一种寒兰花发酵组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及化妆品领域，具体是一种寒兰花发酵组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.兰花是单子叶植物纲、兰科、兰属植物的通称，一般包括春兰、惠兰、建兰、墨兰和寒兰等。其中，寒兰(寒兰花)是兰科兰属地生植物，假鳞茎狭卵球形，包藏于叶基之内，花常有浓烈香气。
3.随着当今化妆品行业的飞速发展，作为兰花的一种，寒兰含有大量的营养物质和活性成分，在化妆品应用中具有巨大的前景。文献记载，寒兰花中有丰富的黄酮、挥发油等成分，而现阶段的提取技术主要是醇回流提取技术、超声波提取技术以及水煮醇沉提取技术等。
4.但是，在现有技术中，对于寒兰花的有效成分的提取方法，大多是采用有机溶剂，不仅生产成本高，而且无法保证安全性。因此，以上技术方案在实际使用时存在以下不足：现有的寒兰花提取方法存在生产成本高且无法保证安全性的问题。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种寒兰花发酵组合物，以解决上述背景技术中提出的现有的寒兰花提取方法存在生产成本高且无法保证安全性的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.一种寒兰花发酵组合物，其是寒兰花发酵培养基为原料，通过利用乳酸菌对所述寒兰花发酵培养基进行发酵制得；其中，所述寒兰花发酵培养基是将寒兰花加水打浆后加入葡萄糖、蛋白粉进行混合均匀并灭菌制得。
8.在本发明实施例中，本发明通过利用乳酸菌对寒兰花进行发酵得到寒兰花发酵组合物，具体是基于发酵技术，利用微生物发酵植物，将发酵提取液直接或复配应用于化妆品中，而且，微生物发酵技术具有反应条件温和、操作简便、成分低、公害少等优点。现阶段，未见对寒兰花有发酵相关的报道。本发明提供了一种寒兰花发酵组合物，可以作为寒兰花发酵化妆品使用，既能拓展寒兰花的利用方向，又能提高寒兰花提取物中活性成分的功效。
9.需要说明的是，现有技术中对于寒兰花中的黄酮、挥发油等有效成分的提取技术主要是醇回流提取技术、超声波提取技术以及水煮醇沉提取技术等，由于大多是采用有机溶剂，不仅生产成本高，而且无法保证安全性，在直接作为化妆品时无法保证寒兰花化妆品的安全性。
10.本发明实施例的另一目的在于提供一种所述寒兰花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
11.按照比例称取寒兰花发酵培养基并接入乳酸菌进行恒温发酵，然后在80-100℃下进行灭菌，灭菌后进行离心除去沉淀，然后进行脱色，调节ph至5.0-7.0，得到所述寒兰花发酵组合物。
12.本发明实施例的另一目的在于提供一种采用上述的寒兰花发酵组合物的制备方法制备得到的寒兰花发酵组合物。
13.本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的寒兰花发酵组合物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。
14.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
15.本发明提供的寒兰花发酵组合物是以寒兰花发酵培养基为原料，通过利用乳酸菌对寒兰花发酵培养基进行发酵制得，具有反应条件温和、操作简便等优点，由于不采用有机溶剂，生产成本低，而且保证了安全性，所述寒兰花发酵组合物可以直接作为化妆品或复配应用于化妆品中，具有较强的抗氧化、美白的功效，解决了现有的寒兰花提取方法存在生产成本高且无法保证安全性的问题，具有广阔的应用前景。
附图说明
16.图1为本发明一实施例提供的dpph自由基清除实验结果图。
17.图2为本发明一实施例提供的超氧阴离子自由基清除实验结果图。
18.图3为本发明一实施例提供的寒兰花发酵组合物对酪氨酸酶的抑制率结果图。
具体实施方式
19.下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细地说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
20.根据本技术包含的信息，对于本领域技术人员来说可以轻而易举地对本发明的精确描述进行各种改变，而不会偏离所附权利要求的精神和范围。应该理解，本发明的范围不局限于所限定的过程、性质或组分，因为这些实施方案以及其他的描述仅仅是为了示意性说明本发明的特定方面。实际上，本领域或相关领域的技术人员明显能够对本发明实施方式作出的各种改变都涵盖在所附权利要求的范围内。
