一种pH/还原双重响应聚合物交联胶束及其制备方法

一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束及其制备方法
技术领域
1.本技术涉及聚合物胶束技术领域，尤其涉及一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束及其制备方法。


背景技术：

2.癌症治疗是世界各国医学领域重点研究的领域。近年来，医学工作者经过研究发现，肿瘤细胞与正常细胞内微环境条件明显不同，如肿瘤细胞中ph低于正常细胞ph，肿瘤细胞中ph为5.0～6.0，正常细胞中ph为7.4；同时，研究还发现，肿瘤细胞中谷胱甘肽浓度比正常组织细胞高数倍，导致肿瘤细胞中还原响应高于正常细胞。肿瘤细胞与正常细胞内微环境条件的不同，即肿瘤细胞微环境具有高还原响应和微酸性，为医学工作者实现抗癌药物在肿瘤组织的靶向递送提供了理论基础。
3.纳米聚合物胶束由两亲性聚合物在水中自组装形成，胶束的疏水性内核可以包载难溶性药物，提高疏水性药物的水溶性，亲水性外壳可避免巨噬细胞系统对胶束的吞噬以及网状内皮系统的非特异性识别，延长了药物在体内的循环时间；利用纳米尺度的epr效应，聚合物载药胶束能够增强药物通透性和滞留效应，促进抗癌药物在肿瘤组织部位的累积，从而降低药物的毒副作用，提高抗癌药物的治疗效果。同时，接入ph响应嵌段、氧化还原响应嵌段等，能实现抗癌药物的靶向递送，使载药胶束在正常细胞环境中稳定存在，在肿瘤细胞处释放药物。然而，尽管各种纳米聚合物胶束在抗癌药物的递送研究已取得巨大进展，但其稳定性和药物控释性能还有待提高。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本技术提供了一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束及其制备方法，用于解决现有技术中纳米聚合物载药胶束的稳定性和药物控释性能还有待提高的技术问题。
5.本技术第一方面提供了一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束，所述交联胶束中聚合物的结构式为：
[0006][0007]
其中，x＝8～23，y＝36～47，z＝14～19。
[0008]
优选的，所述ph/还原双重响应聚合物交联胶束的数均分子量为18126～36126g/mol。
[0009]
本技术第二方面提供了一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束的制备方法，用于制备负载抗癌药物的聚合物交联胶束，制备方法包括以下步骤：
[0010]
步骤1、在惰性气体保护和无水无氧条件下，将γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯、ε-己内酯、含二硫键的小分子引发剂以及第一催化剂混合后，进行开环聚合反应，得到大分子引发剂；
[0011]
步骤2、在氮气氛围下，将聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯、大分子引发剂、溶剂、第二催化剂以及配体混合后，冷冻-抽气-升温三次，室温下搅拌，得到催化剂配合物；
[0012]
步骤3、将催化剂配合物与还原剂搅拌后，进行油浴反应，得到还原响应聚合物；
[0013]
步骤4、将还原响应聚合物与三氟乙酸溶于二氯甲烷后搅拌反应，得到ph/还原双重响应聚合物；
[0014]
步骤5、将步骤4所得到的ph/还原双重响应聚合物和抗癌药物，通过透析，得到ph/还原双重响应聚合物载药胶束透析液；
[0015]
步骤6、将步骤5得到的ph/还原双重响应聚合物载药胶束透析液，加入2,3-二甲基马来酸酐进行交联，得到ph/还原双重响应聚合物载药交联胶束；
[0016]
步骤1中，所述第一催化剂为辛酸亚锡，所述开环聚合反应的100～130℃下反应24～48h；
[0017]
步骤2中，所述第二催化剂为溴化铜，所述配体为五甲基二乙基三胺，所述溶剂为四氢呋喃或甲苯；
[0018]
步骤3中，所述还原剂为辛酸亚锡，所述油浴反应的温度为60～70℃，时间为12～24h。
[0019]
优选的，步骤5中，所述ph/还原双重响应聚合物载药胶束透析液的制备包括：称取ph/还原双重响应聚合物和疏水性抗癌药物，以3～6：1～3的比例溶于有机溶剂中，搅拌4～12h后用去离子水透析24～72h，期间每3～6h换一次去离子水。
[0020]
优选的，所述疏水性抗癌药物为紫杉醇。
[0021]
需要说明的是，本技术提供的述ph/还原双重响应聚合物载药交联胶束中包括了疏水嵌段，适用于疏水药物的负载，可对疏水性抗癌药物的增溶作用，提高聚合物交联胶束的载药能力。
[0022]
