防治罗布麻锈病的生防菌剂及该制剂的制备方法与流程

1.本发明涉及一种防治罗布麻锈病的生防菌剂及该制剂的制备方法。


背景技术：

2.罗布麻锈病是罗布麻种植生产中一个重要的病害，发生早、传播快、发病规模大，是罗布麻种植的头号病害，罗布麻的主要病害有锈病、斑枯病和黑斑病,病原菌分别为罗布麻栅锈菌(melampsora apocyni)、罗布麻壳针孢(septoria apocyni)和长春花生链隔孢(alternaria catharanthicola)。锈病是罗布麻的主要病害,发病率高达73％。
3.罗布麻栅锈菌也危害罗布麻的亲缘种,白麻和大叶白麻,发病率分别为83％和99％,白麻也是罗布麻栅锈菌的新寄主，罗布麻在每年5月中、下旬开始发生锈病,最大病情指数为49.4％—57.1％；野生罗布麻在6月下旬至7月上旬发病,最大病情指数为6.4％—75.6％。
4.目前对罗布麻锈病的防治以预防为主，通常通过三唑酮在；咯菌腈戊唑醇叶面喷施,对锈病的防效并不理想，特别是由于化学农药的成本及环境污染，植株病后恢复困难等缺陷，罗布麻锈病大规模防治是一个很困难的事情。
5.在罗布麻产品加工中，特别是罗布麻皮进行碱(氢氧化钠、氢氧化钾)脱胶过程中，麻皮中的果胶、半纤维素、木质素、淀粉、多糖、蜡质等成分经碱解作用水解成黑褐色的高浓度脱胶废液，纤维得以分离出来，而产生的高浓度废液主要成分为可溶性多糖、水溶性木质素、罗布麻麻皮本身的大量、微量元素矿物质元素及残余的碱，脱胶废液属于高浓度复杂难处理的有机质碱性废液，其中cod达30000mg/l以上，即有机物浓度》3％，严重污染水域，消耗水中氧气，毒害鱼类浮游生物，污染地下水。
6.目前的罗布麻皮加工中所产生的废液进行无害化处理的成本非常高。
7.因此，一种防治罗布麻锈病的生防菌剂及该制剂的制备方法就应运而生。


