新吡唑衍生物的制作方法

1.本技术要求于2020年1月13日提交的韩国专利申请号10-2020-0004471优先权的权益，并且相应的韩国专利申请的文件中公开的全部内容被并入，作为本说明书的一部分。
2.本发明涉及一种具有优异的氧化应激抑制活性的新型吡唑衍生物及其制备方法和其药物组合物。


背景技术：

3.氧化应激是指体内生物分子、细胞和组织中活性氧物质或活性氮物质的产生和抗氧化防御机制失衡，活性氧物质或活性氮物质的产生相对过量，在这种情况下通常导致组织损伤的现象。
4.活性氧物质(ros)统称为由于氧及由其衍生的氧化合物的化学性质而产生的氧自由基，例如超氧阴离子(o
2-·
)、过氧化氢(h2o2)、羟基(oh
·
)、烷氧基(ro
·
)、过氧基(roo
·
)等。活性氮物质(rns)统称为由一氧化氮(no
·
)和超氧阴离子(o
2-·
)在体内通过nos(一氧化氮合酶)产生的高活性过氧化亚硝基(peroxinitrite)(onoo-)，以及由过氧化亚硝基产生的二氧化氮(
·
no2)、亚硝基过氧碳酸根(nitrosoperoxycarbonate)(onooc
2-)和碳酸根(o＝c(o)o-)等。
5.由于这些活性氧物质或活性氮物质在化学上非常不稳定且具有高度活性，它们通过对体内的酶催化反应、线粒体中的电子转移、细胞信号传导系统和基因表达、转录因子的激活和生物分子、细胞、组织等造成广泛的氧化损伤，诱导周围的炎症，并充当组织纤维化的主要因素。这种氧化损伤会导致人体所有组织中的各种疾病。具体而言，已知其参与诸如皮肤、肾脏、心脏、关节、肺、脑、血管、肠道和眼部等组织中癌症的发展以及所产生癌症的进展，并且已知其在包括心血管疾病、炎症、纤维化疾病、糖尿病等的几乎所有疾病中发挥重要作用。
6.近年来，肿瘤微环境与癌细胞之间的相互作用在肿瘤生长、转移和抗肿瘤药物耐药性表达中起着重要作用，而在这种情况下，癌症相关成纤维细胞(caf)起着重要作用。已知癌相关成纤维细胞被ros激活，促进肿瘤免疫逃避，并作用于肿瘤的恶性和转移。因此，近年来，癌症相关成纤维细胞正在成为癌症治疗的新靶标。
7.据报道，在经历肝纤维化的患者的肝组织中，肝细胞中ros生成的增加是由tgf-β1刺激引起的，从而增加胶原和αsma的表达，这对纤维化很重要。据报道，ros可加重特发性肺纤维化患者的肺组织中的肺纤维化。
8.大脑是一个高度代谢的组织，因此非常容易受到氧化损伤。因此，已经进行了许多研究，以有效去除ros来治疗各种神经退行性疾病(帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症、阿尔茨海默病、多发性硬化症、缺血性和创伤性脑损伤等)，但没有成功。最近，由于发现ros是这些脑疾病中的一个重要因素，因此报道了通过ros抑制来治疗这些脑疾病的可能性。
9.瘢痕疙瘩是一种良性肿瘤疾病，其皮肤结缔组织在病理上增生，形成硬块，表皮变
薄、发亮、微红。据报道，瘢痕疙瘩发生和恶化的原因之一是tgf-β1刺激产生的ros过度表达结缔组织生长因子(ctgf)。
10.在糖尿病情况下，如糖尿病肾病和糖尿病视网膜病变等并发症可能伴随长期高血糖，已知ros在并发症的发生中起重要作用。换言之，高血糖导致ros生成增加，此时产生的ros可以通过一系列诱导肾细胞和视网膜细胞死亡的过程引起糖尿病肾病和糖尿病视网膜病变等。
11.此外，正如在瘢痕疙瘩疾病中观察到的那样，据报道，ctgf基因在眼睛视网膜中的过度表达会导致视网膜纤维化和黄斑变性。
12.因此，本发明人重点研究了可通过使用抑制氧化应激产生的分子机制开发由氧化应激引起的癌症、炎症性疾病、纤维化疾病、神经退行性疾病、肝脏疾病、皮肤病或视网膜疾病的治疗剂，结果发现本发明的新型吡唑衍生物具有优异的ros生成的抑制活性，并已证实其可用于治疗与氧化应激相关的各种疾病，从而完成本发明。
13.现有技术
14.(专利文献1)wo 2016-207785
15.(专利文献2)wo 2015-144801
16.(非专利文献1)mengjia song，xinfeng chen等人.chinese journal of cancer research，2018，30(2)：157-172。
17.(非专利文献2)lan t，kisseleva t，brenner da.plos one 2015；10：e0129743。
18.(非专利文献3)merry w.ma，jin wang等人.molecular neurodegeneration，12：7，2017。
19.(非专利文献4)alessandro g.fois.panagiotis paligiannis等人.respir res.2018，19：51。
20.(非专利文献5)rohan samarakoon，jessica m.overstreet等人.cell signal，2013.jan，25(1)，264-268。


