一种肉珊瑚苷元的制备方法

1.本发明涉及肉珊瑚苷元提取领域，具体涉及一种肉珊瑚苷元的制备方法。


背景技术：

2.中国专利zl201510324854.x公布了肉珊瑚苷元可作为抗抑郁化合物在制备抗抑郁药物和抗抑郁保健食品中的应用。其制备肉珊瑚苷元的方法为以泰山白首乌为原料，乙醇水溶液提取，乙醇提取物再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物以硫酸甲醇溶液水解，碳酸氢钠中和，浓缩，浓缩物以乙酸乙酯萃取，萃取物即总苷元。总苷元上硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇系统洗脱，收集含肉珊瑚苷元部分，再使用十八烷基烷化硅胶反复柱层析，甲醇-水系统洗脱，合并含肉珊瑚苷元部分，再经甲醇重结晶得到肉珊瑚苷元，得率约0.046％。该发明制备肉珊瑚苷元的步骤繁琐，周期长；使用了乙酸乙酯、二氯甲烷等有机溶剂，易导致环境污染；且使用十八烷基烷化硅胶，制备成本高。
3.黑鳗藤[jasminanthes mucronata(blanco)merr.]，又名博如藤、白地牛，系萝藦科黑鳗藤属植物，主要分布于浙江、福建、湖南、广东、广西、四川等省，为中国南部地区民间草药，具有强筋骨、祛风湿的功效。我们发现黑鳗藤的主要成分为c
21
甾体苷，其母核主要为肉珊瑚苷元衍生物，此类衍生物在肉珊瑚苷元的12位及20位羟基上链接着乙酰基、惕各酰基、桂皮酰基、烟酰基、(n-甲基)邻氨基苯甲酰基等不同的侧链，并在3位羟基上链接由葡萄糖、磁麻糖、6-去氧-3-o-甲基-β-d-阿洛糖、黄花夹竹桃糖等组成的糖链。通过酸水解，可以将3位羟基的糖链去除，得到苷元部分；苷元部分再经碱水解可以将12位及20位的酰基去除，得到肉珊瑚苷元。


