螨侵染处理的制作方法

fluvalinate)和氟氯苯菊酯(flumethrin)。双甲脒是下式的化合物：
[0013][0014]
有机养蜂业使用三种天然化合物：百里酚、草酸和甲酸。
[0015]
其中，不幸地看到一些化合物的功效降低，因为瓦螨对使用的某些化合物的抗性增加。对于τ-氟胺氰菊酯和氟氯苯菊酯化合物来说尤其如此。另外，可用处理的数量减少不允许在有效健康管理的情况下进行充分的交替。
[0016]
这些化合物还显示出它们在处理除蜜蜂以外的动物中的螨侵染方面的功效。
[0017]
因此，仍然需要进行研究以鉴定新分子，其对螨有效并且对处理的动物以及对人类没有风险，特别是用于对抗瓦螨并且对蜂群以及对环境和养蜂人二者都没有风险，同时不降低供人类食用的蜂蜜的质量。


技术实现要素：

[0018]
根据第一方面，本发明涉及式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物作为杀螨剂的用途，所述式(i)为：
[0019][0020]
其中：
[0021]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0022][0023]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0024]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0025]
z1是卤素、h或ch3；
[0026]
z2是卤素、h或ch3；
[0027]
z3是卤素、h或ch3；
[0028]
z4是卤素、h或ch3。
[0029]
根据第二方面，本发明涉及一种用于减少或预防螨侵染的方法，所述方法包括使螨暴露于式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物，所述式(i)为：
[0030][0031]
其中：
[0032]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0033][0034]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0035]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0036]
z1是卤素、h或ch3；
[0037]
z2是卤素、h或ch3；
[0038]
z3是卤素、h或ch3；
[0039]
z4是卤素、h或ch3。
[0040]
根据第三方面，本发明涉及一种组合物，所述组合物适合用作蜜蜂中的杀瓦螨剂(varroacid)，所述组合物包含式(i)的化合物或其盐、一种或多种蜜蜂诱引剂和一种或多种聚合物，所述聚合物选自塑料材料、橡胶、粘合剂、树脂和聚多糖纤维(polyholoside fiber)，
[0041]
所述式(i)为：
[0042]
[0043]
其中：
[0044]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0045][0046]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0047]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0048]
z1是卤素、h或ch3；
[0049]
z2是卤素、h或ch3；
[0050]
z3是卤素、h或ch3；
[0051]
z4是卤素、h或ch3。
[0052]
根据第四方面，本发明涉及一种条带，所述条带优选地适合在养蜂业中使用，所述条带包含：(i)式(i)的化合物、其盐、包含它们的组合物，或(ii)根据本发明的组合物，
[0053]
所述式(i)为：
[0054][0055]
其中：
[0056]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0057]
[0058]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0059]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0060]
z1是卤素、h或ch3；
[0061]
z2是卤素、h或ch3；
[0062]
z3是卤素、h或ch3；
[0063]
z4是卤素、h或ch3。
[0064]
根据第五方面，本发明涉及一种蜂箱，所述蜂箱包含：(i)式(i)的化合物、其盐、含有它们的组合物，(ii)根据本发明的组合物，或(iii)根据本发明的条带，
[0065]
所述式(i)为：
[0066][0067]
其中：
[0068]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0069][0070]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0071]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0072]
z1是卤素、h或ch3；
[0073]
z2是卤素、h或ch3；
[0074]
z3是卤素、h或ch3；
[0075]
z4是卤素、h或ch3。
[0076]
发明详述
[0077]
式(i)的化合物的定义
[0078]
式(i)的化合物是α-2-肾上腺素能激动剂。其式为：
[0079][0080]
其中：
[0081]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0082][0083]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0084]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0085]
z1是卤素、h或ch3；
[0086]
z2是卤素、h或ch3；
[0087]
z3是卤素、h或ch3；