技术实现要素：

21.技术问题
22.本发明的目的是提供一种新型吡唑衍生物，化学式i的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐。
23.本发明的目的是提供一种药物组合物，包含化学式i的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
24.本发明的目的是提供一种使用化学式i的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐调节ros生成的方法。
25.本发明的目的是提供一种通过向受试者给药化学式i的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐来治疗氧化应激相关疾病的方法。
26.本发明的目的是提供一种制备化学式i的化合物的方法。
27.本发明的目的是提供化学式i的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗氧化应激相关疾病的药物组合物中的用途。
28.技术方案
29.为了实现上述目的，本发明提供了一种新型吡唑衍生物，以下化学式i所代表的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐。
30.《化学式i》
[0031][0032]
在式中，
[0033]
x、y为cr1r2或nr3；和
[0034]
r1、r2或r3彼此相同或不同，并且各自独立地选自ra-l、ra-l-co、ra-l-nhco、ra-l-oco、ra-l-so
2-；和
[0035]
ra选自氢、重氢、氰基、卤素、硝基、卤代烷基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，所述杂芳基包括o、n和s中的1、2或3个杂原子；和
[0036]
l选自直接结合、c1-c5亚烷基和被取代或未被取代的c5-c10亚芳基；和
[0037]
r4选自氢，或被取代或未被取代的c1-c10烷基；和
[0038]
a为cr5或n，b为cr6或n，d为cr7或n，e为cr8或n，g为cr9或n；和
[0039]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0040]
被取代的c1-c10直链或支链烷基可以任选地部分不饱和，并且可以独立地被取代为一个或多个取代基，所述取代基选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基；和
[0041]
被取代的c3-c8环烷基可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和c1-c5卤代烷，中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0042]
被取代的c5-c20芳基或被取代的c5-c20杂芳基可以独立地被取代为选自重氢、卤
素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、c1-c5烷氧基、c1-c5卤代烷基、c1-c10烷基、c3-c8环烷基、c1-c10烷基、以及c5-c20芳基c1-c10烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0043]
被取代的胺可以被取代为c1-c5烷基中的一个或两个；和
[0044]
被取代的c5-c10亚芳基可被取代为选自c1-c3烷基、卤素、氰基、胺、硝基和重氢中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基。
[0045]
此外，本发明提供将由化学式i表示的化合物、溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐用于治疗氧化应激相关疾病。
[0046]
此外，本发明提供一种用于治疗氧化应激相关疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的由化学式i表示的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐和可接受载体。
[0047]
此外，本发明提供一种治疗氧化应激相关疾病的方法，包括向需要治疗的受试者给药有效剂量的化学式i所示的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐。
[0048]
此外，本发明提供了由化学式i表示的化合物，其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐用于制备用于预防或治疗氧化应激相关疾病的药物组合物的用途。
[0049]
有益效果
[0050]
本发明的新型吡唑衍生物和包含该新型吡唑衍生物的药物组合物为氧化应激相关疾病提供了优异的疗效。
[0051]
此外，新型吡唑衍生物有效抑制氧化应激和各种细胞中αsma、细胞外基质或il-1β的产生，尤其具有有效改善由氧化应激引起的癌症、炎症性疾病、纤维疾病、神经退行性疾病、肝病、皮肤病或视网膜疾病等的作用。
[0052]
附图简要说明
[0053]
图1示出了合成例化合物抑制lx-2和nhlf细胞中由pma诱导的ros生成的效果。
[0054]
图2示出了合成例化合物抑制arpe19细胞中由tgf-β1诱导的αsma表达的效果。
[0055]
图3a和图3b示出了合成例3化合物抑制各种细胞中由tgf-β1诱导的αsma表达的效果。
[0056]
图4示出了合成例3化合物抑制n27细胞中由mpp 诱导的ros生成的效果。
[0057]
图5示出了合成例3化合物抑制lx-2和nhlf细胞中由lps诱导的il-1β表达的效果。
[0058]
图6示出了在肺纤维化模型的肺组织中通过合成例化合物抑制αsma表达的效果。
[0059]
最佳方式
[0060]
下文中，将通过实施方式详细描述本发明。然而，它们作为实例呈现，并且本发明不限于此，并且本发明仅由后面描述的权利要求书的范围来定义。此外，即使它是执行本发明所必需的配置，也将省略本领域技术人员根据已知技术可以容易地实现的配置的详细描述。
[0061]
除非下文另有规定，否则术语“本发明的化合物”或“化学式i的化合物”被用作包括所有化合物本身，其溶剂化物、立体异构体及盐的概念。
[0062]
在本说明书中，术语“直链或支链烷基”是指直链、支链单价饱和烃基团。除非另有规定，烷基通常包括1～10、1～8、1～6、1～4或1～3个碳原子。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊
基和新戊基)、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基。在本说明书中，烷基可以是任选地部分不饱和，以及下述的烯基或炔基。此外，烷基可进一步被其他取代基取代。
[0063]
在本说明书中，术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链单价不饱和烃基团。除非另有规定，烯基通常包括2～10、2～8、2～6、2～4或2～3个碳原子。烯基包括例如乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、环己烯基等，并且可以进一步被其他取代基取代。
[0064]
在本说明书中，术语“炔基”是指具有1个或多个碳-碳三键的直链或支链单价不饱和烃基团。除非另有规定，炔基通常包括2～10、2～8、2～6、2～4或2～3个碳原子。炔基包括例如乙炔基、正丙炔基等，并且可以进一步被其他取代基取代。
[0065]
在本说明书中，术语“烷氧基”可以是直链、支链或环链。烷氧基的碳数量不受特别限制，但碳数量优选为1到5。具体而言，它可以是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、新戊基、异戊基等，但不限于此。
[0066]
在本说明书中，术语“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷基。卤代烷基包括-cf3、-c2f5、-chf2、-ccl3、-chcl2和-c2cl5。除非另有定义，卤代烷基通常包含1～6、1～5、1～4或1～3个碳原子，并且可以进一步被其他取代基取代。
[0067]
在本说明书中，术语“环烷基”表示包含环化烷基、烯基和炔基的非芳香碳环。环烷基可包含单环或多环。多环具有例如2、3或4个稠环。除非另有定义，否则环烷基通常包含3至10个或3至7个环碳原子。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环己二烯基、环庚三烯基等，并且可进一步被其他取代基取代。
[0068]
在本说明书中，术语“芳基”是指具有单环或多环的芳香烃基团，并且可以进一步被其他取代基取代。在此，多环是指其中芳基直接连接到与另一个环基稠合。在此，另一个环可以是芳基，但可以是不同种类的环基，例如环烷基、杂芳基等。多环可以具有例如2、3或4个环。除非另有规定，芳基通常具有5至20、6至15、6至12或6至10个碳环原子。芳基包括例如苯基、萘基(例如萘基-1-基和萘基-2-基)、非苯基、蒽基(anthracenyl)、菲基(phenanthreneyl)等。
[0069]
在本说明书中，术语“杂芳基”是指具有一个或多个选自n、o和s的杂原子作为环成员的单价芳香基。杂芳基包括单环或杂环结构。多环可以具有例如2、3或3个稠环。除非另有定义，杂芳基通常包含3至10个、3至7个或3至5个环原子。杂芳基可具有1、2或3个杂原子。杂芳基包括例如呋喃基、吡啶基、n-氧吡啶基、嘧啶基、吡嗪基(pirazinyl)、吡嗪基(piridazinyl)、三嗪基、呋喃基(furyl)、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、呋喃基(furanyl)、噻唑基、吲哚基、吡咯基(pyrryl)、恶唑基(oxazolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、异恶唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1,2,4-噻二唑基、异噻唑基、苯并噻吩基、呋喃基(furinyl)、苯并咪唑基、吲哚啉基等，并可进一步被其他取代基取代。
[0070]
在本说明书中，术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
[0071]
在本说明书中，术语“芳烷基”表示被芳基取代的烷基。“芳基”和“烷基”的定义如上所述。
[0072]
在本说明书中，术语“杂芳烷基”表示被杂芳基取代的烷基。“杂芳基”和“烷基”的定义如上所述。
[0073]
在本说明书中，“被取代或未被取代的胺基”可选自由单烷基胺基、-nh2和二烷基胺基组成的组，且“烷基”如上文所定义。被取代或未被取代的胺基的具体实例包括nh2、甲
胺基、二甲胺基、乙胺基、二乙胺基等，但不限于此。
[0074]
在本说明书中，“亚芳基”是指具有两个结合位点，即二价基团的芳基。除了它们中的每一个都是二价基团之外，可以应用上述芳基的描述。
[0075]
在本说明书中，术语“取代”是指结合到化合物的碳原子的氢原子被另一个取代基取代，并且被取代的位置不受限制，只要氢原子被取代的位置，即取代基可被取代的位置，以及当两个或更多个取代基被取代时，两个或更多个取代基可以彼此相同或不同，并且两个或更多个相同或不同的取代基可以被连接和取代。
[0076]
在本说明书中，术语“被取代的直链或支链烷基”是c1-c10直链或支链烷基的碳原子被以下取代基取代的形式。具体而言，它是一种其中选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和c1-c5卤代烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基被连接和取代的形式。作为示例性取代基，可使用三氟甲基、卤素、氰基、甲氧基、羧基、甲基、氨基、硝基、二甲氨基、环丙基、取代的咪唑等，但不限于此。
[0077]
本说明书中的术语“被取代的环烷基”是一种其中选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和c1-c5卤代烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基被连接并取代为c3-c8环烷基的形式。作为示例性取代基，可使用三氟甲基、卤素、氰基、甲氧基、羧基、甲基、氨基、硝基、二甲胺基、环丙基、取代的咪唑等，但不限于此。
[0078]
本说明书中的术语“取代的芳基”或“取代的杂芳基”是一种其中选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、c1-c5烷氧基、c1-c5卤代烷基、c1-c10烷基、c3-c8环烷基、c1-c10烷基、c5-c20芳基和c1-c10烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基被连接并取代为c5-c20芳基或c5-c50杂芳基的形式。作为示例性取代基，可使用三氟甲基、卤素、氰基、甲氧基、羧基、甲基、氨基、硝基、二甲胺基、环丙基、取代的咪唑等，但不限于此。
[0079]
在本说明书中，“相邻”基团可以是指被取代为直接连接到其中相应取代基被取代的原子的取代基、空间上最接近相应取代基的取代基或被取代为其中相应取代基被取代的原子的另一取代基。例如，在苯环的邻位被取代的两个取代基和在脂肪族环的相同碳上被取代的两个取代基可以被解释为彼此“相邻”的基团。
[0080]
本发明提供以下化学式i表示的化合物、溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐。
[0081]
《化学式i》
[0082][0083]
在式中，
[0084]
x、y为cr1r2或nr3；和
[0085]
r1、r2或r3彼此相同或不同，并且各自独立地选自ra-l、ra-l-co、ra-l-nhco、ra-l-oco、ra-l-so
2-；和
[0086]
ra选自氢、重氢、氰基、卤素、硝基、卤代烷基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的c5-c20芳基或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，所述杂芳基包括o、n和s中的1、2或3个杂原子；和
[0087]
l选自直接结合、c1-c5亚烷基和被取代或未被取代的c5-c10亚芳基；和
[0088]
r4选自氢，或被取代或未被取代的c1-c10烷基；和
[0089]
a为cr5或n，b为cr6或n，d为cr7或n，e为cr8或n，g为cr9或n；和
[0090]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0091]
被取代的c1-c10直链或支链烷基可以任选地部分不饱和，并且可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基中的一个或多个取代基；和
[0092]
被取代的c3-c8环烷基可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和c1-c5卤代烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0093]
被取代的c5-c20芳基或被取代的c5-c20杂芳基可被独立地取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、c1-c5烷氧基、c1-c5卤代烷基、c1-c10烷基、c3-c8环烷基c1-c10烷基、和c5-c20芳基c1-c10烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0094]
被取代的胺可以被取代为c1-c5烷基中的一个或两个；和
[0095]
被取代的c5-c10亚芳基可被取代为选自c1-c3烷基、卤素、氰基、胺、硝基和重氢中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接。
[0096]
此外，化学式i由以下化学式i-1表示。
[0097]
《化学式i-1》
[0098][0099]
在式中，
[0100]
x为nr3，和
[0101]
r3选自ra-l-、ra-l-co-、ra-l-nhco-、ra-l-oco-和ra-l-so
2-；和
[0102]
ra选自氢、重氢、氰基、卤素、硝基、卤代烷基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的c5-c20芳基、或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，所述杂芳基包括o、n和s中的1、2或3个杂原子；和
[0103]
l选自直接结合、c1-c5亚烷基、或被取代或未被取代的c5-c10亚芳基；和
[0104]
r4选自氢、或被取代或未被取代的c1-c10烷基；和
[0105]
a为cr5或n，b为cr6或n，d为cr7或n，e为cr8或n，g为cr9或n；和
[0106]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0107]
被取代的c1-c10直链或支链烷基可以任选地部分不饱和，并且可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基中的一个或多个取代基；和
[0108]
被取代的c3-c8环烷基可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和c1-c5卤代烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0109]
被取代的c5-c20芳基或被取代的c5-c20杂芳基可被独立地取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、c1-c5烷氧基、c1-c5卤代烷基、c1-c10烷基、
c3-c8环烷基c1-c10烷基、和c5-c20芳基c1-c10烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0110]
被取代的胺可以被取代为c1-c5烷基中的一个或两个；和
[0111]
被取代的c5-c10亚芳基可被取代为选自c1-c3烷基、卤素、氰基、胺、硝基和重氢的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接。
[0112]
此外，化学式i由以下化学式i-2表示。
[0113]
《化学式i-2》
[0114][0115]
在式中，
[0116]
y为nr3，和
[0117]
r3选自ra-l-、ra-l-co-、ra-l-nhco-、ra-l-oco-和ra-l-so
2-；和
[0118]
ra选自氢、重氢、氰基、卤素、硝基、卤代烷基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，所述杂芳基包括o、n和s中的1、2或3个杂原子；和
[0119]
l选自直接结合、c1-c5亚烷基、或被取代或未被取代的c5-c10亚芳基；和
[0120]
r4选自氢，或被取代或未被取代的c1-c10烷基；和
[0121]
a为cr5或n，b为cr6或n，d为cr7或n，e为cr8或n，g为cr9或n；和
[0122]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、被取代或未被取代的c1-c10直链或支链烷基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基，或被取代或未被取代的c5-c20杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0123]