21.为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本技术中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语大约进行修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和所附权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据需要而加以改变。
22.本发明实施例提供的一种寒兰花发酵组合物，所述寒兰花发酵组合物是以寒兰花发酵培养基为原料，通过利用乳酸菌对所述寒兰花发酵培养基进行发酵制得；其中，所述寒兰花发酵培养基是将寒兰花加水打浆后加入葡萄糖、蛋白粉进行混合均匀并灭菌制得。
23.作为本发明的另一优选实施例，在制备所述寒兰花发酵培养基时，所述灭菌是进行高温灭菌，具体的灭菌温度为105-125℃，灭菌时间为10min-30min。
24.作为本发明的另一优选实施例，在制备所述寒兰花发酵培养基时，所述水可以是选自纯净水、矿泉水、蒸馏水、去离子水或软水中的任意一种，这里并不作限定，可以根据需要进行选择。
25.优选的，所述水是去离子水。
26.作为本发明的另一优选实施例，所述寒兰花发酵培养基包括以下按照重量份的原料：寒兰花3-60份、水280-320份、葡萄糖0.6-12份、蛋白粉0.3-6份。
27.作为本发明的另一优选实施例，所述寒兰花发酵培养基包括以下按照重量份的原料：寒兰花8-40份、水290-310份、葡萄糖2-8份、蛋白粉1-4份。
28.优选的，所述寒兰花发酵培养基的制备方法是：称取3-60克寒兰花洗净，加入300克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入0.6克-12克葡萄糖、0.3克-6克蛋白粉，混合均匀，在105-125℃下灭菌10-30分钟，得到寒兰花发酵培养基。
29.作为本发明的另一优选实施例，所述乳酸菌为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌中的任意一种或多种。
30.作为本发明的另一优选实施例，所述乳酸菌为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉。具体比例这里并不作赘述，可以采用现有产品，具体种类根据需求进行选择，这里并不作限定。
31.本发明实施例还提供一种所述寒兰花发酵组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
32.按照比例称取寒兰花发酵培养基并接入乳酸菌进行恒温发酵，然后在80-100℃下进行灭菌，灭菌后进行离心除去沉淀，然后进行脱色，调节ph至5.0-7.0，得到所述寒兰花发酵组合物。
33.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物的制备方法中，所述在80-100℃下进行灭菌的灭菌时间是30-60min。
34.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物的制备方法中，所述恒温发酵是在35℃-45℃条件下培养8-48h。
35.作为本发明的另一优选实施例，所述脱色是采用活性炭进行脱色，活性炭用量为0.2wt％-4wt％，脱色温度为40-75℃，脱色时长为20-80min，一般脱色至少两次。
36.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物的制备方法中，还包括在调节ph后加入防腐剂进行混合均匀的步骤。所述防腐剂可以是现有技术中的可用于化妆品的防腐剂，这里优选的是加入0.5wt％的对羟基苯乙酮和0.5wt％的己二醇，也可以是其他的防腐剂，具体用量根据需求进行选择，这里并不作赘述。
37.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物的制备方法中，所述称取寒兰花发酵培养基并接入乳酸菌是按照寒兰花发酵培养基与乳酸菌的重量比是303.9-378:0.1-3的比例进行接入乳酸菌。
38.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物的制备方法中，所述离心的转速是1000r/min-10000r/min，离心的时间是5min-40min，离心后，取上清，过滤，得到寒兰花发酵上清液。