[0088]
z4是卤素、h或ch3。
[0089]
有利地，y是以下基团(iv)或(v)：
[0090][0091][0092]
有利地，式(i)的化合物为：
[0093][0094]
其中：
[0095]-a是基团(ii)，x是nh，y是基团(iv)，z1是卤素，z2是h，并且z3是卤素，
[0096]-a是基团(ii)，x是ch2或ch-ch3，y是基团(v)，z1是ch3，z2是ch3，并且z3是h，或者
[0097]-a是基团(iii)，x是nh，y是基团(iv)，并且z4是卤素。
[0098]
有利地，卤素选自f、cl或br。
[0099]
在特别的实施方案中，式(i)的化合物选自：地托咪定(detomidine)(cas号：76631-46-4)，美托咪定(d)(medetomidine(d))(即右美托咪定-cas号：113775-47-6)，美托咪定(l)(medetomidine(l))(即左美托咪定-cas号：119717-21-4)，罗米非定(romifidine)(cas号：65896-16-4)，可乐定(clonidine)(cas号：4205-90-7)，替扎尼定(tizanidine)(cas号：51322-75-9)或这些化合物中的两种或更多种的混合物。其可以例如是外消旋混合物，例如美托咪定的外消旋物(cas号：86347-14-0)。
[0100]
地托咪定也以化学名称4-[(2,3-二甲基苯基)-甲基]-3h-咪唑而为人所知。其具有下式：
[0101][0102]
右美托咪定对应于美托咪定的右旋对映异构体。右美托咪定也以化学名称(s)-4-[1-(2,3-二甲基苯基)-乙基]-1h-咪唑而为人所知。其具有下式：
[0103][0104]
可乐定也以化学名称n-(2,6-二氯苯基)-4,5-二氢-1h-咪唑-2-胺而为人所知。其具有下式：
[0105][0106]
罗米非定也以化学名称n-(2-溴-6-氟苯基)-4,5-二氢-1h-咪唑-2-胺而为人所知。其具有下式：
[0107][0108]
替扎尼定也以化学名称4-氯-n-(4,5-二氢-1h-咪唑-2-基)-8-硫代-7,9-二氮杂二环,壬-2,4,6,9-四烯-5-胺而为人所知。其具有下式：
[0109][0110]
在特别优选的实施方案中，式(i)的化合物是右美托咪定。右美托咪定是用于养蜂业的特别令人感兴趣的化合物，因为本技术人已显示该化合物具有杀瓦螨剂性质而对于蜜蜂没有毒性。
[0111]
根据本发明的式(i)的化合物也可以是盐的形式。术语“盐”意指由形成不带净电荷的中性产物的阳离子和阴离子构成的离子化合物。本领域技术人员将知悉如何选择适用于实施本发明的盐，即对处理者和/或蜜蜂和/或蜂蜜消费无毒的盐。所述盐可以选自以下盐：盐酸盐、乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己氨磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖酸盐(saccharate)、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、昔萘酸盐(xinofoate)、铝、精氨酸、苯乍生(benzathine)、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌。例如，已知为药用的盐适用于实施本发明，并且特别参考stahl和wermuth的handbook of pharmaceutical salts:properties,selection,and use(wiley-vch，2002)。
[0112]
特别适用于实施本发明的盐是选自地托咪定、美托咪定(d)(即右美托咪定)、美托咪定(l)(即左美托咪定)、罗米非定、可乐定、替扎尼定或这些化合物中的两种或更多种的混合物中的化合物的盐。有利地，所述盐是盐酸盐。其可以是例如盐酸美托咪定(l)(即盐酸左美托咪定-cas号：190000-46-5)和/或盐酸美托咪定(d)(例如盐酸右美托咪定-cas号：145108-58-3或盐酸美托咪定-cas号：86347-15-1)、盐酸可乐定(cas号：4205-91-8)、盐酸替扎尼定(cas号：64461-82-1)或盐酸地托咪定(cas号：90038-00-9)。
[0113]
在本发明的上下文中，数种式(i)的化合物可以彼此结合。
[0114]
特别适用于在养蜂业领域中实施本发明的盐是盐酸右美托咪定，因为本技术人已显示该化合物具有杀瓦螨剂性质而对于蜜蜂没有毒性。
[0115]
定义
[0116]
术语“杀螨剂”表示具有杀螨性质的化合物。例如，化合物可以具有通过麻痹杀螨的性质。在本发明的特别实施方案中，杀螨剂可以是“杀瓦螨剂”，即具有杀螨性质的化合物。
[0117]
在本发明的上下文中，螨可以是：
[0118]-后气门亚目(metastigmata suborder)的螨(蜱)，特别是硬蜱科(ixodidae family)的螨，诸如蓖子硬蜱(ixodes ricinus)、肩突硬蜱(ixodes scapularis)、血红扇头蜱(rhipicephalus sanguineus)和微小牛蜱(boophilus microplus，牛蜱(cattle tick))、变异革蜱(dermacentor variabilis)、美洲钝眼蜱(amblyomma americanum)；
[0119]-中气门亚目(mesostigmata suborder)的螨，特别是皮刺螨科(dermanyssidae family)的螨，诸如鸡皮刺螨(dermanyssus gallinae，鸟虱(poultry louse))，或瓦螨科(varroidae family)的螨，诸如瓦螨属(varroa)；
[0120]-来自无气门亚目(astigmata suborder)的螨(“瘿”)，特别是来自疥螨科(sarcoptidae family)的螨，诸如疥螨(sarcoptes scabiei)和猫耳螨(notoedres cati)，或来自痒螨科(psoroptidae family)的螨，诸如羊痒螨(psoroptes ovis)、牛足螨(chorioptes bovis)和耳螨(otodectes cynotis)；或者