被取代的c1-c10直链或支链烷基可以任选地部分不饱和，并且可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、被取代或未被取代的c3-c8环烷基中的一个或多个取代基；和
[0124]
被取代的c3-c8环烷基可以独立地被取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c20芳基或c5-c20杂芳基、c1-c5烷氧基和
c1-c5卤代烷基中选择的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0125]
被取代的c5-c20芳基或被取代的c5-c20杂芳基可被独立地取代为选自重氢、卤素、氰基、硝基、羧基、被取代或未被取代的胺、c1-c5烷氧基、c1-c5卤代烷基、c1-c10烷基、c3-c8环烷基c1-c10烷基、和c5-c20芳基c1-c10烷基中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接；和
[0126]
被取代的胺可以被取代为c1-c5烷基中的一个或两个；和
[0127]
被取代的c5-c10亚芳基可被取代为选自c1-c3烷基、卤素、氰基、胺、硝基和重氢中的一个或多个取代基，或相同或不同的2个或更多个取代基连接。
[0128]
此外，在化学式i-1或i-2的化合物中，
[0129]
r3为ra-l；和
[0130]
l选自直接结合和c1-c3亚烷基；和
[0131]
a、b、d、e、g中的n为0或1；和
[0132]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、c1-c5烷基，c1-c5卤代烷基，其中一个或多个卤素被取代，被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c10芳基，或被取代或未被取代的c5-c10杂芳基，且彼此相邻的两个或两个以上基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0133]
r4可选自氢，或被取代或未被取代的c1-c5烷基。
[0134]
此外，在化学式i-1或i-2的化合物中，
[0135]
r3为ra-l-co-；和
[0136]
l选自直接结合、c1-c3亚烷基和被取代的亚苯基，和
[0137]
a、b、d、e、g中的n为0或1；和
[0138]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、c1-c5烷基，c1-c5卤代烷基，其中一个或多个卤素被取代，被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c10芳基，或被取代或未被取代的c5-c10杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0139]
r4可选自氢，或被取代或未被取代的c1-c5烷基。
[0140]
此外，在化学式i-1或i-2的化合物中，
[0141]
r3为ra-l-nhco-；和
[0142]
l选自直接结合和c1-c3亚烷基；和
[0143]
a、b、d、e、g中的n为0或1；和
[0144]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、c1-c5烷基，c1-c5卤代烷基，其中一个或多个卤素被取代、被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c10芳基，或被取代或未被取代的c5-c10杂芳基，且彼此相邻的两个或两个以上基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10
杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0145]
r4可选自氢、或被取代或未被取代的c1-c5烷基。
[0146]
此外，在化学式i-1或i-2的化合物中，
[0147]
r3为ra-l-oco-；和
[0148]
l选自直接结合和c1-c3亚烷基，和
[0149]
a、b、d、e、g中的n为0或1；和
[0150]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、c1-c5烷基，c1-c5卤代烷基，其中一个或多个卤素被取代，被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c10芳基，或被取代或未被取代的c5-c10杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0151]
r4可选自氢，或被取代或未被取代的c1-c5烷基。
[0152]
此外，在化学式i-1或i-2的化合物中，
[0153]
r3为ra-l-so
2-；和
[0154]
l选自直接结合和c1-c3亚烷基，和
[0155]
a、b、d、e、g中的n为0或1；和
[0156]
r5至r9相同或不同，且各自独立地选自氢、重氢、氰基、卤素、卤代烷基、羰基、硝基、羧基、c1-c5烷氧基、c1-c5烷基，c1-c5卤代烷基，其中一个或多个卤素被取代，被取代或未被取代的c3-c8环烷基、被取代或未被取代的胺、被取代或未被取代的c5-c10芳基，或被取代或未被取代的c5-c10杂芳基，且彼此相邻的两个或更多个基团可相互结合以形成被取代或未被取代的芳香烃环，其中所述芳香烃环可形成c5-c10杂芳环或芳环，所述c5-c10杂芳环或芳环包含选自n、o和s的0、1、2或3个杂原子；和
[0157]
r4可选自氢或被取代或未被取代的c1-c5烷基。
[0158]
化学式i的化合物可以是以下任何一种化合物。
[0159]
2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-醇；
[0160]
2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-醇；
[0161]
6-苄基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0162]
6-苄基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0163]
6-(4-氟苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0164]
6-(4-甲基苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0165]
4-(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)甲基)苯甲腈；
[0166]
6-(3,5-二氟苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0167]
2-(吡啶-2-基)-6-(3-(三氟甲基)苄基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0168]
6-(萘-2-基甲基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0169]
1-(4,5-二氢-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2h吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7h)-基)丁-1-酮；
[0170]
1-(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙-1-酮；
[0171]
6-(4-甲氧基苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0172]
6-乙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0173]
6-(丙-2-炔-1-基)-2(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0174]
6-丙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0175]
6-烯丙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0176]
(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)(苯基)甲酮；
[0177]
3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸苄基酯；
[0178]
(4-氯苯基)(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)甲酮；
[0179]
3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸乙酯；
[0180]
n-环己基-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺；
[0181]
呋喃-2-基(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)甲酮；
[0182]
6-(甲磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0183]
6-(苯磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0184]
n-(4-氟苯基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺；
[0185]
n-(4-氟苄基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺；
[0186]
n-(呋喃-2-基甲基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺；
[0187]
n-(4-氯苯乙基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺；
[0188]
6-(萘-2-基磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0189]
3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸4-硝基苄基酯；
[0190]
(5-(4-环丙基-1h-咪唑-1-基)-2-氟-4-甲基苯基)(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)甲酮；
[0191]
5-苄基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0192]
6-苄基-2-(5-氯吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0193]
4-(6-苄基-3-羟基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)苯甲酸；
[0194]
6-苄基-2-(4-溴苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0195]
6-苄基-2-苯基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0196]
5-苄基-2-(5-三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0197]
5-苄基-2-苯基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0198]
5-苄基-2-(4-溴苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0199]
5-苄基-2-(2-氯苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0200]
6-苄基-2-(2-氯苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0201]
6-苄基-2-(2-甲氧基苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0202]
5-苄基-2-(5-氯吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0203]
5-苄基-2-(6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0204]
5-苄基-2-(噻吩并[3,2-c]吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0205]
5-(萘-2-基甲基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0206]
5-(萘-2-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0207]
5-(3-(三氟甲基)苄基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0208]
5-(3,5-二氟苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0209]
5-(3,5-二氟苄基)-2-(5-三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0210]
6-苄基-3-甲氧基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶；
[0211]
6-(6-苄基-3-羟基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)烟碱甲腈；
[0212]
6-苄基-2-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0213]
6-苄基-2-(3-氟吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0214]
6-苄基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0215]
6-苄基-2-(6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0216]
5-苄基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0217]
5-苄基-2-(6-三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0218]
6-(5-苄基-3-羟基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)烟碱甲腈；
[0219]
5-苄基-2-(3-氟吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0220]
5-苄基-2-(噻吩并[3,2-c]吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0221]
5-苄基-2-(6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]
吡啶-3-醇；
[0222]
6-苄基-2-(噻吩并[3,2-c]吡啶-4-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0223]
2-(吡啶-2-基)-6-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0224]
2-(吡啶-2-基)-6-(吡啶-4-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0225]
6-(4-(二甲氨基)苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0226]
6-(3-(二甲氨基)苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0227]
2-(6-氨基吡啶-2-基)-6-苄基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0228]
5-(4-(二甲氨基)苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0229]
5-(3-(二甲氨基)苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0230]
2-(吡啶-2-基)-6-(喹啉-6-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0231]
6-(异喹啉-3-基甲基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇；
[0232]
4-(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,6,7-四氢-5h-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-基)甲基)苯甲腈；
[0233]
4-(3-羟基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2,4,6,7-四氢-5h-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-基)甲基)苯甲腈；
[0234]
2-(吡啶-2-基)-5-(3-(三氟甲基)苄基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0235]
5-(3-(三氟甲基)苄基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0236]
5-(异喹啉-3-基甲基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0237]
5-(异喹啉-3-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇；
[0238]
4-(5-苄基-3-羟基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-2-基)苯甲酸。
[0239]
本发明的化合物不仅有效降低所有nhlf(正常人肺成纤维细胞)、lx-2(人肝星状细胞)、arpe19(人视网膜色素上皮细胞)、kel-fib(瘢痕疙瘩成纤维细胞)细胞中通过刺激pma、tgf-β1、棕榈酸酯或高浓度葡萄糖等产生的ros水平，还示出了用每种0.5μm的合成例化合物处理分化的hl-60(人类白血病细胞)时，从30％到70％或更多的ros生成的抑制作用。因此，本发明化合物可用于预防或治疗氧化应激相关疾病。
[0240]