39.本发明实施例还提供一种采用上述的寒兰花发酵组合物的制备方法制备得到的寒兰花发酵组合物。
40.本发明实施例还提供一种上述的寒兰花发酵组合物在制备化妆品和/或护肤品中的应用。
41.作为本发明的另一优选实施例，在所述的寒兰花发酵组合物在制备化妆品和/或护肤品中的应用中，可以是将所述寒兰花发酵组合物直接作为化妆品和/或护肤品使用，也
可以是将所述寒兰花发酵组合物作为原料之一进行添加得到面膜液、化妆水、乳液、膏霜等化妆品。
42.以下通过列举具体实施例对本发明的寒兰花发酵组合物的技术效果做进一步的说明。
43.实施例1
44.一种寒兰花发酵化妆品，其制备方法具体包括以下步骤：
45.称取30克寒兰花洗净，加入300克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入6克葡萄糖、3克蛋白粉，在105℃下，灭菌30分钟，静置冷却后，接入0.9克乳酸菌粉(具体为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉)，放入到恒温培养箱中，40℃，培养24小时。发酵完成后，在80℃下，灭菌40min灭菌。完后才能后进行离心，离心转速为5000r/min，离心时间为30min。离心后，取上清，过滤。将滤液进行活性炭脱色，活性炭用量为1wt％，脱色温度为60℃，脱色时长为30min，脱色两次后，用精氨酸调节ph至5.5，加入0.5wt％的对羟基苯乙酮和0.5wt％的己二醇，即可得到寒兰花发酵化妆品。
46.实施例2
47.一种寒兰花发酵组合物，其制备方法具体包括以下步骤：
48.称取3克寒兰花洗净，加入280克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入0.6克葡萄糖、0.3克蛋白粉，混合均匀，在105℃下，灭菌30min，静置冷却后，得到寒兰花发酵培养基，在所述寒兰花发酵培养基中接入0.9克乳酸菌粉(具体为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉)，放入到恒温培养箱中，35℃，培养48小时。发酵完成后，在80℃下，灭菌60min灭菌。完后才能后进行离心，离心转速为1000r/min，离心时间为40min。离心后，取上清，过滤。将滤液进行活性炭脱色，活性炭用量为0.2wt％，脱色温度为40℃，脱色时长为80min，脱色两次后，用精氨酸调节ph至5.5，得到所述寒兰花发酵组合物。
49.实施例3
50.一种寒兰花发酵组合物，其制备方法具体包括以下步骤：
51.称取60克寒兰花洗净，加入320克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入12克葡萄糖、6克蛋白粉，混合均匀，在125℃下，灭菌10min，静置冷却后，得到寒兰花发酵培养基，在所述寒兰花发酵培养基中接入0.9克乳酸菌粉(具体为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉)，放入到恒温培养箱中，45℃，培养8小时。发酵完成后，在100℃下，灭菌30min灭菌。完后才能后进行离心，离心转速为10000r/min，离心时间为5min。离心后，取上清，过滤。将滤液进行活性炭脱色，活性炭用量为4wt％，脱色温度为75℃，脱色时长为20min，脱色两次后，用精氨酸调节ph至5.5，得到所述寒兰花发酵组合物。
52.实施例4
53.一种寒兰花发酵组合物，其制备方法具体包括以下步骤：
54.称取8克寒兰花洗净，加入290克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入2克葡萄糖、1克蛋白粉，混合均匀，在105℃下，灭菌30分钟，静置冷却后，得到寒兰花发酵培养基，在所述寒兰花发酵培养基中接入0.9克乳酸菌粉(具体为嗜热链球菌、保加利亚乳杆
菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉)，放入到恒温培养箱中，放入到恒温培养箱中，40℃，培养24小时。发酵完成后，在80℃下，灭菌40min灭菌。完后才能后进行离心，离心转速为5000r/min，离心时间为30min。离心后，取上清，过滤。将滤液进行活性炭脱色，活性炭用量为1wt％，脱色温度为60℃，脱色时长为30min，脱色两次后，用精氨酸调节ph至5.5，加入0.5wt％的对羟基苯乙酮和0.5wt％的己二醇，得到所述寒兰花发酵组合物。
55.实施例5
56.一种寒兰花发酵组合物，其制备方法具体包括以下步骤：