[0121]-前气门亚目(prostigmata suborder)的螨，特别是蠕形螨科(demodicidae family)的螨，诸如牛脂螨(demodex bovis)和犬脂螨(demodex canis)，或姬肉食螨科(cheyletiellidae family)的螨，诸如牙氏姬螯螨(cheyletiella yasguri)。
[0122]
在本发明的该特别实施方案中，螨是瓦螨(varroa mite)。术语“瓦螨属”是指外寄生的蜂螨。其寄生在其发育的所有阶段并且影响蜜蜂的健康，然后影响蜂群的健康，尤其是在蜂箱中。在本发明的上下文中，瓦螨属优选地是狄氏瓦螨(varroa destructor)。
[0123]
在本发明的上下文中，术语“动物”表示例如狗、猫、马、家禽、牛、羊、蜜蜂。
[0124]
术语“蜜蜂”是指膜翅目和蜜蜂属的昆虫。蜜蜂有4种：大蜜蜂(apis dorsata)、小蜜蜂(apis florea)、东方蜜蜂(apis cerana)和西方蜜蜂(apis mellifera)。在本发明的特别实施方案中，蜜蜂是西方蜜蜂。
[0125]
术语“蜂箱”是指容纳蜂群的结构。蜂箱的内部由蜂蜡的六角形巢室形成的蜂巢组成。蜜蜂利用这些巢室进行食物储存(蜂蜜和花粉)和种群更新(卵、幼虫和蛹)。在养蜂业中，蜂箱是养蜂人为容纳蜂群而建造的居住单元。这通常是木盒或塑料盒。
[0126]
术语“条带”是指通过切割或编织柔性材料制成的带。柔性材料可以是例如塑料材料、橡胶、织物、树脂或聚多糖纤维。条带可以具有不同的形状。其可以是例如猫项圈、狗项圈或养蜂业中使用的条带。优选地，条带是适合在养蜂业中使用的条带，即非环状条带，优选地扁平条带，其具有适合于使得条带可以在蜂箱的框架之间滑动的尺寸、刚度和形状。
[0127]
本发明源于本发明人证明的式(i)的化合物的杀螨效果的优点。
[0128]
用途和方法
[0129]
根据第一方面，本发明涉及式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物作为杀螨剂的用途，所述式(i)为：
[0130][0131]
其中：
[0132]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0133][0134][0135]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0136]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0137]
z1是卤素、h或ch3；
[0138]
z2是卤素、h或ch3；
[0139]
z3是卤素、h或ch3；
[0140]
z4是卤素、h或ch3。
[0141]
有利地，式(i)的化合物用于：
[0142]-减少或预防螨侵染，
[0143]-减少或预防动物中的螨侵染，例如所述动物是猫、狗、马、家禽、牛、羊或蜜蜂，
[0144]-减少或预防蜂箱中的螨侵染，优选地所述螨是瓦螨。
[0145]
根据第二方面，本发明涉及一种用于减少或预防螨侵染的方法，所述方法包括使瓦螨暴露于式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物，所述式(i)为：
[0146][0147]
其中：
[0148]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0149][0150]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0151]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0152]
z1是卤素、h或ch3；
[0153]
z2是卤素、h或ch3；
[0154]
z3是卤素、h或ch3；
[0155]
z4是卤素、h或ch3。
[0156]
根据本发明的第二方面，螨侵染可以是：
[0157]-动物中的螨侵染，例如所述动物是猫、狗、马、家禽、牛、羊或蜜蜂，
[0158]-蜂箱中的螨侵染，优选地所述螨是瓦螨。
[0159]
在本发明的上下文中，式(i)的化合物的组合物或式(i)的化合物的盐的组合物含有0.001至200μg/μl的式(i)的化合物或其盐，优选地0.01至100μg/μl、0.1至100μg/μl，例如约0.1μg/μl、约1μg/μl、约10μg/μl、约25μg/μl、约50μg/μl、约75μg/μl或甚至约100μg/μl。
[0160]
式(i)的化合物或其盐可以在溶剂中稀释。溶剂可以是例如乙腈、丙酮、乙醇或甲醇。
[0161]
式(i)的化合物或其盐可以是组合物的形式。其可以是根据本发明的组合物，如下所定义。
[0162]
式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物可以包含在条带中和/或条带上。其可以是根据本发明的条带，如下所定义。
[0163]
在本发明的特别实施方案中，螨侵染的减少是减少附着于动物的活螨的数量的至少25％，优选地至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或甚至100％。这样的减少有利地在处理后少于24小时(h)，例如在处理后少于12小时、少于6小时或甚至少于3小时，例如通过实施实施例部分中描述的测试来获得。在实际情况下，所述减少可以在几天或甚至几周后获得。侵染的减少可以容易地测量，例如通过从蜂箱中取出100只蜜蜂并且对附着于它们的瓦螨的数量进行计数来测量瓦螨对蜜蜂的侵染。然后容易地比较经处理的蜂箱和未处理的蜂箱之间或者处理前的蜂箱相对于处理后的同一蜂箱的附着在蜜蜂上的瓦螨数量。减少50％意指经处理的动物携带的螨是未经处理的动物的一半。减少100％意指动物不再携带螨。
[0164]
有利地，根据本发明的用途和根据本发明的方法的实施不影响动物的存活。当动
