一种抗癌药物复合物及其制备方法和应用

1.本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种抗癌药物复合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.金属有机框架材料是由金属离子或金属簇与多齿有机配体自组装形成的多孔、结晶材料。这种无机-有机杂化材料兼具无机材料和有机材料的优异性能，不仅具有高的比表面积、可调的尺寸和孔隙率，而且载药率高、表面易修饰，因此被广泛应用于催化、气体捕获、传感器、药物递送等领域。
3.沸石咪唑框架结构(zif)作为金属有机框架结构一种很重要的亚型，其所用的金属离子为锌离子，其不会对人体产生过大的影响。同时，其有机配体所使用的咪唑结构具有强烈的酸响应特性，能够在特定的弱酸环境中发生亲疏水性转变，从而使整个框架解离释放出其所携带的药物。
4.zif-8由于孔隙率高、比表面积大、可实现较高的载药率且具有ph响应性，因而能够在生理条件下保持稳定而在肿瘤的弱酸性微环境下实现药物的释放，是负载药物和实现药物缓释的理想载体。
5.zif-8能负载dox（阿霉素）在ph为6.5的pbs溶液（磷酸盐缓冲溶液）中，dox@zif-8在15d的释放率保持在1%以内。当ph为6.0时，90%的dox在7～9d缓慢释放出来，相比未经包封的dox，dox@zif-8表现出良好的生物相容性和治疗效果。但zif-8能负载dox的载药率仅达到14%～20%。dox@zif-8对乳腺癌的治疗效果仍不理想。


技术实现要素：

6.本发明要解决的技术问题是zif-8能负载dox的载药率低，且dox@zif-8对乳腺癌的治疗效果仍不理想，针对上述现有技术中的不足，提供一种抗癌药物复合物及其制备方法和应用，该抗癌药物复合物的阿霉素负载率达到50%以上；该抗癌药物复合物既能释放dox使乳腺癌细胞凋亡，又能使乳腺癌细胞内的铁离子浓度升高，进而使乳腺癌细胞铁死亡，抗癌效果好；该抗癌药物复合物具有较好的体内安全性；该抗癌药物复合物的制备方法原料易得，能够以简单的操作和流程稳定可靠地制成抗癌药物复合物；该抗癌药物复合物能够应用于制备治疗乳腺癌的药物。
7.为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种抗癌药物复合物，以沸石咪唑酯骨架结构材料为基架，复合硫酸亚铁和抗癌活性组分构成。
8.作为一种优选方案，所述抗癌活性组分为阿霉素。
9.作为一种优选方案，所述沸石咪唑酯骨架结构材料为zif-8。
10.作为一种优选方案，所述抗癌药物复合物负载阿霉素的载药率达到50%以上。
11.一种抗癌药物复合物的制备方法，包括：
1）金属盐溶于溶剂中，形成溶液a；2）抗癌活性组分溶于溶剂中，形成溶液b；3）将溶液b滴入溶液a中搅拌均匀，形成溶液c；4）将咪唑源溶液溶剂中，形成溶液d；5）将溶液d滴入溶液c中，搅拌均匀，经反应后，得到抗癌药物复合物。
12.作为一种优选方案，步骤1）中金属盐为绿矾及六水硝酸锌，所述绿矾与六水硝酸锌的质量比为5～7:100。
13.作为一种优选方案，步骤2）中抗癌活性组分为盐酸阿霉素。
14.作为一种优选方案，步骤4）中咪唑源为2-甲基咪唑。
15.作为一种优选方案，所述溶剂为甲醇。
16.一种抗癌药物复合物在制备用于治疗乳腺癌症的药物中的应用。
17.本发明的有益效果是：抗癌药物复合物负载dox的载药率达到50%以上；该抗癌药物复合物既能释放dox使乳腺癌细胞凋亡，又能使乳腺癌细胞内的铁离子浓度升高，进而使乳腺癌细胞铁死亡，抗癌效果好；该抗癌药物复合物具有较好的体内安全性；该抗癌药物复合物的制备方法原料易得，能够以简单的操作和流程稳定可靠地制成抗癌药物复合物；该抗癌药物复合物能够应用于制备治疗乳腺癌的药物。
附图说明
18.图1为zif-8、5fz、7fz、dox@5fz及dox@7fz的x射线衍射图；图2为5fz及7fz的x射线光电子能谱图；图3为5fz、7fz、dox@5fz及dox@7fz的热重分析图；图4为5fz在1μm处的扫描电子显微镜图；图5为7fz在5μm处的扫描电子显微镜图；图6为dox@5fz在1μm处的扫描电子显微镜图；图7为dox@7fz在1μm处的扫描电子显微镜图；图8为不同浓度下zif-8、dox、5fz、7fz、dox@5fz及dox@7fz对mcf-7细胞毒性图；图9为不同浓度下zif-8、dox、5fz、7fz、dox@5fz及dox@7fz对lo2细胞毒性图；图10为相同浓度下zif-8、5fz和7fz对mcf-7细胞内铁浓度变化图；图11为相同浓度下zif-8、5fz、7fz、dox@5fz、dox@7fz及dox处理细胞24h后活性氧(ros)水平图；图12为相同浓度下dox@5fz及dox@7fz处理细胞后活性氧(ros)动态变化荧光成像图；图13为空白对照组、5fz组、7fz组、zif-8组、dox@5fz组和dox@7fz组小鼠肿瘤相对体积图；图14为空白对照组、5fz组、7fz组、zif-8组、dox@5fz组和dox@7fz组小鼠肿瘤切片he染色图图15为空白对照组、5fz组、7fz组、zif-8组、dox@5fz组和dox@7fz组小鼠各脏器切片he染色图。