据报道，随着成纤维细胞向肌成纤维细胞分化，癌相关成纤维细胞(caf)形成或诱
导各种组织纤维化。作为用本发明的化合物处理hff-1、lx-2、nhlf、arpe19、kel-fib细胞的结果(其中通过tgf-β1处理诱导纤维化)，抑制αsma(是纤维化的指标)的表达。因此，本发明的化合物可用于预防或治疗纤维化相关疾病，并可通过调节癌相关成纤维细胞用于治疗癌症，而癌相关成纤维细胞是肿瘤微环境相互作用的重要指标。
[0241]
当神经细胞中的ros水平升高时，脂质氧化被诱导，这被认为是神经细胞死亡的一个重要因素。当同时处理mpp (1-甲基-4-苯基吡啶鎓(1-methyl-4-phenylptridinium))诱导ros和合成例化合物到n27细胞(大鼠多巴胺能神经细胞)时，示出了有效抑制ros生成的效果。因此，本发明的化合物可用于预防或治疗由氧化应激引起的神经细胞死亡相关疾病。
[0242]
皮肤纤维化疾病的主要原因之一是瘢痕疙瘩成纤维细胞ctgf产生细胞外基质，如i型胶原等。当合成例化合物处理kelib(瘢痕疙瘩成纤维细胞)细胞，然后处理tgf-β1以诱导纤维化时，ctgf基因和i型胶原基因的表达被有效抑制。因此，本发明的化合物可用于预防或治疗皮肤瘢痕疙瘩疾病。
[0243]
il-1β是与炎症性疾病相关的代表性细胞因子。当lps处理lx-2和nhlf细胞后采用合成例化合物时，il-1b的表达被有效抑制。因此，本发明化合物可用于预防或治疗炎症性疾病。
[0244]
本发明化合物不仅抑制αsma和i型胶原的表达，即肺纤维化小鼠模型中的肺纤维化指标，而且还证实了改善肺纤维化的作用，例如减少炎症性细胞渗透到肺泡和细支气管中。尤其是，与用作特发性肺纤维化常规治疗剂的尼达尼布相比，本发明的化合物示出了有效改善肺纤维化的结果。因此，本发明的化合物可用于预防或治疗包括肺纤维化在内的纤维化疾病。
[0245]
本发明的化合物示出了改善stam小鼠的肝纤维化和肝炎症状的结果，在stam小鼠中，非酒精性脂肪性肝炎和纤维化被诱导。因此，本发明的合成例化合物可用于预防或治疗包括非酒精性肝炎或肝纤维化在内的肝病。
[0246]
本发明的化合物改善了帕金森模型小鼠的行为障碍症状，并改善了脑组织中50％或更多的α-突触核蛋白的聚集和积累。因此，本发明的化合物可用于预防或治疗神经变性疾病，例如帕金森病等。
[0247]
本发明的药物组合物可用于治疗氧化应激相关疾病。该疾病可能是癌症、炎症性疾病、纤维化疾病、神经退行性疾病、肝病、皮肤病或视网膜疾病。
[0248]
癌症可选自由肝癌、肝细胞癌、胃肠道癌、胃癌、神经纤维瘤相关脑膜瘤、胰腺癌、白血病、骨髓增生性/骨髓增生异常疾病、皮肤纤维肉瘤、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、脑瘤、头颈癌、胶质母细胞瘤等组成的组。此外，该癌症可能是已从上述各种类型的癌症转移到另一器官的继发性癌症。
[0249]
炎症性疾病可为炎症伴随性风湿性关节炎、骨关节炎、肺炎、炎症性结直肠疾病、肠道结肠炎、肾小球肾炎、胃炎、血管炎、胰腺炎、腹膜炎、支气管炎、心肌炎、脑炎、缺血后再灌注损伤中的炎症和组织器官移植后免疫排斥引起的炎症、皮肤上发生的各种炎症(如烧伤、过敏性接触性皮炎等)、多器官疾病中发生的炎症(包括糖尿病肾病在内的糖尿病炎症)、病毒或细菌感染引起的感染性炎症，或自身免疫性疾病(如狼疮、银屑病、动脉粥样硬化等)。
[0250]
纤维化疾病可能是代谢紊乱诱导的肝纤维化或肝硬化、nafld诱导的纤维化或肝
硬化、nash诱导的纤维化或肝硬化、酒精诱导的肝纤维化或肝硬化、药物诱导的肝纤维化或肝硬化、感染性病原体诱导的肝纤维化或肝硬化、寄生虫感染诱导的肝纤维化或肝硬化、细菌感染诱导的肝纤维化或肝硬化、病毒感染诱导的肝纤维化或肝硬化、hbv感染诱导的肝纤维化或肝硬化、hcv感染诱导的肝纤维化或肝硬化、hiv感染诱导的肝纤维化或肝硬化、双重hcv和hiv感染诱导的肝纤维化或肝硬化、放疗或化疗诱导的纤维化或肝硬化、胆管纤维化、任何慢性胆汁淤积性疾病引起的肝纤维化或肝硬化、任何病因引起的胃肠纤维化、克罗恩病诱导的纤维化、溃疡性结肠炎诱导的纤维化、肠纤维化、结肠纤维化、胃纤维化、肺纤维化、皮肤纤维化、表皮纤维化、上皮纤维化、皮肤硬化/系统性硬化引起的皮肤纤维化、慢性阻塞性肺病(copd)、哮喘、肺气肿、吸烟者的肺、肺结核、肺纤维化、肺纤维化，然后是特发性肺纤维化、心脏纤维化、肾纤维化、肾源性系统纤维化、肌肉纤维化、软组织纤维化、骨髓纤维化、关节纤维化、干纤维化、软骨纤维化、胰腺纤维化、子宫纤维化、神经纤维化、睾丸纤维化、卵巢纤维化、肾上腺纤维化、动脉纤维化、静脉纤维化、眼纤维化、内膜心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、作为尘肺并发症的进行性大规模纤维化、增殖性纤维化、抗肿瘤纤维化、移植周纤维化、石棉肺、关节纤维化或粘连性包膜炎。
[0251]
神经退行性疾病可能是阿尔茨海默病(包括轻度或初始阿尔茨海默病、轻度至中度阿尔茨海默病、中度至中度阿尔茨海默病、中度至重度阿尔茨海默病、中重度阿尔茨海默病、重度阿尔茨海默病、阿尔茨海默病(ad)伴路易体)、帕金森病(包括因暴露于环境因素(如杀虫剂、杀昆虫剂或除草剂)和/或金属(如锰、铝、镉、铜或锌)化学诱导的帕金森病、snca基因相关帕金森病、散发性或特发性帕金森病，或帕金森病相关或lrrk2相关帕金森病(pd))、常染色体显性帕金森病、弥漫性路易体病(dlbd)(也称路易体痴呆(dlb))、纯自主神经失衡、路易体吞咽困难、随机lbd、遗传lbd(例如，α-突触核蛋白基因突变、park3和park4)、多系性干皱症(包括橄榄桥脑萎缩、纹状体变性、shy-drager综合征(msa))，以复杂阿尔茨海默病和帕金森病和/或msa为特征的疾病或病症、亨廷顿病、突触核细胞病或存在路易小体、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化(als)、痴呆(包括血管性痴呆、路易小体痴呆、帕金森痴呆和额颞叶痴呆)、精神病(包括由神经变性疾病引起或与多巴胺治疗相关的焦虑，例如帕金森氏精神病、阿尔茨海默氏症、路易体痴呆精神病(不限于此))、运动障碍(包括由神经变性疾病引起或与多巴胺治疗相关的焦虑)、焦虑(由神经退行性疾病引起或与多巴胺治疗相关的焦虑)、与多巴胺治疗相关的病症(包括肌张力障碍、肌阵挛或颤动)、突触核蛋白病或与α突触核蛋白异常表达相关的疾病。
[0252]
肝病可能是代谢性肝病、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎、药物诱导的肝病、酒精诱导的肝病、传染性病原体诱导的肝病、炎症性肝病、免疫系统功能障碍介导的肝病或血脂异常。
[0253]
皮肤疾病可能是瘢痕疙瘩、银屑病或白斑，视网膜疾病可能是视网膜纤维化、黄斑变性、糖尿病视网膜病变、白内障或新生血管性青光眼。
[0254]
本发明的化合物可以是其药学上可接受的盐的形式。盐是指本发明所属医学领域中常用的盐，例如可以是由盐酸、硝酸、磷酸、溴酸、碘酸、高氯酸、酒石酸和硫酸等制备的无机盐。此外，它可以是由乙酸、前氟乙酸(prefluoroacetic acid)、柠檬酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡萄糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸等制备的有机酸。此外，它可以是由甲烷磺酸、乙
烷磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和萘磺酸等制备的磺酸，并且本发明中的盐的类型不受这些列出的盐的限制。
[0255]
本发明的化合物也可以是其溶剂化物的形式。“溶剂化物”是指由一个或多个溶质分子，即化学式i的化合物或其药学上可接受的盐和一个或多个溶剂分子形成的复合物或聚集体。溶剂化物可以是由各种溶剂分子(例如水、甲醇、乙醇、异丙醇或乙酸等)形成的复合物或聚集体。
[0256]
本发明的化合物也可以是其立体异构体的形式。立体异构体包括所有立体异构体，例如对映体和非对映体。该化合物可以是立体异构体的立体异构纯形式，或一种或多种立体异构体的混合物，例如外消旋混合物。特定立体异构体的分离可通过本领域已知的常用方法之一进行。与特定立体异构体的外消旋混合物相比，本发明化合物的一些实例可具有更大的特定立体异构体的氧化应激抑制效果。在这种情况下，通过使用特定立体异构体，可以减少剂量。因此，通过分离特定立体异构体，例如对映体和非对映体，具有极大的氧化应激抑制作用，可以有效地治疗氧化应激相关疾病。
[0257]
本发明的其他方面提供了一种药物组合物，其包含治疗有效剂量的上述限定的化学式i的化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物或立体异构体和药学上可接受的载体。
[0258]
在本发明的组合物中，化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体如上文所定义。
[0259]
在本发明的组合物中，“药学上可接受的载体”表示与活性成分组合使用以帮助应用活性成分的物质，通常为非活性物质。该载体包括常见的药学上可接受的赋形剂、添加剂或稀释剂。载体可以包括选自例如填充剂、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、醛类、调味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、ph调节剂和增强剂中的一种或多种。
[0260]
作为稀释剂，糖、淀粉、微晶纤维素、乳糖(水合乳糖)、葡萄糖、二甘露醇、海藻酸钠、碱土金属盐、粘土、聚乙二醇、无水磷酸氢钙或其混合物等；作为粘合剂，可使用淀粉、微晶纤维素、高分散性二氧化硅、甘露醇、二甘露醇、蔗糖、乳糖水合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、聚乙烯吡咯烷酮共聚物(共聚维酮)、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、天然胶、合成胶、明胶或其混合物等。
[0261]
作为崩解剂，可使用淀粉或改性淀粉，如淀粉酸钠、玉米淀粉、马铃薯淀粉、预糊化淀粉等；粘土，如膨润土、蒙脱石或硅酸镁铝等；纤维素，如微晶纤维素、羟丙基纤维素或羧甲基纤维素等；海藻酸，如海藻酸钠或海藻酸等；交联纤维素，如交联羧甲基纤维素钠等；树胶，如瓜尔豆胶、黄原胶等；交联聚合物，如交联聚乙烯吡咯烷酮(交联聚维酮)等；起泡剂(effervescent agent)，如碳酸氢钠、柠檬酸等，或其混合物。
[0262]
作为润滑剂，可使用滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、十二烷基硫酸钠、氢化植物油、苯甲酸钠、硬脂富马酸钠、单硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、胶体二氧化硅或其混合物等。
[0263]
作为ph调节剂，可使用酸化剂，如乙酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠、乙酸钠、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸和柠檬酸等，以及碱性剂，如沉淀碳酸钙、氨水、葡胺、碳酸钠、氧化镁、碳酸镁、柠檬酸钠和三碱式磷酸钙等。
[0264]
作为抗氧化剂，可使用二丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醇、生育酚醋酸酯、生育酚、
丙二酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等。在预释放室中，作为增溶剂，可使用聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，如十二烷基硫酸钠、聚山梨醇酯等、二十二碳磺酸钠、泊洛沙姆等。
[0265]
此外，为了制备缓释剂，其可包括肠道聚合物、水不溶性聚合物、疏水性化合物和亲水性聚合物。
[0266]
肠道聚合物是指在ph 5或以上的特定ph条件下溶解或降解的聚合物，其在ph小于5的酸性条件下不溶或稳定，例如，它包括肠道纤维素衍生物，如醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素、邻苯二甲酸羟丙甲纤维素(邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素)、邻苯二甲酸羟甲基乙基纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、醋酸琥珀酸纤维素、醋酸苹果酸纤维素、苯甲酸邻苯二甲酸纤维素、丙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸甲基纤维素、羧甲基乙基纤维素和乙基羟乙基纤维素邻苯二甲酸酯和甲基羟乙基纤维素；肠溶型丙烯酸酯类共聚物，如苯乙烯-丙烯酸酯共聚物、丙烯酸甲酯-丙烯酸酯共聚物、丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(例如，acryl-is)、丙烯酸丁酯-苯乙烯-丙烯酸酯共聚物和丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸辛基共聚物；肠道聚甲基丙烯酸甲酯共聚物，如聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物(例如，eudragit l，eudragit s，evonik，germany)和聚(甲基丙烯酸乙酯)共聚物(例如，eudragit l100-55)；肠溶马来酸基共聚物，如乙酸酯-乙烯基马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸酐单酯共聚物、乙烯基甲醚-马来酸酐共聚物、乙烯-马来酸酐共聚物、乙烯基丁基马来酸酐共聚物、丙烯腈-丙烯酸甲酯
·
马来酸酐共聚物和丙烯酸丁酯-苯乙烯-马来酸酐共聚物；和肠溶聚乙烯衍生物，如聚乙烯醇邻苯二甲酸酯、聚乙烯醇缩醛苯二甲酸酯、聚乙烯醇缩醛苯二甲酸酯和聚乙烯醇缩醛苯二甲酸酯。
[0267]
水不溶性聚合物是指不溶于水的药学上可接受的聚合物，其控制药物的释放。例如，水不溶性聚合物包括聚醋酸乙烯酯(例如kollicoat sr30d)、水不溶性聚甲基丙烯酸酯共聚物[例如，聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯)共聚物(例如，eudragit ne30d，聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸三甲氨基乙酯)共聚物(例如，eudragit rspo等)、乙基纤维素、纤维素酯、纤维素醚、酰化纤维素、二酰化纤维素、三酰化纤维素、醋酸纤维素、二醋酸纤维素和三醋酸纤维素等。
[0268]
疏水化合物是指不溶于水的药学上可接受的物质，其控制药物的释放。例如，它包括脂肪酸和脂肪酸酯，如棕榈硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、癸酸甘油酯、棕榈酸十六酯、单酸甘油酯和硬脂酸；蜡，如巴西棕榈蜡、蜂蜡和微晶蜡；和矿物质，如滑石、沉淀碳酸钙、磷酸一氢钙、氧化锌、氧化钛、高岭土、膨润土、蒙脱石和硅酸镁铝等。
[0269]
亲水性聚合物是指溶于水的药学上可接受的物质，其控制药物的释放。例如，它包括糖类，如糊精、聚糊精、葡聚糖、支链和支链衍生物、海藻酸盐、聚半乳糖醛酸、木聚糖、阿拉伯木聚糖、阿拉伯半乳聚糖、淀粉、羟丙基淀粉、直链淀粉和支链淀粉；纤维素衍生物，如羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；胶，如瓜尔豆胶、刺槐豆胶、黄芩胶、卡拉胶、相思胶、阿拉伯胶、结冷胶和黄原胶；蛋白质，如明胶、酪蛋白和玉米醇溶蛋白；聚乙烯醇衍生物，如聚乙烯醇、聚乙烯醇吡咯烷酮和聚乙烯醇缩醛二乙胺醋酸酯；亲水性聚甲基丙烯酸甲酯共聚物，例如聚(甲基丙烯酸丁酯-(2-二甲氨基乙基)甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯)共聚物(例如，eudragit e100，evonik,germany)，聚(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸三乙基氨基乙酯氯化物)共聚物(例如，eudragit rl，rs，evonik,germany)；聚乙烯衍生物，如聚乙二醇和聚氧化乙烯；和卡
波姆等。
[0270]
此外，本发明的制备可通过选择性地使用药学上可接受的添加剂(如选自着色剂和调味剂中的各种添加剂)来调配。
[0271]
在本说明书中，添加剂的范围不限于使用上述添加剂，其可通过选择上述添加剂将剂量控制在常规范围内来进行配制。
[0272]
根据本发明的药物组合物可以按照常规方法以口服制剂的形式使用，如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆和气溶胶等，外部应用、栓剂或灭菌注射溶液。
[0273]
本发明的组合物可口服给药，或包括静脉、腹腔内、皮下、直肠内和局部给药的肠外给药。
[0274]
本发明的其他方面提供了一种治疗受试者的疾病的方法，包括向受试者给药治疗有效剂量的化学式i的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或立体异构体。
[0275]
在该方法中，本领域技术人员可以根据患者的病症在给药时适当地选择给药途径。可以口服或肠外给药。肠外给药包括静脉、腹腔、皮下、直肠和局部给药。
[0276]
在该方法中，剂量可根据各种因素(如患者的病症、给药途径、家庭医生的判断等)进行各种调整，如上所述。可根据从体外实验或动物模型试验获得的剂量-反应曲线估计有效剂量。可根据化学性质、给药方式、治疗剂量等确定存在于待给药组合物中的本发明化合物的比率和浓度。可以约1μg/kg至约1g/kg/天或约0.1mg/kg至约500mg/kg/天的有效剂量向受试者给药该剂量。剂量可根据受试者的年龄、体重、敏感性或症状进行调整。
[0277]
此外，包含本发明的化合物或其溶剂化物、立体异构体或药学上可接受的盐的药物组合物可用于预防或治疗选自癌症、瘢痕疙瘩病、肝纤维化、肝硬化、肺纤维化、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、缺血性或创伤性脑损伤、视网膜纤维化、黄斑变性和炎症性疾病中的疾病，包括将其给药于需要其的受试者。
具体实施方式
[0278]
下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例旨在更具体地说明本发明，对于本领域技术人员来说明显的是，根据本发明的要点，本发明的范围不受这些实施例的限制。
[0279]
本发明的化学式i表示的化合物可通过以下反应式中示例的方法制备，但不限于此。
[0280]
一般合成工艺1(合成例1～4)
[0281]
通过以下方法合成了合成例1至4，并描述了具体的合成例。
[0282]
将溶解于乙醇(30～50ml)中的2-肼吡啶衍生物(100mmol)和β-酮酯(100mmol)装入100ml圆底烧瓶中，加热至140℃，持续24小时。然后，在大气压下缓慢蒸馏乙醇约3小时。反应的进度水平和中间体(肼亚胺)的消耗量由lcms监控。将产物溶解于热乙醇中，冷却并通过重结晶纯化，得到白色固体(收率40～70％)。
[0283]
合成例1.2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-醇
[0284]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.23-8.55(m,1h),7.71-8.04(m,2h),7.10(m,1h),2.44-1.95-2.77(m,4h),1.50-1.80(m,3h),1.07(2d,2h),质量[m h]