物是蜜蜂时，优选地少于20％的蜜蜂通过用式(i)的化合物处理蜂箱而被杀死，优选地少于15％的蜜蜂、少于10％的蜜蜂、少于5％的蜜蜂、理想地没有蜜蜂被杀死。
[0165]
暴露于所述化合物可以通过使螨与式(i)的化合物接触来进行，例如通过式(i)的化合物或其盐的蒸发、升华、烟熏、撒粉或汽化。螨的暴露也可以在动物摄入式(i)的化合物或其盐之后进行。
[0166]
可以进行暴露以防止螨侵染或处理螨侵染。当动物是蜜蜂并且螨是瓦螨时，则可以在春季(如果养蜂场中的瓦螨属数量太高)、在夏初(对于希望留下贮蜜箱以获取荞麦蜜或帚石楠蜜的养蜂人来说)或在紧接在最后一次蜜流之后的夏末(七月末/八月中旬)暴露于式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物。暴露也可以在冬天进行。
[0167]
可以将式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物施用至动物的至少一部分。
[0168]
当动物是蜜蜂并且螨是瓦螨时，可以将式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物施用至蜂箱的至少一部分(例如在置于蜂箱中的装置(例如条带)上的蜂箱入口处)、直接施用在蜜蜂上或直接施用在瓦螨上。施用化合物的形式可以变化，只要其允许具有所需的杀瓦螨剂效果，例如以粉末形式、凝胶形式、聚合物形式、烟雾形式、溶液形式等。
[0169]
在特别的实施方案中，式(i)的化合物在组合物中与一种或多种蜜蜂诱引剂组合。一种或多种蜜蜂诱引剂在文献中，例如在专利ep0499510b1中广泛描述。在一种或多种蜜蜂诱引剂中，可以提及例如香叶醇、柠檬醛、橙花酸、柠檬草、法尼醇和/或蜂王浆的成分(诸如己二酸、庚二酸(pinelic acid)、辛二酸和/或4-羟基苯甲酸)。(参见文章“compounds which affect the behavior of the honeybee apis mellifera-bee world 69-1988-104-123)。向式(i)的化合物中添加一种或多种蜜蜂诱引剂允许吸引蜜蜂。因此，蜜蜂将自然地移向式(i)的化合物并且因此发现它们自己与所述式(i)的化合物接触。因此，蜜蜂会将式(i)的化合物自行施用至它们身体的至少一部分。
[0170]
组合物
[0171]
本描述涉及一种组合物，所述组合物包含式(i)的化合物或其盐和一种或多种聚合物，所述聚合物选塑料材料、橡胶、粘合剂、树脂和多糖纤维，
[0172]
所述式(i)为：
[0173][0174]
其中：
[0175]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0176]
[0177][0178]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0179]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0180]
z1是卤素、h或ch3；
[0181]
z2是卤素、h或ch3；
[0182]
z3是卤素、h或ch3；
[0183]
z4是卤素、h或ch3。
[0184]
根据第三方面，本发明涉及一种组合物，所述组合物适合用作蜜蜂中的杀瓦螨剂，所述组合物包含式(i)的化合物或其盐、一种或多种蜜蜂诱引剂和一种或多种聚合物，所述聚合物选自塑料材料、橡胶、粘合剂、树脂和聚多糖纤维，
[0185]
所述式(i)为：
[0186][0187]
其中：
[0188]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0189][0190][0191]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0192]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0193]
z1是卤素、h或ch3；
[0194]
z2是卤素、h或ch3；
[0195]
z3是卤素、h或ch3；
[0196]
z4是卤素、h或ch3。
[0197]
塑料材料可以是乙烯和乙酸乙烯酯的共聚物(eva共聚物)。
[0198]
树脂可以是天然或合成树脂。
[0199]
多糖纤维是纤维素、淀粉或菊粉。
[0200]
组合物有利地适合用作杀螨剂，例如用作动物中的杀螨剂。在本发明的上下文中，组合物适合用作蜜蜂中的杀瓦螨剂，并且所述组合物还包含一种或多种蜜蜂诱引剂。蜜蜂诱引剂在文献中广泛描述，例如在专利ep0499510b1中。在一种或多种蜜蜂诱引剂中，可以提及例如香叶醇、柠檬醛、橙花酸、柠檬草、法尼醇和/或蜂王浆的成分(诸如己二酸、庚二酸(pinelic acid)、辛二酸和/或4-羟基苯甲酸)。(参见文章“compounds which affect the behavior of the honeybee apis mellifera-bee world 69-1988-104-123)。
[0201]
组合物必须含有足够的式(i)的化合物或其盐之一以允许减少螨侵染，优选地减少附着于动物的活螨的数量的至少25％，优选地至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或甚至100％。这样的减少有利地在处理后少于24小时(h)获得，例如在处理后少于12小时、少于6小时或甚至少于3小时获得。在特别的实施方案中，这样的减少可以在施用处理后几天在蜂箱中获得，例如施用处理后至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周，例如施用处理后多达12周。
[0202]
本发明的组合物不应对蜜蜂有毒。优选地，当与本发明的组合物接触时，少于20％的蜜蜂被杀死，优选地少于15％的蜜蜂、少于10％的蜜蜂、少于5％的蜜蜂、理想地没有蜜蜂被杀死。
[0203]
