一种果蔬酵素及其制备方法与流程

1.本发明涉及酵素领域，尤其涉及一种果蔬酵素及其制备方法。


背景技术：

2.酵素是“酶”的旧译，中国生物发酵产业协会发布的《酵素产品分类导则》标准中，将酵素定义为以动物、植物和食用菌等为原料，经微生物发酵制得的含有特生物活性成分的可食用的酵素产品。酵素具有抗氧化、抑菌、改善免疫力、促进新陈代谢及净化血液等作用。然而，目前市面上的酵素保健品普遍存在一个问题，那就是由于发酵工艺的不成熟和储存时间过长等问题导致酵素中酶的活性过低，完全无法达到保健的效果。
3.在酵素中添加活化剂是一种常用的提高酵素酶活性的方法，现有技术中通常采用直接添加金属离子来活化酶，例如cn 109549105 a公开了一种用于激活酵素酶的金属活化剂及其制作方法，矿物质硒、锌、镁、铁、钾、锰、铬、铜元素，选自无机盐或葡萄糖酸盐、乳酸盐、edta螯合盐。但是酵素中存在十数种甚至数十种酶，不同的酶所需的金属离子不同，直接添加金属离子或有机金属螯合物来活化酶，需要测定酵素中酶的种类，再配置对应的金属离子，成本高昂，操作麻烦。另一方面，酵素中酶活性不高的另一个原因是发酵菌细胞通透性不高，阻碍了酶的溶出，导致酵素中酶浓度低，也抑制了发酵菌的产酶速率。


技术实现要素：

4.针对现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种果蔬酵素及其制备方法。
5.一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
6.按质量份计，将29-55份植物原料、45-81份水、0.0.5-0.1份酶制剂混合静置酶解4-6h，得到酶解物；按质量份计，将70-100份所述酶解物、5-20份辅料、0.05-0.15份发酵菌a、0.01-0.05份活化剂混合倒入发酵罐，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，定期开罐透气，得到一次发酵酵素；所述辅料为蜂蜜和/或果糖，优选地，所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：(1-2)的混合物；对所述一次发酵酵素灭菌，然后按质量份计，再加入0.05-0.15份发酵菌b，密封发酵，得到二次发酵酵素；过滤，浓缩，杀菌，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
7.进一步的，一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
8.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
9.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶3-5份、山楂5-10份、甘蔗5-10份、苦瓜3-5份、黄瓜10-20份进行切片后和3-5份决明子、45-81份水混合，向其中加入0.0.5-0.1份酶制剂，在30-50℃下、以70-100r/min转速搅拌10-30min后，静置酶解4-6h，得到所述酶解物；
10.(3)按质量份计，将步骤(2)制得的70-100份酶解物、5-20份辅料、0.05-0.15份发酵菌a、0.1-1份活化剂混合倒入发酵罐，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每5-10天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1-2个月，得到一次发酵酵素；
11.(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至62-65℃，恒温25-35min，冷却至室温，然后再向其中加入0.05-0.15份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2-3个月，得到二次发酵酵素；
12.(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径150-200目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.6-1μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为46-50℃，真空度为-0.04-(-0.08)mpa，浓缩至原体积的1/10-1/3，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至62-65℃，恒温25-35min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
13.所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶按质量比(1-2)：(3-5)混合而成。
14.所述辅料为蜂蜜、果糖中的一种或两种混合；优选地，所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：(1-2)混合而成。
15.所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比(1-2)：(1-2)：(4-6)混合而成。
16.所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比(1-2)：(3-4)混合而成。
17.本发明为了增加所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素的功能性，进一步的，优选了一种新型植物组合，作为发酵的原料。其中，苦瓜的苦味有抑制食欲的效果，既可以防止暴食还能减少饮食量，达到减肥瘦身和保持身材的效果。另外苦瓜还有加速脂肪消耗和抑制脂肪堆积的作用，对减肥瘦身有着非常大的帮助。除此以外，苦瓜中还含有大量的食物纤维，有促进肠胃活动和加速消化排泄的效果。黄瓜中含有大量的食物纤维和水分，食用后可以促进肠胃蠕动，加速食物的消化，防止热量的堆积。另外黄瓜中还含有丙醇二酸，可以抑制糖分转化成脂肪，防止肥胖的发生。甘蔗提供大量糖类物质作为发酵菌的生存基础。决明子具有清热平肝、降脂降压、润肠通便的功效。荷叶有治疗便秘和促消化的作用，很快会得到瘦身的目的。山楂也具有帮助脂肪消解的功效。
18.这种荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜赋予了所制得的酵素浓浆消脂瘦身的作用。
