-8℃下冷冻的cfz-api。在dmso中高浓度的cfz-api在第4周没有百分比主峰的显著损失，如通过rp-hplc测量的。
[0176]
图9展示了在小鼠中经皮下施用无卡非佐米配制品的蛋白酶体活性。
[0177]
图10展示了在小鼠中经静脉内施用无卡非佐米配制品的蛋白酶体活性。
具体实施方式
[0178]
定义
[0179]
术语“c
x-y
烷基”是指未经取代的饱和烃基团，包括链中含有从x至y的碳的直链烷
基和支链烷基基团。
[0180]
术语“胺”和“氨基”是领域公认的并且是指未经取代的或经取代的胺两者和其盐，例如，可以由以下通式代表的部分：
[0181][0182]
其中r9、r
10
和r
10
′
各自独立地代表氢、烷基、烯基、—(ch2)m—r8、或r9和r
10
与它们附接的n原子一起完成环结构中具有4至8原子的杂环；r8代表芳基、环烷基、环烯基、杂环基或多环基；以及m是零或1至8的整数。在一些实施例中，r9或r
10
中仅有一个是羰基，例如，r9、r
10
和氮一起不形成酰亚胺。在一些实施例中，r9和r
10
(和任选地r
10
′
)各自独立地代表氢、烷基、烯基、或—(ch2)m—r8。在一些实施例中，氨基基团是基本的，这意味着它的质子化形式具有7.00以上的pka。
[0183]
术语“缓冲剂”是存在于溶液中会增加必须添加的酸或碱的量的物质，从而导致ph的单位变化。因此，缓冲剂是辅助调节组合物的ph的物质。通常，缓冲剂选自基于期望的ph并且与组合物的其他组分相容。一般而言，缓冲剂的pka与组合物期望的ph(或组合物溶解时将产生的ph)高或低相差不超过1单位。
[0184]
如本文所用，术语“水”是指具有ph大约7.0的h2o液体溶液。
[0185]
术语“c
x-y
烷基醇”是指被羟基基团取代的c
x-y
烷基基团。
[0186]
术语“经取代的”是指在分子的一个或多个非氢原子上具有替换氢的取代基的部分。应理解的是，“取代”或“取代的”包括隐含的条件是此类取代是根据经取代的原子和取代基的所允许化合价，并且取代产生稳定的化合物，例如，该化合物不会自发地经历转化，如通过重排、环化、消除等。如本文所用，术语“经取代的”预期包括有机化合物所有允许的取代基。从广义上看，允许的取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳香族和非芳香族的取代基。对于适当的有机化合物，允许的取代基可以是一个或多个并且是相同或不同的。出于本披露的目的，杂原子(如氮)可以具有本文描述的有机化合物的氢取代基和/或任何允许的取代基，这些取代基将满足杂原子的化合价。取代基可以包括，例如卤素、羟基、羰基(如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸盐、膦酸盐、亚膦酸盐、氨基、酰氨基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸盐、磺酸盐、氨磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基、或芳香族或杂芳香族部分。本领域技术人员将理解烃链上被取代的部分本身可以被取代，如果适当的话。
[0187]
如本文所用，术语“肽”是指长度约2至约10个氨基酸的氨基酸的链。
[0188]
如本文所用，术语“天然”或“天然存在的”氨基酸是指二十个最常存在的氨基酸之一。天然氨基酸是用其标准的一个或三个字母的缩写来表示的。
[0189]
术语“预防性或治疗性”治疗是本领域公认的，并且包括向宿主施用一种或多种主题组合物。如果在不希望的病症(例如，疾病或宿主动物的其他不希望的病症)的临床表现之前施用，则治疗是预防性的(即，它保护宿主对抗不希望的病症的发展)，而如果在不希望的病症的表现之后施用，则治疗是治疗性的(即，它旨在减小、改善、或稳定存在的不希望的
病症或其副作用)。
[0190]
如本文所用，术语“蛋白酶体”意指包括免疫性和组成性蛋白酶体。
[0191]
如本文所用，术语“抑制剂”旨在描述如下化合物，该化合物阻断或降低酶或酶系统、受体或其他药理学目标的活性(例如，抑制标准荧光肽底物如suc-llvy-amc、box-llr-amc和z-lle-amc的蛋白水解切割，抑制20s蛋白酶体的各种催化活性)。抑制剂可以与竞争性、无竞争性或非竞争性抑制一起作用。抑制剂可以可逆或不可逆地结合，并因此该术语包括作为酶的自杀底物的化合物。抑制剂可以修饰酶活性位点上或附近的一个或多个位点，或者它可以引起酶上别处的构象变化。术语抑制剂在本文的使用比科学文献更广泛，以便还涵盖其他类别的药理学上或治疗上有用的药剂，如激动剂、拮抗剂、刺激剂、辅因子等。
[0192]
如本文所用，“低溶解度”是指难溶、微溶、极微溶、几乎不溶或不溶于例如水或其他溶液(例如，第一组合)；术语“难溶、微溶、极微溶、几乎不溶或不溶”对应于美国药典(usp)关于近似溶解度表达的通用术语的含义。参见例如，deluca和boylan在pharmaceutical dosage forms:parenteral medications[药物剂型：肠胃外药剂]，第1卷，编辑avis,k.e.，lackman,l.和lieberman,h.a.；marcel dekkar出版社：1084，第141-142页：
[0193]
usp术语溶解1份溶质的相对溶剂量难溶30-100微溶100-1,000极微溶1,000-10,000几乎不溶，或不溶》10,000
[0194]
如本文所用，“非均相”是指具有非均匀(多相)组合物的溶液。例如，非均相溶液可以包括液体中实体颗粒的混悬剂(例如，浆料)。
[0195]
如本文所用，“同质”是指溶液在其整个体积中是一致的或均匀的(单相，观察为澄清溶液)。
[0196]
关于受试者治疗方法的化合物的“治疗有效量”是指制备中化合物的量，当作为所需剂量方案的一部分施用(至患者，例如人类)时，所述化合物的量根据临床上可接受的对于待治疗障碍或病症的标准或美容目的，例如，以适用于任何医学治疗的合理效益/风险比减轻症状、改善病症、或减缓疾病病症的发作。
[0197]
如在此所用，术语“治疗(treating或treatment)”包括逆转、减少、或抑制病症的症状、临床征象、和潜在病理，以此方式改善或稳定患者的病症。
[0198]
许多小分子有机化合物药物具有ph依赖性溶解度。适于药物施用的ph范围(如通过静脉内施用其中可耐受的ph范围通常被认为是ph 3至ph 10.5的注射剂)经常与在水性溶液中可以发现药物足够的溶解度时的ph不相同(例如ph等于或低于2)。为了使溶液中药物的药学上可用浓度水平在施用可接受的和可耐受的ph范围内(例如通过注射剂)，在引入水性溶液时添加溶剂和调整ph的顺序对于本文所要求的本配制品是有用的考虑因素。
[0199]
对于碱性药物分子，溶解度通常在较低的ph下提高，如果不使用一种或多种环糊精，在某些情况下也会对稳定性和保质期提出挑战。例如，足够的溶解度可以通过用酸降低溶液的ph获得，然而这种ph减少可以引起酸性条件下的降解反应。卡非佐米固有的水溶解度数据参见表1，显示随着ph的降低，溶解度会适度增加。
[0200]
表1：无环糊精的cfz-api的水溶解度与ph的关系
[0201]
溶剂溶解度(mg/ml)水/ph 70.002水/ph 50.002水/ph 30.02水/ph 11.8
[0202]
小分子药物和生物分子存在许多酸介导的降解反应途径，例如更小的无活性肽片段中酰胺的水解，或功能性环氧化物部分的水解开环。酸介导的降解的产物可能缺乏药理学活性，并且甚至在微量水平可能是有毒性或遗传毒性的化合物。因此，在引入具有适当的ph水性溶液前，将cfz-api完全溶解在溶剂(如n-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)或二甲基亚砜(dmso))及本发明的共溶剂混合物中是有帮助的。
[0203]
为了平衡避免在低ph下发生的酸介导的降解副反应的竞争需求，本发明人发现独特的ph条件以及添加可溶性聚合物共增溶剂。令人惊讶的是，水性溶液的ph通过添加特定浓度的酸(例如甲烷磺酸(约ph 3.0至3.5))获得，在可溶性聚合物共增溶剂的存在下，优选地聚合物含有吡咯烷酮环或相似结构，例如聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)环，优选地10,000mw pvp，其溶解90％或更多的cfz-api。其他含有吡咯烷酮环的共增溶剂可用于溶解和稳定cfz。可用于溶解cfz的吡咯烷酮药剂的某些实例包括甲基吡咯烷酮(例如，n-乙烯基3-甲基2-吡咯烷酮、n-乙烯基4-甲基2-吡咯烷酮、和n-乙烯基5-甲基吡咯烷酮)作为溶剂、单体或聚合物。
[0204]
将cfz-api溶解到溶液中的步骤数减到最少，有助于易制性以及临床处理。将水混溶性溶剂、共溶剂、酸、和含水溶液的不同组合混合以简化多步骤程序。从以上讨论的1至3号配制品测试样品中，水混溶性溶剂和共溶剂的组合能够在≥20mg/ml时产生相似的cfz-api溶解度。通过进一步筛选发现，引入水性溶剂步骤以进一步稀释cfz-api至≥2mg/ml不能与水混溶性溶剂和/或共溶剂步骤结合，因为cfz-api不能溶解。据发现，为了最大限度增加cfz-api的溶解度，在药物产物展示的最终选择前，每种溶剂混合物必须在多步骤模式中添加，这些溶剂混合物可以是随时可用的药物产物或冻干药物产物。多步骤制备无环糊精的冻干药物产物的流程方案在下文描述：
[0205][0206]
在流程方案制备的步骤1中，首先将包含水混溶性有机溶剂和共溶剂系统的非水性溶剂添加以溶解cfz-api固体，由于cfz-api固体的水溶解度极低。在流程方案制备的步骤2中，再将非水性cfz-api溶液引入具有最终ph在3.0至3.5的酸性、水性环境中以获得最大cfz-api溶解度。然后通过配有(无硅酮)注射器的0.22μm pes注射器过滤器过滤溶液。然后用反相高效液相色谱法(rp-hplc)检测所得滤液的cfz-api溶解度回收率和稳定性。rp-hplc通过使用3至5点参考标准曲线来确定峰降解及cfz-api回收率。标准品的峰积分取自标准缓冲剂，50％乙腈梯度；同时配制品样品的峰积分取自配制品的缓冲剂。在图的步骤3中，冻干步骤在滤液上进行。本发明优选的配制品中，用注射用水(wfi)复原冻干产物产生约1.5mg/ml至5mg/ml溶解度的cfz-api。
[0207]
多步骤添加溶剂包括单独步骤的酸化溶液以达到cfz-api目标浓度和ph进而用于最大限度增加cfz-api溶解度。无环糊精的cfz-api配制品可以通过两步或三步方案制成，如以下所示；
[0208][0209]
第一步骤可以包括将cfz-api api溶解在有机混合物中以达到约20至50mg/ml。这
种有机混合物可以由dmso、peg400、乙醇和乳酸组成。第二步骤可以将包括水的酸性、含有増溶剂的溶液添加至最终浓度为2mg/ml的cfz-api中。这种混合物可以由聚维酮、水和msa组成使ph达到约2.9。将这种混合物添加至含有cfz-api的第一步骤应引起部分沉淀成透明溶液，ph约为3。如果步骤2没有达到目标ph，那么可能需要额外的步骤以最少的msa或mea达到目标ph 3。一旦达到该ph，就需要过滤以过滤多余的未溶解的cfz-api。从这些实验的研究表明了将这些赋形剂引入cfz-api的顺序对于获得cfz-api最大的溶解度是重要的。例如，在添加有机混合物前，不能将包括聚维酮的水性混合物添加至cfz-api，因为它不能溶解cfz-api api。
[0210]
除了冻干和可注射乳剂外，对于无环糊精的cfz药物产物展示的其他实施例在2℃至8℃下呈冷冻形式。这种选择是有利的，因为不需要冻干仪或冰箱来维持cfz的高溶解度和稳定性。组合物可以通过用dmso将cfz api溶解制成以达到≥200mg/ml，并且在2℃至8℃下储存以获得冷冻产物。这种在较高温度下的冷冻状态是由于dmso的高熔解温度(19℃)。以下描述了在制造前和制造后制备冷冻的无环糊精的cfz-api药物产物的流程方案。第一步骤是通过制造进行的。在2℃至8℃下储存和运输将维持药物产物的冷冻状态。临床将接收步骤2和3配制品溶液、或其组合，以在临床施用时添加至解冻的药物产物中。
[0211][0212]
使用方法
[0213]