:216.0,构象异构体混合物。
[0285]
合成例2.2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吲唑-3-醇
[0286]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ11.80(s,0.5h),8.81(s,0.5h),8.67(d,j＝9.0hz,0.5h),8.53(d,j＝11.0hz,1h),8.02(dd,j＝9.0,2.1hz,0.5h),7.94-7.96(m,1h),2.59-2.65(dt,j＝64.0,6.2hz,2h),2.35-2.45(dt,j＝59.0,6.0hz,2h),1.72-1.87(m,4h),质量[m h]

:284.0,构象异构体混合物。
[0287]
合成例3.6-苄基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0288]
1h-nmr(400mhz,dmso-d6,)δ11.75(s,1h),8.39(s,1h),7.94(s,1h),7.65(s,2h),7.45(s,3h),7.35～7.15(m,2h),4.42(bs,2h),4.11(bs,2h),3.56(bs,1h),3.21(bs,1h),2.8～2.6(m,2h),质量[m h]

；307.1；hplc保留时间:3.4min,λ
max
:304nm,纯度97.8％.
[0289]
合成例4.6-苄基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0290]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),8.00(s,2h),7.20-7.37(m,5h),3.72(d,j＝11.0hz,2h),3.53(s,2h),2.74(bs,2h),2.56(bs,2h),质量[m h]

:375.2.
[0291]
一般合成工艺2(合成例中的烷基衍生物)
[0292]
合成例中烷基衍生物的一般合成工艺如下。
[0293]
步骤1反应
[0294]
将1-苄基-3-氧哌啶-4-甲酸乙酯(1.0g，3.35mmol)、zncl(0.46g，3.36mmol)和nabh4(0.13g，3.36mmol)的混合物溶解在甲醇(20ml)中，并在70℃下搅拌过夜。在减压下去除溶剂，并用水(50ml)稀释残留物。用乙酸乙酯(3
×
50ml)提取水层。用盐水(50ml)清洗合并的有机层，并在无水na2so4上干燥，然后浓缩以获得所需的淡黄色油状产物。
[0295]
第2步反应
[0296]
将1-苄基-3-羟基哌啶-4-甲酸乙酯(0.5g，2.01mmol)和钯/碳(10％，50mg)在甲醇(20ml)溶剂中的混合物在室温下于氢气气球压力下搅拌过夜。在减压下去除溶剂，以获得所需的淡黄色油。
[0297]
步骤3反应
[0298]
在圆底烧瓶中添加仲胺(0.5g，1mol当量)、n,n-二异丙基乙胺(1.5mol当量)、卤代烷(1.1mol当量)和10ml dmf，并在室温下氮气下搅拌。完成反应后(通过tlc监测)，蒸发反应混合物并在减压下干燥。将残留物溶解在5ml二氯甲烷中，并用5ml蒸馏水冲洗。用3
×
5ml的二氯甲烷部分清洗水层。收集的有机部分用mgso4干燥并过滤，然后在减压下去除溶剂以获得产物。
[0299]
步骤4反应
[0300]
向40ml乙腈中添加h5io6(1.19g，5.15mmol)，并在室温下剧烈搅拌15分钟。随后，在添加乙醇中间体(冰冷却下)后，将溶解在10ml乙腈中的pcc添加两次并搅拌2小时。然后，用100ml乙酸乙酯稀释反应混合物，并分别用1:1盐水：水、饱和na2so3水溶液和盐水洗涤，然后在无水na2so4上干燥，并浓缩以获得产物。
[0301]
步骤5反应
[0302]
将溶解于乙醇(0.5～5ml)中的2-肼吡啶衍生物(1.1mol当量)和β-酮酯(1mol当量)注入10ml圆底烧瓶中，加热至140℃，持续12小时。反应开始后，在大气压下蒸馏乙醇3小时。产物在硅胶上纯化(收率5～30％)。
[0303]
一般合成工艺3(合成例5至33、35至38、43、44、53至58、65至70、73、74)
[0304][0305]
合成例5至33、35至38、43、44、53至58、65至70、73、74是根据上述一般反应式合成，且应用具体化合物的合成方法的实例如下。
[0306]
步骤1反应
[0307]
将溶解于乙醇(40ml)中的2-肼吡啶衍生物(2g，1.1mol当量)和β-酮酯(5g，1mol当量)注入100ml圆底烧瓶中，并加热至140℃，持续24小时。然后，在开始反应后，在大气压下缓慢蒸馏乙醇约3小时。反应的进度水平和中间体(肼亚胺)的消耗量由lcms监控。将产物溶解在热乙醇(50ml)中，冷却并通过重结晶纯化，以获得白色固体(收率3.7g，85％)。
[0308]
第2步反应
[0309]
将6-苄基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇盐酸盐(0.5g，2.01mmol)溶解于甲醇(20ml)中，并在室温下在氢气气球压力下搅拌钯/碳(含水分10％，250mg)2天。减压去除溶剂，得到淡黄色固体盐酸盐产物。
[0310]
步骤3-1反应(烷基衍生物)
[0311]
将2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇(50mg，0.12mmol)溶解于5ml二甲基乙酰胺中。在室温下向反应溶液中添加三乙胺(97ul，3当量)和卤代烷(1.2当量)。在室温下将反应混合物溶液搅拌2小时。用乙酸乙酯(50ml)稀释，并将盐水/nahco3饱和水溶液混合以用于洗涤。产物经重结晶纯化，收率10～50％。
[0312]
步骤3-2反应(酰胺、碳酸盐、尿素、磺胺衍生物合成法)
[0313]
将2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇(20mg，0.08mmol)溶解在5ml乙腈和1ml水的混合溶液中，并添加nahco3饱和溶液(200ul)。对于每个衍生物的合成，选择羧基氯化物、氯甲酸酯、异氰酸酯和磺酰氯中的一种，并在室温下添加。在室温下将反应混合物溶液搅拌1小时，并通过lc-ms确认反应完成，然后添加50ml乙酸乙酯稀释，并用盐水和nahco3混合饱和溶液洗涤。通过tlc对产物进行分离和纯化，收率在10～70％之间。此外，还描述了根据一般合成方法和使用具体物质的合成方法制备的合成例的数据。
[0314]
合成例5.2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0315]
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ9.74(bs,1h),8.45(d,j＝4.8hz,1h),8.05-7.92(1h),7.37-7.24(1h),4.14(s,2h),3.31(t,j＝5.9hz,2h),2.50(s,2h),质量[m h]

