分析检测白酒大曲中二肽类物质的丹磺酰氯衍生化方法与流程

技术特征：
1.用于分析检测白酒大曲中二肽类物质的丹磺酰氯衍生化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)白酒大曲的预处理将白酒大曲经珠打研磨成细曲样本，经过浸泡、液液萃取、离心得到大曲提取物；向大曲提取物中加入内标化合物并冻干备用，所述内标化合物包括甲硫氨酸-d3、缬氨酸-d8、丙氨酸-d4、甘氨酸-d5、苯丙氨酸-d5、谷氨酰胺-d5、丝氨酸-13
c；(2)丹磺酰氯衍生化利用丹磺酰氯-碳酸钠/碳酸氢钠体系在ph8.0对大曲提取物进行低温衍生化，得到用于进行液相色谱-质谱联用技术分析的溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述白酒大曲包括黄曲、白曲、黑曲三种类型的拆仓大曲。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二肽为除了半胱氨酸之外的十九种组成生命体蛋白质的氨基酸所组成的361种直链二肽中的一种或二种以上，十九种氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)：将白酒大曲样本经25～30hz珠打研磨5～8分钟成粉末状细曲样本；向3～6mg珠打研磨后的大曲样本中加入400～600μl甲醇，于3～5℃浸泡过夜后加入400～600μl氯仿，涡旋1～2分钟后加入100～300μl超纯水，涡旋20～40分钟后离心取200～400μl上层水相，加入50～100μl二肽标样溶液，真空冷冻干燥。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述二肽标样，包括his-asp、thr-val、leu-his、his-val、asp-val、val-his、his-his、his-thr、val-val、thr-thr、his-leu、asp-leu、asp-his、leu-val、leu-asp、thr-leu、val-leu、asp-asp、thr-asp、asp-thr、pro-gly、glu-cys、asp-ala、glu-glu、gln-leu、ile-arg、his-asn、ala-asp、asp-phe、asp-ala、arg-phe、gly-asn、arg-arg、ile-pro、met-pro、tyr-glu、hpm、hpq。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)：向真空冷冻干燥后的样本提取物中加入40～60μl的40～50mg/ml的丹磺酰氯乙腈溶液，涡旋1～2分钟后，加入等体积0.4～0.6m、ph＝9.0～9.2的碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液，涡旋1～2分钟后，加入1～3μl、1～3m的氢氧化钠溶液，涡旋1～2分钟后，于4℃～10℃反应60～80分钟，于12000～15000g离心5～10分钟后，取上清液用于液质联用分析。7.利用液相色谱-质谱联用技术对白酒大曲中的二肽进行分析检测的方法，其特征在于，利用权利要求1～6任一所述方法对白酒大曲中二肽类物质进行丹磺酰氯衍生化，然后利用液相色谱-质谱联用技术对样本进行分析，通过对数据中的衍生化二肽色谱峰进行提取，得到可用于表征二肽相对含量的数据。

技术总结
本发明公开了分析检测白酒大曲中二肽类物质的丹磺酰氯衍生化方法，属于分析化学和食品检验应用领域。本发明通过蛋白去除、衍生化反应等步骤对大曲样本进行预处理，对丹磺酰氯衍生化反应pH、衍生化试剂用量、时间、温度等条件进行优化考察，建立起针对白酒大曲中二肽类化合物高灵敏分析检测的衍生化方法。该方法具有简单、灵敏、可靠的优点。可靠的优点。可靠的优点。


技术研发人员：杨帆 王莉 胡阳 许国旺 卢建军 陈良强 王紫萱 陆欣 胡春秀
受保护的技术使用者：贵州茅台酒股份有限公司
技术研发日：2022.06.14
技术公布日：2022/9/13