优选的，步骤6中，所述ph/还原双重响应聚合物载药交联胶束的制备包括：取ph/还原双重响应聚合物载药胶束透析液，加入二甲基马来酸酐，在弱碱性条件下室温搅拌交联反应6～12h，反应完毕后用去离子水透析12～36h，期间每3～6h换一次去离子水，得到ph/还原双重响应聚合物载药交联胶束。
[0023]
优选的，以质量份计算，所述ph/还原双重响应聚合物载药交联胶束的制备原料包括：0.01～0.03质量份2,3-二甲基马来酸酐。
[0024]
优选的，所述弱碱性为ph 8～10。
[0025]
优选的，所述步骤3中，油浴反应之后还包括：加入溶剂稀释油浴反应产物后，通过中性氧化铝层析柱除去催化剂。
[0026]
优选的，所述中性氧化铝层析柱的洗脱剂为四氢呋喃。
[0027]
优选的，以质量份计算，所述大分子引发剂的制备原料包括：49.6～66.3质量份ε-己内酯，12.8～21.6质量份γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯，0.05～0.06质量份辛酸亚锡，0.8～1.2质量份含二硫键的小分子引发剂。
[0028]
优选的，得到大分子引发剂之前，还包括：浓缩、沉淀、过滤、干燥，所述沉淀是将浓缩后的产物溶解于少量的二氯甲烷中，再将此溶液转入10倍体积量的冷乙醚中进行沉淀。
[0029]
优选的，以质量份计算，所述还原响应聚合物的制备原料包括：3.4～4.1质量份大分子引发剂，4.8～5.9质量份聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯，0.013～0.022质量份溴化铜，0.12～0.20质量份五甲基二乙基三胺，0.26～0.38份辛酸亚锡。
[0030]
优选的，以质量份计算，所述ph/还原双重响应聚合物的制备原料包括：0.6～1.2质量份还原响应聚合物，0.8～1.6质量份三氟乙酸。
[0031]
步骤3中，得到还原双重响应聚合物之前，还包括：浓缩、沉淀、过滤、干燥；
[0032]
所述沉淀是将浓缩后的产物溶解于少量的四氢呋喃中，再将此溶液转入10倍体积量的冷正己烷中进行沉淀。
[0033]
步骤4中，得到ph/还原双重响应聚合物之前，还包括：浓缩、沉淀、过滤、干燥；
[0034]
所述沉淀是将浓缩后的产物溶解于少量的四氢呋喃中，再将此溶液转入10倍体积量的冷正己烷中进行沉淀。
[0035]
优选的，所述γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯的制备方法包括：将4-(叔丁基氧羰基氨基)环己酮和3-氯过氧苯甲酸溶于二氯甲烷中，在40～50℃反应12～24h，得到γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯。
[0036]
优选的，以质量份计算，所述γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯的制备原料包括：20.6～22.4质量份4-(叔丁基氧羰基氨基)环己酮，19.3～21.8质量份3-氯过氧苯甲酸。
[0037]
优选的，步骤1中，所述含二硫键的小分子引发剂的制备方法包括：在惰性气体保护和无水条件下，将双(2-羟基乙基)二硫醚溶于四氢呋喃，加入三乙胺，冷却至0℃。逐滴加入2,4-二溴异丁酰溴并搅拌，滴加完毕后在0℃条件下反应1～3h，然后在室温下继续反应12～24h。
[0038]
优选的，所述四氢呋喃为除去水的四氢呋喃。
[0039]
优选的，以质量份计算，所述含二硫键的小分子引发剂的制备原料包括：5.96～6.41质量份双(2-羟基乙基)二硫醚，6.42～6.58质量份三乙胺4.88～4.98质量份2,4-二溴异丁酰溴。
[0040]
优选的，反应结束后，还包括浓缩、洗涤含二硫键的小分子引发剂；
[0041]
优选的，所述浓缩包括：将反应液进行减压旋转蒸发，以除去有机溶剂；
[0042]
所述洗涤包括：用稀盐酸、碳酸氢钠溶液和去离子水依次洗涤小分子引发剂。
[0043]
综上所述，本技术提供了一种ph/还原双重响应聚合物交联胶束的制备方法，ph/还原双重响应聚合物交联胶束的结构中包括聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯、γ-氨基-ε-己内酯、ε-己内酯、2,3-二甲基马来酸酐以及二硫键。