:217.0.
[0316]
合成例6.6-(4-氟苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0317]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝4.8hz,1h),7.80(m,2h),7.35(dd,j＝8.3,
5.5hz,2h),7.00-7.12(m,3h),3.68(d,j＝4.8hz,2h),3.54(s,2h),2.74(t,j＝5.9hz,2h),2.58(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:325.0.
[0318]
合成例7.6-(4-甲基苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0319]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.23(m,1h),7.80(m,2h),7.00-7.12(m,5h),3.68(s,2h),3.54(s,2h),2.72(m,2h),2.56(m,2h),2.34(s,3h),质量[m h] :321.0.
[0320]
合成例8.4-(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)甲基)苯甲腈
[0321]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.25(d,j＝4.8hz,1h),7.81(m,2h),7.64(m,3h),7.52(d,j＝7.6hz,2h),3.77(d,j＝4.8hz,2h),3.55(s,2h),2.74-2.78(m,2h),2.59(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:332.0.
[0322]
合成例9.6-(3,5-二氟苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0323]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.22(d,j＝4.8hz,1h),7.79(t,j＝7.9hz,2h),7.09(s,1h),6.92(d,j＝6.2hz,1h),6.67-6.69(m,2h),3.67(s,3h),3.53(s,2h),2.73(m,2h),2.57(t,j＝5.5hz,2h),质量[m h]

:343.0.
[0324]
合成例10.2-(吡啶-2-基)-6-(3-(三氟甲基)苄基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0325]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝4.8hz,1h),7.80(m,2h),7.35(m,2h),7.00-7.12(m,3h),3.68(d,j＝4.8hz,2h),3.54(s,2h),2.74(t,j＝5.9hz,2h),2.58(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:374.9.
[0326]
合成例11.6-(萘-2-基甲基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0327]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.56(s,1h),7.77-7.88(m,6h),7.43-7.47(m,3h),7.18(m,1h),3.92(s,2h),3.73(s,2h),3.01(t,j＝5.9hz,2h),2.80(m,2h),质量[m h]

:356.9.
[0328]
合成例12.1-(4,5-二氢-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2h吡唑并[3,4-c]吡啶-6(7h)-基)丁-1-酮
[0329]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.27(q,j＝5.3hz,1h),7.81-7.89(m,2h),7.13-7.17(m,1h),4.65(ss,2h),3.76(旋转异构体混合物dt,j＝5.7hz,2h),2.58(dt,j＝29.4,5.9hz,2h),2.41(m,2h),1.64-1.74(m,2h),0.96-1.01(m,3h),质量[m h]

:286.9.
[0330]
合成例13.1-(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)乙-1-酮
[0331]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.27(q,j＝5.7hz,1h),7.82-7.90(m,2h),7.14-7.18(m,1h),4.64(2s,2h,),3.74(2t,j＝5.9hz,2h),2.59(2t,j＝6.0hz,2h),2.18-2.20(2s,3h),质量[m h]

:258.1:构象异构体混合物。
[0332]
合成例14.6-(4-甲氧基苄基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0333]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝4.8hz,1h),7.81(bs,2h),7.29(d,j＝8.3hz,2h),7.10(m,1h),6.86(d,j＝8.6hz,2h),3.80(s,3h),3.67(s,2h),3.55(s,2h),2.74(t,j
＝5.9hz,2h),2.57(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:337.0.
[0334]
合成例15.6-乙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0335]
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.34(bs,1h),7.85-7.96(m,2h),7.26-7.28(bs,1h),4.31(2bs,2h),3.60(bs,2h),3.22(q,j＝7.3hz,1h),2.86-2.96(m,2h),1.47-1.56(m,3h),质量[m h]

:244.9.
[0336]
合成例16.6-(丙-2-炔-1-基)-2(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0337]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.25(bd,j＝4.8hz,1h),7.84(bs,2h),7.12(dd,j＝8.3,5.5hz,1h),3.72(s,2h),3.55(d,j＝2.1hz,2h),2.83(t,j＝5.9hz,2h),2.63(t,j＝5.5hz,2h),2.30(t,j＝2.4hz,1h),质量[m h]

:254.9.
[0338]
合成例17.6-丙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0339]
1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ8.24(s,1h),7.79(b,2h),7.16(s,1h),4.16(b,2h),3.33-3.48(m,2h),3.13(bs,2h),2.77-2.92(m,2h),1.7-2.0(m,5h),质量[m h]

:258.9.
[0340]
合成例18.6-烯丙基-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0341]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24(bs,1h),7.82b(s,2h),7.11(bs,2h),5.19-5.27(m,3h),3.72(bs,2h),3.22(d,j＝6.2hz,3h),2.75(bs,2h),2.59(bs,2h),质量[m h]

:257.0.
[0342]
合成例19.(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)(苯基)甲酮
[0343]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.19-8.20(m,1h),7.66-7.85(m,2h),7.39-7.49(m,5h),7.11(broad,1h),4.76(m,2h),3.58-4.13(m,2h),2.59-2.76(m,2h),质量[m h]

:320.9:构象异构体混合物。
[0344]
合成例20.3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸苄基酯
[0345]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24(d,j＝4.8hz,1h),7.80-7.85(m,2h),7.34(m,5h),7.13(t,j＝6.5hz,1h),5.16(s,2h),4.61(s,2h),3.72(bs,2h),2.57(bs,2h),质量[m h]

:350.9.
[0346]
合成例21.(4-氯苯基)(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-5-基)甲酮
[0347]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.13(d,j＝8.3hz,1h),7.71-7.86(m,2h),7.41-7.44(m,4h),7.09-7.15(m,1h),4.54-4.92(m,2h),3.59-4.01(m,2h),2.64(m,2h),质量[m h]

:354.9,构象异构体混合物。
[0348]
合成例22.3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸乙酯
[0349]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.24-8.39(m,1h),7.70-7.86(m,2h),7.12-7.18(m,1h),4.58-4.80(m,2h),4.17-4.23(m,2h),3.67(m,2h),2.44-2.60(m,2h),1.21-1.30(m,3h),质量[m h] :288.9,构象异构体混合物。
[0350]
合成例23.n-环己基-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺
[0351]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝4.8hz,1h),7.84-7.89(m,2h),7.17(t,j＝6.2hz,1h),4.49(s,2h),3.67-3.71(m,1h),3.65(t,j＝5.5hz,2h),2.59(t,j＝5.9hz,2h),1.35-1.99(m,10h),质量[m h]

:341.9
[0352]
合成例24.呋喃-2-基(3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-基)甲酮
[0353]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.31(d,j＝5.2hz,1h),7.90(m,2h),7.56(s,1h),7.19(t,j＝6.5hz,1h),7.10(s,1h),6.54(s,1h),5.08-4.76(m,2h),4.00(m,2h),2.76(bs,2h),质量[m h]

:310.9.
[0354]
合成例25.6-(甲磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0355]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝4.8hz,1h),7.83-7.90(m,2h),7.18(t,j＝6.2hz,1h),4.45(s,2h),3.59-3.62(m,2h),3.38(s,2h),3.11(s,3h),质量[m h]

:294.8.
[0356]
合成例26.6-(苯磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0357]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.25(d,j＝4.8hz,1h),7.83-7.85(m,2h),7.51-7.60(m,5h),7.15(t,j＝6.2hz,1h),4.26(s,2h),3.39(t,j＝5.9hz,2h),2.60(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:356.9.
[0358]
合成例27.n-(4-氟苯基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺
[0359]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝5.5hz,1h),7.82-7.87(m,2h),7.29-7.31(m,2h),7.15(t,j＝6.5hz,1h),6.97(t,j＝9.0hz,2h),6.56(bs,1h),4.60(s,2h),3.72(t,j＝5.9hz,2h),2.63(t,j＝5.9hz,2h),质量[m h]

:353.9.
[0360]
合成例28.n-(4-氟苄基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺
[0361]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝4.8hz,1h),7.78-7.86(m,2h),7.26(dd,j＝8.6,5.9hz,2h),7.14(t,j＝6.2hz,1h),6.99(t,j＝8.6hz,2h),4.49(s,2h),4.38(d,j＝5.5hz,2h),3.63(t,j＝5.5hz,2h),2.56(t,j＝5.2hz,2h),质量[m h]

:367.9.
[0362]
合成例29.n-(呋喃-2-基甲基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺
[0363]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝4.8hz,1h),7.79-7.86(m,2h),7.35(s,1h),7.14(t,j＝6.2hz,1h),6.31(t,j＝2.4hz,1h),6.23(d,j＝3.4hz,1h),4.49(s,2h),4.43(d,j＝5.5hz,2h),3.62-3.65(m,2h),2.56(m,2h),质量[m h]

:339.9.
[0364]
合成例30.n-(4-氯苯乙基)-3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酰胺
[0365]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.26(bs,1h),7.83(d,j＝30.3hz,2h),7.25-7.27(m,2h),7.07-7.15(m,3h),4.42(s,2h),3.58(s,2h),3.47(m,2h),2.77-2.81(m,2h),2.54(s,2h),质量[m h]

:397.9.
[0366]
合成例31.6-(萘-2-基磺酰基)-2-(吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇
[0367]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.38(s,1h),7.94(d,j＝6.9hz,2h),7.52-7.60(m,7h),7.11(bs,1h),4.29(s,2h),3.54(m,2h),2.57(bs,2h),质量[m h]

:406.8.
[0368]
合成例32.3-羟基-2-(吡啶-2-基)-2,4,5,7-四氢-6h-吡唑并[3,4-c]吡啶-6-甲酸4-硝基苄基酯
[0369]
1h-nmr(600mhz,cdcl3)δ8.27(bs,1h),8.23(m,2h),7.82-7.87(m,2h),7.54(d,j＝8.3hz,2h),7.16(bs,1h),5.28(d,j＝10.3hz,2h),4.66(s,2h),3.75(t,j＝5.9hz,2h),2.61(bs,2h),质量[m h]

:395.9.
[0370]
合成例35.6-苄基-2-(5-氯吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇的制备
[0371]
将1-苄基-3-氧基-4-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和5-氯-2-肼基吡啶(0.24g，1.68mmol)溶解在10ml乙醇中，并添加2滴醋酸盐。在室温下将反应混合物搅拌1小时，添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.53g，2.52mmol)，然后搅拌30小时。减压浓缩反应混合物，然后用水和二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥有机层，并在减压下过滤和浓缩。反应混合物用乙酸乙酯重结晶，得到标题化合物(0.12g，22％)。
[0372]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.54(brs,1h),8.40(d,j＝2.4hz,1h),8.35(s,1h),7.97(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),7.34-7.28(m,4h),7.26-7.20(m,1h),3.64(s,2h),3.33(s,2h),2.63(t,j＝5.8hz,2h),2.23(t,j＝5.3hz,2h).ms计算值:340.1；ms实际值:341.1([m h]