技术实现要素：

[0004]
本发明所要解决的技术问题是，克服中国专利zl201510324854.x现有技术存在的缺陷，提供一种周期短，步骤简便，有机溶剂用量少，成本低廉的肉珊瑚苷元的制备方法。
[0005]
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了以下的技术方案：
[0006]
一种肉珊瑚苷元的制备方法，包括以下步骤：
[0007]
1)粉碎：黑鳗藤的根或茎粉碎机粉碎后，得到黑鳗藤粉；
[0008]
步骤1)中，黑鳗藤的根或茎粉碎后目数为10～50目，即黑鳗藤粉的目数为10～50目。
[0009]
2)提取：黑鳗藤粉按液固比2-15:1加入醇溶液，加热回流提取1-2h，第一次提取液过滤；滤渣继续按液固比2-15:1加入醇溶液，加热回流提取1-2h，第二次提取液过滤，合并二次提取溶液；
[0010]
步骤2)中，醇溶液为体积百分数20％-95％的乙醇水溶液或甲醇水溶液，最优选为体积百分数70％的乙醇水溶液。
[0011]
3)浓缩：将合并的提取溶液减压浓缩得干浸膏；
[0012]
4)酸水解：干浸膏中按液固比5-15:1加入盐酸醇水溶液，60-80℃进行搅拌酸水解
1-5h；
[0013]
步骤4)中，所述的盐酸醇水溶液中盐酸的浓度为0.1～0.5mol/l(进一步优选为0.2mol/l)，所述的盐酸醇水溶液采用盐酸和体积百分比20％-95％的乙醇或甲醇水溶液(优选为体积百分比70％的乙醇水溶液)配置而成；
[0014]
5)碱水解：酸水解结束后，向酸水解液中加入固体氢氧化钠，在50-70℃进行搅拌碱水解1-8h，碱水解结束后，水解液加盐酸调中性，
[0015]
步骤5)中，加入氢氧化钠后的水解液中氢氧化钠终浓度为0.5-1.5mol/l；
[0016]
6)大孔树脂吸附：将中和后的碱水解液加水稀释10-20倍，以3-6bv/h的流速上s-8树脂柱，直至上样饱和；洗脱，减压浓缩至干浸膏；
[0017]
步骤6)中，洗脱具体包括：
[0018]
用水以3-6bv/h的流速洗脱；再以体积百分数10-95％乙醇水溶液3-6bv/h的流速洗脱，收集醇洗脱液；
[0019]
步骤6)中，将中和后的碱水解液加水稀释10-20倍，以3-6bv/h的流速上s-8树脂柱，直至上样饱和；用水以3-6bv/h的流速洗脱6bv；再以体积百分数10-95％乙醇3-6bv/h的流速洗脱3-6bv，收集醇洗脱液，减压浓缩至干浸膏，备用；
[0020]
7)结晶：第6)步得到的干浸膏按照液固比3-5:1加入甲醇，50-60℃溶解，置4-8℃结晶69～75h，滤取结晶，甲醇润洗；
[0021]
8)重结晶：第7)步得到的结晶中按照液固比15-30:1加入甲醇，50-60℃溶解，置4-8℃结晶69～75h，滤取结晶，甲醇润洗即得纯度大于99％的肉珊瑚苷元，收率可达0.28％。
[0022]
本发明以黑鳗藤的根和茎为起始原料，经粉碎，提取、浓缩、酸水解、碱水解、层析、浓缩、结晶工序生产而成，具体步骤如下：
[0023]
1、黑鳗藤的根或茎粉碎机粉碎后，待用；
[0024]
2、提取，黑鳗藤粉按液固比2-15:1加入醇溶液，加热回流提取1-2h，第一次提取液过滤；滤渣继续按液固比2-15:1加入醇提取溶液，加热回流提取1-2h，第二次提取液过滤；
[0025]
3、合并二次提取溶液，减压浓缩得干浸膏，备用；
[0026]
4、干浸膏中按液固比5-15:1加入0.2mol/l盐酸醇溶液，60-80℃进行搅拌酸水解1-5h；
[0027]
5、酸水解结束后，向酸水解液中加入固体氢氧化钠，使水解液中氢氧化钠终浓度为0.5-1.5mol/l，50-70℃进行搅拌碱水解1-8h；
[0028]
6、碱水解结束后，水解液加盐酸调中性，备用；
[0029]
7、大孔树脂吸附：将中和后的碱水解液加水稀释10-20倍，以3-6bv/h的流速上s-8树脂柱，直至上样饱和；用水以3-6bv/h的流速洗脱6bv；再以10-95％乙醇3-6bv/h的流速洗脱3-6bv，收集醇洗脱液，减压浓缩至干浸膏，备用；
[0030]
8、结晶：第7步得到的干浸膏按照液固比3-5:1加入甲醇，50-60℃溶解，置4-8℃结晶72h，滤取结晶，甲醇润洗；
[0031]
9、重结晶：第8步得到的结晶中按照液固比15-30:1加入甲醇，50-60℃溶解，置4-8℃结晶72h，滤取结晶，甲醇润洗即得纯度大于99％的肉珊瑚苷元，收率可达0.28％。
[0032]
进一步的，步骤1所述的黑鳗藤根或茎粉碎后目数为10～50目。
[0033]
进一步的，步骤2所述的醇溶液为20％-95％的乙醇或甲醇溶液。
[0034]
进一步的，步骤3所述的减压浓缩温度不得超过70℃。
[0035]