19.本发明优选了新的发酵菌种组合，以保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母作为半有氧发酵的发酵菌，以长双歧杆菌、植物乳杆菌作为无氧发酵步骤的发酵菌种，发酵菌种的多样性有利于酶种类的增加。保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母，这三种菌都有微好氧性，因此，采用定期开盖补充氧气的方法有利于发酵菌种的繁殖。这三个菌种主要能量来源是酶解纤维素产生的多糖和植物原料溶出的水果多糖，产生酸性物质、芳香物质及多种酶。此外，还能调节酵素的ph值，为无氧发酵提供酸性环境。长双歧杆菌、植物乳杆菌为厌氧菌种，消耗半有氧发酵没有消耗的蔗糖、大分子纤维多糖，及发酵菌a的代谢产物生存繁殖，其发酵周期长，能够产生多种非常规酶，例如6-磷酸果糖磷酸解酮酶，有益人体健康。此外，这种新的发酵菌种配合，不仅增加了酵素液中活性酶的含量和种类，更能降低酵素中糖含量，有利于人体吸收，减少因消化困难导致的糖分转化为脂肪，达到消脂的目的，有益于人体健康。
20.本发明采用半有氧发酵和无氧发酵两步发酵法，充分考虑不同菌种发酵的氧需求，使得发酵更充分，缩短了发酵时间，同时，提高了酵素中酶的浓度。此外，马克斯克鲁维酵母和植物乳杆菌能够消除发酵过程中产生的乙醇，避免了最后除乙醇造成的营养成分流
失和酶失活。
21.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
22.将麦饭石微粉、硅酸钠、石蜡、润湿剂、尿素混合煅烧，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；将高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、酪蛋白磷酸肽、水混合，得到所述活化剂。
23.进一步的，所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
24.s1取麦饭石，球磨至平均粒径1-5μm，得到麦饭石微粉；
25.s2按质量份计，取20-40份步骤s1制得的麦饭石微粉、5-10份硅酸钠、20-40份石蜡、润湿剂0.5-1份、尿素5-20份混合，在80-100℃下搅拌10-20min，注入直径2-5mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
26.s3将s2制得的煅烧胚体置于800-1000℃下煅烧1-2h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
27.s4按质量份计，取20-40份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1-2份酪蛋白磷酸肽、50-60份水混合，得到所述活化剂。
28.所述润湿剂为大豆卵磷脂、硬脂酸钠、烷基葡萄糖苷中的一种或两种或两种以上混合物；优选的，所述润湿剂为大豆卵磷脂。
29.本发明发现麦饭石中含有动物所需的全部常量元素，如：k、na、ca、mg、cu、mo等微量元素和稀土元素，约58种之多。麦饭石具有吸附性、溶解性、调节性、生物活性和矿化性等。它能吸附水中游离的金属离子。经水浸泡后的麦饭石，可溶出40多种元素，其中近20种为微量元素，此外，还有微量稀土元素，足以满足活化绝大部分金属酶所需金属离子，相较于采用直接添加金属盐或有机金属更节约成本，同时还能补充人体所需的微量元素。因此本发明采用麦饭石作为金属离子源，为了进一步增加其离子溶出率，本发明采用石蜡、尿素相配合，赋予其多孔的特性，将其煅烧成具有高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷。
30.进一步的，本发明为了提高酵素中酶的浓度，采用酪蛋白磷酸肽作为活化剂的一部分。酪蛋白磷酸肽常被用于螯合钙离子，目的是促进人体对钙的吸收，并没有人考虑过其对酵素中酶活性的影响。由于发酵菌细胞外膜的脂多糖是通过与钙离子和镁离子的相互作用连接的，所以，利用酪蛋白磷酸肽优异的钙离子螯合能力，能够破坏发酵菌细胞外膜结构，提高其通透性，使得更多的酶能够溶出，从而增大了酵素中酶的浓度。
31.在上述基础上，本发明人还提供一种果蔬酵素及其制备方法。
32.一种果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
33.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
34.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶3-5份、山楂5-10份、甘蔗5-10份、苦瓜3-5份、黄瓜10-20份进行切片后和3-5份决明子、45-81份水混合，向其中加入0.0.5-0.1份酶制剂，在30-50℃下、以70-100r/min转速搅拌10-30min后，静置酶解4-6h，得到所述酶解物；
35.(3)按质量份计，将步骤(2)制得的70-100份酶解物、5-20份辅料、0.05-0.15份发酵菌a、0.1-1份活化剂混合倒入发酵罐，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每5-10天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1-2个月，得到一次发酵酵素；
36.(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至62-65℃，恒温25-35min，冷却至室温，然后再向其中加入0.05-0.15份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期
为2-3个月，得到二次发酵酵素；
37.(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径150-200目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.6-1μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为46-50℃，真空度为-0.04-(-0.08)mpa，浓缩至原体积的1/10-1/3，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至62-65℃，恒温25-35min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