其中，聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯为亲水嵌段，与线性的聚乙二醇相比，能够提高胶束在中性条件下的稳定性；ε-己内酯为疏水嵌段，从而可改善胶束对疏水性药物的载药量；而二硫键为还原响应基团，在还原条件下，二硫键通过巯基-二硫键交换反应后断裂，导致胶束结构变化，使聚合物亲疏水平衡发生变化，从而使得胶束具有还原响应；γ-氨基-ε-己内酯的氨基，可作为交联基团，通过引入酸不稳定的2,3-二甲基马来酸酐作为交联剂，在微碱性条件下γ-氨基-ε-己内酯的氨基发生可逆交联反应，形成可逆交联键，可提高载药胶束的稳定性；在如肿瘤组织酸性环境中，酸不稳定的可逆交联键可迅速水解断裂，解除交联；同时，在如肿瘤组织高谷胱甘肽还原条件的作用下，二硫键发生断裂，胶束结构发生变化，从而实现药物的精准快速释放。因此，本技术提供的ph/还原双重响应聚合物交联胶束，在正常细胞内微环境条件中可稳定存在，在肿瘤细胞中的酸性以及高谷胱甘肽浓度或其他高还原响应和微酸性的细胞环境下，可释放迅速药物。因此，与非交联胶束相比，本技术所制备的载药交联胶束，其稳定性得到进一步提高，又能在肿瘤环境处快速释放药物，可解决现有技术中聚合物载药胶束的稳定性能和药物控释的性能还有待提高的技术问题。
具体实施方式
[0044]
为使得本技术的发明目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而非全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本技术保护的范围。
附图说明
[0045]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0046]
图1为γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯的合成工艺路线图；
[0047]
图2为ph/还原双重响应聚合物交联胶束的合成工艺路线图；
[0048]
图3为实施例4中ph/还原双重响应聚合物胶束交联前后的核磁共振氢谱图；
[0049]
图4为实施例4中ph/还原双重响应聚合物胶束交联前后的ft-ir图谱；
[0050]
图5为实施例8中ph/还原双重响应聚合物空白胶束交联前后粒径随时间变化图；
[0051]
图6为实施例9中ph/还原双重响应载药交联胶束的透射电镜图及动态光散射法测定的dls图；
[0052]
图7为实施例10中ph/还原双重响应载药交联胶束的体外释放曲线图；
[0053]
图8为实施例4中ph/还原双重响应载药交联胶束与ph/还原双重响应非交联载药的胶束的体外释放曲线图。
[0054]
实施例1
[0055]
本实施例1提供了γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯的制备工艺，包括步骤：
[0056]
将4-(叔丁基氧羰基氨基)环己酮(21.3g，0.1mol)和3-氯过氧苯甲酸(20.6g，0.12mol)溶解在无水二氯甲烷(100ml)中，并将混合物在43℃下冷凝回流反应24h，反应结束后旋转蒸发二氯甲烷，把浓缩后的产物滴加到体积为其十倍量的冷乙醚中沉淀，过滤，在室温下真空干燥24h，得到γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯。
[0057]
实施例2
[0058]
本实施例2提供了含二硫键的小分子引发剂的制备工艺，包括步骤：
[0059]
将双(2-羟基乙基)二硫醚(15.425g，100mmol)和搅拌子加入到100ml无水无氧反应瓶中，用反口橡皮塞进行密封，抽真空-通氮气三次，在氮气氛围下用注射器加入100ml无水四氢呋喃和无水三乙胺(13.900ml，100mmol)，冰浴冷却至0℃。边搅拌边逐滴加入2,4-二溴异丁酰溴(9.888ml，80mmol)，滴加完毕后在0℃条件下继续反应3h，然后在室温下继续反应24h，过滤除去不溶物三乙胺盐，旋蒸滤液，再用二氯甲烷稀释。用稀盐酸溶液、碳酸氢钠溶液、去离子水依次洗涤三次后再用无水硫酸镁过夜干燥，过滤，旋蒸浓缩滤液，40℃下真空干燥所得产物12h，得到含二硫键的小分子引发剂。
[0060]
实施例3
[0061]
本实施例3提供了大分子引发剂的制备工艺，包括步骤：
[0062]
在100ml无水无氧反应瓶中加入实施例2制备的小分子引发剂(0.244g，0.8mmol)和γ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯(3.46g，15.0mmol)，用反口橡皮塞进行密封，抽真空-通氮气三次，用注射器分别加入ε-己内酯(5.70g，50.0mmol)和催化剂辛酸亚锡(0.00916g，0.02mmol)，置于130℃油浴中反应24h，反应结束后冷却到室温，用少量二氯甲烷溶解产物，往体积为其十倍量的冷乙醚中逐滴加入反应溶液并搅拌使其沉淀，抽滤，在室温下真空干燥12h，得到产物大分子引发剂。
[0063]
实施例4
[0064]
本实施例4提供了ph/还原双重响应聚合物交联胶束的制备工艺，包括步骤：
[0065]