蛋白酶体抑制的生物应用是多样的。已将蛋白酶体抑制建议为多种疾病的预防和/或治疗，这些疾病包括但不限于增生性疾病、神经毒性/退行性疾病、阿尔茨海默病、缺血性病症、炎症、自身免疫性疾病、hiv、癌症、器官移植排斥、感染性休克、抗原呈递抑制，减少病毒基因表达、寄生虫感染、酸中毒相关病症、黄斑变性、肺部病症、肌肉萎缩疾病、纤维化疾病、骨骼和毛发生长疾病。因此，非常强效的蛋白酶体特定的化合物的药物制剂(如环氧酮类分子)提供了将药物施用至患者并且治疗这些病症的方式。
[0214]
已报道在细胞水平上，在用各种蛋白酶体抑制剂治疗细胞后多泛素化蛋白的积累、细胞形态的改变和细胞凋亡。也推荐蛋白酶体抑制作为可能的抗肿瘤治疗策略。最初是
在抗肿瘤化合物的筛选中发现环氧酶素的事实验证了蛋白酶体作为抗肿瘤化学疗法的目标。因此，这些组合物可用于治疗癌症。
[0215]
体外和体内模型均显示，恶性细胞通常易受蛋白酶体抑制。事实上，已经证实蛋白酶体抑制是用于治疗多发性骨髓瘤的治疗策略。这可能部分由于高增生性恶性细胞依赖蛋白酶体系统以快速去除蛋白质(rolfe等人,j.mol.med.[分子医学杂志](1997)75:5-17；adams,nature[自然](2004)4:349-360)。因此，本文提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者施用治疗上有效量的如本文提供的肽蛋白酶体抑制剂。
[0216]
如本文所用，术语“癌症”包括但不限于血源性和实体瘤。癌症是指血液、骨骼、器官、皮肤组织和血管系统的疾病，包括但不限于膀胱癌、血液癌、骨骼癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、胸癌、结肠癌、内膜癌、食道癌、眼癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、淋巴结癌、口腔癌、颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌，喉癌和子宫癌。特定癌症包括但不限于白血病(急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞性白血病(aml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、毛细胞白血病)、成熟b细胞肿瘤(小淋巴细胞淋巴瘤、b细胞前淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤(如沃尔丹斯特伦氏巨球体蛋白血症(macroglobulinemia))、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球体蛋白沉积病、重链疾病、结外边缘区b细胞淋巴瘤(malt淋巴瘤)、结内边缘区b细胞淋巴瘤(nmzl)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性b细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤和伯基特淋巴瘤/白血病)、成熟t细胞和自然杀伤(nk)细胞肿瘤(t细胞前淋巴细胞白血病、t细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性nk细胞白血病、成人t细胞白血病/淋巴瘤、结外nk/t细胞淋巴瘤、肠病型t细胞淋巴瘤、肝脾t细胞淋巴瘤、母细胞nk细胞淋巴瘤、蕈样真菌病(塞泽里综合征(sezary syndrome))、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、非特异性外周t细胞淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤)、霍奇金淋巴瘤(结节性硬化型霍奇金淋巴瘤、混合细胞型霍奇金淋巴瘤、富含淋巴细胞型霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞消减型或未消减型霍奇金淋巴瘤、结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤、骨髓瘤(多发性骨髓瘤、惰性骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤)、慢性骨髓增生性疾病、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、骨髓增生异常综合征、免疫缺陷相关的淋巴组织增生性障碍、组织细胞和树突状细胞肿瘤、肥大细胞增多症、软骨肉瘤、尤因肉瘤(ewing sarcoma)、纤维肉瘤、恶性巨细胞肿瘤、骨髓瘤骨疾病、骨肉瘤、乳腺癌(激素依赖性乳腺癌、非激素依赖性乳腺癌)、妇科癌症(宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌、妊娠滋养细胞疾病、卵巢癌、腹膜癌、子宫癌、阴道癌和外阴癌)、基底细胞癌(bcc)、鳞状细胞癌(scc)、恶性黑色素瘤、隆突性皮纤维肉瘤、默克尔细胞癌、卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma)、星形细胞瘤、毛细胞性星形细胞瘤、胚胎发育不良性神经上皮瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、多形性成胶质细胞瘤、混合性胶质瘤、少突星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、视网膜母细胞瘤、成神经细胞瘤、生殖细胞瘤、畸胎瘤、恶性间皮瘤(腹膜间皮瘤、心包间皮瘤、胸膜间皮瘤)、胃肠胰或胃肠胰腺神经内分泌肿瘤(gep-net)、类癌、胰腺内分泌肿瘤(pet)、结直肠腺癌、结直肠癌、侵袭性神经内分泌瘤、平滑肌肉瘤、粘液性腺癌、印戒细胞腺癌、肝细胞癌、胆管癌、肝母细胞瘤、血管瘤、肝腺瘤、局灶结节性增生(结节性再生性增生、错构瘤)、非小细胞肺癌(nsclc)(肺鳞状细胞癌、腺癌、大细胞肺癌)、小细胞肺癌、甲状腺癌、前列腺癌(激素难治性前列腺癌、非雄激素依赖性前列腺癌、雄激素依赖性前
列腺癌、激素不敏感型前列腺癌)以及软组织肉瘤(纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、皮肤纤维肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管内皮瘤、滑膜肉瘤、恶性周围神经鞘膜瘤/神经纤维肉瘤、骨外骨肉瘤)。
[0217]
在一些实施例中，本文提供的肽蛋白酶体抑制剂，或包含相同成分的药物组合物可以在患者中施用治疗多发性骨髓瘤。例如，多发性骨髓瘤可以包括难治性和/或难治性多发性骨髓瘤或新诊断的多发性骨髓瘤。
[0218]
许多造血和淋巴组织肿瘤的特征在于细胞增殖、或特定细胞类型的增加。慢性骨髓增生性疾病(cmpd)是以一个或多个髓系的骨髓增殖为特征的克隆性造血干细胞障碍，导致外周血中粒细胞、红细胞和/或血小板数量的增加。因此，使用蛋白酶体抑制剂治疗这些疾病是有吸引力的，并且正在接受检查(cilloni等人,haematologica[血液病学](2007)92:1124-1229)。cmpd可以包括慢性髓细胞性白血病、慢性中性粒细胞白血病、慢性嗜酸性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、慢性特发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症和不能分类的慢性骨髓增生性疾病。本文提供了一种治疗cmpd的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者施用有效量的本文披露的蛋白酶体抑制剂化合物。
[0219]
骨髓增生异常/骨髓增生性疾病，例如慢性粒-单核细胞白血病、非典型慢性骨髓白血病、幼年型粒-单核细胞白血病和不能分类的骨髓增生异常/骨髓增生性疾病，其特征是由于一个或多个髓系的增殖而导致的骨髓细胞过多。用本文描述的组合物抑制蛋白酶体可以通过向需要这种治疗的患者提供有效量的组合物来治疗这些骨髓增生异常性/骨髓增生性疾病。
[0220]
骨髓增生异常综合征(mds)是指一组以一个或多个主要的骨髓细胞系中的发育异常和无效造血为特征的造血干细胞障碍。在这些血液系统恶性肿瘤中用蛋白酶体抑制剂靶向nf-kb可诱导细胞凋亡，从而杀死恶性细胞(braun等人,cell death and differentiation[细胞死亡和分化](2006)13:748-758)。本文进一步提供了一种治疗mds的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者施用有效量的本文提供的化合物。mds包括难治性贫血、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞、难治性血细胞减少伴多系发育异常、难治性贫血伴原始细胞增多、不能分类的骨髓增生异常综合征和与分离的del(5q)染色体异常相关的骨髓增生异常综合征。
[0221]
肥大细胞增多症是肥大细胞的增殖及它们随后在一个或多个器官系统中的积聚。肥大细胞增多症包括但不限于皮肤肥大细胞增多症、惰性系统性肥大细胞增多症(ism)、系统性肥大细胞增多症伴相关的克隆性血液非肥大细胞系疾病(sm-ahnmd)、侵袭性系统性肥大细胞增多症(asm)、肥大细胞白血病(mcl)、肥大细胞肉瘤(mcs)和皮外肥大细胞瘤。本文进一步提供了一种治疗肥大细胞增多症的方法，该方法包括向被诊断患有肥大细胞增多症的患者施用有效量的本文披露的化合物。
[0222]
蛋白酶体调节nf-κb，其进而调节涉及免疫和炎性应答的基因。例如，需要nf-κb表达免疫球蛋白轻链κ基因、il-2受体α-链基因、ⅰ类主要组织相容性复合体基因、和一些细胞因子基因编码(例如，il-2、il-6、粒细胞集落刺激因子、和ifn-β)(palombella等人，cell[细胞](1994)78:773-785)。因此，本文提供了影响il-2、mhc-i、il-6、tnfα、ifn-β或任何其他先前提到的蛋白质表达水平的方法，每种方法包括向患者施用有效量的本文披露的蛋白酶体抑制剂组合物。
[0223]
本文还提供了一种治疗患者中的自身免疫性疾病的方法，该方法包括施用治疗上有效量的本文描述的化合物。本文中的“自身免疫性疾病”是由个体自身组织引起并针对个体自身组织的疾病或障碍。自身免疫性疾病或障碍的实例包括但不限于炎性皮肤疾病(包括银屑病和皮炎(例如特应性皮炎))等炎性应答；系统性硬皮病和硬化；与炎性肠病相关的应答(如克罗恩病(crohn's disease)或溃疡性结肠炎)；呼吸窘迫综合征(包括成人型呼吸窘迫综合征；ards)；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；结肠炎；肾小球性肾炎；湿疹和哮喘等过敏性病症，以及其他涉及t细胞浸润和慢性炎性应答的病症；动脉粥样硬化；白细胞黏附缺陷症；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮(sle)；糖尿病(例如i型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病)；多发性硬化症；雷诺氏综合征(reynaud's syndrome)；自身免疫性甲状腺炎；过敏性脑脊髓炎；干燥综合征；幼年型糖尿病；以及通常在结核病、结节病、多肌炎、肉芽肿病和血管炎中发现的由细胞因子和t-淋巴细胞介导的与急性和延迟的超敏反应相关的免疫应答；恶性贫血(艾迪生病(addison's disease))；涉及白细胞渗出的疾病；中枢神经系统(cns)炎性障碍；多器官损伤综合征；溶血性贫血(包括但不限于冷球蛋白血症(cryoglobinemia)或coombs阳性贫血)；重症肌无力；抗原-抗体复合体介导的疾病；抗肾小球基底膜疾病；抗磷脂综合征；过敏性神经炎；格雷夫斯氏病；兰伯特-伊顿肌无力综合征(lambert-eaton myasthenic syndrome)；大疱性类天疱疮；天疱疮；自身免疫多腺内分泌综合征；莱特尔疾病(reiter's disease)；僵人综合征；白塞氏病(beheet disease)；巨细胞动脉炎；免疫复合体肾炎；iga肾病；igm多发性神经病；免疫性血小板减少性紫癜(itp)或自身免疫性血小板减少症。
