一种中药组合物中五味子醇甲的含量检测方法与流程

1.本发明涉及一种中药组合物中五味子醇甲的含量检测方法，属于药品的质量控制方法领域。


背景技术：

2.本发明所涉及的中药组合物为十味安神颗粒，由山萸肉、五味子、白芍、酸枣仁、牡丹皮、北柴胡、炒栀子、地黄、知母和莲子心，10味中药组成。用于肝肾阴虚心肾不交所致失眠健忘，胸闷心悸，食欲不振，神志恍惚不安，多梦易醒，头晕耳鸣和更年期综合征所致失眠、多梦、烘热、汗出、头晕、耳鸣，从而有效地治疗失眠、焦虑、抑郁和更年期综合征。
3.cn（中国专利申请号：2020108551366，公告日：2022年03月02日）公开了一种治疗失眠的中药组合物及其制备方法，本专利申请就是针对该中药组合物进行的质量控制方法研究。
4.五味子醇甲为中药五味子的主要有效成分，五味子醇甲含量检测是十味安神颗粒质量控制中的重要步骤。通过五味子醇甲的含量检测，可以反映出五味子中药材的投料情况，有利于该中药组合物成品的质量控制。《中国药典》（2020年版）提供了五味子中五味子醇甲的含量测定方法，然而由山萸肉、五味子、白芍、酸枣仁、牡丹皮等组成的中药组合物成分比较复杂，各成分之间相互影响，将药典中的方法应用于上述中药组合物的五味子醇甲含量检测时，五味子醇甲与其他组分分离效果比较差，无法对五味子醇甲的含量进行准确测定。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种中药组合物有效成分的含量检测方法。
6.在质量控制方面，本发明提供的测定方法可测定该中药组合物的五味子醇甲的含量，方法简单、有效、可行。
7.解决的技术问题。
8.建立的五味子醇甲定量测定方法，依据《中国药典》2020年版“五味子”项下五味子醇甲的含量测定，适当调整流动相比例，在250nm检测，解决了五味子醇甲阴性干扰问题，使各波峰大小适宜，互不干扰，效率高，成本低。
9.本发明是通过下述的技术方案来实施的，所述的五味子醇甲的含量检测方法为高效液相色谱法，包括以下步骤。
10.第一步：色谱柱为c18柱；以甲醇-水（54:46）为流动相；流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为250nm，进样量10μl。
11.第二步：对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.03mg的溶液。
12.第三步：供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，精密称定，研细，取1.0g，精密加入80%甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率20khz）20分钟，取
出，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
13.第四步：制备缺五味子药材的制剂，再根据第三步制备缺五味子阴性对照溶液。
14.第五步：方法学考察，所述方法学考察包括线性关系考察、专属性试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验、耐用性试验，所述线性关系考察中的对照品溶液为：精密称取五味子醇甲对照品适量，置于25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.6mg/ml的对照品储备液。分别精密吸取对照品储备液适量置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别制成0.01531、0.02784、0.05062、0.06327、0.09039、0.11893mg/ml系列浓度溶液，各进样10μl，测定峰面积。以五味子醇甲进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。
15.所述专属性试验为分别量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl进样，记录色谱图。
16.所述精密度试验为精密量取混合对照品溶液，分别在所述第一步中的色谱条件下连续进样6次，测定五味子醇甲的峰面积的rsd值。
17.所述稳定性试验为取五味子醇甲对照品溶液和供试品溶液，每隔一定时间测定峰面积，考察了48h内的稳定性，测五味子醇甲的峰面积的rsd值。
18.所述重复性试验为以高、中、低剂量，取同一批9份样品，分别按所述第二步中的方法制备供试品溶液，按所属第一步中的色谱条件进样测定。
19.所述加样回收试验为精密称取已知含量的同一批样品9份，按高、中、低比例精密加入一定量的对照品，按所述第三步中的方法制备供试品溶液，按所述第一步中的色谱条件进样测定。
20.所述耐用性试验为考察了不同品牌的色谱柱【waters symmetry c18（4.6*250mm）、agilent zorbax sb-aq（4.6*250mm）、thermo acclaim c18（4.6*250mm）】，按所述第一步中的色谱条件进样测定。
21.本发明的原理如下。
22.通过调整流动相的比例，使五味子醇甲呈现波峰分离良好、无干扰，峰面积适宜，而且其波峰面积与含量呈良好线性关系，而得以定量测定。
23.本发明的创新点及有益效果如下。
24.(1) 本发明首次提出了针对包括山萸肉、五味子、白芍、酸枣仁、牡丹皮等多药味组成的中药组合物中五味子醇甲的含量检测方法，采用本发明提供的高效液相色谱法能够实现五味子醇甲与中药组合物中的其他成分的有效分离，该检测方法准确、稳定、重复性好，从而能够应用于该中药组合物中五味子醇甲的含量测定。