因此，式(i)的化合物或其盐的浓度适合于杀死螨而不对动物有毒。本领域技术人员可以根据需要容易地调整浓度。例如，式(i)的化合物的组合物或式(i)的化合物的盐的组合物含有0.001至200μg/μl的式(i)的化合物或其盐，优选地0.01至100μg/μl、0.1至100μg/μl，例如约0.1μg/μl、约1μg/μl、约10μg/μl、约25μg/μl、约50μg/μl、约75μg/μl或甚至约100μg/μl。
[0204]
条带
[0205]
根据第四方面，本发明涉及一种条带，所述条带优选地适合在养蜂业中使用，所述条带包含：(i)式(i)的化合物、其盐、包含它们的组合物，或(ii)根据本发明的组合物，所述式(i)为：
[0206][0207]
其中：
[0208]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0209][0210]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0211]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0212]
z1是卤素、h或ch3；
[0213]
z2是卤素、h或ch3；
[0214]
z3是卤素、h或ch3；
[0215]
z4是卤素、h或ch3。
[0216]
条带通常在杀螨剂处理方面在兽医领域中使用，例如以用于狗或猫的项圈的形式。条带通常也在杀瓦螨剂处理方面在养蜂业中使用。几种适用于养蜂业的条带是可商购获得的(例如，装置)。
[0217]
通常，杀螨化合物从条带内部迁移到其表面以与动物和/或螨接触。产品就是这种情况。蜜蜂在条带处摩擦以带有化合物。然后通过接触将化合物分布在蜜蜂之间。附着在蜜蜂上的瓦螨因此暴露于导致瓦螨死亡的化合物。然后瓦螨与蜜蜂脱离。在蜂箱中，由此脱离的瓦螨落到蜂箱底部。
[0218]
因此，本发明的条带可以适合在养蜂业中使用。特别地，其具有适合于使其能够滑入蜂箱的尺寸、刚度和形状，即以便条带可以在蜂箱的框架之间滑动。适合的形状对应于非环状或非弯曲条带，优选地扁平条带。适合的尺寸对应于这样的条带，其宽度为1cm至20cm、优选地4cm至20cm并且长度为5cm至50cm、优选地15cm至25cm。条带的厚度理想地为0.5mm至5mm，优选地其厚度为1mm至2mm。适合的刚度对应于足以破坏可以在蜂箱框架之间形成的蜂蜡桥的刚度。
[0219]
条带可以用杀螨化合物浸渍或涂覆，例如通过用所述化合物喷洒条带。条带也可以由已经包含杀螨化合物的混合物制造，例如通过挤出该混合物以使其具有所需形状或通过模制。
[0220]
蜂箱
[0221]
根据第五方面，本发明涉及一种蜂箱，所述蜂箱包含：(i)式(i)的化合物、其盐、含有它们的组合物，(ii)根据本发明的组合物，或(iii)根据本发明的条带，
[0222]
所述式(i)为：
[0223][0224]
其中：
[0225]
a选自基团(ii)或(iii)：
[0226][0227]
x是nh、ch2或ch-ch3；
[0228]
y是包含至少一个氮原子的5-键合杂环；
[0229]
z1是卤素、h或ch3；
[0230]
z2是卤素、h或ch3；
[0231]
z3是卤素、h或ch3；
[0232]
z4是卤素、h或ch3。
[0233]
蜂箱包含足够量的(i)式(i)的化合物、其盐或含有它们的组合物、(ii)根据本发明的组合物或(iii)根据本发明的一个或多个条带。
[0234]
在特别的实施方案中，全部或部分的蜂箱被杀螨化合物覆盖，例如通过用所述化合物喷洒蜂箱。
[0235]
在另一个特别的实施方案中，蜂箱包含蜂群并且蜂群被杀螨化合物覆盖，例如通过用所述化合物喷洒蜂群。
[0236]
在另一个特别的实施方案中，蜂箱包含一个或多个根据本发明的条带。
[0237]
其他目的
[0238]
另一个目的涉及用于蜜蜂的营养组合物，其包含如“式(i)的化合物的定义”中定义的式(i)的化合物。用于蜜蜂的营养组合物可以是不同的形式，例如用于蜜蜂的糖浆、甜酱或用于蜜蜂的蛋白糊的形式。
[0239]
另一个目的涉及用于兽医用途(例如在养蜂业中)的装置，其包含如“式(i)的化合物的定义”中定义的式(i)的化合物。装置可以是条带或蜂箱。装置可以用杀螨化合物浸渍或涂覆，例如通过用所述化合物喷洒装置。装置也可以由已经包含杀螨化合物的混合物制造，例如通过挤出该混合物以使其具有所需形状或通过模制制造。
[0240]
另一个目的涉及如“式(i)的化合物的定义”中定义的式(i)的化合物，其用于处理或预防动物中的如上定义的螨侵染。
[0241]
附图简述
[0242]
[图1]是表示某些溶剂对瓦螨和蜜蜂的毒性的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。
[0243]
[图2]是测量双甲脒的杀瓦螨剂作用(图2a)及其对蜜蜂的影响(图2b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0244]
[图3]是测量盐酸可乐定的杀瓦螨剂作用(图3a)及其对蜜蜂的影响(图3b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0245]
[图4]是测量一水合盐酸地托咪定的杀瓦螨剂作用(图4a)及其对蜜蜂的影响(图4b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0246]
[图5]是测量盐酸右美托咪定的杀瓦螨剂作用(图5a)及其对蜜蜂的影响(图5b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0247]
[图6]是测量盐酸罗米非定的杀瓦螨剂作用(图6a)及其对蜜蜂的影响(图6b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0248]
[图7]是测量盐酸替扎尼定的杀瓦螨剂作用(图7a)及其对蜜蜂的影响(图7b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0249]