).
[0373]
合成例36.4-(6-苄基-3-羟基-4,5,6,7-四氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-基)-苯甲酸盐酸盐的制备
[0374]
通过使用1-苄基-3-氧基-4-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和4-肼基苯甲酸盐酸盐(0.31g，1.68mmol)，根据以下合成例38的制备方法获得标题化合物(0.28g，43％)。
[0375]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ12.96(brs,1h),10.61(brs,1h),7.97(d,j＝8.8hz,2h),7.84(d,j＝8.8hz,2h),7.61-7.52(m,2h),7.51-7.43(m,3h),4.52-4.36(m,2h),4.28-4.12(m,2h),3.75-3.51(m,1h),3.30-3.15(m,1h),2.90-2.65(m,2h).ms计算值:349.1；ms实际值:350.1([m h]

).
[0376]
合成例37.6-苄基-2-(4-溴苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0377]
通过使用1-苄基-3-氧代-4-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和4-溴苯肼盐酸盐(0.35g，1.68mmol)，根据以下合成例38的制备方法获得标题化合物(0.29g，41％)。
[0378]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.65(brs,1h),7.65-7.59(m,4h),7.59-7.53(m,2h),7.51-7.41(m,3h),4.50-4.38(m,2h),4.22-4.07(m,2h),3.65-3.50(m,1h),3.27-3.10(m,1h),2.85-2.65(m,2h).ms计算值:383.1；ms实际值:384.1([m h]

).
[0379]
合成例38.6-苄基-2-苯基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0380]
将1-苄基-3-氧代-4-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和苯肼盐酸盐(0.24g，1.68mmol)溶解在10ml乙醇中，然后添加2滴醋酸盐。反应混合物在120℃搅拌1小时，然后减压浓缩。反应混合物用乙醇和二乙醚重结晶，得到标题化合物(0.25g，44％)。
[0381]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.30(brs,1h),7.63(d,j＝8.0hz,2h),7.60-7.51(m,2h),7.50-7.44(m,3h),7.41(t,j＝7.7hz,2h),7.31-7.20(m,1h),4.44(s,2h),4.30-4.07(m,2h),3.63(dd,1h),3.25-3.19(m,1h),2.84-2.60(m,2h).ms计算值:305.1；ms实际值:306.1([m h]

).
[0382]
一般合成工艺4(合成例34、39至42、45至52、59至64、71、72、75至81)
[0383][0384]
合成例34、39至42、45至52、59至64、71、72、75至81是根据上述一般反应式合成，且应用具体化合物的合成方法实例如下。此外，还描述了根据该合成方法的合成例的数据。
[0385]
合成例39.5-苄基-2-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0386]
将1-苄基-4-氧基-3-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和2-肼基-5-(三氟甲基)吡啶(0.29g，1.68mmol)溶解于10ml醋酸盐中，并在65℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，然后用乙醇重结晶，得到标题化合物(0.14g，21％)。
[0387]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.99(brs,1h),8.90-8.78(m,1h),8.60-8.45(m,1h),8.30(d,j＝9.8hz,1h),7.65-7.55(m,2h),7.48-7.43(m,3h),4.60-4.30(m,2h),3.90-3.60(m,3h),3.50-3.20(m,1h),3.10-2.80(m,2h).ms计算值:374.1；ms实际值:375.1([m h]

).
[0388]
合成例40.5-苄基-2-苯基-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0389]
使用1-苄基-4-氧基-3-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(1.02g，3.46mmol)和苯肼盐酸盐(0.50g，3.46mmol)，根据上述合成例38的制备方法获得标题化合物(0.48g，41％)。
[0390]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.94(brs,1hz),7.68-7.60(m,4h),7.50-7.44(m,3h),7.40(t,j＝7.7hz,2h),7.22(t,j＝7.3hz,1h),4.54-4.46(m,1h),4.36(dd,j＝12.6,5.9hz,1h),4.06-3.87(m,2h),3.72-3.66(m,1h),3.38-3.28(m,1h),3.08-2.96(m,1h),2.90-2.81(m,1h).ms计算值:305.1；ms实际值:306.2([m h]

).
[0391]
合成例41.5-苄基-2-(4-溴苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0392]
使用1-苄基-4-氧基-3-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和4-溴苯肼盐酸盐(0.38g，1.68mmol)，根据上述合成例38的制备方法获得标题化合物(0.17g，24％)。
[0393]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.10(brs,1h),7.66-7.61(m,4h),7.67-7.61(m,2h),
7.47-7.43(m,3h),4.54-4.42(m,1h),4.40-4.30(m,1h),4.05-3.85(m,2h),3.70-3.60(m,1h),3.40-3.21(m,1h),3.10-2.95(m,1h),2.90-2.80(m,1h).ms计算值:383.1；ms实际值:384.1([m h]

).
[0394]
合成例42.5-苄基-2-(2-氯苯基)-4,5,6,7-四氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-醇盐酸盐的制备
[0395]
使用1-苄基-4-氧基-3-哌啶甲酸乙酯盐酸盐(0.50g，1.68mmol)和2-氯苯基肼盐酸盐(0.30g，1.68mmol)，根据上述合成例38的制备方法获得标题化合物(0.23g，36％)。
[0396]1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.19(brs,1h),7.71-7.67(m,2h),7.65-7.60(m,1h),7.52-7.45(m,5h),7.41(d,j＝7.3hz,1h),4.54(dd,j＝12.6,3.5hz,1h),4.39(dd,j＝12.6,6.3hz,1h),4.09-3.91(m,2h),3.68(t,j＝13.6hz,1h),3.45-3.31(m,1h),3.14-3.00(m,1h),2.93-2.79(m,1h).ms计算值:339.1；ms实际值:340.2([m h]

