一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂、制备方法及其应用

1.本发明属于生物防控技术领域，具体来说涉及一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂、制备方法及其应用。


背景技术：

2.黑须污蝇隶属于双翅目(diptera)，麻蝇科(sarcophagidae)，野麻蝇亚科(subfamily paramacronychinae)，污蝇属(genus wohlfahrtia brauer)，是引起人、畜创伤性蝇蛆病的重要病原。黑须污蝇是引起双峰驼阴道蝇蛆病的唯一病原，广泛分布于南欧，中东，北非和我国的新疆、内蒙古等地区。不同区域的黑须污蝇侵袭对象各不相同，感染程度因区域而异，这取决于寄生虫动物群的组成、宿主、畜牧业和控制做法、气候和地理有关的各种因素。在欧洲有相关报道，受黑须污蝇侵扰的绵羊感染率高至90％。但是对于其他地区而言，双峰驼则是黑须污蝇的重点侵扰对象。在伊朗的一项报道中发现，由黑须污蝇的幼虫引起的创伤性疾病约有60％。在摩洛哥北部的两个农场，对狗进行了创伤性肌炎检查，从它们身上发现并培育的所有幼虫和成虫都被鉴定为黑须污蝇。有报道称还有其他动物也受到黑须污蝇幼虫的感染。除此之外，黑须污蝇幼虫也能引起人类的多种疾病，比如耳、眼、外阴和皮肤等方面的疾病。
3.在我国黑须污蝇主要引起母驼的阴道蝇蛆病，严重影响患病驼的生长发育性能及骆驼产业的发展，成为母驼首要危害疾病。目前蝇蛆病的防治主要依靠农药，药物驱虫治疗，除了杀死寄生部位的蝇蛆，对环境中的黑须污蝇起不到作用，等药效过后，继续产蛆、反复感染。为了改变目前以农药为主的防治现状，我们需要探索以人工干扰环境当中黑须污蝇为主的生物防控措施。