[图8]是测量盐酸美托咪定的杀瓦螨剂作用(图8a)及其对蜜蜂的影响(图8b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0250]
[图9]表示通过蜜蜂饲喂的盐酸右美托咪定的杀瓦螨剂作用。阴性对照对应于仅接受纯糖浆的蜜蜂。
[0251]
[图10]是测量盐酸左美托咪定的杀瓦螨剂作用(图10a)及其对蜜蜂的影响(图10b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子和/或进行稀释或浓缩。
[0252]
[图11]是测量章鱼胺(octopamine)的杀瓦螨剂作用(图11a)及其对蜜蜂的影响(图11b)的图表。阴性对照对应于未经处理的蜜蜂，即并未接受胸部沉淀的蜜蜂。溶剂允许溶解分子。
[0253]
[图12]是显示用于饲养蜱的饲喂装置。
[0254]
[图13]表示在7天的时间段内根据不同处理的死蜱的百分比的图表。
[0255]
[图14]是测量作为处理时间的函数的测试化合物对蜂箱中瓦螨的累积功效的图表。
[0256]
[图15]是测量在蜂箱中施用测试化合物后成年蜜蜂的死亡率的图表。
实施例
[0257]
实施例1：式(i)的化合物对狄氏瓦螨的杀螨效果的证明
[0258]
材料和方法
[0259]
瓦螨的准备
[0260]
将约300只感染狄氏瓦螨的蜜蜂(西方蜜蜂)从重复感染狄氏瓦螨的蜂箱中取出。然后将蜜蜂放置在装满糖粉的装置中，该装置允许附着在蜜蜂上的瓦螨脱离(欧洲实用新型003419415-0001中描述的装置)。将该装置搅拌2分钟以对附着在蜜蜂上的瓦螨进行取样。糖粉允许在蜜蜂和附着在其上的瓦螨之间进行干扰。瓦螨用糖粉收获，因为与蜜蜂不同，它们穿过装置中的孔。然后将瓦螨从糖粉中分离。
[0261]
将由此回收的瓦螨分派在盒子中(每盒10只瓦螨)。使用两个盒子以相同的剂量测试每种化合物，以获得20只瓦螨的数据。
[0262]
蜜蜂的准备
[0263]
蜜蜂从在过去6个月期间并未经历任何处理的蜂箱中收获，以确保实验的效果并非来自先前的处理。
[0264]
然后将蜜蜂分派在盒子中(每盒10只)。使用两个盒子以相同的剂量测试相同的化合物，以获得20只蜜蜂的数据。
[0265]
然后使用co2(3升流量，持续20秒)让蜜蜂睡几分钟，以使用移液管将1μl的待测试的化合物沉积在它们的胸部。应该注意的是，接受浓度为10μg/μl的盐酸罗米非定的蜜蜂接受了2μl的产品。在待测试的化合物被沉积的时间内(即大约三分钟)，蜜蜂是无意识的，然后它们就醒了。
[0266]
在待测试的化合物的胸部沉积后，将来自同一个盒子的10只蜜蜂转移到装有10只瓦螨的盒子(参见上文的“瓦螨的制备”)。在观察期间，将液体糖留在每个盒子中以饲喂蜜蜂。然后将该系列盒子放置在25℃和50％湿度的烘箱中，以尽可能接近蜂箱条件。确保5分钟后所有瓦螨都附着在蜜蜂上。
[0267]
化合物对瓦螨和蜜蜂的作用
[0268]
然后在将待测试的化合物施用至蜜蜂后5分钟、2小时、4小时和24小时监测瓦螨和蜜蜂的死亡率。死瓦螨对应于从蜜蜂上脱离的瓦螨。死蜜蜂对应于不再移动并且经常胸部着地的蜜蜂。
[0269]
使用的溶剂的测试
[0270]
对溶剂进行测试，以确保它们对结果没有(正面或负面)影响。测试了四种溶剂：乙醇、甲醇、丙酮和乙腈。
[0271]
结果
[0272]
结果在图1中显示。测试的溶剂证明没有对瓦螨或蜜蜂具有显著的毒性。
[0273]
结论
[0274]
测试的溶剂对蜜蜂和瓦螨的生存能力没有影响。因此，它们可以用于稀释测试化合物。
[0275]
化合物的测试
[0276]
测试化合物
[0277]
将以下组合物施用至蜜蜂的胸部：
[0278]-溶剂，
[0279]-双甲脒，1μg/μl，在丙酮中，
[0280]-盐酸可乐定，100μg/μl、10μg/μl、1μg/μl和0.1μg/μl，在甲醇中，
[0281]-一水合盐酸地托咪定，1μg/μl，在甲醇中，
[0282]-盐酸右美托咪定，100μg/μl、10μg/μl、1μg/μl和0.1μg/μl，在甲醇中，
[0283]-盐酸罗米非定，10μg/μl和5μg/μl，在甲醇中，
[0284]-盐酸替扎尼定，1μg/μl，在甲醇中，
[0285]-盐酸美托咪定，0.1μg/μl，在乙醇中，
[0286]-盐酸左美托咪定，100μg/μl、10μg/μl、1μg/μl和0.1μg/μl，在甲醇中，
[0287]-章鱼胺，1μg/μl，在乙醇中。
[0288]
结果
[0289]
双甲脒：100％的瓦螨被杀死，并且0％的蜜蜂被杀死(图2)。如所预期的，双甲脒在对抗瓦螨方面非常有效。双甲脒是阳性对照。
[0290]
盐酸可乐定：结果在图3中显示。在100μg/μl和10μg/μl的浓度下，对于仅10％的蜜蜂被杀死，瓦螨的死亡率达到了85％。令人惊讶地，该化合物对瓦螨的功效在1μg/μl的浓度下是特别显著的，而蜜蜂的死亡率为零并且瓦螨的死亡率为95％。与阳性对照相比，该分子的动力学显得相当缓慢，因为其在24小时后显示出其全部功效。
[0291]
一水合盐酸地托咪定:结果在图4中显示。一水合盐酸地托咪定被证明是特别有效的，因为在2小时后，40％的瓦螨被杀死而蜜蜂没有死亡。24小时后，100％的瓦螨被杀死而蜜蜂没有死亡。
[0292]
盐酸右美托咪定：结果在图5中显示。结果表明仅100μg/μl的浓度对蜜蜂有毒。在其他浓度(10μg/μl；1μg/μl；0.1μg/μl)下，观察到在24小时后蜜蜂的死亡率小于5％，并且系统地瓦螨的死亡率为100％。因此，瓦螨属对该化合物敏感。
[0293]
盐酸罗米非定：结果在图6中显示。该分子被证明是非常有效的。在将2μl的产品以10μg/μl沉积后2小时之后，瓦螨的死亡率为75％，然后4小时后瓦螨的死亡率为95％。对于5μg/μl的浓度，需要24小时才能获得相同水平的瓦螨死亡率。在所有剂量下并且甚至在24小时后，蜜蜂死亡率都保持为零(图表未显示)。
[0294]
盐酸替扎尼定：结果在图7中显示。该产品被证明在1μg/μl下在24小时后是非常有效的(80％瓦螨死亡率)而对蜜蜂没有毒性。
[0295]