[0224]
免疫系统筛选被病毒感染的自体细胞已经发生致癌转化或在其表面存在不熟悉的肽。细胞内蛋白酶解引起小肽呈递至t淋巴细胞以诱导mhc i类介导的免疫应答。因此，本文提供了一种使用本文提供的蛋白酶体抑制剂作为免疫调节剂抑制或改变细胞中抗原呈递的方法，该方法包括细胞暴露于(或向患者施用)本文描述的化合物。特定的实施例包括一种治疗移植物或移植相关的疾病(如患者中的移植物抗宿主疾病或宿主抗移植物疾病)的方法，该方法包括施用治疗上有效量的本文描述的化合物。如本文所用，术语“移植物”是指来自供者的用于移植到受者体内的生物材料。移植物包括各种不同的材料，例如，小岛细胞等分离的细胞；新生儿的羊膜、骨髓、造血前体细胞等组织，以及角膜组织等眼部组织；以及皮肤、心脏、肝脏、脾脏、胰脏、甲状腺叶、肺、肾脏、管状器官(如小肠、血管或食管)等器官。管状器官可用于替换食管、血管、或胆管的受损部分。皮肤移植物不仅可用于烧伤，还可以作为受损小肠的敷料或用来愈合某些缺损如膈疝。移植物来自任何哺乳动物来源，包括人，无论是来自尸体还是活体供者。在一些情况下，供者和受者是相同的患者。在一些实施例中，移植物是骨髓或心脏等器官，并且移植物的供者和宿主的hla ii类抗原是匹配的。
[0225]
组织细胞和树突状细胞肿瘤来源于吞噬细胞和辅佐细胞，其在抗原处理和向淋巴细胞的呈递中起主要作用。已经证明消耗树突状细胞中的蛋白酶体含量会改变其抗原诱导的应答(chapatte等人,cancer res[癌症研究](2006)66:5461-5468)。
[0226]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可以施用于患有组织细胞或树突状细胞肿瘤的患者。组织细胞和树突状细胞肿瘤包括组织细胞肉瘤、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、朗格汉斯细胞肉瘤、指突状树突状细胞肉瘤/肿瘤、滤泡树突状细胞肉瘤/肿瘤和非特定树突状细胞肉瘤。
[0227]
抑制蛋白酶体已被证明有利于治疗细胞类型正在增殖的疾病和免疫障碍；因此，在一些实施例中，提供的原发免疫障碍(pid)相关性淋巴细胞增生性疾病(lpd)的治疗包括向有需要的患者施用有效量的本披露的化合物。最常见的与淋巴组织增生障碍(包括b-细胞和t-细胞肿瘤和淋巴瘤)的发生率增加相关的免疫缺陷的临床环境是原发免疫缺陷综合征和其他原发免疫障碍、人类免疫缺陷病毒(hiv)感染、接受实体器官或骨髓同种异基因移植物的患者中的医源性免疫抑制、以及与氨甲蝶呤治疗相关的医源性免疫抑制。其他通常与lpd相关的pid是但不限于，毛细血管扩张性共济失调综合征(at)、威斯科特-奥尔德里奇综合征(was)、普通变异型免疫缺陷病(cvid)、重症联合免疫缺陷(scid)、x连锁淋巴组织增殖性障碍(xlp)、尼梅亨断裂综合征(nbs)、高igm综合征和自身免疫性淋巴增殖综合征(alps)。
[0228]
蛋白酶体抑制也与抑制nf-κb激活以及稳定p53水平相关。因此，本文提供的组合物也可以用于细胞培养中抑制nf-κb激活和稳定p53水平。由于nf-κb是炎症的关键调节因子，因此它是抗炎疗法干预的有吸引力的目标。因此，本文提供的组合物可用于治疗与炎症相关的病症，包括但不限于copd、银屑病、哮喘、支气管炎、肺气肿和囊性纤维化。
[0229]
本披露的组合物可用于治疗由蛋白酶体的蛋白水解功能直接介导的病症(如肌肉萎缩)或通过由蛋白酶体(如nf-κb)处理的蛋白质直接介导的病症。蛋白酶体参与涉及细胞调节(例如，细胞周期、基因转录和代谢途径)、细胞间通信和免疫应答(例如抗原呈递)的蛋白质(例如酶)的快速消除和翻译后处理。下文讨论的特定的实例包括β-淀粉样蛋白和调节蛋白(如细胞周期蛋白)和转录因子nf-κb。
[0230]
在一些实施例中，本文提供的组合物用于治疗神经变性疾病和病症，这些神经变性疾病和病症包括但不限于卒中、神经系统的缺血性损伤、神经创伤(例如，撞击性脑损伤、脊髓损伤、和神经系统的创伤性损伤)、多发性硬化症和其他免疫介导的神经病(例如，吉兰-巴雷综合征和其变体、急性运动轴突性神经病、急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、和费希尔综合征)、hiv/aids痴呆综合征、axonomy、糖尿病神经病变、帕金森病、亨廷顿病、多发性硬化症、细菌性、寄生虫性、真菌性和病毒性脑膜炎、脑炎、血管性痴呆、多发梗死性痴呆、路易体痴呆、额叶痴呆(如皮克病)、皮质下痴呆(如亨廷顿或进行性核上性麻痹)、局灶性皮质萎缩综合征(如原发性失语)、代谢中毒性痴呆(如慢性甲状腺功能减退症或b12缺乏)、和由感染(如梅毒或慢性脑膜炎)引起的痴呆。
[0231]
阿尔茨海默病以老年斑和脑血管中β-淀粉样蛋白(β-ap)的细胞外沉积物为特征，β-ap是来自淀粉样蛋白前体(app)的39至42个氨基酸的肽片段。至少三个app的异形体是已知的(695、751和770个氨基酸)。mrna的可变剪接产生异形体；正常处理影响部分β-ap序列，因此防止产生β-ap。据信，由蛋白酶体处理的异常蛋白质有助于阿尔茨海默病大脑中β-ap的丰度。大鼠中app处理的酶含有约十种不同的亚基(22kda-32kda)。25kda亚基具有x-gln-asn-pro-met-x-thr-gly-thr-ser的n-末端序列，其与人类巨蛋白因子的β-亚基相同(kojima,s.等人,fed.eur.biochem.soc.[欧洲生化学会联合会],(1992)304:57-60)。app处理的酶在gln15
‑‑
lys16键裂解；在存在钙离子的情况下，酶也在met-1
‑‑
asp1键和asp1
‑‑
ala2键裂解，以释放β-ap的细胞外结构域。
[0232]
因此，一个实施例提供了一种治疗阿尔茨海默病的方法，该方法包括向患者施用有效量的本文提供的组合物。这种治疗包括降低β-ap处理的速率、降低β-ap斑块形成的速
率、降低β-ap产生的速率、和降低阿尔茨海默病的临床体征。
[0233]
本文还提供了治疗恶病质和肌肉萎缩疾病的方法。蛋白酶体降解成熟的网织红细胞和生长的成纤维细胞中的许多蛋白质。被剥夺胰岛素或血清的细胞中，蛋白酶解的速率几乎加倍。抑制蛋白酶体会减少蛋白酶解，从而减少肌肉蛋白损失以及肾脏或肝脏的含氮负荷。如本文提供的肽蛋白酶体抑制剂可用于治疗病症，例如癌症、慢性感染性疾病、发热、肌肉废用(萎缩)和去神经、神经损伤、禁食、与酸中毒相关的肾衰竭、和肝衰竭。参见例如，goldberg，美国专利号5,340,736。治疗方法包括：降低细胞中肌肉蛋白降解的速率；降低细胞内蛋白质降解的速率；降低细胞中p53蛋白质的降解速率；以及抑制p53相关的癌症的生长。每种这些方法包括用有效量的本文披露的药物组合物接触细胞(体内或体外，例如，患者的肌肉)。
[0234]
纤维化是由成纤维细胞过度增殖性生长引起的瘢痕组织过度和持续形成，并且与tgf-β信号传导通路激活有关。纤维化涉及细胞外基质的大量沉积，并且可以发生在几乎任何组织内或跨越若干不同的组织。正常地，tgf-β刺激后激活靶基因转录的细胞内信号传导蛋白质(smad)的水平是由蛋白酶体活性调节的。然而，在癌症和其他过度增殖性病症中已经观察到tgf-β信号传导组分的加速降解。因此，在一些实施例中，提供了治疗过度增殖性病症的方法，这些过度增殖性病症例如糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、糖尿病肾病、肾小球硬化症、iga肾病、肝硬化、胆道闭锁、充血性心力衰竭、硬皮病、辐射诱导的纤维化、和肺纤维化(特发性肺纤维化、胶原血管病、结节病、间质性肺疾病和外源性肺障碍)。烧伤受害人的治疗常常受到纤维化的阻碍，因此，在一些实施例中，本文提供的抑制剂可以通过局部或全身施用来治疗烧伤。手术后的伤口闭合常常与毁容瘢痕有关，这可以通过抑制纤维化来预防。因此，在一些实施例中，本文提供了预防或减少瘢痕形成的方法。
[0235]
其他由蛋白酶体处理的蛋白质是nf-κb，rel蛋白质家族的成员。转录激活蛋白的rel家族可以划分为两个基团。第一基团需要蛋白水解处理，并且包括p50(nf-κb1，105kda)和p52(nf-κ2，100kda)。第二基团不需要蛋白水解处理，并且包括p65(rela、rel(c-rel)、和relb)。同和异二聚体两者可以由rel家族成员形成；nf-κb，例如，是p50-p65异二聚体。iκb和p105的磷酸化和泛素化后，分别降解和处理这两种蛋白质以产生从细胞质转移到细胞核的活性nf-κb。泛素化的p105也被纯化的蛋白酶体处理(palombella等人,cell[细胞](1994)78:773-785)。活性nf-κb与其他转录激活剂形成立体特异性增强子复合体，例如，hmg i(y)，诱导特定基因的选择性表达。
[0236]
nf-κb调节涉及免疫和炎性应答，及有丝分裂事件的基因。例如，需要nf-κb表达免疫球蛋白轻链κ基因、il-2受体α-链基因、ⅰ类主要组织相容性复合体基因、和一些细胞因子基因编码(例如，il-2、il-6、粒细胞集落刺激因子、和ifn-β)(palombella等人，cell[细胞](1994)78:773-785)。一些实施例包括影响il-2、mhc-i、il-6、tnfα、ifn-β或任何其他先前提到的蛋白质表达水平的方法，每种方法包括向患者施用有效量的本文披露的组合物。包括p50的复合体是急性炎症和免疫应答的快速的介质(thanos,d.和maniatis,t.,cell[细胞](1995)80:529-532)。
[0237]
nf-κb还参与编码e-选凝素、p-选凝素、icam、和vcam-1的细胞黏附基因的表达(collins,t.,lab.invest.[实验室研究](1993)68:499-508)。在一些实施例中，提供了抑制细胞黏附(例如，由e-选凝素、p-选凝素、icam、或vcam-1介导的细胞黏附)的方法，该方法
包括用有效量的本文披露的药物组合物接触细胞(或施用于患者)。
[0238]
缺血和再灌注损伤导致缺氧，在这种病症下，缺乏到达身体组织的氧气。这种病症导致iκ-bα降解增加，从而导致nf-κb激活。已经证明施用蛋白酶体抑制剂可以降低导致缺氧的损伤的严重程度。因此，本文提供了治疗缺血性病症或再灌注损伤的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者施用有效量的本文披露的化合物。此类病症或损伤的实例包括但不限于急性冠状动脉综合征(易损斑块)、动脉闭塞性疾病(心脏、脑、外周动脉和血管闭塞)、动脉粥样硬化(冠状动脉硬化、冠心病)、梗死形成、心力衰竭、胰腺炎、心肌肥大、狭窄和再狭窄。
[0239]
nf-κb也特定结合hiv增强子/启动子。当与mac239的nef相比时，pbj14的hiv调节蛋白在控制蛋白激酶结合的区域中有两个氨基酸不同。据信，蛋白质激酶预示iκb的磷酸化，通过泛素-蛋白酶体途径引发iκb降解。降解后，nf-κb被释放至细胞核，因此增强hiv的转录(cohen,j.,science[科学],(1995)267:960)。本文提供了抑制或降低患者中的hiv感染的方法，以及一种降低病毒基因表达水平的方法，每种方法包括向患者施用有效量的本文披露的组合物。
[0240]
病毒感染对许多疾病的病理学有所贡献。正在进行的心肌炎和扩张型心肌病等心脏病症与柯萨奇病毒b3有关。受感染小鼠心脏的全基因组微阵列比较分析中，在产生慢性心肌炎的小鼠心脏均匀地上调节特定的蛋白酶体亚基(szalay等人,am j pathol[美国临床病理学杂志]168:1542-52,2006)。病毒进入步骤中某些病毒利用泛素-蛋白酶体系统将病毒从内体释放至胞质溶胶。小鼠肝炎病毒(mhv)属于冠状病毒科家族，其也包括严重急性呼吸综合征(sars)冠状病毒。yu和lai(j virol[病毒学杂志]79:644-648,2005)证明了用蛋白酶体抑制剂治疗mhv感染的细胞导致病毒复制减少，与未处理细胞相比病毒滴度降低相关。人类乙型肝炎病毒(hbv)是嗜肝dna病毒科的成员，同样需要病毒编码的包膜蛋白来繁殖。抑制蛋白酶体降解途径导致分泌的包膜蛋白数量显著降低(simsek等人,j virol[病毒学杂志]79:12914-12920,2005)。除了hbv，其他肝炎病毒(a、c、d和e)也可以利用泛素-蛋白酶体降解途径进行分泌、形态发生和发病机制。因此，在一些实施例中，提供了治疗病毒感染(如sars或肝炎a、b、c、d和e)的方法，该方法包括用有效量的本文披露的化合物接触细胞(或施用于患者)。