步骤1、在100ml无水无氧反应瓶中放入搅拌子、实施例3制备的大分子引发剂(9.439g，1mmol)和溴化铜(0.018g，0.08mmol)，把反应瓶密封后，依次抽真空-通氮气三次，再依次加入聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯(4.75g，10mmol)、无水四氢呋喃20ml、配体五甲基二乙基三胺(0.190ml，0.8mmol)，搅拌15min后溴化铜/五甲基二乙基三胺催化剂配合物形成，再用注射器将溶于10ml无水四氢呋喃中的还原剂辛酸亚锡(0.324g，0.8mmol)加入反应瓶中，接着搅拌20min，再在60℃油浴中反应24h，冷却到室温时，用四氢呋喃稀释反应后所得溶液，过中性氧化铝层析柱除去催化剂，旋蒸溶液，逐滴加入体积为其十倍量的冰冻的正己烷中沉淀，抽滤，最后于40℃真空干燥12h，得到还原响应聚合物；
[0066]
步骤2、将溶于5ml无水二氯甲烷的三氟乙酸(1.2g，10mmol)溶液缓慢加入到溶于
5ml无水二氯甲烷的还原响应聚合物(0.8g，0.9mmolγ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯)溶液中，将反应在室温下搅拌24h，反应结束后旋转蒸发二氯甲烷。将粗产物溶解在少量四氢呋喃中，并在体积为其十倍量的冷冻正己烷中沉淀两次，抽滤，抽真空除去残留的溶剂，得到ph/还原双重响应聚合物；
[0067]
步骤3、将30mg步骤2制备的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后准确加入15mg紫杉醇，混合均匀后转入透析袋(mwco3500)，于1l去离子水中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后，转移透析袋里的溶液至烧杯，滴加少量0.1mol/l的naoh溶液以调节ph为弱碱性。称取2,3-二甲基马来酸酐(0.01g，0.1mmol)并加入到烧杯中，继续用naoh溶液将ph保持在9.0，室温下搅拌12h，反应完毕后转移到透析袋(mwco3500)使用去离子水透析24h，每4小时更换一次水。透析完毕后将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后冷冻干燥，即可得到ph/还原双重响应聚合物交联胶束。
[0068]
实施例5
[0069]
本实施例5提供了ph/还原双重响应聚合物交联胶束的制备工艺，包括步骤：
[0070]
步骤1、在100ml无水无氧反应瓶中放入搅拌子、实施例3制备的大分子引发剂(9.439g，1mmol)和溴化铜(0.022g，0.1mmol)。把反应瓶密封后，依次抽真空-通氮气三次，再依次加入聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯(7.13g，15mmol)、无水四氢呋喃30ml、配体五甲基二乙基三胺(0.238ml，1.0mmol)。搅拌15min后溴化铜/五甲基二乙基三胺催化剂配合物形成。再用注射器将溶于10ml无水四氢呋喃中的还原剂辛酸亚锡(0.405g，1.0mmol)加入反应瓶中，接着搅拌20min，再在60℃油浴中反应24h，冷却到室温时，用四氢呋喃稀释反应后所得溶液，过中性氧化铝层析柱除去催化剂，旋蒸溶液，逐滴加入体积为其十倍量的冰冻的正己烷中沉淀，抽滤，最后于40℃真空干燥12h，得到还原响应聚合物；
[0071]
步骤2、将溶于5ml无水二氯甲烷的三氟乙酸(1.2g，10mmol)溶液缓慢加入到溶于5ml无水二氯甲烷的还原响应聚合物(1.0g，0.9mmolγ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯)溶液中。将反应在室温下搅拌24h，反应结束后旋转蒸发二氯甲烷。将粗产物溶解在少量四氢呋喃中，并在体积为其十倍量的冷冻正己烷中沉淀两次，抽滤。抽真空除去残留的溶剂，得到ph/还原双重响应聚合物；
[0072]
步骤3、将30mg步骤2制备的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后准确加入15mg紫杉醇，混合均匀后转入透析袋(mwco3500)，于1l去离子水中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后，转移透析袋里的溶液至烧杯，滴加少量0.1mol/l的naoh溶液以调节ph为弱碱性。称取2,3-二甲基马来酸酐(0.015g，0.15mmol)并加入到烧杯中，继续用naoh溶液将ph保持在9.0，室温下搅拌12h，反应完毕后转移到透析袋(mwco3500)使用去离子水透析24h，每4小时更换一次水。透析完毕后将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后冷冻干燥，即可得到ph/还原双重响应聚合物交联胶束。