盐酸美托咪定：结果在图8中显示。该产品被证明是非常有效的。
[0296]
盐酸左美托咪定：结果在图10中显示。结果与用右美托咪定获得的那些结果类似。因此，瓦螨对该化合物敏感。
[0297]
章鱼胺：结果在图11中显示。并未观察到杀瓦螨剂效果。蜜蜂死亡率也保持为零。
[0298]
实施例2：通过饲喂暴露于式(i)的化合物
[0299]
如实施例1中详述的获得蜜蜂和瓦螨并且进行接触(没有处理步骤)。
[0300]
将附着有瓦螨的蜜蜂(10只蜜蜂与10只瓦螨接触)饲喂：
[0301]-纯糖浆(阴性对照)，或
[0302]-包含盐酸右美托咪定(100μg/ml糖浆)的糖浆。
[0303]
将糖浆在1.5ml eppendorf管中随意提供至蜜蜂。
[0304]
结果
[0305]
结果在图9(杀瓦螨剂效果)和表1(对蜜蜂的毒性)中显示。
[0306]
表1：
[0307]
蜜蜂死亡率％5min1h2h3h 303h 4524h阴性对照000000右美托咪定100μg/ml糖浆005％5％5％5％
[0308]
实施例3：根据本发明的化合物对蓖子硬蜱的杀螨效果的证明
[0309]
根据本发明测试的化合物
[0310]
sn0305：盐酸右美托咪定
[0311]
sn0306：盐酸美托咪定
[0312]
sn0307：盐酸地托咪定
[0313]
概述
[0314]
进行实验室研究以确定根据本发明的三种化合物(sn0305、sn0306和sn0307)对蓖子硬蜱的口服杀螨性质。每种化合物在1、10和100ppm下进行测试，并且与对应于单独溶剂(0.1％dmso)的阴性对照进行比较。100ppm的双甲脒用作阳性对照。
[0315]
将蓖子硬蜱(若虫和成虫)在含有与测试化合物混合的血液的饲喂孔中的膜上放置24小时。在蜱暴露于化合物开始1、3、6、12、24、48、72和96小时后，检查蜱死亡率(每个孔中死亡、濒死或未受影响的蜱的数量)、对膜的附着(每个孔中附着/脱离的蜱的数量)和行为(存在或不存在颤搐)。
[0316]
方法
[0317]
测试系统-节肢动物
[0318]
收集蜱(蓖子硬蜱)。将收集的成年雌性与若虫分开，并且将两者都放置在湿度箱的无菌管中，以提供约80％湿度和17℃。仅选择健康的蜱(雌性/若虫)进行实验。
[0319]
将12只成虫或若虫的批次插入饲喂孔中。约24小时后，用刷子检查它们的附着。移除死亡或濒死的蜱和未附着的蜱。
[0320]
测试样品-化合物
[0321]
将三种化合物(sn0305、sn0306和sn0307)的功效(每种化合物在三种浓度(1、10、100ppm)下测试)与溶剂对照(0.1％dmso，sigma-aldrich d-5879；lot 101k0028)和阳性对照(双甲脒，100ppm)进行比较。
[0322]
膜
[0323]
厚度为110至140μm的有机硅涂膜用于构建饲喂装置。
[0324]
饲喂装置
[0325]
将饲喂装置(无菌丙烯酸玻璃管)放置在由无菌六孔板制成的饲喂孔中。
[0326]
将3.1ml的无菌的10-3
m的富atp血液施加至每个饲喂孔。然后将饲喂孔插入热水浴中(图12)并且保持在37℃
±
2℃。
[0327]
测试化合物和施用
[0328]
制备100,000ppm的储备溶液，并且在0.1％dmso中进行第十次稀释以达到所需浓度。蜱附着后(将蜱放置在饲喂孔后24小时)，将3.1μl的溶液添加到每个含有3.1ml血液的饲喂孔。12小时后，将血液更换为待测试的化合物的新鲜补充物。将蜱暴露于该产品达总计
24小时，之后将血液再次更换为新鲜的未经处理的血液。
[0329]
评价
[0330]
在蜱暴露于化合物开始1、3、6、12、24、48、72和96小时后，检查蜱死亡率(每个孔中死亡、濒死或未受影响的蜱的数量)、附着(每个孔中附着/脱离的蜱的数量)和行为(抽搐的存在、不存在和强度)。
[0331]
结果
[0332]
蜱的抽搐、发病或死亡
[0333]
无论测试浓度如何，三种测试化合物(sn0305、sn0306和sn0307)从暴露1小时开始显示出对蜱的强烈影响(蜱抽搐、发病或死亡)。100％的蜱受到影响。双甲脒阳性对照对于若虫获得了相当的结果，但是在成年蜱上观察到弱得多的效果(表2)。在实验的96小时期间，并未观察到溶剂(阴性对照)的影响。
[0334]
时间(小时)1361224487296受影响％66.856.253.756.266.583.1100.0100.0
[0335]
表2：口服暴露于双甲脒(100ppm)开始后受影响的成年蜱的平均百分比(蜱抽搐、发病或死亡)。
[0336]
蜱的脱离
[0337]
测试的三种产品(sn0305、sn0306和sn0307)在蜱脱离方面显示出非常有限的效果。仅观察到非常孤立的案例：1ppm的sn0305重复中的1只脱离若虫，100ppm的sn0305重复中的1只脱离成年蜱，1ppm的sn0307的重复中的2只脱离成虫。在溶剂对照中，55％的完全饲喂的若虫在72至96小时之间自然释放。在溶剂对照中成年蜱并未脱离。
[0338]
双甲脒诱导成年蜱的强烈脱离(表3)。
[0339]
时间(小时)1361224487296附着％66.856.253.753.753.753.753.753.7
[0340]
表3：暴露于双甲脒(100ppm)开始后附着的成年蜱的平均百分比。
[0341]
蜱死亡率
[0342]
96小时后，测试的三种产品(sn0305、sn0306和sn0307)在若虫和成年蜱中引起100％的死亡率(濒死或死亡的蜱)。双甲脒在若虫中引起100％的死亡率并且在成虫中引起97.5％的死亡率。在溶剂的情况下并未观察到死亡(表4和5)。
[0343][0344]
表4：暴露于sn0305、sn0306和sn0307(1、10和100ppm)、溶剂对照(0.1％dmso)或双甲脒(100ppm)的蜱若虫的死亡率的平均百分比(濒死或死亡的若虫)。
[0345][0346][0347]
表5：暴露于sn0305、sn0306和sn0307(1、10和100ppm)、溶剂(0.1％dmso)或双甲脒(100ppm)的成年蜱死亡率的平均百分比(濒死或死亡的成年蜱)。在双甲脒处理中成年蜱的存活可能是由蜱的早期脱离引起的。