[0241]
认为脂多糖(lps)诱导的细胞因子(如tnfα)的过度生产对于与感染性休克相关的处理而言是关键的。此外，通常认为lps激活细胞的第一步骤是lps与特定膜受体的结合。已经证明20s蛋白酶体复合体的α-和β-亚基是lps结合蛋白，表明lps诱导的信号转导在脓毒症的治疗或预防中可以是重要的治疗目标(qureshi,n.等人,j.immun.[免疫学杂志](2003)171:1515-1525)。因此，在一些实施例中，如本文提供的组合物可以用于抑制tnfα以预防和/或治疗感染性休克。
[0242]
细胞内蛋白酶解引起小肽呈递至t淋巴细胞以诱导mhc i类介导的免疫应答。免疫系统筛选受病毒感染的或已经进行致癌性转化的自体细胞。一个实施例提供了在细胞中抑制抗原呈递的方法，该方法包括将细胞暴露于本文描述的组合物。另外的实施例提供了压制患者免疫系统(例如，抑制移植排斥、过敏性反应、哮喘)的方法，该方法包括向患者施用有效量的本文描述的组合物。本文提供的组合物还可以用于治疗自身免疫性疾病，例如狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症、和炎性肠病(如溃疡性结肠炎和克罗恩病)。
[0243]
另一个实施例提供了改变由具有多催化活性的蛋白酶体或其他ntn产生的抗原肽库的方法。例如，如果20s蛋白酶体的pgph活性被选择性抑制，则蛋白酶体将产生一组不同的抗原肽，并呈递在细胞表面的mhc分子中，而不是在没有任何酶抑制或有任何酶抑制时产生和呈递，例如选择性抑制蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性。
[0244]
某些蛋白酶体抑制剂体外和体内阻断泛素化的nf-κb的降解和处理。蛋白酶体抑制剂还阻断iκb-α降解和nf-κb激活(palombella等人,cell[细胞](1994)78:773-785；和traenckner等人,embo j.[欧洲分子生物学学会杂志](1994)13:5433-5441)。在一些实施例中，提供了抑制iκb-α降解的方法，该方法包括用本文描述的组合物接触细胞。另外的实施例提供了降低细胞、肌肉、器官、或患者中nf-κb细胞含量的方法，该方法包括用本文描述的组合物接触细胞、肌肉、器官、或患者。
[0245]
其他需要蛋白水解处理的真核转录因子包括通用转录因子tfiia、单纯疱疹病毒vp16辅佐蛋白(宿主细胞因子)、病毒诱导型ifn调节因子2蛋白质、和膜结合固醇调节元件结合蛋白1。
[0246]
本文进一步提供了影响细胞周期蛋白依赖性真核细胞周期的方法，该方法包括将细胞(体外或体内)暴露于本文披露的组合物。细胞周期蛋白是涉及细胞周期控制的蛋白质。蛋白酶体参与细胞周期蛋白的降解。细胞周期蛋白的实例包括有丝分裂细胞周期蛋白、g1细胞周期蛋白、和细胞周期蛋白b。细胞周期蛋白的降解使细胞能从一个细胞周期阶段(例如，有丝分裂)退出而进入另一个细胞周期阶段(例如，分裂)。认为所有细胞周期蛋白与p34cdc2蛋白质激酶或相关的激酶有关。蛋白酶解靶向信号定位于氨基酸42-raalgnisen-50(破坏盒)。有证据表明，细胞周期蛋白被转化为易受泛素连接酶影响的形式，或者细胞周期蛋白特异性连接酶在有丝分裂过程中被激活(ciechanover,a.,cell[细胞],(1994)79:13-21)。抑制蛋白酶体会抑制细胞周期蛋白降解，并且因此抑制细胞增殖，例如，在细胞周期蛋白相关的癌症中(kumatori等人,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊](1990)87:7071-7075)。本文提供了一种治疗患者中的增殖性疾病(例如，癌症、银屑病,或再狭窄)的方法，该方法包括向患者施用有效量的本文披露的组合物。本文还提供了一种治疗患者中的细胞周期蛋白相关的炎症方法，该方法包括向患者施用治疗上有效量的本文描述的组合物。
[0247]
另外的实施例包括影响癌蛋白的蛋白酶体依赖性调节的方法和治疗或抑制癌症生长的方法，每种方法包括将细胞(体内，例如在患者体内，或体外)暴露于本文披露的组合物。hpv-16和hpv-18衍生的e6蛋白刺激粗网织红细胞裂解物中p53的atp依赖性和泛素依赖性缀合及降解。已显示隐性癌基因p53在具有突变的不耐热e1的细胞系中在非容许温度下积累。p53水平升高可能导致细胞凋亡。通过泛素系统降解的原癌蛋白的实例包括c-mos、c-fos、和c-jun。一个实施例提供了一种治疗p53相关的细胞凋亡的方法，该方法包括向患者施用有效量的本文披露的组合物。
[0248]
在另一个实施例中，本披露的组合物用于治疗寄生虫感染，如由原生动物寄生虫引起的感染。认为这些寄生虫的蛋白酶体主要涉及细胞分化和复制活动(paugam等人,trends parasitol.[寄生虫学趋势]2003,19(2):55-59)。此外，已经证明当内变形虫类物种暴露于蛋白酶体抑制剂时可失去包囊能力(gonzales等人,arch.med.res.[医学研究档案]1997,28,专刊号：139-140)。在一些此类实施例中，本披露的组合物可用于治疗选自由
以下原生动物寄生虫在人类中引起的寄生虫感染，这些原生动物寄生虫包括疟原虫属(包括导致疟疾的恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫)、锥虫属(包括导致恰加斯病的克氏锥虫、和导致非洲昏睡病的布氏锥虫)、利什曼寄生虫(包括l.amazonesis、杜氏利虫、婴儿利什曼原虫、墨西哥王蛇等)、卡氏肺孢子虫(在aids和其他免疫抑制患者中已知原生动物会导致肺炎)、弓形虫、溶组织内阿米巴、侵袭内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫。在一些实施例中，本披露的组合物可用于治疗选自由以下原生动物寄生虫在动物和家畜中引起的寄生虫感染，这些原生动物寄生虫包括疟原虫美球虫、隐孢子虫、细粒棘球绦虫、柔嫩艾美球虫、猫肌囊虫属和粗糙链孢霉。wo 98/10779中描述的在治疗寄生虫疾病中作为蛋白酶体抑制剂的其他化合物，将其以其全文并入本文。
[0249]
在一些实施例中，本披露的组合物在寄生虫中不可逆地抑制蛋白酶体活性。这种不可逆的抑制已被证明在没有红细胞和白细胞回收率的情况下会诱导酶活性的停止。在一些此类实施例中，血液细胞的长半衰期可以提供关于对再发暴露于寄生虫的疗法的长期保护。在一些实施例中，血液细胞的长半衰期可以提供关于对未来感染的化学预防的长期保护。
[0250]
原核生物具有相当于真核生物20s蛋白酶体颗粒的物质。虽然原核生物20s颗粒的亚基组合物比真核生物更简单，但它具有以类似方式水解肽键的能力。例如，对肽键的亲核攻击是通过β亚基n末端的苏氨酸残基发生的。在一些实施例中，提供了治疗原核感染的方法，该方法包括向患者施用有效量的本文披露的蛋白酶体抑制剂组合物。原核感染可以包括由分枝杆菌(如结核病、麻风或布鲁里溃疡)或古细菌引起的疾病。
[0251]
还已经证明与20s蛋白酶体结合的抑制剂刺激骨器官培养物中的骨形成。此外，当已经将此类抑制剂全身地施用至小鼠时，某些蛋白酶体抑制剂使骨体积和骨形成率增加超过70％(garrett,i.r.等人,j.clin.invest.[临床研究杂志](2003)111:1771-1782)，这因此表明泛素-蛋白酶体机制调节成骨细胞分化和骨形成。因此，本披露的组合物可用于治疗和/或预防与骨损失相关的疾病，如骨质疏松症。
[0252]
本文提供了治疗选自以下疾病或病症的方法，这些疾病或病症包括癌症、自身免疫性疾病、移植物或移植相关的病症、神经变性疾病、纤维化相关的病症、缺血性相关的病症、骨损失相关的感染(病毒、寄生虫或原核)和疾病，该方法包括施用如本文提供的蛋白酶体抑制剂。例如，式(5)的化合物。
[0253]
骨组织是具有刺激骨细胞能力的因子的极佳来源。因此，牛骨组织提取物不仅含有负责维持骨骼结构完整性的结构蛋白，而且还含有可刺激骨细胞增殖的具有生物活性的骨生长因子。这些较后的因子中有最近描述的称为骨形态发生蛋白质(bmp)的蛋白质家族。所有这些生长因子影响其他类型的细胞及骨细胞，包括hardy,m.h.,等人,trans genet[转录遗传学](1992)8:55-61描述的关于骨形态发生蛋白质(bmp)在发育期间毛囊中表达不同的证据。harris,s.e.,等人,j bone miner res[骨骼和矿物质研究杂志](1994)9:855-863描述了tgf-β对表达bmp-2和骨细胞中其他物质的影响。在成熟期和细胞增殖期后也出现成熟卵泡中bmp-2表达(hardy,等人(1992,同上))。因此，本文提供的化合物也可以可用于刺激毛囊生长。
[0254]
最后，本披露的组合物也可用作诊断试剂(例如，在诊断试剂盒中或用于在临床实验室中使用)，用于筛选由ntn水解酶(包括蛋白酶体)处理的蛋白质(例如，酶、转录因子)。
所披露的组合物也可用作研究试剂，用于特异性地结合x/mb1亚基或α链并抑制与其相关的蛋白水解活性。例如，可以确定蛋白酶体的其他亚基的活性(以及特异性抑制剂的活性)。
[0255]
大多数细胞蛋白在成熟或激活期间易受蛋白水解处理的影响。本文披露的酶抑制剂可用于确定细胞、发育或生理过程或输出是否通过特定ntn水解酶的蛋白水解活性调节。一种这样的方法包括获得生物体、完整的细胞制备、或细胞提取物；将生物体、细胞制备、或细胞提取物暴露于本文披露的组合物；将化合物暴露的生物体、细胞制备、或细胞提取物暴露于信号，并且监测过程或输出。本文披露的高选择性的化合物允许在给定的细胞、发育、或生理过程中快速和精确地消除或暗示ntn(例如，20s蛋白酶体)。
[0256]
施用
[0257]
如本文所述的制备的组合物可以多种形式施用，此取决于有待治疗的障碍及患者的年龄、状况及体重，如本领域所熟知。例如，在有待经口施用组合物的情形下，可将其配制为片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂或糖浆剂；或对于肠胃外施用，可将其配制为注射剂(静脉内、肌内或皮下)、滴剂输注制剂或栓剂。对于通过经眼黏膜途径的应用，可将其配制为滴眼剂或眼部软膏剂。这些配制品可通过常规方式结合本文所述的方法来制备，且若期望，除了环糊精和缓冲剂，可将活性成分与任何常规添加剂或赋形剂(例如黏合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增溶剂、悬浮助剂、乳化剂或包衣剂)混合。虽然剂量将根据患者的症状、年龄及体重、有待治疗或预防障碍的性质及严重程度、药物的施用途径及形式而有所变化，但对于成年人类患者通常推荐0.01至2000mg日剂量的化合物，而且这个化合物可以单次剂量或以分开剂量施用。可与载体材料组合产生单一剂型的活性成分的量通常将为产生治疗效应的化合物的量。一般而言，旨在用于肠胃外使用(例如静脉内、皮下注射剂)的组合物包括经取代的环糊精。通过其他途径，特别是口服途径施用的组合物包括经取代或未经取代的环糊精。
[0258]
就给定患者的治疗疗效而言，将产生最有效结果的精确施用时间和/或组合物的量将取决于特定化合物的活性、药代动力学及生物利用度、患者的生理学状态(包括年龄、性别、疾病类型及阶段、一般身体状况、对给定剂量的反应性及药剂类型)、施用途径等。然而，以上指南可用作使治疗微调的基础，例如确定施用的最佳时间和/或量，其将仅需要由监测患者及调整剂量和/或时间组成的常规实验。
[0259]
短语“药学上可接受的”在本文用于指代在合理的医学判断范围内，适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
[0260]