57.称取40克寒兰花洗净，加入310克去离子水，打浆粉碎，装入500毫升三角瓶中，加入8克葡萄糖、4克蛋白粉，混合均匀，在105℃下，灭菌30分钟，静置冷却后，得到寒兰花发酵培养基，在所述寒兰花发酵培养基中接入0.9克乳酸菌粉(具体为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌五种乳酸菌的混合菌粉)，放入到恒温培养箱中，放入到恒温培养箱中，40℃，培养24小时。发酵完成后，在80℃下，灭菌40min灭菌。完后才能后进行离心，离心转速为5000r/min，离心时间为30min。离心后，取上清，过滤。将滤液进行活性炭脱色，活性炭用量为1wt％，脱色温度为60℃，脱色时长为30min，脱色两次后，用精氨酸调节ph至5.5，加入0.5wt％的对羟基苯乙酮和0.5wt％的己二醇，得到所述寒兰花发酵组合物。
58.实施例6
59.与实施例2相比，除了将去离子水替换为纯净水外，其他与实施例2相同。
60.实施例7
61.与实施例2相比，除了将去离子水替换为矿泉水外，其他与实施例2相同。
62.实施例8
63.与实施例2相比，除了将去离子水替换为蒸馏水外，其他与实施例2相同。
64.实施例9
65.与实施例2相比，除了所述乳酸菌粉为嗜热链球菌的菌粉外，其他与实施例2相同。
66.实施例10
67.与实施例2相比，除了所述乳酸菌粉为保加利亚乳杆菌的菌粉外，其他与实施例2相同。
68.实施例11
69.与实施例2相比，除了所述乳酸菌粉为干酪乳杆菌的菌粉外，其他与实施例2相同。
70.实施例12
71.与实施例2相比，除了所述乳酸菌粉为嗜酸乳杆菌的菌粉外，其他与实施例2相同。
72.实施例13
73.与实施例2相比，除了所述乳酸菌粉为植物乳杆菌的菌粉外，其他与实施例2相同。
74.实施例14
75.与实施例2相比，除了乳酸菌粉为保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌等重量混合的混合菌粉外，其他与实施例2相同。
76.实施例15
77.与实施例2相比，除了乳酸菌粉为保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌以及植物乳杆菌等
hcl配制)。
104.(3)加入8mol/l盐酸1ml终止反应，空白组以蒸馏水做对照。
105.(4)于299nm处测定吸光度，计算清除率。a1为样品，a2对照。
106.超氧阴离子清除率(％)＝(a1-a2)/a1
107.如图2所示，寒兰花发酵组合物对超氧阴离子具有显著的清除作用。随寒兰花发酵组合物浓度升高，其对超氧阴离子的清除率逐渐增加。100％的寒兰花发酵组合物对超氧阴离子的的清除能力在62.1％左右，对超氧阴离子自由基清除作用的ic50＝76.02％。
108.三：寒兰花发酵组合物的美白性能检测：
109.(1)c1、c2、t1、t2管的物质加入量参照表3。
110.(2)c2管配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。
111.(3)c1管溶液配好摇匀，37℃水浴10min后，加酪氨酸酶1ml，继续水浴10分钟，测定c1吸光度值。
112.(4)按(1)(2)同样方法，以t2调零测定t1吸光度值。
113.(5)计算样品对酪氨酸酶的活性抑制率t(％)。公式：t(％)＝(c1-t1)/c1
×
100％
[0114][0115]
寒兰花发酵组合物对酪氨酸酶的抑制率见图3。
[0116]
1％熊果苷为酪氨酸酶活性抑制实验的阳性对照，其对酪氨酸酶活性抑制率为95.20％。10％寒兰花发酵组合物可抑制14.21％的酪氨酸酶活性。因此寒兰花发酵组合物具有一定的抑制酪氨酸酶活性的作用
[0117]
需要说明的是，本发明针对现有技术对寒兰花活性成分提取效率低从而对寒兰花进行发酵提取，得到的寒兰花发酵组合物具有以下优势：
[0118]
(1)利用五种乳酸菌混合菌粉对寒兰花进行发酵，得到的寒兰花发酵组合物中寒兰花的活性物质得到提升，还包含复合乳酸菌在发酵过程中释放的活性物质，可以直接作为寒兰花发酵化妆品使用，从而可以提升寒兰花发酵化妆品的功效；
[0119]
(2)本发明所得到的寒兰花发酵组合物具有较强的抗氧化、美白的功效，可用于复配抗皱、美白等化妆品。
[0120]
(3)本发明所得到的寒兰花发酵组合物在生产过程中，能耗小，条件温和，不仅大大降低了生产成本，在生产过程中不使用任何有机试剂等化工试剂，保证了寒兰花发酵化妆品的安全性，而且，本发明实施例提供的制备方法简单，具有广阔是市场前景。
[0121]
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。