38.(6)向步骤(5)中得到的具有减肥功能的复合果蔬酵素中加入β-环糊精、羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖，搅拌均匀，经喷雾干燥、灭菌，得到果蔬酵素；其中喷雾干燥的条件为进风温度为100-140℃，出风温度为45-60℃、进料速度为8-12ml/min，喷雾气压为0.1-0.3mpa；所述β-环糊精占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的6-8％，所述羟基酪醇占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的1-3％，所述知母总皂苷占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的1-3％，所述米糠多糖占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的1-3％。
39.本发明在上述基础上添加β-环糊精、羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖制备一种具有降血脂功能的果蔬酵素。本发明以荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜为原料进行酶解、发酵，制备得到的具有减肥功能的复合果蔬酵素中含有大量的不饱和脂肪酸，添加羟基酪醇控制不饱和脂肪酸的氧化，有效去除内源性、外源性氧化物及自由基，同时羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖协同作用具有良好的降血脂、提高免疫力的作用。β-环糊精的添加一方面是增稠作用，另一方面是改善喷雾干燥过程中出现粘壁现象，提高产量。
40.本发明有益效果：
41.本发明以荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜为原料，采用酶解、半有氧发酵、无氧发酵，然后加入β-环糊精、羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖，搅拌均匀，经喷雾干燥、灭菌，得到了果蔬酵素。本发明中向发酵果蔬液中添加羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖、β-环糊精制备的粉末状果蔬酵素具有良好的降血脂、提高免疫力的作用。本发明制备的果蔬酵素，且具有热量低、富含膳食纤维、降血脂、减肥消脂的作用，含有补充人体所需的维生素、微量元素等营养元素，粉末状果蔬酵素经冲调后气味芳香，酸味适中。
具体实施方式
42.荷叶，干荷叶，采购自金华市善本茶业有限公司。
43.山楂，品种：大五菱山楂，采购自山东沂蒙山楂批发市场。
44.甘蔗、苦瓜、黄瓜为上海市农贸市场购买的常规农产品。
45.决明子，采购自亳州市亿弘堂药业有限公司。
46.蜂蜜，百花蜂蜜，北京天蜂奇科技开发有限公司。
47.纤维素酶，酶活性：200000u/g，泰安信得利生物工程有限公司。
48.半纤维素酶，酶活性：50000u/g，北京夏盛生物科技开发有限公司。
49.保加利亚乳杆菌，lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus，菌株编号：cicc20247，采购自中国工业微生物保藏管理中心。
50.肠膜明串珠菌，leuconostoc mesenteroides，菌株编号：cicc 20074，采购自中国工业微生物保藏管理中心。
51.马克斯克鲁维酵母，kluyveromyces marxianus，菌株编号：cicc 1276，采购自中
国工业微生物保藏管理中心。
52.长双歧杆菌，bifidobacterium longum，菌株编号：cicc 6188，采购自中国工业微生物保藏管理中心。
53.植物乳杆菌，lactobacillus plantarum subsp.plantarum，菌株编号：cicc 10345，采购自中国工业微生物保藏管理中心。
54.酪蛋白磷酸肽，货号：r000005，上海易恩化学技术有限公司。
55.麦饭石，货号：011，粒径：325目，灵寿县隆辉矿产品加工厂。
56.硅酸钠，货号：03，济南千奇化工有限公司。
57.石蜡，cas号：8002-74-2，货号：r002109，上海易恩化学技术有限公司。
58.大豆卵磷脂，cas号：8002-43-5，货号：ss2641，湖北实顺生物科技有限公司。
59.β-环糊精，食品级，分子量：1135，购买自郑州裕和食品添加剂有限公司。
60.羟基酪醇，cas：10597-60-1，食品级，购买自河北裕隆祥生物科技有限公司。
61.实施例中采用的知母总皂苷参照200510054633.1中制备例1制备方法制备而成。
62.实施例中采用的米糠多糖参照cn106432529b中实施例1中制备方法制备而成。
63.实施例1
64.一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
65.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐进行杀菌消毒；
66.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，得到原料；
67.(3)按质量份计，将90份步骤(2)制得的原料、15份辅料、0.1份发酵菌a、0.5份活化剂混合倒入发酵罐，密封摇匀，在室温阴凉环境下持续密封发酵，发酵周期为3.5个月，得到酵素；
68.(4)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至63℃恒温30min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
69.所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
70.所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
71.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
72.s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
73.s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
74.s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
75.s4按质量份计，取30份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1.5份酪蛋