如本文所用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。在与配制品的其他成分相容且对患者无害的意义上，每种载体必须为“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉及经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲剂；及(21)药物配制物中所
采用的其他无毒兼容物质。在某些实施例中，本文提供的药物组合物无热原，即在施用于患者时不会诱发显著的温度升高。
[0261]
术语“药学上可接受的盐”是指一种或多种抑制剂的相对无毒无机和有机酸加成盐。这些盐可在一种或多种抑制剂的最终分离及纯化期间原位制备，或通过使呈其游离碱形式的纯化的肽蛋白酶体抑制剂与合适的有机或无机酸单独反应且分离由此形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐、月桂基磺酸盐及氨基酸盐等。(参见例如berge等人，(1977)“pharmaceutical salts[药物盐]”,j.pharm.sci.[药物科学杂志]66:1-19)。
[0262]
在一些实施例中，本文提供的肽蛋白酶体抑制剂可以含有一个或多个酸性功能性基团，并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指一种或多种抑制剂的相对无毒无机及有机碱加成盐。同样，这些盐可在一种或多种抑制剂的最终分离及纯化期间原位制备，或通过使一种或多种经纯化的抑制剂以其游离酸形式与合适的碱(例如，药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、与氨、或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺单独反应来制备。代表性碱盐或碱土盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(例如，参见berge等人，同上)。
[0263]
润湿剂、乳化剂和润滑剂(如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁)、和着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
[0264]
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基苯甲醚(bha)、丁基化羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
[0265]
适于口服施用的配制品可呈以下形式：胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、菱形片剂(使用矫味基质，通常为蔗糖及阿拉伯胶或黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂；或作为于水性或非水性液体中的溶液或混悬剂；或作为水包油或油包水液体乳液；或作为酏剂或糖浆剂；或作为锭剂(使用惰性基质，如明胶及甘油，或蔗糖及阿拉伯胶)和/或作为漱口剂等，各自含有预定量的一种或多种抑制剂作为活性成分。组合物还可以大丸剂、药糖剂或糊剂形式施用。
[0266]
在用于口服施用的固体剂型(胶囊剂、片剂、丸剂、糖衣丸剂、粉末、颗粒剂等)中，可将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下中任一者混合：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如高岭土及膨润土；(9)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊剂、片剂及丸剂的情形下，药物组合物还可包含缓冲剂。还可以使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂，将相似类型的固体组合物用作软填充及硬填充明胶胶囊剂中的填充
剂。
[0267]
可通过压制或模制来制备片剂，其任选地含有一种或多种辅助成分。可以使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠或交联的羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压缩片剂。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的一种或多种粉状抑制剂的混合物来制备模制的片剂。
[0268]
片剂及其他固体剂型(例如糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂及颗粒剂)可任选地经刻痕或利用包衣及外壳(例如肠溶衣及医药配制技术中熟知的其他包衣)来制备。也可以使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素将它们配制成使其中的活性成分缓慢或受控释放以提供所希望的释放特征、其他聚合物基质、脂质体和/或微球。可以将它们例如通过细菌截留过滤器滤过，或通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，这些无菌固体组合物可以在使用前立即溶解于无菌水或一些其他无菌可注射介质中。任选地，这些组合物也可以含有遮光剂并且可以是如下组合物，该组合物仅或者优先在胃肠道的某一部分，任选地以延迟的方式释放一种或多种活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质及蜡。活性成分还可以呈微囊化形式，如果适当，具有一种或多种上述赋形剂。
[0269]
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂及酏剂。除活性成分以外，这些液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂及乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(特别地，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。
[0270]
除了惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包括辅助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
[0271]
除一种或多种活性抑制剂以外，混悬剂还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇及脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂及黄蓍胶以及其混合物。
[0272]
用于直肠或阴道施用的配制品可以作为栓剂呈递，这些配制品可以通过将一种或多种抑制剂与一种或多种合适的无刺激赋形剂或载体混合而制备，这些赋形剂或载体包含例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸盐，并且这些配制品在室温下是固体但在体温下是液体，并且因此其将在直肠或阴道腔中融化并释放活性药剂。
[0273]
适用于阴道施用的配制品还包括含有如在本领域已知是适当的此类载体的阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂配制品。
[0274]
用于局部或经皮施用的一种或多种抑制剂的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。活性组分可在无菌条件下与药学上可接受的载体及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
[0275]
除一种或多种抑制剂之外，软膏剂、糊剂、霜剂和凝胶剂也可以含有赋形剂，如动物和植物脂肪、油类、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌、或其混合物。
[0276]
除一种或多种抑制剂之外，粉剂和喷雾剂可以含有赋形剂，如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙以及聚酰胺粉剂、或这些物质的混合物。另外，喷雾剂可以含有常规的推进
剂，如氯氟烃类和挥发性未经取代的烃类，如丁烷和丙烷。
[0277]
肽蛋白酶体抑制剂可通过气溶胶来施用。这是通过制备湿气溶胶、脂质体制剂或含有该组合物的固体颗粒来实现的。可使用非水性(例如氟碳推进剂)混悬剂。在一些实施例中，优选音波雾化器，因其使药剂对剪切的暴露最小化，该剪切可导致化合物降解。
[0278]
通常，通过将药剂的水性溶液或混悬剂与常规药学上可接受的载体及稳定剂配制在一起来制备水性气溶胶。载体及稳定剂随特定组合物的要求而变化，但通常包括非离子表面活性剂(吐温、普朗尼克、脱水山梨糖醇酯、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor))、药学上可接受的共溶剂(如聚乙二醇)、无害蛋白质(如血清白蛋白)、脱水山梨糖醇酯、油酸、卵磷脂、氨基酸(如甘氨酸)、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气溶胶通常制备自等渗溶液。
[0279]
经皮贴剂具有另外的优点,即提供一种或多种抑制剂至身体的受控递送。这类剂型可通过将药剂溶解于或分散于适当介质中而制得。吸收增强剂还可用于增加一种或多种抑制剂经皮肤的通量。此通量速率可以通过提供速率控制膜或将一种或多种抑制剂分散在聚合物基质或凝胶剂中来控制。
[0280]
适合用于肠胃外施用的药物组合物包含与以下项组合的抑制剂：一种或多种药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散体、混悬剂或乳剂、或可以在临用前复原于无菌可注射溶液或分散体的无菌粉剂，这些溶液、分散体、混悬剂或乳剂、或无菌粉剂可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。
[0281]
本文提供的药物组合物中可采用合适的水性及非水性载体的实例包括注射用水(例如注射用无菌水)、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、缓冲剂(如柠檬酸盐缓冲剂)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)、及可注射的有机酯(如油酸乙酯)。可以例如通过使用如卵磷脂的包衣材料、通过在分散体的情况下保持所需粒度以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
[0282]
药物组合物典型地包括药学上可接受的载体。如本文所用，语言“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂等。在一些实施例中，药学上可接受的载体是缓冲剂(如柠檬酸盐缓冲剂)。在一些实施例中，药学上可接受的载体是注射用无菌水。在一些实施例中，药学上可接受的载体包含柠檬酸。
[0283]
这些组合物还可以含有辅助剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂、和分散剂。可以通过包括多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)来确保防止微生物的作用。可能还需要在组合物中纳入张力调整剂，如糖等。另外，可通过纳入延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)使可注射医药形式的吸收延长。
[0284]
在一些情况下，为了延长药物的作用，希望减慢来自皮下或肌内注射的药物的吸收。例如，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解或悬浮在油媒介物中而实现。