技术实现要素：

4.本发明的目的是解决现有的技术问题，提供一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂，该引诱剂可以引诱黑须污蝇成虫，以减少其与宿主的接触机会，从而影响其交配及产蛆行为，为治疗双峰驼阴道蝇蛆病提供新的思路。
5.本发明是通过以下技术方案实现的：
6.一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂，通过下述方法制备获得：
7.将1-辛烯-3-醇以溶解于溶剂中。
8.在上述技术方案中，所述溶剂为正己烷。
9.在上述技术方案中，所述1-辛烯-3-醇的浓度为10-4
μg/μl至1μg/μl。
10.一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂的制备方法，如下所述：
11.将1-辛烯-3-醇以溶解于溶剂中。
12.在上述技术方案中，所述溶剂为正己烷。
13.在上述技术方案中，所述1-辛烯-3-醇的浓度为10-4
μg/μl至1μg/μl。
14.一种1-辛烯-3-醇黑须污蝇引诱剂的应用，如下所述：通过1-辛烯-3-醇引诱黑须
污蝇，减少黑须污蝇与双峰驼的接触机会，防控黑须污蝇引起的阴道蝇蛆病。
15.本发明的有益效果是：
16.本发明通过气相色谱-触角电位联用技术(gc-ead)、触角电位技术(eag)、行为实验测定黑须污蝇对双峰驼阴道挥发物-1-辛烯-3-醇的触角电位和行为反应，了解1-辛烯-3-醇对黑须污蝇引诱行为的影响。通过实验证实，本发明使用的1-辛烯-3-醇可以引诱黑须污蝇，从而减少黑须污蝇与双峰驼的接触机会，可有效防控黑须污蝇引起的阴道蝇蛆病。
附图说明
17.图1为1日龄黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的gc-ead反应(左图为雄性，右图为雌性)。
18.图2为7日龄黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的gc-ead反应(左图为雄性，右图为雌性)。
19.图3为雄性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag反应。
20.图4为雌性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag反应。
21.图5为黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的eag反应对比。
22.图6为雄性黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应。
23.图7为雌性黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应。
24.图8为黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应对比。
25.对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，可以根据以上附图获得其他的相关附图。
具体实施方式
26.为了使本发明现实的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于了解，下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。
27.实施例
28.1-辛烯-3-醇对黑须污蝇的电生理及行为反应包括以下步骤：
29.一、黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的gc-ead反应
30.(1)样品制备：将购置的1-辛烯-3-醇(≥98％)使用hplc级正己烷配制为10-2
μg/μl的待测样品。
31.(2)玻璃毛细管制备；
①
使用电极拉制仪自动制备；
②
在酒精灯下，手动拉制，拉制过程尽量保持平衡。拉制的毛细管尖端刚好可以放入昆虫触角为好。玻璃毛细管制备完成后，灌装0.9％的生理盐水。
32.(3)触角制备及连接：在显微镜下用眼科手术剪将黑须污蝇的触角从基部剪下，利用毛细管中生理盐水的表面张力，将触角吸附至毛细管中，将其搭接于触角电位仪的两个玻璃电极上，触角基部连接参比电极，顶部连接记录电极。等待ead基线基本稳定后，开始进样，记录电极。记录的信号经idac-2信号采集器放大、转换后，通过gc-ead软件进行数据采集和分析。选取1日龄与7日龄左右的黑须污蝇分别测定对10-2
μg/μl的1-辛烯-3-醇的gc-ead反应，每个样品雌雄各重复3次，每根触角使用一次。
33.(4)gc条件：起始温度120℃，保持1min，以20℃/min的速率，升温至280℃，保持15分钟。5∶1分流进样，每次手动进样1μl。
34.二、黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的eag反应
35.(1)样品制备：将1-辛烯-3-醇用色谱级的正己烷配制成10-4
μg/μl、10-3
μg/μl、10-2
μg/μl、10-1
μg/μl和1μg/μl的待测样品，保存至-20℃冰箱待用。
36.(2)选取5-7日龄左右的黑须污蝇成虫，将其触角从基部剪下，连接触角。取10μl待测样品，均匀地滴在30mm
×
10mm滤纸条上，放入干净的1ml蓝色枪头中，待挥发溶剂约5min后，进行刺激。以正己烷(hplc级)作为空白对照，在每一根触角eag测定的前后均做空白的eag测定，矫正样品的eag反应值。按随机方式测试样品，测定在室温下进行。滴管末端连接刺激气体控制装置，每次刺激时间为0.2s，刺激间隔为60s，刺激气流流速设定为300ml/min、持续气流设定为1000ml/min。每个样品重复6次，区分雌雄。每种样品的eag刺激顺序为：空白对照(ck)
→
10-4
μg/μl
→
10-3
μg/μl
→
10-2
μg/μl
→
10-1
μg/μl
→
1μg/μl
→
空白对照(ck)。
37.eag相对反应值计算公式如下：
38.样品触角电位反应相对值＝2
×
(测试样品的触角电位反应值)/(测试样品前溶剂对照的触角电位反应值 测试样品后溶剂对照的触角电位反应值)
39.(3)统计分析：eag反应数据使用excel 16.0进行整理，使用graphpad prism8.0.1对数据进行分析并绘图，同一性别对不同测试样品的eag反应和不同性别对同种测试样品的eag反应均采用单因素方差分析(one-way anova)(p＜0.05)。
40.三、黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应
41.(1)用净水器管依次连接装置大气采样仪(出气口)
→
装有活性炭的干燥塔
→
湿润装置
→
气味瓶
→
y型试管，两侧臂气流维持在1l/min。选取5-7日龄左右的黑须污蝇，进行行为实验测定。每次仅放一只黑须污蝇于y型试管直臂口，反应时间为5min，当虫子进入侧臂1/2以上并至少停留30s作为选择结果并进行记录。如果5min内未做出选择，则停止该虫的行为测定，不作记录。雌、雄虫各记录60只，3组重复，每组20只，同一浓度每只虫子仅测试一次，每测试5只虫子，将y型试管水平旋转180
°
，调换两臂位置，以减少误差。测试10头虫后，分别用75％的酒精、蒸馏水清洗y型管内臂，置于烘干箱内烘干，更换一只干净的y型试管。继续实验。黑须污蝇活跃时间段主要在白天进行，所以测试时间为9：00-17：00，整个实验在室温下进行，实验前禁食12小时。同样由低浓度向高浓度进行测试，正己烷为空白对照。
42.(2)统计：行为反应数据使用excel 16.0进行整理，黑须污蝇对3种化合物使用graphpad prism8.0.1采用t检验进行分析，并使用origin pro绘图。
43.结果分析
44.由图1和图2可知，不同日龄的黑须污蝇雌雄成虫对10-2
μg/μl的1-辛烯-3-醇均有gc-ead反应。
45.雄性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag相对反应值如图3所示。分析可得，不同浓度的1-辛烯-3-醇均可以引起雄性黑须污蝇不同程度的eag反应。随着1-辛烯-3-醇的浓度升高，雄性黑须污蝇的eag相对反应值升高，并在浓度为10-2
μg/μl时达到最大值，1.396mv。10-4
μg/μl、10-3
μg/μl、10-1
μg/μl和1μg/μl的eag相对反应值分别为1.143mv、1.240mv、1.362mv和1.382mv。雄性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag相对反应值无显著差异(p＞0.05)。
46.雌性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag相对反应值如图4所示。分析可得，雌性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇均存在不同程度的eag反应。随着1-辛烯-3-醇浓
度的升高，雌性黑须污蝇的eag相对反应值升高，并在浓度为10-1
μg/μl时达到最大值，1.775mv。10-4
μg/μl、10-3
μg/μl、10-1
μg/μl和1μg/μl的eag相对反应值分别为1.143mv、1.240mv、1.362mv和1.382mv。雌性黑须污蝇对不同浓度的1-辛烯-3-醇的eag相对反应值无显著差异(p＞0.05)。
47.黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的eag反应对比如图5所示。分析得知，雌、雄成虫对1-辛烯-3-醇的eag相对反应值无显著差异(p＞0.05)。
48.雄性黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应结果表明(图6)，10-1
μg/μl的1-辛烯-3-醇对雄性黑须污蝇有显著的引诱性(p＜0.05)；当浓度为1μg/μl时，对雄性黑须污蝇有极显著的引诱性(p＜0.01)。而雄性黑须污蝇对其他浓度的1-辛烯-3-醇没有显著的趋向性(p＞0.05)。
49.雌性黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为反应结果表明(图7)，10-2
μg/μl的1-辛烯-3-醇对雌性黑须污蝇有显著的引诱性(p＜0.05)；10-1
μg/μl和1μg/μl的1-辛烯-3-醇对雌性黑须污蝇有极显著的引诱性(p＜0.01)。而雌性黑须污蝇对其他浓度的1-辛烯-3-醇没有显著的趋向性(p＞0.05)。
50.不同性别的黑须污蝇对1-辛烯-3-醇的行为实验表明(图8)，当浓度为1μg/μl时，对雌性黑须污蝇的引诱性显著高于雄性(p＜0.05)，其余浓度均无显著差异(p＞0.05)。
51.以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。