具体实施方式
19.下面结合附图对本发明的结构原理和工作原理作进一步详细说明。
20.实施例1抗癌药物复合物dox@5fz的制备1）将0.282g六水硝酸锌和0.014g绿矾溶于18.7ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌5min，得到溶液a；2）称取7.5mg盐酸阿霉素超声分散于1.3ml甲醇中，得到溶液b；3）将溶液b缓慢滴入溶液a中，搅拌2min，得到混合溶液c；4）将0.328g 2-甲基咪唑溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌均匀，得到溶液d；5）d液缓慢滴入c液中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌2小时后，静置24小时，得到固体e；6）用甲醇洗固体e 3次后，置入离心机内以转速为12000r/min的条件下离心10min，将得到的固体放入真空干燥机内以温度为60℃的条件下真空干燥烘干24小时，即可得到抗癌药物复合物dox@5fz。
21.实施例2抗癌药物复合物dox@7fz的制备1）将0.275g六水硝酸锌和0.021g绿矾溶于18.7ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌5min，得到溶液a；2）称取7.5mg盐酸阿霉素超声分散于1.3ml甲醇中，得到溶液b；3）将溶液b缓慢滴入溶液a中，搅拌2min，得到混合溶液c；4）将0.328g 2-甲基咪唑溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌均匀，得到溶液d；5）d液缓慢滴入c液中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌2小时后，静置24小时，得到固体e；6）用甲醇洗固体e 3次后，置入离心机内以转速为12000r/min的条件下离心10min，将得到的固体放入真空干燥机内以温度为60℃的条件下真空干燥烘干24小时，即可得到抗癌药物复合物dox@7fz。
22.对比例1硫酸亚铁-沸石咪唑酯骨架结构复合材料5fz的制备1）将0.282g六水硝酸锌和0.014g绿矾溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌5min，得到溶液f；2）将0.328g 2-甲基咪唑溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌均匀，得到溶液g；3）将溶液g缓慢滴入溶液f中，用封口膜封好烧杯，搅拌2h后，静置24h，得到固体h；4）用甲醇清洗固体h 3次后，置入离心机内以转速为12000r/min的条件下离心10min，将得到的固体放入真空干燥机内以温度为60℃的条件下真空干燥烘干24小时，即可得到硫酸亚铁-沸石咪唑酯骨架结构复合材料5fz。
23.对比例2
硫酸亚铁-沸石咪唑酯骨架结构复合材料7fz的制备1）将0.275g六水硝酸锌和0.021g绿矾溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌5min，得到溶液f；2）将0.328g 2-甲基咪唑溶于20ml甲醇中，用封口膜封好50ml烧杯，搅拌均匀，得到溶液g；3）将溶液g缓慢滴入溶液f中，用封口膜封好烧杯，搅拌2h后，静置24h，得到固体h；4）用甲醇清洗固体h 3次后，置入离心机内以转速为12000r/min的条件下离心10min，将得到的固体放入真空干燥机内以温度为60℃的条件下真空干燥烘干24小时，即可得到硫酸亚铁-沸石咪唑酯骨架结构复合材料7fz。
24.以下实验例中所使用的dox@5fz由实施例1制得。dox@7fz由实施例2制得。5fz由对比例1制得。7fz由对比例2制得。zif-8通过市售得到。
25.实验例1x射线衍射实验实验步骤：用x射线衍射仪分别对zif-8、5fz、7fz、dox@5fz以及dox@7fz进行x射线衍射测定。