[0073]
实施例6
[0074]
本实施例6提供了ph/还原双重响应聚合物交联胶束的制备工艺，包括步骤：
[0075]
步骤1、在100ml无水无氧反应瓶中放入搅拌子、实施例3制备的大分子引发剂(9.439g，1mmol)和溴化铜(0.027g，0.12mmol)，把反应瓶密封后，依次抽真空-通氮气三次，再依次加入聚乙二醇甲基醚甲基丙烯酸酯(9.50g，20mmol)、无水四氢呋喃40ml、配体五甲基二乙基三胺(0.285ml，1.2mmol)。搅拌15min后溴化铜/五甲基二乙基三胺催化剂配合物
形成。再用注射器将溶于10ml无水四氢呋喃中的还原剂辛酸亚锡(0.486g，1.2mmol)加入反应瓶中，接着搅拌20min，再在60℃油浴中反应24h，冷却到室温时，用四氢呋喃稀释反应后所得溶液，过中性氧化铝层析柱除去催化剂，旋蒸溶液，逐滴加入体积为其十倍量的冰冻的正己烷中沉淀，抽滤，最后于40℃真空干燥12h，得到还原响应聚合物；
[0076]
步骤2、将溶于5ml无水二氯甲烷的三氟乙酸(1.2g，10mmol)溶液缓慢加入到溶于5ml无水二氯甲烷的还原响应聚合物(1.1g，0.9mmolγ-(氨基甲酸叔丁酯)-ε-己内酯)溶液中。将反应在室温下搅拌24h，反应结束后旋转蒸发二氯甲烷。将粗产物溶解在少量四氢呋喃中，并在体积为其十倍量的冷冻正己烷中沉淀两次，抽滤。抽真空除去残留的溶剂，得到ph/还原双重响应聚合物；
[0077]
步骤3、将30mg步骤2制备的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后准确加入15mg紫杉醇，混合均匀后转入透析袋(mwco3500)，于1l去离子水中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后，转移透析袋里的溶液至烧杯，滴加少量0.1mol/l的naoh溶液以调节ph为弱碱性。称取2,3-二甲基马来酸酐(0.02g，0.2mmol)并加入到烧杯中，继续用naoh溶液将ph保持在9.0，室温下搅拌12h，反应完毕后转移到透析袋(mwco3500)使用去离子水透析24h，每4小时更换一次水。透析完毕后将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后冷冻干燥，即可得到ph/还原双重响应聚合物交联胶束。
[0078]
实施例7
[0079]
本实施例7提供了ph/还原双重响应聚合物非交联空白胶束与ph/还原双重响应聚合物交联空白胶束的制备工艺，包括步骤：
[0080]
步骤1、将30mg实施例4步骤2制备得到的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后转入透析袋(mwco3500)，于1l去离子水中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后，继续在ph 7.4的pbs缓冲溶液中培育120h，得到ph/还原双重响应聚合物非交联空白胶束p8。
[0081]
步骤2、将30mg实施例4步骤2制备得到的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后转入透析袋(mwco3500)，于1l pbs缓冲溶液(50mm，ph 9.0)中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后，转移透析袋里的溶液至烧杯测量其ph值，若低于9.0则滴加0.1mol/l的naoh溶液调节ph保持弱碱性。称取适量2,3-二甲基马来酸酐并加入到烧杯中，并用naoh溶液调节ph保持在9.0，室温下搅拌12h，反应完毕后转移到透析袋(mwco3500)使用去离子水透析24h，每4小时更换一次水。透析完毕后将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后，继续在ph 7.4的pbs缓冲溶液中培育120h，得到ph/还原双重响应聚合物交联空白胶束cp8。
[0082]
步骤3、对步骤1及步骤2制备得到的胶束溶液进行稳定性测试，测试步骤包括：使用动态光散射法测定非交联空白胶束p8与交联空白胶束cp8在ph 7.4的pbs缓冲溶液中培育120h的粒径变化。
[0083]
其结果如图5所示，交联后的ph/还原双重响应聚合物胶束稳定性有所提高，交联的方法有利于胶束在正常细胞中稳定存在。
[0084]
实施例8
[0085]
本实施例8为对实施例4制备得到的ph/还原双重响应聚合物交联胶束的粒径分布及形貌表征。
[0086]