白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
76.所述润湿剂为大豆卵磷脂。
77.实施例2
78.一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
79.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
80.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，得到原料；
81.(3)按质量份计，将80份步骤(2)制得的原料、15份辅料、0.1份发酵菌a、0.5份活化剂混合倒入发酵罐，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每7天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1个月，得到一次发酵酵素；
82.(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至63℃恒温30min，冷却至室温，然后再向其中加入0.07份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2.5个月，得到二次发酵酵素；
83.(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至63℃恒温30min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
84.所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
85.所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
86.所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比1：3混合。
87.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
88.s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
89.s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
90.s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
91.s4按质量份计，取30份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1.5份酪蛋白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
92.所述润湿剂为大豆卵磷脂。
93.实施例3
94.一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
95.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
96.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，向其中加入0.07份酶制剂，在40℃下，以80r/min转
速搅拌20min，然后静置酶解5h，得到所述酶解物；
97.(3)按质量份计，将80份步骤(2)制得的酶解物、15份辅料、0.1份发酵菌a、0.5份活化剂，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每7天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1个月，得到一次发酵酵素；
98.(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至63℃恒温30min，冷却至室温，然后再向其中加入0.07份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2.5个月，得到二次发酵酵素；
99.(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至63℃恒温30min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
100.所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶按质量比1.5：4混合而成。
101.所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
102.所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
103.所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比1：3混合。
104.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
105.s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
106.s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
107.s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
108.s4按质量份计，取30份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1.5份酪蛋白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
109.所述润湿剂为大豆卵磷脂。
110.实施例4
111.与实施例3基本相同，区别仅在于：
112.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，取31.5份酪蛋白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
113.实施例5
114.与实施例3基本相同，区别仅在于：
115.所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
116.s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