技术实现要素：

8.本发明所要解决的技术问题是提供一种防治罗布麻锈病的生防菌剂及该制剂的制备方法。
9.一种防治罗布麻锈病的生防菌剂，主要通过以下过程制备：包含生防菌剂菌种的选择、发酵培养基的配制，生防菌的培养，生防菌剂的制作及使用。
10.所选用生防菌剂为淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液的混合液。
11.所述的淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液通过以下过程得到。
12.培养：将所述的淡紫拟青霉和沼泽红假单胞菌分别在培养基中进行培养。
13.所述培养基为：取罗布麻碱脱胶废水，即罗布麻加工中进行碱脱胶所产生的废水，经磷酸中和到ph值7-8，按重量加1-5％的红糖，0.05-0.5％的酵母膏，得到培养基。
14.进一步地，上述的罗布麻碱脱胶废水按重量5-15倍加水稀释后使用。
15.淡紫拟青霉菌的培养：将淡紫拟青霉菌种按培养基重量的1-10％接种于培养基中
发酵培养，发酵时间36-72h，温度控制为28-36℃，溶氧值控制为50-70％，得淡紫拟青霉菌液。
16.所述的沼泽红假单孢菌的培养：将沼泽红假单孢菌种按培养基重量的5-15％接种于培养基中，30-35℃通气培养36-60小时，转移到专用透明密封瓶白天的日光下暴晒，或者800-1500rax光照，温度控制在30～35℃下进行密封培养3～5d，待菌液变成棕红色时终止培养，得到沼泽红假单胞菌液。
17.进一步地，将沼泽红假单胞菌种从试管或平板种子接种到经灭菌的液体培养基，上摇床培养2-3天，菌的含量达到两亿每毫升以上时，得到原菌液，再将所述的原菌液按培养基重量的5-15％接种于培养基中进行培养。
18.将上述的淡紫拟青霉发酵液与沼泽红假单胞菌发酵液按重量比例为2：1-4的比例混合即得到本发明的防治罗布麻锈病的生防菌剂。
19.进一步地，最好在上述的生防菌剂中按重量加入0.3-1％的的表面活性剂作为助剂。所述的表面活性剂优选为洗衣粉或者是司盘吐温一类活性剂。
20.本发明的生防菌剂的施用方法如下：将混合配制好的生防菌剂在罗布麻生长期分别均匀喷施在罗布麻植株上。在罗布麻生长期每隔10天喷施一次，连续喷施3次，可获得良好的防控效果，经喷施罗布麻锈病生防控剂，经试验获得良好效果。
21.在具体施用时，可以根据实际情况再按生防菌剂重量的3-10倍加水稀释后使用。
22.进一步地，上述的淡紫拟青霉菌种在最好通过下列步骤进行扩繁：将淡紫拟青霉平板菌种接种于液体培养基中，摇动或搅动培养36-60小时得淡紫拟青霉菌发酵种子，将淡紫拟青霉菌发酵种子作为淡紫拟青霉菌培养的淡紫拟青霉菌种。
23.试验证明，本发明的生防菌剂对罗布麻不仅能明显抑制罗布麻生长中主要病菌的侵染，特别是对罗布麻锈病有显著的防治效果，而且能明显地促进锈病植株营养器官的生长，提高抗逆性，同时，对罗布麻线虫的防病作用也非常显著。
24.本发明特点是利用高浓度难处理罗布麻皮碱脱胶废液经中和稀释作为主要培养液，添加2％的红糖及0.5％的酵母膏分别接种淡紫拟青霉、沼泽红单孢菌等有益微生物进行发酵培养增值，以获得防罗布麻锈病的微生物生防菌剂，分别培养增值完成后过滤，按一定的比例混合制成一种能有效防治罗布麻锈病的生防菌剂，取其发酵液直接喷施罗布麻田中，在罗布麻生长期每隔10天喷施一次，连续喷施3次，可获得良好的防控效果，经喷施罗布麻锈病生防控剂，经试验获得良好效果。
具体实施方式
25.下面详细说明本发明的优选实施方式。
26.实施例1：一种防治罗布麻锈病的生防菌剂，通过以下过程制备。
27.所选用生防菌剂为淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液按重量2：1-4的混合液。
28.所述的淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液通过以下过程得到。
29.培养：将所述的淡紫拟青霉和沼泽红假单胞菌分别在培养基中进行培养。
30.所述培养基为：取罗布麻碱脱胶废水，经磷酸中和到ph值7-8，按重量加1-5％的红糖，0.05-0.5％的酵母膏，得到培养基。
31.淡紫拟青霉菌的培养：将淡紫拟青霉菌种按培养基重量的1-10％接种于培养基中
发酵培养，发酵时间36-72h，温度控制为28-36℃，溶氧值控制为50-70％，得淡紫拟青霉菌液。
32.所述的沼泽红假单孢菌的培养：将沼泽红假单孢菌种按培养基重量的5-15％接种于培养基中，30-35℃通气培养36-60小时，转移到专用透明密封瓶白天的日光下暴晒，或者800-1500rax光照，温度控制在30～35℃下进行密封培养3～5d，待菌液变成棕红色时终止培养，得到沼泽红假单胞菌液。
33.将所得淡紫拟青霉发酵液与沼泽红假单胞菌发酵液按重量比例混合即得到本发明的防治罗布麻锈病的生防菌剂。
34.进一步地，在上述的生防菌剂中按重量加入0.3-1％的的表面活性剂作为助剂。所述的表面活性剂优选为洗衣粉或者是司盘吐温一类活性剂。