粒径分布及形貌表征如图8所示，采用动态光散射法测其粒径及粒径分布，激光光散射法得负载抗癌药物的ph/还原双重响应胶束的平均粒径为175.8nm，粒径分布为0.207，采用tem观察其形貌为球形。
[0087]
实施例9
[0088]
本实施例9为对实施例4制备得到的负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束的药物释放测试，测试包括步骤：
[0089]
准确称取四份5mg实施例4所制得的负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束，分别溶于5ml的ph 5.0、ph 7.4、ph 5.0/10mm dtt、ph 7.4/10mm dtt的缓冲溶液中。充分溶解后将混合溶液置于透析袋(mwco3500)中，接着将透析袋浸入95ml上述对应的缓冲溶液中。设定温度在37℃，搅拌速度为100rpm。每隔一定时间取样4ml，并加入4ml新鲜缓冲液。用紫外分光光度法测定不同时间释放液中紫杉醇的浓度，绘制其体外释放曲线；
[0090]
其结果参见图7，从图7可以看出在正常血液环境中(ph 7.4/0mm dtt)，药物释放速度缓慢，100h内累计释放量低于10％，可以有效减少药物在人体正常血液循环过程中的流失；在ph 5.0/10mm dtt环境下，载药胶束释放速率迅速，100h内累计释放量达到70％，同时，在四种实验情况下均没有出现突释现象，满足了缓控释放的要求。
[0091]
实施例10
[0092]
本实施例10为对实施例4制备得到的负载抗癌药物的ph/还原双重响应交联胶束以及负载抗癌药物的ph/还原双重响应非交联胶束进行药物释放测试，测试包括步骤：
[0093]
步骤1、将30mg步骤2制备的ph/还原双重响应聚合物溶于30ml二甲基亚砜中，完全溶解后准确加入15mg紫杉醇，混合均匀后转入透析袋(mwco3500)，于1l去离子水中透析48h，每四小时更换一次透析介质，透析完成后，将所得溶液经过孔径为0.45μm的水系滤头过滤后，冷冻干燥，即可得到ph/还原双重响应聚合物非交联载药胶束；
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步骤2、称取2份5mg实施例4所制得的负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束，分别溶于5ml的ph 7.4、ph 5.0/10mm dtt的缓冲溶液中，将2份5mg步骤1制备得到的ph/还原双重响应聚合物载药胶束，分别溶于5ml的ph 7.4、ph 5.0/10mm dtt的缓冲溶液中充分溶解后将混合溶液置于透析袋(mwco3500)中，接着将透析袋浸入95ml上述对应的缓冲溶液中。设定温度在37℃，搅拌速度为100rpm。每隔一定时间取样4ml，并加入4ml新鲜缓冲液。用紫外分光光度法测定不同时间释放液中紫杉醇的浓度，绘制其体外释放曲线；
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其结果参见图8，从图8可以看出在正常血液环境中(ph 7.4/0mm dtt)，与负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物非交联胶束p8相比，负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束cp8，药物释放速度缓慢，可以进一步减少药物在人体正常血液循环过程中的流失；在ph 5.0/10mm dtt环境下，与负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物非交联胶束相比，负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束药物释放速度缓慢，但随着时间的延长，负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物交联胶束药物释放量超过了负载抗癌药物的ph/还原双重响应聚合物胶束，说明对胶束交联后，不仅提高了缓控释放的效果，还提高了药物释放量。
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以上所述，以上实施例仅用以说明本技术的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本技术进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些
修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本技术各实施例技术方案的精神和范围。