26.实验结果：由图1可知，类沸石咪唑酯骨架材料zif-8在掺杂5%和7%硫酸亚铁后，晶体结构未有受到影响，载入药物后，整体材料结构仍未有变化。
27.实验例2x射线光电子能谱实验实验步骤：用x射线光电子能谱仪分别对5fz和7fz进行x射线光电子能谱测定。
28.实验结果：由图2可知，5fz及7fz的x射线光电子能谱图均出现铁元素能谱峰，这表明铁成功掺杂进入zif-8中。
29.实验例3热重实验实验步骤：分别称取10mg5fz、10mg7fz、10mgdox@5fz以及10mg负dox@7fz置于坩埚（热重分析专用）中，然后放入热重分析仪（型号为hct-2，生产商为北京恒 九科学仪器厂）上进行热重实验，其中，实验时热重分析仪按照以下条件进行设定：氮气流量为150ml/min，反应温度从25℃升到800℃以及升温速率为10℃/min。
30.实验结果如图3所示。
31.实验例4扫描电子显微镜实验实验步骤：使用扫描电子显微镜分别对5fz、7fz、dox@5fz以及dox@7fz进行扫描电子显微。
32.实验结果：由图4～图7可知，5fz和7fz仍具有zif-8的十二截面形貌特征，当5fz和7fz载入dox后，两材料表面形貌均发生不同程度的改变，但骨架基本能维持。
33.实验例5
dox@5fz以及dox@7fz载药量测定试验实验步骤：1）收集实施例1中经离心后得到的dox@5fz上清液以及经洗涤后得到的dox@5fz清洗液；2）收集实施例2中经离心后得到的dox@7fz上清液以及经洗涤后得到的dox@7fz清洗液；3）称取10mg盐酸阿霉素标准品溶于100ml水中配制成100mg/l的标准溶液，然后用水将其稀释成浓度为10、15、20、25、30、35mg/l的阿霉素标准溶液，用紫外分光光度计（uv-vis）测定上述阿霉素标准溶液在530nm处的吸光度值，记录数据，绘制阿霉素标准曲线；4）用紫外分光光度计（uv-vis）测定步骤1）中dox@5fz上清液及dox@5fz清洗液在530nm处吸光度值，并对比由步骤3）得到阿霉素标准曲线，分别求出dox@5fz上清液中阿霉素浓度以及dox@5fz清洗液中阿霉素浓度；5）用紫外分光光度计（uv-vis）测定步骤2）中dox@7fz上清液及dox@7fz清洗液在530nm处吸光度值，并对比由步骤3）得到阿霉素标准曲线，分别求出dox@7fz上清液中阿霉素浓度以及dox@7fz清洗液中阿霉素浓度；6）根据阿霉素的负载率公式算出阿霉素分别在5fz和7fz的负载率。
34.阿霉素的负载率公式如下：实验结果：经测算可知，dox@5fz 的负载率为56.04%；dox@7fz的负载率为57.21%。
35.实验例6肿瘤细胞毒性实验实验步骤：1）配置实验溶液：dox组实验溶液制备：dox溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox实验溶液；zif-8组实验溶液制备：zif-8溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的zif-8实验溶液；5fz组实验溶液制备：5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的5fz实验溶液；7fz组实验溶液制备：7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的7fz实验溶液；dox@5fz组实验溶液制备：dox@5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox@5fz实验溶液；dox @7fx组实验溶液制备：dox@7fx溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox@7fx实验溶液。
36.2）取处于对数生长期和生长状态良好的mcf-7细胞，进行细胞消化，移除原培养
基，各加入3 ml pbs溶液清洗两遍，加入2 ml胰蛋白酶并置于培养箱中消化2 min，消化完毕后，加入 2 ml 的dmem完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗），用离心机以转速为900 r/min条件下进行离心3 min，把上清液去掉，向其加入 6 ml 的dmem完全培养基吹打均匀后进行细胞计算，按实验需求配制成细胞悬液（细胞密度 4
×
10
4 个/ ml），并以每孔 4
×