[0285]
可注射的长效形式为通过在生物可降解的聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成一种或多种抑制剂的微胶囊基质而实现。取决于药物与聚合物的比率和所采用的特定聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备长效可注射配制品。
[0286]
药剂的制备可以经口、肠胃外、局部或直肠给予。当然，它们是以适于各种施用途径的形式被给予。例如，它们是以片剂或胶囊剂形式施用，通过注射、吸入、眼部洗剂、软膏剂、栓剂施用；通过洗剂或软膏剂局部施用；及通过栓剂经直肠施用。在一些实施例中，是通过口服施用。
[0287]
如本文所用的短语“肠胃外施用”及“以肠胃外方式施用”意指除经肠及局部施用以外的施用模式，通常通过注射来实施，且包括(但不限于)静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、框内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、角质层下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊椎内及胸骨内注射及输注。
[0288]
如本文所用，短语“全身施用(systemic administration和administered systemically)”、“外周施用(peripheral administration和administered peripherally)”意指除了直接用于中枢神经系统中以外的方式施用配体、药物或其他材料，使得所述配体、药物或其他材料进入患者的系统中并因此进行代谢和其他相似过程，例如皮下施用。
[0289]
本文描述的肽蛋白酶体抑制剂可以通过任何合适的施用途径施用于人类和其他动物进行治疗，任何合适的施用途径包括经口、经鼻(如通过例如喷雾剂)、直肠、阴道内、肠胃外、脑池内和局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)，包括口腔和舌下。
[0290]
无论选择何种施用途径，肽蛋白酶体抑制剂(其能以合适的水合形式使用)和/或本文提供的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。
[0291]
本文所提供的药物组合物中活性成分的实际剂量值可变化以便获得有效达成对特定患者的期望治疗反应的量的活性成分、组合物及施用模式，而对患者无毒。
[0292]
药学上可接受的混合物中披露的化合物的浓度将根据若干因素而变化，这些因素包括待施用化合物的剂量，所采用的一种或多种化合物的药代动力学特征，及施用途径。一般而言，本文提供的组合物可以在水性溶液中提供，该水性溶液在其他物质中含有约0.1-10％w/v的本文披露的组合物来用于肠胃外施用。典型剂量范围是从约0.01至约50mg/kg体重/天，以1-4个分开剂量给予。每种分开剂量可含有相同或不同的化合物。该剂量为取决于若干因素的有效量，这些因素包括患者的总体健康状况及所选择的一种或多种化合物的配制品及施用途径。
[0293]
在另一个实施例中，药物组合物是口服溶液或肠胃外溶液。另一个实施例提供了一种可在施用前复原的冷冻干燥制剂。作为固体，这种配制品还可以包括片剂、胶囊剂或粉剂。
[0294]
本文还提供了一种联合疗法，其中一种或多种其他治疗肽蛋白酶体抑制剂或包含肽蛋白酶体抑制剂的药物组合物一起施用。这种联合治疗可以通过治疗的各个组分的同时、顺序、或分开给药来实现。
[0295]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可以与一种或多种其他蛋白酶体抑制剂联合施用。
[0296]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可以与一种或多种化学疗法联合施用。合适的化学疗法可以包括天然产物例如长春花生物碱(即长春花碱、长春花新碱和长春瑞滨)、紫杉烷基(例如，多西紫杉醇、紫杉醇，例如，多西紫杉醇)、表鬼臼毒
素(即依托泊苷、替尼泊苷)、抗生素(更生霉素(放线菌素d)、道诺霉素、多柔比星和伊达比星；例如，多柔比星)、蒽环类抗生素、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)、丝裂霉素、酶(l-天冬酰胺酶，其系统性地代谢l-天冬酰胺并剥夺不具有合成自身天冬酰胺的能力的细胞)；抗血小板剂；抗增殖/抗有丝分裂的烷基化剂如氮芥(二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、环磷酰胺和类似物、美法仑、苯丁酸氮芥，例如美法仑)、乙烯亚胺和甲基蜜胺(六甲基蜜胺(hexaamethylmelaamine)和噻替派)、烷基磺酸酯(白消安)、亚硝基脲(卡莫司汀(bcnu)和类似物、链脲霉素)、三氮烯-达卡巴嗪(trazenes-dacarbazinine)(dtic)；抗增殖/抗有丝分裂的抗代谢药物如叶酸类似物(甲氨蝶呤)、嘧啶类似物(氟尿嘧啶、氟尿苷和阿糖胞苷)、嘌呤类似物和相关抑制剂(巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和2-氯脱氧腺苷)；芳香酶抑制剂(阿那曲唑、依西美坦和来曲唑)；铂配位复合物(顺铂、卡铂)、丙卡巴肼、羟基脲、米托坦、氨鲁米特；dna结合剂/细胞毒性剂(例如，扎利普斯(zalypsis))；组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂(例如，曲古抑菌素、丁酸钠、阿匹西坦(apicidan)、辛二酰苯胺异羟肟酸(“saha”(伏立诺他))、曲古抑菌素a、缩酚酸肽、阿匹西坦、a-161906、scriptaid、pxd-101、chap、丁酸、depudecin、奥沙利铂、丁酸苯酯、丙戊酸、ms275(n-(2-氨基苯基)-4-[n-(吡啶-3-基甲氧基-羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)、laq824/lbh589、ci994、mgcd0103、acy-1215、帕比司他(panobinostat)；激素(即雌激素)和激素激动剂例如促黄体素释放激素(lhrh)激动剂(戈舍瑞林、亮丙瑞林和曲普瑞林)。其他化学治疗剂可以包括二氯甲基二乙胺、喜树碱、异环磷酰胺、他莫昔芬、雷洛昔芬、吉西他滨、诺维本或前述项的任何类似物或衍生物变体。
[0297]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂(例如曲古抑菌素、丁酸钠、阿匹西坦、辛二酰苯胺异羟肟酸(“saha”(伏立诺他))、曲古抑菌素a、缩酚酸肽、阿匹西坦、a-161906、scriptaid、pxd-101、chap、丁酸、depudecin、奥沙利铂、丁酸苯酯、丙戊酸、ms275(n-(2-氨基苯基)-4-[n-(吡啶-3-基甲氧基-羰基)氨基甲基]苯甲酰胺)、laq824/lbh589、ci994、mgcd0103、acy-1215、帕比司他；例如，saha、acy-1215、帕比司他)联合施用。
[0298]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种氮芥(二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、环磷酰胺和类似物、美法仑、苯丁酸氮芥，例如美法仑)联合施用。
[0299]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种dna结合剂/细胞毒性剂(例如扎利普斯)联合施用。
[0300]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种紫杉烷基(例如，多西紫杉醇、紫杉醇、例如，多西紫杉醇)联合施用。
[0301]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种抗生素(更生霉素(放线菌素d)、道诺霉素、多柔比星和伊达比星，例如，多柔比星)联合施用。
[0302]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种细胞因子联合施用。细胞因子包括但不限于干扰素γ、干扰素α和干扰素β，白细胞介素1-8、10和12，粒细胞单核细胞集落刺激因子(gm-csf)、tnf-α和-β及tgf-β。
[0303]
在一些实施例中，本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与一种或多种类固醇联合施用。合适的类固醇可以包括但不限于21-乙酰氧基孕烯醇酮、阿氯米松、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松(beclomethasone)、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松
(chloroprednisone)、氯倍他索(clobetasol)、氯可托龙、氯泼尼醇、皮质酮、可的松、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松(diflorasone)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟孕甾丁酯(difuprednate)、甘草次酸、氟扎可特、氟氯奈德(flucloronide)、氟米松(flumethasone)、氟尼缩松、氟轻松(fluocinolone acetonide)、醋酸氟轻松、氟考丁酯(fluocortin butyl)、氟可龙、氟米龙(fluorometholone)、醋酸甲氟龙(fluperolone acetate)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene acetate)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氟氢缩松(flurandrenolide)、丙酸氟替卡松、福莫可他(formocortal)、氯氟舒松(halcinonide)、丙酸卤倍他索(halobetasol propionate)、卤米松(halometasone)、氢化可的松(hydrocortisone)、依碳酸氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙(methylprednisolone)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、帕拉米松、泼尼卡酯、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松龙25-二乙氨基乙酸酯、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙戊酸酯(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙、替可的松(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)及其盐和/或衍生物(例如氢化可的松、地塞米松、甲泼尼龙和泼尼松龙；例如，地塞米松)。
[0304]
在一些实施例中，本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可与地塞米松联合施用。在一些实施例中，联合疗法包括在kyprolis标签上提供的以下给药方案，例如，
[0305]
1.kyprolis经静脉内施用2至10分钟，每周连续两天，持续三周(第1天、第2天、第8天、第9天、第15天、和第16天)，然后12天休息期(第17至28天)。认为每28天周期是一个治疗周期(表a)。
[0306]