117.s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
118.s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得
到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
119.s4按质量份计，取31.5份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、55份水混合，得到所述活化剂。
120.所述润湿剂为大豆卵磷脂。
121.对比例1
122.一种具有减肥功能的复合果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
123.(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
124.(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，向其中加入0.07份酶制剂，在40℃下，以80r/min转速搅拌20min，然后静置酶解5h，得到所述酶解物；
125.(3)按质量份计，将80份步骤(2)制得的酶解物、15份辅料、0.1份发酵菌a，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每7天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1个月，得到一次发酵酵素；
126.(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至63℃恒温30min，冷却至室温，然后再向其中加入0.07份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2.5个月，得到二次发酵酵素；
127.(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至63℃恒温30min进行杀菌处理，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素。
128.所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶按质量比1.5：4混合而成。
129.所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
130.所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
131.所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比1：3混合。
132.测试例1
133.酶活性测定：
134.具有减肥功能的复合果蔬酵素经4000r/min离心10min，取上清液进行主要功效酶活性测定。
135.蛋白酶活性：采用福林酚法测定，参照gb/t 23527-2009《蛋白酶制剂》；
136.脂肪酶活性：采用滴定法测定，参照gb/t 23535-2009《脂肪酶制剂》；
137.α-淀粉酶活性：参照gb/t 24401-2009《α-淀粉酶制剂》；
138.sod酶活性：采用修改的marklund方法，参照gb/t 5009.171-2003《保健食品中超氧化物歧化酶(sod)活性的测定》。
139.表1：具有减肥功能的复合果蔬酵素酶活性测定结果
[0140] 蛋白酶u/l脂肪酶u/lα-淀粉酶u/lsod酶u/l实施例12230060009000
实施例230500760014000实施例336600900016000实施例432560860015000实施例531540850014500对比例12021040006000
[0141]
由表1可以看出，实施例3所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素酶活性最高，而对比例1中不添加活化剂所制得的酵素中各种酶的活性均为最低，这是由于麦饭石中含有动物所需的全部常量元素，如：k、na、ca、mg、cu、mo等微量元素和稀土元素，约58种之多，经水浸泡后的麦饭石，可溶出40多种元素，其中近20种为微量元素，此外，还有微量稀土元素，本发明制造的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷能够提高溶出元素的量，足以满足活化绝大部分金属酶所需金属离子的种类和数量。此外，由于发酵菌细胞外膜的脂多糖是通过与钙离子和镁离子的相互作用连接的，利用酪蛋白磷酸肽优异的钙离子螯合能力，能够破坏发酵菌细胞外膜结构，提高其通透性，使得更多的酶能够溶出，从而增大了酵素中酶的浓度。
[0142]
实施例2所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素酶活性低于实施例3，实施例1所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素酶活性低于实施例2，这表明酶解和半有氧发酵都对酶活性的提高起到了积极的作用。这是由于，先用纤维素酶对植物原料进行酶解，既可以加快植物细胞中成分的溶出，酶解产生的多糖也增大了发酵菌繁殖所需的碳水化合物，方便发酵菌繁殖，产生更多的酶。其次，本发明采用半有氧发酵和无氧发酵两步发酵法，充分考虑不同菌种发酵的氧需求，使得发酵更充分，缩短了发酵时间，同时，提高了酵素中酶的浓度。实施例4和实施例5所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素酶活性也低于实施例3，这表明酪蛋白磷酸肽和高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷具有协同作用，麦饭石溶出离子起活化，提升酶的催化能力的作用；酪蛋白磷酸肽起将酶从发酵菌体内释放，增加酵素中酶浓度的作用。二者协同，大大提升了所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素的酶活性。
[0143]
测试例2
[0144]
选取年龄在20-50岁之间的体重大于[(身高(cm)-105)
×
1.5]的肥胖者共360例，男女不分性别统计。
[0145]
用量用法：每晚1次，睡前服用，每次10g实施例和对比例所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素兑90g 35℃的水。疗程：每30天1个疗程，观察3疗程的疗效。
[0146]