104个细胞种板于96孔板中，并置于培养箱中培养24h；待细胞贴壁后，将原培养基移除，分别加入20μl pbs溶液、dox实验溶液、zif-8实验溶液、5fz实验溶液、7fz实验溶液、dox@5fz实验溶液和dox@7fx实验溶液，其中加药浓度折算以7%；加药完毕后，重新置于培养箱中继续培养24 h。培养结束后，移除含药培养基，每孔加入已配制好 10%mtt（5 mg/ml）的不含胎牛血清和双抗的dmem完全培养基 100 μl，置于培养箱继续培养4 h后，移除培养基，每孔加入 dmso100μl并置于摇床中摇晃15 min，最后用酶标仪在490 nm波长处测定每孔的吸光度，记录数据，利用细胞存活率计算公式求出相应细胞存活率，并以细胞存活率为 y 轴和药物浓度为 x 轴作折线图。
37.细胞存活率计算公式如下：实验结果：由图8可知，载药后材料对肿瘤细胞杀伤力较载药前的更大，其中45g/ml和60ug/ml浓度下加入dox@7fz实验溶液的肿瘤细胞存活率最低。表明dox@7fz在45和60ug/ml浓度下，能发挥最大的杀死癌细胞能力。
38.实验例7正常肝细胞毒性实验实验步骤：1）配置实验溶液：dox组实验溶液制备：dox溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox实验溶液；zif-8组实验溶液制备：zif-8溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的zif-8实验溶液；5fz组实验溶液制备：5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的5fz实验溶液；7fz组实验溶液制备：7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的7fz实验溶液；dox@5fz组实验溶液制备：dox@5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox@5fz实验溶液；dox @7fx组实验溶液制备：dox@7fx溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为15、30、45、60μg/ml的dox@7fx实验溶液。
39.2）取处于对数生长期和生长状态良好的lo2细胞，进行细胞消化，移除原培养基，各加入3 ml pbs溶液清洗两遍，加入2 ml胰蛋白酶并置于培养箱中消化2 min，消化完毕后，加入 2 ml 的dmem完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗），用离心机以转速为900 r/
min条件下进行离心3 min，把上清液去掉，向其加入 6 ml 的dmem完全培养基吹打均匀后进行细胞计算，按实验需求配制成细胞悬液（细胞密度 4
×
10
4 个/ ml），并以每孔 4
×
104个细胞种板于96孔板中，并置于培养箱中培养24h；待细胞贴壁后，将原培养基移除，分别加入20μl pbs溶液、dox实验溶液、zif-8实验溶液、5fz实验溶液、7fz实验溶液、dox@5fz实验溶液和dox@7fx实验溶液，其中加药浓度折算以7%；加药完毕后，重新置于培养箱中继续培养24 h。培养结束后，移除含药培养基，每孔加入已配制好 10%mtt（5 mg/ml）的不含胎牛血清和双抗的dmem完全培养基 100 μl，置于培养箱继续培养4 h后，移除培养基，每孔加入 dmso100μl并置于摇床中摇晃15 min，最后用酶标仪在490 nm波长处测定每孔的吸光度，记录数据，利用上述细胞存活率计算公式求出相应细胞存活率，并以细胞存活率为 y 轴和药物浓度为 x 轴作折线图。
40.实验结果：由图9可知，载药后材料对肝细胞毒性较载药前的稍大，但仍处于安全范围内。dox@7fz组在45ug/ml浓度下细胞活性为86.23%。表明dox@7fz在45ug/ml浓度下，既能发挥最大的杀死癌细胞能力，又能对肝细胞有较小的毒性。
41.实验例8mcf-7细胞胞内铁浓度测定实验步骤：1）配置实验溶液：zif-8组实验溶液制备：zif-8溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5、15、30μg/ml的zif-8实验溶液；5fz组实验溶液制备：5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5、15、30μg/ml的5fz实验溶液；7fz组实验溶液制备：7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5、15、30μg/ml的7fz实验溶液。