).
[0397]
表1合成例1至81的化合物
[0398]
[0399]
[0400]
[0401]
[0402]
[0403]
[0404]
[0405]
[0406]
[0407][0408]
《实施例1》
[0409]
为了证实合成例化合物对成纤维细胞和特定底物细胞的ros生成的影响，对通过dmso处理分化为中性粒细胞的hl-60细胞(韩国细胞系库(korean cell line bank))、nhlf(正常人肺成纤维细胞(normal human lung fibroblast)，lonza)、lx-2(人肝星状细胞，sigma)、arpe19(人视网膜色素上皮细胞，atcc)、kel-fib(瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast)，atcc)通过刺激pma(佛波醇12-肉豆蔻酸13-醋酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate))、tgf-β1、棕榈酸酯或高浓度葡萄糖等来诱导ros生成，在此条件下观察到合成例化合物的ros生成的抑制作用。
[0410]
hl-60细胞(人白血病细胞，atcc)悬浮于含有1.25％dmso(rpmi 10％fbs)的培养基中，在5％co2、37℃条件下培养6天，诱导分化为中性粒细胞。将分化为中性粒细胞的hl-60细胞以2
×
104细胞/孔的浓度在96孔板中等分，并将合成例化合物在浓度为0.5mm的条件下处理30分钟。然后，在每个含有细胞和药物的孔中处理200mm的pma以诱导ros生成，并通过使用100μm l-012观察每个孔的发光水平来测量ros生成。
[0411]
将nhlf(正常人肺成纤维细胞，lonza)、lx-2(人肝星状细胞，sigma)、arpe19(人视网膜色素上皮细胞，atcc)、kel-fib(瘢痕疙瘩成纤维细胞，atcc)细胞悬浮在含有10％fbs的培养基中，于96孔板中等分，然后在5％co2、37℃条件下培养24小时。将合成例化合物预处理30分钟至1小时，然后对每个包含细胞和药物的孔进行ros刺激。在额外培养48小时后，使用l-012或dcf-da确认ros生成水平。
[0412]
实验结果表明，在所有nhlf、lx-2、arpe19、kel-fib细胞中，合成例化合物通过ros刺激抑制ros生成。表2的结果示出了合成例化合物(0.5μm)抑制在诱导进入中性粒细胞的hl-60细胞中通过pma诱导的ros生成的结果，图1示出了合成例3和合成例34两者抑制在lx-2和nhlf细胞中通过pma诱导的ros生成的结果。
[0413]
因此，证实当用合成例化合物处理分化的hl-60细胞或诱导ros生成的各种成纤维细胞或特定底物细胞时，ros生成被有效抑制。
[0414]
表2
[0415]
分化的hl-60细胞中ros生成的抑制作用
[0416][0417][0418]
《*:《30％、**:30《《50％、***:50《《70％、****:》70％》
[0419]
《实施例2》tgf-β1诱导的αsma表达变化分析
[0420]
据报道，成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，以形成癌相关成纤维细胞(caf)或诱导各种组织的纤维化。
[0421]
为了证实本发明的合成例化合物是否影响成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，观察
了合成例化合物对hl-60细胞(韩国细胞系库)、hff-1(人类包皮成纤维细胞，atcc)、nhlf(正常人肺成纤维细胞，lonza)、lx-2(人肝星状细胞，sigma)、arpe19(人视网膜色素上皮细胞，atcc)、kel-fib(瘢痕疙瘩成纤维细胞，atcc)细胞中由tgf-β1诱导的αsma(确认分化为肌成纤维细胞的生物标记物)表达增加的抑制作用。
[0422]
将每个细胞悬浮在含有10％fbs的dmem培养基中，并以1
×
104个细胞/孔的浓度在4孔室载玻片(nunc)上等分，处理合成例化合物和tgf-βgf-处理合成，tgf-处均为相同含义)以制备用于确认αsma表达的细胞。用免疫细胞化学方法确认αsma在制备的细胞中的表达，如下所示。在使用4％多聚甲醛固定10分钟并使用0.1％triton x-100对细胞进行透化后，依次处理针对αsma的一级抗体(抗αsma抗体，1:200，在4℃下持续16小时)和二级抗体(缀合alexa-594的抗体，1:800，在室温下持续1小时)，然后用荧光显微镜观察αsma的表达水平。
[0423]
图2是通过将tgf-β1(5μm)处理至arpe19细胞诱导αsma表达后，观察处理各种合成例化合物(5μm)的效果。所有合成例3、8、9、26化合物示出了抑制35％～70％或更多的αsma表达的效果，尽管程度不同。
[0424]
此外，在hff-1、lx-2、nhlf、arpe19、kel-fib细胞中，也可以在图3a和图3b中证实，观察到tgf-β1(10ng/ml)诱导的αsma表达的增加被5μm合成例3化合物处理显著抑制。
[0425]
《实施例3》多巴胺能神经细胞的ros生成变化分析
[0426]
神经细胞中高水平的ros诱导氧化脂质，已知这是神经细胞死亡的重要因素。为了证实合成例化合物对多巴胺能神经细胞的ros生成的影响，通过刺激n27(大鼠多巴胺能神经细胞，sigma)细胞的mpp (1-甲基-4-苯基吡啶鎓(1-methyl-4-phenylptridinium))诱导ros生成，并在此条件下观察合成例化合物ros生成的抑制作用。
[0427]
n27细胞在含有10％fbs和1μm血管紧张素ii的rpmi培养基中培养，培养的细胞在6孔板中以5
×
103～6
×
103细胞/孔的浓度等分。将ros生成刺激物mpp (1-甲基-4-苯基吡啶鎓)和合成例化合物3(1μm)处理到细胞中。在处理合成例化合物后的24小时内，通过使用dcf-da测量每个孔的荧光，确认ros生成水平。
[0428]
如图4所示，实验结果证实，通过合成例化合物处理，mpp 诱导的ros生成被有效抑制。
[0429]
《实施例4》瘢痕疙瘩成纤维细胞的ctgf和col1a1基因表达变化分析
[0430]
为了证实合成例化合物对瘢痕疙瘩成纤维细胞产生细胞外基质过程的影响，细胞外基质形成促进因子ctgf和代表性细胞外基质的表达变化，根据合成例3化合物对kel-fib(瘢痕疙瘩成纤维细胞)细胞的处理，在基因水平上分析i型胶原。
[0431]
将kel-fib细胞系在含有2％fbs的dmem中适应24小时，然后用浓度为5μm或10μm的合成例3化合物预处理1小时。为了诱导ctgf和i型胶原基因的表达，24或48小时后用2ng/ml tgf-β1处理并从细胞中提取mrna。通过qrt-pcr(定量实时pcr)证实ctgf和i型胶原基因的mrna的存在和表达水平。
[0432]
实验结果证实，通过2ng/ml tgf-β1处理，ctgf基因和i型胶原基因的表达分别增加26倍和2.3倍，然后通过5μm或10μm合成例3化合物处理，这两个基因的表达分别被抑制76％和75％。
[0433]
《实施例5》lps诱导的il-1β表达变化分析
[0434]
为了证实本发明的合成例化合物对人源性成纤维细胞中炎症反应的影响，在来自各种组织的成纤维细胞中观察通过lps处理增加的il-1b表达是否受到抑制。
[0435]
在将2
×
105个细胞接种于6孔板中并培养24小时，然后在无血清的培养液中进一步培养16小时后，根据每个条件对合成例3化合物进行30分钟的预处理，并通过lps诱导炎症反应6小时。使用rt-pcr证实il-1β的表达。使用rneasy mini试剂盒(qiagen)从细胞中分离总rna，从分离的rna 2ug，使用primescript
tm
ii第一链cdna合成试剂盒(takara)合成cdna，然后使用pcr premix(bioneer)进行pcr以扩增基因。目标引物的序列如下。il-1β(正向：5'-ccacagaccttccaggaatg-3'，反向：5'-gtgcagttcagtgagg-3')；gapdh(正向：5'-gtggctggctcagaaaagg-3'，反向：5'-ggtgccagggtcttact-3')；β-肌动蛋白(正向：5'-caccattggcaatgagcggttc-3'，反向：5'-aggtctttgcggatgtccacgt-3')。经1.5％琼脂糖凝胶电泳证实pcr产物。
[0436]
如图5所示，实验结果表明，通过合成例3化合物处理，以浓度依赖性的方式有效抑制了lps诱导的il-1β。
[0437]
《实施例7》博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中肺纤维化的抑制作用的确认
[0438]
作为博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型，使用5周龄、体重为20g左右的c57bl/6j雄性小鼠。通过将实验动物分为对照组(口服给予蒸馏水)(对照组)；由博莱霉素(blm)引起的肺纤维化组；给药博莱霉素并且在3周内，每天口服给药100mg/kg尼达尼布(nintedanib)的实验组(blm nin)作为阳性对照组；和给药博莱霉素并且在3周内，每天口服给药3mg/kg的本发明的合成例化合物(blm 合成例)的实验组，每组7只小鼠。
[0439]
每天口服给药一次尼达尼布和合成例化合物，持续28天。最后一次给药尼达尼布或合成例化合物的第二天，麻醉每只动物，然后通过心脏穿刺抽血，然后处死，分离balf(支气管肺泡灌洗液)和肺组织，并用于进一步的测试。苏木精-伊红(h&e)染色为细胞染色，马森三色染色(mt)确认纤维化，并确认αsma和i型胶原在肺组织中的表达率。
[0440]
综合而言，基于上述组织学和免疫学结果，通过使用广泛用于肺纤维化组织分析领域中的改良ashcroft评分(改良ashcroft量表)进行量化，评价每个合成例化合物给药组(blm 合成例)与阴性对照组(对照)、实验组(blm)、阳性对照组相比的肺纤维化严重程度。使用光学显微镜(carl zeiss,oberkochen,germany)对制备的组织切片进行组织病理学检查。对于实验结果，使用spss22.0版统计程序(spss inc.,chicago,il,usa)计算平均值和标准偏差，并通过学生t检验在p《0.05的水平上验证实验组之间差异的显著性。
[0441]
根据实验结果，如图6所示，通过h&e染色和mt染色进行组织学分析的结果证实了，在导致肺纤维化的实验组(blm 载体)、阳性对照组(blm nin)和合成例化合物给药组(blm 合成例)中，炎症细胞浸润到肺泡和细支气管中的程度显著低于实验组和阳性对照组，并证实了上皮细胞肥大减少，肺结构变形减少以及异常组织沉积部位减少。
[0442]
此外，证实了与实验组和阳性对照组相比，合成例化合物给药组(blm 合成例)的纤维化区域大小和由于纤维化而引起的胶原沉积显著减少，并且证实了αsma表达显著抑制至正常组的水平。因此，证实合成例化合物有效地改善了肺纤维化。
[0443]
综合而言，基于上述组织学和免疫学结果，通过使用广泛应用于肺纤维化组织分析领域中的改良ashcroft评分(改良ashcroft量表)进行量化，作为评价每个合成例化合物给药组(blm 合成例)与阴性对照组(对照组)、实验组(blm)、阳性对照组相比的肺纤维化严
重程度的结果，阴性对照组(pbs)的评分示出了正常结果为0.4
±
0.55，博莱霉素(blm)导致肺纤维化的实验组为5.4
±
0.5。阳性对照组(blm nin)的改良ashcroft评分降低至5.0
±
0，给药合成例化合物的实验组(blm 合成例)的改良ashcroft评分为3.44
±
0.88，因此证实，与用作特发性肺纤维化的常规治疗剂的尼达尼布相比，本发明的化合物有效改善了肺纤维化。
[0444]
《实施例8》stam小鼠模型对非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化的治疗效果的确认
[0445]
为了证实本发明的合成例化合物对非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化的治疗效果，使用非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化诱导的stam小鼠(6周龄，雌性，smc laboratories inc，japan)。所有小鼠均维持在标准状态。将实验动物分为正常对照组(口服给予蒸馏水)(阴性对照组)、stam组(诱导非酒精性脂肪性肝炎和纤维化)(载体对照组)，每天口服给药替米沙坦10mg/kg的实验组(stam tel)作为stam阳性对照组，和每天口服给药3或10mg/kg的合成例化合物的实验组(stam 合成例)，每组7只小鼠。替米沙坦和合成例化合物每天口服给药一次，持续28天。
[0446]
完成测试后，对动物进行麻醉，提取每个动物的肝组织，并抽取血液进行检查。测量肝组织的重量并拍照。将组织固定在10％缓冲中性福尔马林溶液中。将固定的组织切割至一定厚度后，通过常规组织处理工艺将其埋入石蜡中，以制备4～5μm的组织切片，然后进行苏木精-伊红染色(h&e染色)，天狼星红染色确认纤维化，油红o工作液染色确认脂质形成的程度，观察组织病理学结果。
[0447]
综合而言，基于上述组织学和免疫学结果，采用肝炎和纤维化组织分析领域中广泛使用的改良nas(非酒精性脂肪肝病活动得分(nonalcoholic fatty liver disease activity dcore))评分进行量化，作为评价每个合成例化合物给药组(stam 合成例)与阴性对照组(对照组)、实验组(stam)、阳性对照组(stam tel)的肝炎和肝纤维化严重程度的结果，示出正常结果的正常对照组(正常对照组)的评分为0.0
±
0.0，stam实验组(stam 载体)的评分为4.8
±
0.7。阳性对照组(stam tel)的改善的nas得分降低至2.8
±
0.7，给药合成例化合物的实验组(stam 合成例)的改善的nas得分确认为2.6
±
0.7。
[0448]
此外，根据天狼星红染色确认肝纤维化程度的结果，示出正常结果的正常对照组(正常对照组)的肝纤维化面积为0.29
±
0.06，stam实验组(stam 载体)的肝纤维化面积为0.93
±
0.36。证实，阳性对照组(stam tel)的改善的纤维化面积减少至0.44
±
0.15，给药合成例化合物的实验组(stam 合成例)的改善的纤维化面积减少至0.49
±
0.16。
[0449]
证实，本发明的合成例化合物有效改善了非酒精性肝炎和肝纤维化。
[0450]
《实施例9》确认脑损伤治疗效果
[0451]
为了测试合成例化合物对预防或治疗脑部疾病或疾病的效果，建立了帕金森病小鼠(α-突触核蛋白a53t突变转基因小鼠)模型。
[0452]
所有小鼠均维持在标准状态。将实验动物分为正常对照组(口服给予蒸馏水)(阴性对照)、帕金森病诱导组(载体对照)和实验组(每天口服给药25mg/kg的合成例化合物)(合成例)，每组8只小鼠。正常对照组给予生理盐水，合成例化合物每天口服给药一次，持续2周，然后进行行为改变实验和组织病理学实验。
[0453]
通过转棒试验(rota rod)、爬杆试验(pole test)和后肢紧握(hindlimb clasping)分析行为变化，并测量每只动物三次试验的平均值。
[0454]
完成试验后，将动物麻醉以提取每个动物的脑组织，并将组织固定在4％缓冲中性福尔马林中。将固定的组织切割至一定厚度后，通过常规组织处理工艺将其埋入石蜡中，以制备4～5μm的组织切片。然后，为了证实帕金森病的病理指数是否根据纹状体中的蛋白质聚集水平得到改善，首先用磷酸化的丝氨酸129α突触核蛋白标记，然后进行硫黄素t染色以观察组织病理学结果。
[0455]
实验结果表明，通过对合成例化合物给药组的转棒试验、爬杆试验和后肢紧握的行为变化分析，证实帕金森样行为症状改善了50％或更多，重要病理指标a-突触核蛋白的聚集和积累改善了50％或更多。
[0456]
总之，证实本发明的合成例化合物有效改善了帕金森病。