进一步的，步骤4所述的醇溶液为20％-95％的乙醇或甲醇溶液。
[0036]
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0037]
本发明工艺简单，采用简单的提取纯化工艺，可达到生产高纯度肉珊瑚苷元的质量要求，肉珊瑚苷元纯度可大于99％。本发明肉珊瑚苷元制备工艺总收率可高达0.2％，比传统工艺收率提高了300％。本发明采用大孔树脂吸附即可去除大量杂质，替代了传统工艺中采用萃取和硅胶柱层析使用的大量易挥发有机溶剂，减少了环境污染。本发明采用大孔吸附树脂纯化工艺替代了传统工艺中的十八烷基烷化硅胶反复柱层析，降低了成本，有利于大规模生产。
附图说明
[0038]
图1.以黑鳗藤中含量最高的c
21
甾体苷黑鳗藤新苷k(smk)的酸水解及碱水解的过程为例进一步说明本发明的制备过程：黑鳗藤新苷k(smk)经酸水解可以得到苷元12-o-乙酰基-20-o-(n-甲基)邻氨基苯甲酰基肉珊瑚苷元(sta)；12-o-乙酰基-20-o-(n-甲基)邻氨基苯甲酰基肉珊瑚苷元(sta)经碱水解可以得到肉珊瑚苷元。
[0039]
图2.为本发明的流程图，用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。
具体实施方式
[0040]
以下结合实例进一步对本发明实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。本发明中的固液比的单位为g：ml，本发明中实施例中的百分数均为体积百分数。
[0041]
实施例1：
[0042]
如图1和图2所示，本实施例包括以下步骤：
[0043]
(1)提取：5kg黑鳗藤的茎粉碎机粉碎过10目筛，按液固比10:1加入70％乙醇溶液，加热回流提取1.5h，第一次提取液过滤；滤渣继续按液固比10:1加入70％乙醇提取溶液，加热回流提取1.5h，第二次提取液过滤；合并二次提取溶液，减压浓缩得752g干浸膏i，备用；
[0044]
(2)酸水解：752g干浸膏i中按液固比13:1加入0.2mol/l盐酸70％乙醇溶液(盐酸:70％乙醇＝1:59配置)，70℃进行搅拌酸水解3h；
[0045]
(3)碱水解：酸水解结束后，向酸水解液中加入固体氢氧化钠，使水解液中氢氧化钠终浓度为1.25mol/l，63℃进行搅拌碱水解6h；碱水解结束后，水解液加盐酸调节ph＝7，备用；
[0046]
(4)大孔树脂吸附纯化：将中和后的碱水解液加水稀释20倍，以6bv/h的流速上s-8大孔树脂柱，直至上样饱和；用水以6bv/h的流速洗脱6bv；再以50％乙醇6bv/h的流速洗脱4bv，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩得179g干浸膏ii，备用；
[0047]
(5)结晶：179g干浸膏ii按照液固比4:1加入甲醇，50℃溶解，置6℃结晶72h，滤取并以甲醇润洗得22.0g结晶i；结晶i中按照液固比20:1加入甲醇，60℃溶解，置6℃结晶72h，滤取并以甲醇润洗得14.0g结晶ii，即为纯度大于99％的肉珊瑚苷元，收率0.28％。
[0048]
实施例2：肉珊瑚苷元的结构表征
[0049]
本品为白色结晶状粉末，无味。熔点157.3-160.4℃。[α]2d0 68.1
°
(meoh；c 1.0)。
hresi-ms(positive)m/z:405.2251[c
21h34
o6 na]

，计算值:405.2253。1h nmr(c5d5n,500mhz):δ3.96(1h,m,h-3),5.46(1h,br s,h-6),3.96(1h,m,h-12),1.99(3h,s,h-18),1.50(3h,s,h-19),4.49(1h,m,h-20),1.55(3h,d,j＝6.5hz,h-21)。
13
c nmr(c5d5n,125mhz):δ39.9(c-1),32.7(c-2),71.3(c-3),44.0(c-4),140.6(c-5),119.6(c-6),34.8(c-7),74.7(c-8),45.1(c-9),37.9(c-10),29.7(c-11),72.1(c-12),59.1(c-13),89.4(c-14),35.1(c-15),35.8(c-16),89.5(c-17),11.9(c-18),19.0(c-19),73.7(c-20),18.3(c-21)。经光谱数据分析和理化性状测定与文献报道[warashina t,noro t.steroidal glycosides from cynanchum caudatum.phytochemistry 1995；39(1):199-204.]的肉珊瑚苷元完全一致。