第1周期中，kyprolis以20mg/m2的剂量施用。如果在第1周期中耐受，那么应在第2周期开始时增加剂量至27mg/m2，并且在随后的周期以27mg/m2的剂量继续。可以继续治疗直到疾病进展或直到不可接受的毒性出现。
[0307]
使用患者基线时实际的体表面积计算剂量。体表面积大于2.2m2的患者应接受基于2.2m2的体表面积的剂量。小于或等于至20％的体重改变不需要进行剂量调整。
[0308]
表a1：针对多发性骨髓瘤患者的剂量方案
[0309][0310][0311]a如果之前的周期剂量是耐受的。
[0312]
2.使用kyprolis治疗为患者补充水分以降低肾毒性和肿瘤溶解综合征(tls)的风险。在整个治疗过程中保持足够的液体量状态并且密切监测血液化学。第1周期每一剂量前，静脉内给予250ml至500ml生理盐水或其他适当的静脉内液体。施用kyprolis后，根据需要额外给予250ml至500ml静脉内液体。在随后的周期，根据需要继续静脉内水分补充。在这个期间还要监测患者的液体超负荷情况。
[0313]
3.在第1周期所有kyprolis剂量前以及在第1周期剂量递增至27mg/m2期间所有kyprolis剂量前经口或静脉内给予4mg地塞米松预先用药，以降低输注反应的发生率和严重程度。在随后的周期如果这些症状发展或再出现，恢复地塞米松预先用药(4mg经口或静脉内)。
[0314]
在一些实施例中，如本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可以与一种或多种免疫治疗剂联合施用。合适的免疫治疗剂可以包括但不限于mdr调节剂(维拉帕米、伐司朴达、比立考达、塔利喹达、拉尼喹达)、环孢霉素、泊马度胺、沙利度胺、cc-4047(actimid)、来那度胺(瑞复美)和单克隆抗体。单克隆抗体可以是裸露或缀合的，如利妥昔单抗、托西莫单抗、阿仑单抗、依帕珠单抗、替坦-艾瑞妥莫单抗、奥-吉妥珠单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、埃
罗替尼和曲妥珠单抗。在一些实施例中，本文提供的药物组合物与来那度胺(瑞复美)联合施用。
[0315]
在一些实施例中，本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒(例如，包括卡非佐米的药物组合物)可与以下联合施用
[0316]
(i)以下的一种或多种：
[0317]
●
一种或多种第二化学疗法药剂(例如，一种或多种hdac抑制剂，例如，saha、acy-1215、帕比司他；一种或多种氮芥例如，美法仑；一种或多种dna结合剂/细胞毒性剂，例如，扎利普斯；一种或多种紫杉烷基，例如，多西紫杉醇；一种或多种抗生素(更生霉素(放线菌素d)、道诺霉素、多柔比星和伊达比星；例如，多柔比星)；
[0318]
●
一种或多种其他蛋白酶体抑制剂(例如，具有式(1)-(5)的其他化合物)；
[0319]
●
一种或多种细胞因子；
[0320]
●
一种或多种免疫治疗剂(例如，瑞复美)；
[0321]
●
一种或多种拓扑异构酶抑制剂；
[0322]
●
一种或多种m-tor抑制剂；
[0323]
●
一种或多种蛋白质激酶抑制剂(例如，索拉非尼)；
[0324]
●
一种或多种cdk抑制剂(例如，迪那西利)；
[0325]
●
一种或多种ksp(eg5)抑制剂(例如，array 520)；
[0326]
●
一种或多种pi13δ抑制剂(例如，gs-1101pi3k)；
[0327]
●
一种或多种双重抑制剂：pi3kδ和γ抑制剂(例如，cal-130)；
[0328]
●
一种或多种多激酶抑制剂(例如，tg02)；
[0329]
●
一种或多种pi3kδ抑制剂(例如，tgr-1202)；
[0330]
以及
[0331]
(ii)一种或多种类固醇(例如，地塞米松)。
[0332]
在其他实施例中，本文提供的无环糊精的药物制剂或试剂盒可以与以下联合施用
[0333]
(i)以下的一种：
[0334]
●
一种或多种第二化学疗法药剂(例如，一种或多种hdac抑制剂，例如，saha、acy-1215、帕比司他；一种或多种氮芥例如，美法仑；一种或多种dna结合剂/细胞毒性剂，例如，扎利普斯；一种或多种紫杉烷基，例如，多西紫杉醇；一种或多种抗生素(更生霉素(放线菌素d)、道诺霉素、多柔比星和伊达比星；例如，多柔比星)；
[0335]
●
一种或多种其他蛋白酶体抑制剂(例如，具有式(1)-(5)的其他化合物)；
[0336]
●
一种或多种细胞因子；
[0337]
●
一种或多种免疫治疗剂(例如，瑞复美)；
[0338]
●
一种或多种拓扑异构酶抑制剂；
[0339]
●
一种或多种m-tor抑制剂；
[0340]
●
一种或多种蛋白质激酶抑制剂(例如，索拉非尼)；
[0341]
●
一种或多种cdk抑制剂(例如，迪那西利)；
[0342]
●
一种或多种ksp(eg5)抑制剂(例如，array 520)；
[0343]
●
一种或多种pi13δ抑制剂(例如，gs-1101pi3k)；
[0344]
●
一种或多种双重抑制剂：pi3kδ和γ抑制剂(例如，cal-130)；
[0345]
●
一种或多种多激酶抑制剂(例如，tg02)；
[0346]
●
一种或多种pi3kδ抑制剂(例如，tgr-1202)；
[0347]
以及
[0348]
(ii)地塞米松。
[0349]
实例
[0350]
实例1：非水性和水性溶剂筛选
[0351]
在最初溶剂筛选中，三个目标浓度的cfz-api用于检验它们的溶解度特征，如下所述：
[0352]
非水相：(a)针对水混溶性溶剂筛选的200mg/ml至250mg/ml目标浓度的cfz-api；以及(b)针对共溶剂筛选的20至50mg/ml目标浓度的cfz-api；以及
[0353]
水相：约2mg/ml目标最终浓度的cfz-api。
[0354]
实例1a.非水相溶剂筛选
[0355]
a.有机水混溶性溶剂筛选。
[0356]
由于cfz-api极不溶于水，因此首先筛选了各种有机水混溶性溶剂以溶解cfz-api原料药粉末。表1显示了在各种水混溶性溶剂中满足200mg/ml至250mg/ml初始浓度的cfz-api的溶解度模式的目视观察。如表1所示，7至11号测试溶液导致cfz-api不溶，并且因此只有1至6号测试溶液被用于共溶剂筛选。
[0357]
表1.筛选各种有机水混溶性溶剂以在高浓度(≥200mg/ml)下溶解cfz-api
[0358][0359]
b.共溶剂筛选
[0360]
进行共溶剂筛选以进一步将cfz-api在以上鉴定的非水性水混溶性溶液中稀释来达到20-50mg/ml的第二目标浓度。基于以上表1的结果，选择dmso或nmp作为优选的水混溶性溶剂。表2列出了进一步筛选各种共溶剂以将先前在dmso或nmp水混溶性溶剂中溶解的cfz-api稀释来满足20-50mg/ml目标浓度的cfz-api。对于筛选，仔细选择非亲核溶剂和/或赋形剂，因为cfz-api含有对亲核攻击敏感的环氧酮部分。另外，基于fda注射限制，对于筛选，也仔细选择具有可接受的浓度的用于静脉内注射(iv)和皮下注射(sc)的肠胃外批准的溶剂/赋形剂。
[0361]
表2.共溶剂筛选以进一步稀释cfz-api来达到20至50mg/ml的目标浓度
[0362]
[0363][0364]
*首先将cfz-api在纯净nmp或dmso中溶解至约200mg/ml至250mg/ml。将在表2列出的共溶剂添加以进一步稀释cfz-api至约20mg/ml至50mg/ml。
[0365]
与那些未沉淀的样品配制品相比，过滤后cfz-api沉淀的样品配制品预期具有较低的cfz-api回收率。每种条件的安慰剂缓冲液用于确定从溶液中沉淀出来的cfz-api，而不是任何其他物质。表2中14-15和21-34号样品的目视观察表明在20mg/ml至50mg/ml的目标浓度范围下水的存在引起cfz-api的沉淀。表2的14至34号样品导致cfz-api不溶性，并且
在下一步水性溶剂筛选中仅进一步研究1至13号样品。
[0366]
据发现，当用聚维酮和水稀释至2mg/ml以达到ph 3时，乳酸和马来酸与peg400和乙醇的组合产生最大溶解度，如通过目视观察确定的，这将在下一部分讨论。然而，与在2℃至8℃储存3天后沉淀的含有马来酸的配制品相比，发现含有乳酸的配制品在2℃至8℃下具有更长的cfz-api溶解度。在配制品中乳酸的缺乏显示了cfz-api在ph 3下沉淀，并且因此乳酸有助于降低ph以及作为cfz-api的共増溶剂起作用。
[0367]
实例1b：水相溶剂筛选
[0368]
在一种或多种増溶剂的存在下将水引入cfz-api以预期化合物在溶液中的更好分散。尽管在这个步骤的所有样品中都观察到沉淀，但是用甲烷磺酸进行ph调节以达到3.0-3.1范围的ph来增加溶解度。由于大多数样品即使在调节ph后仍是浑浊的，因此在0.22μm pes膜过滤器上过滤溶液以在rp-hplc上检查cfz-api溶解度。表3显示了调节ph和过滤后的目视观察，以及在dmso、peg400、乙醇和乳酸中与cfz-api组合使用以达到2mg/ml cfz-api的不同膨胀剂和増溶剂与水的cfz-api溶解度。结果确定了与其他配制品相比，所有含有pvp的配制品(表3中条件3至8)产生较高cfz-api溶解度。基于来自nmp和pvp的溶解度证据，我们怀疑具有吡咯烷酮环或相似结构的其他分子会溶解cfz-api。
[0369]
表3.水性溶剂筛选以溶解cfz-api*至约2mg/ml
[0370]
[0371][0372]
*在水性环境中用这些増溶剂稀释前，cfz-api在dmso、peg400:乙醇(1:1)、乳酸中的浓度是50mg/ml。
[0373]
包括酸、氨基酸和普朗尼克的其他赋形剂以2mg/ml溶解或部分溶解cfz-api，如表4所示。当用hcl、三乙醇胺(tea)或单乙醇胺(mea)调节ph至大约3.0时，进行目视观察。用这些赋形剂的cfz-api回收率和稳定性仍在研究中。
[0374]
表4.在酸性溶液中的其他潜在的増溶剂(添加以溶解在2mg/ml下的cfz-api*)
[0375]
编号在酸性、水溶液中的増溶剂在约ph 3.0下的目视观察11.3％苯丙氨酸透明23.5％至6.6％精氨酸hcl透明36％色氨酸透明41％丁酸透明5约0.5％至1.6％己二酸透明6约6％n-乙酰基色氨酸(nmp中)透明7约6％n-乙酰基色氨酸(dmso中)混浊8约6％n-乙酰基色氨酸(苄醇中)混浊9约6％n-乙酰基色氨酸(dma中)混浊105％辛酸混浊1112％酪氨酸:色氨酸(1:1)；混浊127％二钠酪氨酸混浊137％普朗尼克f68混浊147％普朗尼克l64轻微浑浊157.4％普朗尼克l64:f68轻微浑浊
[0376]
*用这些増溶剂稀释前，在nmp或dmso、peg400:乙醇(1:1)中cfz-api的浓度是20mg/ml至50mg/ml。
[0377]
实例2.无环糊精的cfz-api样品配制品的目视观察
[0378]
卡非佐米(cfz)是蛋白酶体抑制剂和(用于治疗多发性骨髓瘤的冻干药物产品)的活性成分。当前商业kyprolis的配制品含有这是用于帮助溶解cfz-api的环糊精。本发明提供了适于注射的在水性溶液中稳定的、无环糊精的cfz-api配制品。图1展示了(a)在磷酸盐缓冲剂溶液(pbs)的存在下在水中不可溶的cfz-api(左小瓶)；(b)当前商业含有captisol的kyprolis配制品(中间小瓶)；以及(c)本发明的无环糊精的配制品(右小瓶)。每种样品含有2mg/ml浓度的cfz-api。无环糊精的聚乙烯吡咯烷酮(pvp)配制品样品的黄色染色来自pvp共增溶剂；然而，透明溶液证明了cfz-api在无环糊精的配制品中溶解。
[0379]
配制品组合物：
[0380][0381]
实例3：定义溶剂空间的溶解度模型
[0382]