[0348]
结论
[0349]
所有测试化合物都显示出对蓖子硬蜱的杀螨作用。
[0350]
实施例4：根据本发明的化合物对血红扇头蜱的杀螨效果的证明
[0351]
概述
[0352]
进行实验室研究以确定根据本发明的三种化合物(sn0305、sn0306和sn0307)对血红扇头蜱的杀螨性质。每种化合物在1、10和100ppm下进行测试，并且与对应于单独溶剂(0.1％dmso)的阴性对照进行比较。100ppm的双甲脒用作阳性对照。
[0353]
方法
[0354]
测试系统
[0355]
使用来自单个组群的第二阶段的褐色犬蜱(血红扇头蜱)。
[0356]
测试化合物和施用
[0357]
测试了三(3)种化合物以及参考化合物(双甲脒)。对于每种测试化合物和双甲脒，将四种剂量(1000、100、10和1ppm)局部施用至蜱。包括阴性对照(丙酮)和未经处理组用于比较。一式三份地进行实验。
[0358]
实验方案
[0359]
将十只蜱放置在具有大约120mm直径和45mm高度的透明塑料容器中。然后通过直接暴露于二氧化碳(10秒)来麻醉蜱。然后使用hamilton注射器将处理施用至每只蜱的背部(盾片)，每只蜱最多0.5μl处理(1次施用)。
[0360]
将浸在水中的棉花放入每个容器中，以在整个实验过程中提供湿度。在整个实验过程中，容器也用一根管通风，以将空气引入每个容器。将容器保持在23
±
3℃的温度下。处理7天后，每天对活蜱、休克蜱和死蜱进行计数。
[0361]
统计分析
[0362]
计算每个评价类别(健康、倒地和死亡)的百分比平均值以及标准偏差。使用minitab软件第16版进行方差分析(anova)。
[0363]
结果和结论
[0364]
结果在图14中显示。
[0365]
1000ppm处理
[0366]
1000ppm下的处理导致在处理7天后化合物sn0305、sn0306、sn0307和双甲脒具有100％的死亡率，而在化合物之间没有统计学上的显著差异。
[0367]
100ppm处理
[0368]
100ppm处理导致在处理7天后化合物sn0305、sn0306、sn0307和双甲脒分别具有100％、93.3％、50％和96.7％的死亡率。与化合物sn0307相比，化合物sn0305、sn0306和双甲脒在7天具有显著更高水平的死亡率。
[0369]
10ppm处理
[0370]
10ppm下的处理导致在处理7天后化合物sn0305、sn0306、sn0307和双甲脒分别具有93.3％、66.7％、23.3％和46.7％的死亡率。与所有其他处理相比，化合物sn0305导致显著更高的死亡率。与sn0307相比，化合物sn0306导致显著更高的死亡率，但是与双甲脒相比并没有。
[0371]
1ppm下的处理
[0372]
1ppm下的处理导致低得多的死亡率，在处理7天后化合物sn0305、sn0306、sn0307
和双甲脒分别具有20％、26.7％、26.7％和30％的死亡率。
[0373]
阴性对照
[0374]
7天后，使用对照观察到的死亡率仍然很低，其中使用丙酮报告的死亡率为3.3％并且在未经处理的对照组中观察到的死亡率为6.7％。
[0375]
实施例5：式(i)的化合物在蜂箱中和在孵卵以外的情况下对狄氏瓦螨的杀螨效果的证明
[0376]
材料和方法
[0377]
蜂箱的准备
[0378]
根据蜂群强度(蜜蜂数量)和瓦螨属侵染，将18个蜜蜂蜂箱分为6组，每组3个同质蜂箱。
[0379]
每个蜂箱的蜂王在施用测试化合物前被关在笼子里3周。因此，测试化合物的施用在孵卵以外的情况下进行，这使得瓦螨被迫从其繁殖阶段进入其寄载阶段(因此它们都存在于蜜蜂上)。
[0380]
在蜂王被关在笼子里三周后，测试化合物以凝胶形式施用。对化合物的活性进行了为期9天的研究。
[0381]
在这9天的处理之后，用草酸进行对照处理(处理持续时间等于1周)。
[0382]
以规则的时间间隔对落在地板上的瓦螨进行计数，以定量死瓦螨的数量。
[0383]
处理的功效通过以下方式计算：将从d0到d9的所有死瓦螨加和(测试化合物)并且除以从d0到d16的所有死瓦螨的总和(测试化合物 对照处理)。
[0384]
蜜蜂的死亡率也被定量以证明测试化合物的潜在毒性。为此，使用了置于蜂箱前的死蜂捕集器。
[0385]
化合物的测试
[0386]
测试化合物
[0387]
对以下化合物进行测试：
[0388]-右美托咪定，55mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0389]-右美托咪定，110mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0390]-右美托咪定，220mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0391]-地托咪定，38.4mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0392]-地托咪定，110mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0393]-地托咪定，220mg/蜂箱，盐酸盐形式，
[0394]
结果
[0395]
测试化合物的功效的计算结果在图14中显示。右美托咪定对瓦螨的功效明显存在剂量效应。最有效的剂量为220mg/蜂箱(94.5％总功效)。
[0396]
关于地托咪定，结果表明220mg/蜂箱的剂量允许具有杀瓦螨剂效果。
[0397]
因此，右美托咪定是对瓦螨最有效的化合物。
[0398]
蜜蜂死亡率的结果在图15中显示。结果表明使用220mg/蜂箱的地托咪定会增加蜜蜂的死亡率。另一方面，使用右美托咪定并未观察到蜜蜂死亡率的增加。
[0399]
这些结果证实了地托咪定和右美托咪定作为杀瓦螨剂的意义，特别是要求较低剂量并且对蜜蜂无毒的右美托咪定。
[0400]
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