42.2）取处于对数生长期和生长状态良好的mcf-7细胞，进行细胞消化，移除原培养基，各加入3 ml pbs溶液清洗两遍，加入2 ml胰蛋白酶并置于培养箱中消化2 min，消化完毕后，加入 2 ml 的dmem完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗），用离心机以转速为900 r/min条件离心3 min，把上清液去掉，向其加入 6 ml 的dmem完全培养基吹打均匀后进行细胞计算，按实验需求配制成细胞悬液（细胞密度 5
×
10
5 个/ ml），并以每孔 5
×
105个细胞种板于24孔板中，并置于培养箱中培养24h；待细胞贴壁后，将原培养基移除，分别加入20 μlpbs溶液、zif-8实验溶液、fz实验溶液和7fz实验溶液；加药完毕后，重新置于培养箱中继续培养24 h。培养结束后，将培养液弃去，用2ml冷的pbs洗细胞2次，将pbs弃去。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解2小时。配置4.5%高锰酸钾溶液，并与铁离子比色法检测试剂盒中的缓冲液以1：1比例混合，称为混液a。各取裂解后样品液和稀释后的标准品 100ul，各与100ul混液a混匀，60℃孵育1小时。冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。加入30ul 铁离子检测试剂，混匀，室温孵育30分钟。取200ul于96孔板，在550nm测定吸光度。绘制标准曲线并计算铁离子浓度。
43.实验结果：由图10可知，30ug/ml浓度下7fz组的细胞胞内铁离子浓度最高并与其他组存在显
著差异，表明7fz使mcf-7细胞胞内铁离子浓度升高，继而使胞内铁代谢失衡。
44.实验例9流式细胞术实验实验步骤：1）配置实验溶液：zif-8组实验溶液制备：zif-8溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的zif-8实验溶液；5fz组实验溶液制备：5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的5fz实验溶液；7fz组实验溶液制备：7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的7fz实验溶液；dox@5fz组实验溶液制备：dox@5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的dox@5fz实验溶液；dox@7fz组实验溶液制备：dox@7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的dox@7fz实验溶液；dox组实验溶液制备：dox溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的dox实验溶液。
45.2）取处于对数生长期和生长状态良好的mcf-7细胞，进行细胞消化，移除原培养基，各加入3 ml pbs溶液清洗两遍，加入2 ml胰蛋白酶并置于培养箱中消化2 min，消化完毕后，加入 2 ml 的dmem完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗），用离心机以转速为900 r/min条件离心3 min，把上清液去掉，向其加入 6 ml 的dmem完全培养基吹打均匀后进行细胞计算，按实验需求配制成细胞悬液（细胞密度 1.5
×
10
6 个/ ml），并以每孔 1.5
×
106个细胞种板于6孔板中，并置于培养箱中培养24h；待细胞贴壁后，将原培养基移除，分别加入20 μl pbs溶液、zif-8实验溶液、5fz实验溶液、7fz实验溶液、dox@5fz实验溶液、dox@7fz实验溶液和dox实验溶液；加药完毕后，重新置于培养箱中继续培养24 h。培养结束后，移除原培养基，用pbs清洗3遍，然后加入500 μl胰蛋白酶并置于培养箱中进行消化 2 min，消化完毕后加入等量的dmem完全培养基终止消化，离心机以转速为900 r/min条件离心3min，去除上清液，然后加入500 μl pbs吹打均匀和清洗，再次离心机以转速为900 r/min条件离心3min，去除上清液后加入500 μl pbs吹打均匀后过细胞筛，收集于流式管中，最后用流式细胞仪检测荧光强度。
46.实验结果：由图11可知，dox@7fz组的细胞活性氧的荧光强度最高，表明dox@7fz使mcf-7细胞产生最多的活性氧。