治疗判断标准：
[0147]
痊愈：体重、体脂率回复至正常标准且随访半年未反弹者。显效：减去超额体重和体脂率的40％以上者。有效：减去超额体重和体脂率的20％以上者。无效：减去超额体重和体脂率的20％(不含20％)以下者。体脂率使用欧姆龙脂肪测试仪测试。
[0148]
治疗观察90天后进行统计。结果如下表：
[0149]
表2：90天实施例和对比例所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素的消脂效果
[0150] 肥胖人数痊愈/人显效/人有效/人无效/人实施例1602226120实施例2602622120实施例360401820实施例460361770
实施例560361860对比例16018121812
[0151]
由表2可以看出，实施例3所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素具有最好的消脂效果，且各实施例制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素对于瘦身都有不错的效果。这是由于本发明首先优选了一种新型植物组合，作为发酵的原料。其中，苦瓜的苦味有抑制食欲的效果，既可以防止暴食还能减少饮食量，达到减肥瘦身和保持身材的效果。另外苦瓜还有加速脂肪消耗和抑制脂肪堆积的作用，对减肥瘦身有着非常大的帮助。除此以外，苦瓜中还含有大量的食物纤维，有促进肠胃活动和加速消化排泄的效果。黄瓜中含有大量的食物纤维和水分，食用后可以促进肠胃蠕动，加速食物的消化，防止热量的堆积。另外黄瓜中还含有丙醇二酸，可以抑制糖分转化成脂肪，防止肥胖的发生。甘蔗提供大量糖类物质作为发酵菌的生存基础。决明子具有清热平肝、降脂降压、润肠通便的功效。荷叶有治疗便秘和促消化的作用，很快会得到瘦身的目的。山楂也具有帮助脂肪消解的功效。
[0152]
这种荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜赋予了酵素消脂瘦身的作用。
[0153]
保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母主要能量来源是酶解纤维素产生的多糖和植物原料溶出的水果多糖，产生酸性物质、芳香物质及多种酶。此外，还能调节酵素的ph值，为无氧发酵提供酸性环境。进一步的，本发明以长双歧杆菌、植物乳杆菌作为无氧发酵步骤的发酵菌种，主要消耗半有氧发酵没有消耗的蔗糖、大分子纤维多糖，及发酵菌a的代谢产物生存繁殖，其发酵周期长，能够产生多种非常规酶，例如6-磷酸果糖磷酸解酮酶，有益人体健康。这种新的发酵菌种配合，不仅增加了酵素液中活性酶的含量和种类，更能降低酵素中糖含量，有利于人体吸收，减少因消化困难导致的糖分转化为脂肪，达到消脂的目的。
[0154]
测试例3
[0155]
总酚含量测定：
[0156]
根据福林酚试剂使酵素液中多酚物质中的-oh基团变蓝且位于765nm吸光度最大的原理来测定，以没食子酸进行标准定量校正。
[0157]
标准曲线绘制方法：
[0158]
用移液枪分别准确吸取1000μg/ml没食子酸标准溶液于6支10ml容量瓶中，各试管中分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，加水使溶液体积补至刻度并摇匀，所得系列没食子酸标准溶液浓度分别为0、10、20、30、40、50μg/ml。然后吸取系列标准溶液1ml于各具塞试管内，分别加入10wt％福林酚试剂5ml后立即混匀，反应5min后加入7.5wt％的na2co3溶液4ml，充分摇匀，25℃下放置1h，蒸馏水作为参比溶液进行空白试验。765nm波长下记录测定的吸光度值，以没食子酸标准溶液浓度(μg/ml)为纵坐标y，吸光度值为横坐标x，绘制标准曲线。
[0159]
测定方法：
[0160]
用移液枪移取1ml实施例制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素于10ml具塞试管内，加入10％福林酚试剂5ml后立即混匀，反应5min后加入7.5％的na2co3溶液4ml，充分摇匀，25℃下放置1h，蒸馏水作为参比溶液进行空白试验，765nm波长下测量其吸光度值。记录测定的吸光度值，从标准曲线计算水果酵素样液含有的总酚浓度，结果见表3：
[0161]
表3：具有减肥功能的复合果蔬酵素总酚含量测定结果
[0162] 总酚含量μg/ml
实施例13.9实施例24.1实施例34.8
[0163]
由表3可以看出，实施例1和实施例2所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素中总酚含量相近，且都远小于实施例3所制得的具有减肥功能的复合果蔬酵素。这表明先用纤维素酶对植物原料进行酶解，可以加快植物细胞中成分的溶出，从而达到缩短发酵时间的目的。
[0164]
实施例6
[0165]
一种果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
[0166]
(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
[0167]
(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，向其中加入0.07份酶制剂，在40℃下，以80r/min转速搅拌20min，然后静置酶解5h，得到所述酶解物；
[0168]
(3)按质量份计，将80份步骤(2)制得的酶解物、15份辅料、0.1份发酵菌a、0.5份活化剂，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每7天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1个月，得到一次发酵酵素；
[0169]
(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至63℃恒温30min，冷却至室温，然后再向其中加入0.07份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2.5个月，得到二次发酵酵素；
[0170]
(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素；
[0171]