35.本发明的生防菌剂的施用方法如下：将混合配制好的生防菌剂在罗布麻生长期分别均匀喷施在罗布麻植株上。在罗布麻生长期每隔10天喷施一次，连续喷施3次，可获得良好的防控效果，经喷施罗布麻锈病生防控剂，经试验获得良好效果。
36.在具体施用时，可以根据实际情况再按生防菌剂重量的3-10倍加水稀释后使用。
37.本发明的生防菌剂使用的试验如下：
38.1、将罗布麻种植区随机分为等面积的5个区域，每个区域10亩，分喷施清水对照组，喷施三唑酮组25％1000倍，喷施淡紫拟青霉组，喷施沼泽红假单胞菌组，喷施淡紫拟青霉 沼泽红假单胞菌组，5个组合进行评测。
39.2、5月份罗布麻生长期间喷施全植株，每隔10天喷一次，连续喷施4次，期间按正常浇水。
40.2个月后，对照组感染罗布麻锈病率发病率为69％，25％三唑酮1000倍喷施罗布麻锈病发病率6％，淡紫拟青霉菌组罗布麻锈病发病率为16％、沼泽红假单胞菌单菌液罗布麻锈病发病率为12％，淡紫拟青霉 沼泽红假单胞菌混合菌液罗布麻锈病发病率率9％，有较显著的防病效果。
41.试验证明，本发明的生防菌剂对罗布麻不仅能明显抑制罗布麻生长中主要病菌的侵染，特别是对罗布麻锈病有显著的防治效果，而且能明显地促进锈病植株营养器官的生长，提高抗逆性，同时，对罗布麻线虫的防病作用也非常显著。
42.实施例2：所选用生防菌剂为淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液按重量3：3-4的混合液。
43.所述的淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液通过以下过程得到。
44.培养：将所述的淡紫拟青霉和沼泽红假单胞菌分别在培养基中进行培养。
45.所述培养基为：取罗布麻碱脱胶废水，按重量5-15倍加水稀释后使用。
46.经磷酸中和到ph值7-8，按重量加3-5％的红糖，0.1-0.4％的酵母膏，得到培养基。
47.淡紫拟青霉菌的培养：将淡紫拟青霉平板菌种接种于液体培养基中，摇动或搅动培养36-60小时得淡紫拟青霉菌发酵种子，将淡紫拟青霉菌发酵种子作为淡紫拟青霉菌培养的淡紫拟青霉菌种。再将淡紫拟青霉菌种按培养基重量的4-8％接种于培养基中发酵培养，发酵时间36-72h，温度控制为28-36℃，溶氧值控制为50-70％，得淡紫拟青霉菌液。
48.所述的沼泽红假单孢菌的培养：将沼泽红假单胞菌种从试管或平板种子接种到经灭菌的液体培养基，上摇床培养2-3天，菌的含量达到两亿每毫升以上时，得到原菌液，再将
所述的原菌液按培养基重量的5-15％接种于培养基中，30-35℃通气培养36-60小时，转移到专用透明密封瓶白天的日光下暴晒，或者800-1500rax光照，温度控制在30～35℃下进行密封培养3～5d，待菌液变成棕红色时终止培养，得到沼泽红假单胞菌液。
49.将所得淡紫拟青霉发酵液与沼泽红假单胞菌发酵液按重量比例混合，同时按重量加入0.5-1％的的表面活性剂作为助剂。即得到本发明的防治罗布麻锈病的生防菌剂。所述的表面活性剂优选为洗衣粉或者是司盘吐温一类活性剂。
50.实施例3：一种防治罗布麻锈病的生防菌剂，通过以下过程制备。
51.所选用生防菌剂为淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液按重量2：2-3的混合液。
52.所述的淡紫拟青霉菌液和沼泽红假单孢菌液通过以下过程得到。
53.培养：将所述的淡紫拟青霉和沼泽红假单胞菌分别在培养基中进行培养。
54.所述培养基为：取罗布麻碱脱胶废水，经磷酸中和到ph值7-8，按重量加3-5％的红糖，0.2-0.4％的酵母膏，得到培养基。
55.淡紫拟青霉菌的培养：将淡紫拟青霉平板菌种接种于液体培养基中，摇动或搅动培养36-60小时得淡紫拟青霉菌发酵种子，将淡紫拟青霉菌发酵种子作为淡紫拟青霉菌培养的淡紫拟青霉菌种。将淡紫拟青霉菌种按培养基重量的5-10％接种于培养基中发酵培养，发酵时间36-72h，温度控制为28-36℃，溶氧值控制为50-70％，得淡紫拟青霉菌液。
56.所述的沼泽红假单孢菌的培养：将沼泽红假单胞菌种从试管或平板种子接种到经灭菌的液体培养基，上摇床培养2-3天，菌的含量达到两亿每毫升以上时，得到原菌液，再将所述的原菌液按培养基重量的5-15％接种于培养基中进行培养。
57.将沼泽红假单孢菌种按培养基重量的5-15％接种于培养基中，30-35℃通气培养36-60小时，转移到专用透明密封瓶白天的日光下暴晒，或者800-1500rax光照，温度控制在30～35℃下进行密封培养3～5d，待菌液变成棕红色时终止培养，得到沼泽红假单胞菌液。
58.将上述的淡紫拟青霉发酵液与沼泽红假单胞菌发酵液按重量比例混合，同时按重量加入0.3-0.8％的的表面活性剂作为助剂，即得到本发明的防治罗布麻锈病的生防菌剂。
59.以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变化和改进，这些都属于本发明的保护范围。