如表1、2和5所说明的，cfz-api可以在高浓度的水混溶性溶剂如dmso或nmp中溶解。为了进一步了解cfz溶剂化的性质，除了表1中测试的溶剂外，还使用溶解度参数评估来扩展可潜在溶解cfz的溶剂的溶剂空间。在这种方法中，使用软件包(汉森溶解度参数/hsp)，总参数δ的溶解度(最初由希尔德布兰特(hildebrandt)定义为总内聚能的平方根)根据以下式分为分散力(δd)、极性力(δp)和氢键(δh)力的贡献：δ2＝δd2 δp2 δh2。参见https://www.hansen-solubility.com/hsp-science/basics.php.如表1所示在若干溶剂中实验测量的cfz-api的溶解度及结果，以及来自先前未公开的结果用于生成下表5所示的有鉴定为1分的合适的溶剂(cfz溶解度》200mg/ml)以及鉴定为0分的不合适的溶剂(cfz溶解度《1mg/ml)的信息。然后获得3d溶解度球体，球体内有合适的溶剂，球体外有不合适的溶剂。表5还显示了从hsp软件获得的溶解度参数，鉴定为δd(分散力)、δp(极性)和δh(氢键)力。表中的相对能量距离(red)术语仅指每种溶剂的球体中心的距离除以球体距中心点的半径的比率。距离获自汉森由定义的熟知的等式，其是
[0383]
ra2＝4(δd
1-δd2)2 (δp
1-δp2)2 (δh
1-δh2)2。
[0384]
任何具有接近0的red得分的溶剂都允许与cfz有合适的溶解度。假设任何大于1的数字是针对cfz不合适或不太合适的溶剂。
[0385]
表5.水混溶性溶剂的溶解度参数
[0386][0387]
溶剂球体的3d溶解度图如图2所示。如所示的，对于cfz-api，圆形是指至合适的或更合适的溶剂，然而正方形是指至不合适的溶剂，这通过这个实验确定。为了学习每种参数分散力(d)、极性(p)和h键(h)在整体溶解度的贡献，绘制2d图以比较每种溶解度参数δd、δp和δh，如图3所示。图3展示了基于实验数据，δp相比于δh以及δh相比于δd成功区分了合适的溶剂和不合适的溶剂，但是δp相比于δd比较的相关性更弱。这表明h键参数是有助于cfz的整体溶解度模式的主要因素，然而分散力和极性参数的作用较小。
[0388]
表5显示了nmp和dmso的red得分接近1，这表明在这些溶剂中预期cfz-api有较低的溶解度。然而，本发明人惊讶地发现cfz-api在这些溶剂中高度溶解。这个发现表明，与分散力和极性力相比，h键力在确定cfz-api溶解度并且因此溶剂选择方面起重要作用。
[0389]
基于表5中所示的信息以及图2和3的图，本发明人可以通过在hsp数据库中选择落在选定溶解度限制内的分子来仔细选择对cfz有效的潜在溶剂。基于本发明人的实验结果，选择的限制如下：δd＝16至19.5；δp＝5至18；以及δh＝7至19.6。利用hsp软件，生成图4所示在规定范围的分子的列表。列表通过名称、cas编号、δd、δp、δh值、δhd/a术语(氢键参数再分为供者和受者贡献)和沸点来标识每个分子。基于图4的详情，本发明人可以在hsp数据库中为cfz-api选择多种合适的溶剂。另外，可以预期不在hsp数据库但具有如在以上范围内规定的δd、δp和δh值的分子为cfz-api提供合适的或更合适的溶解度特征。
[0390]
本发明人还发现从较高浓度稀释至较低浓度时，pvp有助于溶解cfz-api。使用hsp软件，计算pvp的δd、δp和δh值为δd＝21.4、δp＝11.6、和δh＝21.6。由于聚合物分子量可以对溶解度产生影响，并且在这个来源中没有列出分子量，因此δd、δp和δh值的宽范围并不出人意料。图5列出了溶解度数据库中预期可与pvp溶解的分子，对上述每种条件使用以下范围：汉森来源：δd＝16至24；δp＝8至14；以及δh＝17至24。在这里规定范围内的溶解度参数的分子预期会溶解pvp，然而，由于pvp的分子量也影响溶解度特征，因此，鉴定适于溶解cfz-api的pvp的合适的分子量也用于选择合适的pvp。
[0391]
实例4：冻干循环的方法、膨胀剂筛选和结果
[0392]
为获得长期稳定性，考虑冻干cfz-api的无环糊精的液体配制品。
[0393]
冻干方法：
[0394]
将如以上制备的填充在3ml肖特1a玻璃小瓶中的1ml cfz-api液体配制品加载在virtis genesis 12el冻干仪中(ts系统lyostartm-3，sp科技公司，沃敏斯特，宾夕法尼亚州)。用于筛选膨胀剂的冻干循环包含保持搁板温度在4℃下30分钟，然后将搁板以0.2℃/min冷却至-45℃。然后以0.3℃/min在-45℃至-12℃下进行退火步骤。初级干燥和二次干燥搁板温度分别是-25℃和25℃。应用于初级和二次干燥的加热速率分别是0.2℃/min和0.1℃/min。
[0395]
表5描述了冻干前和冻干后含有膨胀剂(如pvp 12,000mw、甘露醇或甘氨酸)的配制品的初始冻干研究结果。如以上讨论的，由于冻干前和冻干后在pvp中cfz-api的高溶解度，因此选择pvp作为共增溶剂候选药物。由于市场上可用的pvp有不同的分子量和不同的浓度，因此测试具有10,000mw、12,000mw和17,000mw以及10％至40％的浓度范围的各种pvp。本发明人发现两种溶解度趋势受pvp分子量和浓度的影响。首先，发现在较低的mw pvp中，cfz-api更易于溶解。在这种情况下，发现10,000mw pvp提供最高的溶解度；随后是12,000mw pvp；并且然后是17,000mw pvp。第二，较高浓度的pvp提供了较高的cfz-api溶解度。这两种趋势的组合揭示获得最大cfz-api溶解度、高浓度的较低分子量pvp可以是合适的选择。据发现，29％的10,000mw pvp适于溶解2.2mg/ml cfz-api；然而较低浓度的20％的12,000mw pvp适于溶解2mg/ml cfz-api。
[0396]
表5.初始冻干筛选结果
[0397]
[0398][0399]
表5说明：ba＝膨胀剂；pre-lyo＝冻干前；[cfz]＝cfz溶解度；osmo＝渗透压；[etoh]＝乙醇浓度；post-lyo＝冻干后；cfz冻干饼＝cfz冻干饼外观；以及[cfz]/recon sln＝cfz溶解度/复原溶剂。
[0400]
从冻干和膨胀剂的筛选结果来看，存在大量劣质冻干饼，但是选择的两种膨胀剂提供的冻干饼在整体药物产物展示中看起来较好。用注射用水(wfi)将这两种冻干饼(20％pvp 12,000mw配制品和200mm甘露醇配制品)复原。20％pvp 12,000mw配制品在5分钟内复原成透明溶液(如表5第二行所示)。1.8mg/ml的cfz-api回收率低于预期的2mg/ml，可能由于粉剂的其他组分吸收水，使其比理论上测量的更稀释。观察到冻干前至冻干后渗透压水平的减少是由于乙醇蒸发，如乙醇定量测定证实的。研究用叔丁醇(tba)交换乙醇，以及优化冻干循环可以解决观察到的冻干饼轻微塌陷。
[0401]
实例5：稳定性测试和分析
[0402]
分析测试：
[0403]
通过反相高效液相色谱法(rp-hplc)分析在上述制备的pvp配制品中的cfz-api以精确定量(a)在2℃至8℃下储存超过1天、2天和1周以及(b)在25℃下储存超过8小时和1天的cfz-api的浓度。比较和分析三种配制品溶液样品的稳定性测试，即，(i)(不供人类使用/nhu)；(ii)2mg/ml无的cfz-api由以下组成：0.85％dmso、
1.4％peg400、1.4％乙醇、0.15％乳酸和28.8％pvp 10k；以及(iii)2mg/mlcfz-api由以下组成：0.85％nmp、1.4％peg400、1.4％乙醇、0.15％乳酸和28.8％pvp 10k。
[0404]
图6a和6b分别显示在2℃-8℃和25℃下超过储存时间的百分比主峰。尽管在nmp中无的cfz-api没有显著主峰损失，但发现dmso优选较低的毒性水平问题。
[0405]
实例6-冷冻的无环糊精的卡非佐米配制品的稳定性分析
[0406]
dmso是非常吸湿的并且因此在低湿度条件下需小心进行样品处理。另外，无水分的储存容器和/或装置用于获得高cfz稳定性并且在2℃至8℃下在冷冻的状态下保持。检验带有冻干塞子和波纹性封口的0.5ml微量离心机艾本德离心管和3cc玻璃肖特1a小瓶等容器在dmso稳定性中的cfz。图7显示了冷冻的卡非佐米药物产物在2℃至8℃下在带有和不带有波纹性封口的容器中储存4周的目视差异。
[0407]
与不带有波纹性封口的冷冻的药物产物相比，波纹性封口的容器具有更多的晶体样冷冻的固体药物产物。艾本德离心管在dmso冷冻的状态保持cfz直至3周，并且然后变成液体。药物产物在2℃至8℃下储存4周的稳定性通过rp-hplc测量，如图8所示。超过4周的百分比主峰没有显著损失，这表明冷冻的状态维持了短期稳定性。
[0408]
实例7：在balb/c雄性小鼠中的探索性单次剂量局部耐受性研究
[0409]
进行研究以测量本发明的无环糊精2mg/ml的cfz-api配制品经(a)皮下和(b)静脉内施用于balb/c雄性小鼠的蛋白酶体活性。研究是在查尔斯河实验室公司(charles river laboratory,inc.)测试机构(斯潘塞维尔，俄亥俄州)进行的。选择皮下和静脉内的暴露途径是由于它们都是人类潜在的暴露途径。
[0410]
将cfz-api经皮下施用于小鼠的蛋白酶体活性
[0411]
将在上述制备的pvp配制品中的cfz-api经皮下施用于小鼠。在第1天，通过皮下注射将测试品和对照品施用于适当动物的下胁腹(后背)区域一次。每只动物的剂量体积基于最近的体重测量结果。暂时限制动物以用于给药并且不使用镇静剂。使用带有附接针头的注射器给药。给药的第一天指定为第1天。在第一剂量前，修剪掉动物的胁腹区域的毛发。修剪程序期间应小心以避免皮肤擦伤。一个或多个注射部位(2cm x 2cm)用擦不掉的标志指出，并且此后根据需要进行标记。结果通过反相高效液相色谱法(rp-hplc)分析以精确定量给药后超过5、10、15和20小时配制品的蛋白酶体活性(百分比胰凝乳蛋白酶样(％ct-l)活性)。比较和分析三种配制品溶液样品的药效学测试，即，(i)2mg/ml无的cfz-api由以下组成：0.85％dmso、1.4％peg400、1.4％乙醇、0.15％乳酸、和28.8％pvp 10k；(ii)nhu 5mg/ml；以及(iii)nhu 16.7mg/ml。
[0412]
(b)将cfz-api经静脉内施用于小鼠的蛋白酶体活性
[0413]
将在上述制备的pvp配制品中的cfz-api经静脉内施用于小鼠。将在上述制备的pvp配制品中的cfz-api经皮下施用于小鼠。在第1天，通过静脉内(缓慢推注)注射将测试品和对照品施用于适当动物的尾静脉一次。每只动物的剂量体积基于最近的体重测量结果。暂时限制动物以用于给药并且不使用镇静剂。使用带有附接针头的注射器给药。给药的第一天指定为第1天。结果通过反相高效液相色谱法(rp-hplc)分析以精确定量给药后超过5、10、15和20小时配制品的蛋白酶体活性(％ct-l活性)。如下进行三种比较研究：
[0414][0415]
图9显示了将本发明的无的cfz-api配制品和nhu配制品以2mg/ml经静脉内施用于小鼠的蛋白酶体活性结果。为清楚起见，1.7mg/ml cfz-api样品是液体版本，并且它是冻干的。将冻干的产物复原至2mg/ml，并且作为单独样品注射剂使用。在皮下施用中，证明了较低剂量的无环糊精的cfz-api获得与含有的cfz-api(kyprolis nhu)相同的功效。这种剂量减少可以转化以降低cfz-api产生的毒性。经皮下施用的无的配制品是具有10,000mw pvp配制品组合物的液体dp。与具有和不具有透明质酸酶的nhu相比，它具有较低百分比蛋白酶体活性，或较高蛋白酶体抑制。
[0416]
图10显示了将无的cfz-api和nhu以2mg/ml经静脉内施用于小鼠的蛋白酶体活性结果。当与nhu相比时，在含有28.8％pvp 10,000mw的无的配制品中观察到最高的蛋白酶体抑制。冻干的pvp12,000mw配制品表现了稍低的蛋白酶体抑制，然而它仍然在可接受的范围内并且在当前市售的的标准偏差内。
[0417]
观察到来自动物研究的结果显示，与当前含有的配制品相比，本发
明的无环糊精的配制品在小鼠中的药效学显著更高。可以假设，由于包封了cfz-api，其生物利用度特性受到损害或低于最佳的无环糊精的cfz-api。同样，添加剂或共増溶剂(例如pvp、dmso、nmp等)可以提高在无环糊精的配制品中cfz-api的生物利用度。
[0418]
其他实施例
[0419]
应理解，虽然本披露结合其详细描述来阅读，但是前述描述旨在说明且不限制本披露的范围，该范围通过所附权利要求的范围来限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。