(6)向步骤(5)中得到的具有减肥功能的复合果蔬酵素中加入β-环糊精、羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖，搅拌均匀，经喷雾干燥、灭菌，得到果蔬酵素；其中喷雾干燥的条件为进风温度为130℃，出风温度为55℃、进料速度为8ml/min，喷雾气压为0.3mpa；所述β-环糊精占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的8％，所述羟基酪醇占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的2％，所述知母总皂苷占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的2％，所述米糠多糖占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的2％。
[0172]
所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶按质量比1.5：4混合而成。
[0173]
所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
[0174]
所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
[0175]
所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比1：3混合。
[0176]
所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
[0177]
s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
[0178]
s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得
到煅烧胚体；
[0179]
s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
[0180]
s4按质量份计，取30份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1.5份酪蛋白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
[0181]
所述润湿剂为大豆卵磷脂。
[0182]
实施例7
[0183]
一种果蔬酵素的制备方法，包括以下步骤：
[0184]
(1)发酵前处理：将荷叶、决明子、山楂、甘蔗、苦瓜、黄瓜用水洗净，沥水放置备用；对使用的菜刀、案板、玻璃发酵罐及勺子进行杀菌消毒；
[0185]
(2)按质量份计，将步骤(1)所述的荷叶4份、山楂8份、甘蔗6份、苦瓜4份、黄瓜15份进行切片后和4份决明子、59份水混合，向其中加入0.07份酶制剂，在40℃下，以80r/min转速搅拌20min，然后静置酶解5h，得到所述酶解物；
[0186]
(3)按质量份计，将80份步骤(2)制得的酶解物、15份辅料、0.1份发酵菌a、0.5份活化剂，密封摇匀，在室温阴凉环境下发酵，每7天开盖放气一次后密封摇匀继续发酵，持续1个月，得到一次发酵酵素；
[0187]
(4)按质量份计，采用巴氏杀菌法将所述一次发酵酵素加热至63℃恒温30min，冷却至室温，然后再向其中加入0.07份发酵菌b，转为持续密封发酵，发酵周期为2.5个月，得到二次发酵酵素；
[0188]
(5)后处理：用纱布对步骤(4)制备得到的二次发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径180目，得到滤液，采用滤膜对滤液进行二次过滤，滤膜孔径为0.8μm，得到二次滤液；采用浓缩机对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆，浓缩温度为48℃，真空度为-0.06mpa，浓缩为原体积的1/5，得到所述具有减肥功能的复合果蔬酵素；
[0189]
(6)向步骤(5)中得到的具有减肥功能的复合果蔬酵素中加入β-环糊精、米糠多糖，搅拌均匀，经喷雾干燥、灭菌，得到果蔬酵素；其中喷雾干燥的条件为进风温度为130℃，出风温度为55℃、进料速度为8ml/min，喷雾气压为0.3mpa；所述β-环糊精占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的8％，所述米糠多糖占具有减肥功能的复合果蔬酵素重量的2％。
[0190]
所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶按质量比1.5：4混合而成。
[0191]
所述辅料为蜂蜜和果糖按质量比1：2混合。
[0192]
所述发酵菌a为保加利亚乳杆菌、肠膜明串珠菌、马克斯克鲁维酵母按质量比1：1：5混合。
[0193]
所述发酵菌b为长双歧杆菌、植物乳杆菌按质量比1：3混合。
[0194]
所述活化剂的制备方法，包括以下步骤：
[0195]
s1取麦饭石，球磨至平均粒径4μm，得到麦饭石微粉；
[0196]
s2按质量份计，取30份步骤s1制得的麦饭石微粉、8份硅酸钠、30份石蜡、润湿剂0.8份、尿素15份混合，在90℃下搅拌15min，注入直径3mm的模具，然后冷却至室温，脱模，得到煅烧胚体；
[0197]
s3将s2制得的煅烧胚体置于900℃下煅烧1.5h，取出冷却至室温，经洗涤、干燥，得到高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷；
[0198]
s4按质量份计，取30份步骤s3制得的高吸附高离子溶出型麦饭石陶瓷、1.5份酪蛋白磷酸肽、55份水混合，得到所述活化剂。
[0199]
所述润湿剂为大豆卵磷脂。
[0200]
测试例4
[0201]
降血脂测试：
[0202]
取spf级健康雄性大鼠30只，sd雄性大鼠体重为150
±
20g，采用高脂饲料喂养大鼠制备高胆固醇脂代谢紊乱模型，造模两周后不禁食尾部采血。将大鼠随机分为三组，包括对照组、实施例6产品组、实施例7产品组，其中实施例6、实施例7产品组分别采用实施例6、实施例7制备的果蔬酵素进行喂养，对照组采用普通饲料喂养，每天100mg/kg
·
bw，喂养期间大鼠自由摄食、饮水，灌胃给予两周后于实验结束不禁食采血，采血后尽快分离血清，测试血清中tc、tg水平。
[0203]
高脂饲料为基础饲料75.6％、胆固醇2％、胆盐0.15％、猪油12％、蛋黄10.25％；所述基础饲料为麸皮23％、玉米20％、面粉20％、米粉10％、大豆20％、鱼粉3％、骨粉3％、食盐0.5％、维生素0.5％。
[0204]
表4果蔬酵素降血脂性能
[0205][0206][0207]
从上述数据可知，本发明中复合果蔬酵素与β-环糊精、羟基酪醇、知母总皂苷、米糠多糖相结合，协同作用，其将血脂作用显著优于实施例7，是本发明人付出创造性劳动得到的。