25.（2）本发明提供的五味子醇甲含量的检测方法可以用于包括山萸肉、五味子、白芍、酸枣仁、牡丹皮等多药味组成的中药组合物药品的质量控制，提高了检测效率，节省检测时间，降低检测成本，减少环境污染，形成了一套简便、快捷、高效、低耗、低污染的控制药品质量的现代化标准，对十味安神颗粒的质量控制具有重要的意义。
附图说明
26.图1 五味子醇甲对照品线性关系图。
27.图2五味子醇甲对照品的hplc色谱图。
28.图3中药组合物样品五味子醇甲hplc色谱图。
29.图4缺五味子的空白样品hplc色谱图。
30.图5waterssymmetryc18（4.6
×
250mm）s.n.03253008313820中药组合物中五味子醇甲hplc色谱图。
31.图6agilentzorbaxsb-aqs.n.usag017373中药组合物中五味子醇甲hplc色谱图。
32.图7thermoacclaimc18（4.6
×
250mm）s.n.017565中药组合物中五味子醇甲hplc色谱图。
33.图1中，横坐标为进样量μg,纵坐标为峰面积。
34.图2、图3、图5、图6、图7中，1.为五味子醇甲。
35.本发明具体实施方式如下一种中药组合物中五味子醇甲的含量检测方法。
36.第一步：色谱柱为c18柱；以甲醇-水（54:46）为流动相；流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为250nm。
37.第二步：对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1ml含五味子醇甲0.03mg的溶液。
38.第三步：供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，精密称定，研细，取1.0g，精密加入80%甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率20khz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
39.第四步：制备缺五味子药材的制剂，再根据第三步制备缺五味子阴性对照溶液。
40.第五步：方法学考察，所述方法学考察包括线性关系考察、专属性试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验、耐用性试验，所述线性关系考察中的对照品溶液为：精密称取五味子醇甲对照品适量，置于25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.6mg/ml的对照品储备液。分别精密吸取对照品储备液适量置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别制成0.01531、0.02784、0.05062、0.06327、0.09039、0.11893mg/ml系列浓度溶液，各进样10μl，测定峰面积。以五味子醇甲进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。结果表明:五味子醇甲进样量在0.1531~1.1893μg，与峰面积呈现良好的线性关系，回归方程为：y=2153304x-109555(r=0.99981,n=6)（见表1）。
41.所述专属性试验为分别量取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl进样，记录色谱图（图2、图3、图4），供试品与对照品在同一保留时间有相同的色谱峰出现，而阴性样品则没有相应的峰出现。
42.所述精密度试验为精密量取混合对照品溶液，分别在所述第一步中的色谱条件下连续进样6次，记录峰面积：五味子醇甲对照品6次测定的峰面积平均值为1225710，rsd为0.59%；供试品中五味子醇甲的平均值为1180174，rsd为0.54%。结果表明：本方法精密度较好（见表2）。
43.所述稳定性试验为取五味子醇甲对照品溶液和供试品溶液，每隔一定时间测定峰
面积，考察了48h内的稳定性，对照品五味子醇甲在48h内的rsd为1.84%；供试品五味子醇甲在48h内的rsd为0.5%。结果表明：对照品溶液和供试品溶液在48h内稳定（见表3）。
44.所述重复性实验为以高、中、低剂量，取同一批样品9份样品，分别按所述第二步中的方法制备供试品溶液，按所属第一步中的色谱条件进样测定，9次测定的结果，五味子醇甲的平均含量为1.475%，rsd为0.73%。结果表明：本方法的重现性良好（见表4）。
45.所述加样回收试验为精密称取已知含量的同一批样品9份，按高、中、低比例精密加入一定量的对照品，按所述第三步中的方法制备供试品溶液，按所属第一步中的色谱条件进样测定，五味子醇甲的平均回收率为100.98%（n=9），rsd为1.76%（见表5）。
46.所述耐用性试验为考察了不同品牌的色谱柱【waterssymmetryc18（4.6*250mm）、agilentzorbaxsb-aq（4.6*250mm）、thermoacclaimc18（4.6*250mm）】，所得的检测结果没有明显的差异，且rsd值均在2%以下，且各色谱峰分离度较好，说明此方法耐用性良好（见表6）。
47.表1五味子醇甲进样量与峰面积
[0048][0049]
表2五味子醇甲精密度实验结果
[0050][0051]
表3五味子醇甲稳定性试验结果
[0052][0053]
表4五味子醇甲重复性试验结果（mg/g）
[0054][0055] 表5 五味子醇甲加样回收率试验结果
[0056][0057] 表6 不同色谱柱耐用性试验结果（mg/g）
[0058]