47.实施例10细胞成像实验实验步骤：1）配置实验溶液：dox@5fz组实验溶液制备：dox@5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的dox@5fz实验溶液；
dox@7fz组实验溶液制备：dox@7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为30μg/ml的dox@7fz实验溶液。
48.2）取处于对数生长期和生长状态良好的mcf-7细胞，进行细胞消化，移除原培养基，各加入3 ml pbs溶液清洗两遍，加入2 ml胰蛋白酶并置于培养箱中消化2 min，消化完毕后，加入 2 ml 的dmem完全培养基（含10%胎牛血清和1%双抗），用离心机以转速为900 r/min条件离心3 min，把上清液去掉，向其加入 6 ml 的dmem完全培养基吹打均匀后进行细胞计算，按实验需求配制成细胞悬液（细胞密度 1.5
×
10
6 个/ ml），并以每孔 1.5
×
106个细胞种板于6孔板中，并置于培养箱中培养24h；待细胞贴壁后，将原培养基移除，分别加入20 μldox@5fz实验溶液和dox@7fz实验溶液；加药完毕后，重新置于培养箱中培养6、12、24 h。培养结束后，移除原培养基，用 pbs 清洗 3 遍，然后加入500 μl含荧光探针的pbs并置于培养箱中孵育30min，每5min取出左右摇晃混匀，结束后用 pbs 清洗2遍，置于荧光显微镜下观察细胞荧光成像况。
49.实验结果：由图12可知，dox@7fz组6、12、24h的细胞活性氧产生及荧光强度均多于及强于dox@5fz组，表明dox@7fz使mcf-7细胞产生活性氧的能力更为出色。
50.实验例11mcf-7乳腺癌裸鼠建模实验步骤：1）配置注射液配置；5fz注射液制备：5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5mg/ml的5fz注射液；7fz注射液制备：7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5mg/ml的7fz注射液；dox@5fz注射液制备：dox@5fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5mg/ml的7dox@5fz注射液；dox@7fz注射液制备：dox@7fz溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5mg/ml的dox@7fz注射液；zif-8注射液制备：zif-8溶于pbs溶液中，并用pbs溶液制备出浓度为5mg/ml的zif-8注射液。
51.2）30只雌性balb/c裸鼠，共分为6组，空白对照组、5fz组、7fz组、zif-8组、dox@5fz组和dox@7fz组，各5只小鼠，通过mcf-7细胞悬液注射建立乳腺癌模型。注射位置：裸鼠左侧腋窝皮下组织。细胞量：5*106个细胞/只。双侧注射mcf-7细胞后，喂养3周。注射细胞后的第3、4、5周后，通过尾静脉注射药物，空白对照组注射pbs溶液，5fz组注射5fz注射液，7fz组注射7fz注射液，zif-8组注射zif-8注射液，dox@5fz组注射dox@5fz注射液，及dox@7fz组注射dox@7fz注射液。裸鼠注射药物量为50mg/kg。注射细胞的6周后称重取材。
52.实验结果：由图13可知，dox@7fz组的肿瘤相对体积最小，表明dox@7fz治疗乳腺癌肿瘤的效果最为出色。
53.实验例12
小鼠肿瘤及各脏器取材和切片he染色实验步骤：戊巴比妥钠麻醉分别空白对照组、5fz组、7fz组、zif-8组、dox@5fz组和dox@7fz组的裸鼠后取样，取出裸鼠腋下肿瘤及主要脏器（心、肝、脾、肺、肾），拍照并测量肿瘤大小，观察裸鼠全身淋巴结和脏器有无肿瘤转移。随后将肿瘤和主要脏器于4%多聚甲醛中固定过夜。固定后包埋入石蜡，切片后脱蜡至水，依次进行苏木素和伊红染色 (he染色)。
54.实验结果：由图14可知，5fz和7fz组的癌细胞形态较为贴合铁死亡的细胞形态特征。dox@5fz和dox@7fz组的癌细胞形态既有铁死亡细胞形态特征也有凋亡细胞形态特征dox@7fz组的两种细胞形态特征的细胞数量比dox@5fz组更多，整体组织呈更为疏松的形态，表明dox@7fz治疗乳腺癌肿瘤的效果最为出色。由图15可知，小鼠主要脏器各组均未观察到病变，表明5fz、7fz、zif-8、dox@5fz和dox@7fz均具有较好的体内安全性。