抗SLC34A2抗体、抗体药物缀合物及它们的使用方法与流程

抗slc34a2抗体、抗体药物缀合物及它们的使用方法
1.相关申请
2.本技术要求2020年1月6日提交的美国临时申请第62/957,780号的权益，所述临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。
3.序列表的引用
4.依据美国联邦法规(c.f.r.)第37章第1.821条，以计算机可读形式(ascii格式)通过efs-web作为文件名cytx_078_pct_st25.txt以电子方式同时随同提交的序列表以引用的方式并入本文。序列表的ascii副本创建于2021年1月6日，并且大小为48千字节。
发明领域
5.本发明总体上涉及结合slc34a2的抗体，以及在各种治疗、诊断和预防适应症中使用这些抗slc34a2抗体。
6.发明背景
7.基于抗体的疗法已证实是若干种疾病的有效治疗。在一些情况下，通过将抗体缀合至剂(诸如细胞毒性化合物)，发现了所述抗体的额外效用。此类缀合的抗体，也称为抗体药物缀合物(adc)，允许将缀合的毒素靶标特异性地递送至表达抗体靶标的细胞或组织。以这种方式，adc提供了一种基于抗体特异性的特异性递送细胞毒性化合物的方法。
8.因此，在针对新分子靶标的新抗体和adc领域中存在持续的需求。


技术实现要素：

9.本公开提供了特异性结合slc34a2的抗体或其抗原结合片段，也称为。术语“slc34a2”的使用旨在涵盖其任何变型，并且所有变型在本文中可互换使用。
10.在一些实施方案中，所述抗体包括特异性结合slc34a2的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，结合slc34a2的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、结构域抗体、单链、fab片段、f(ab’)2片段、scfv、scab、dab、单结构域重链抗体或单结构域轻链抗体。在一些实施方案中，这种结合slc34a2的抗体或其抗原结合片段为小鼠抗体、其他啮齿动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或完全人单克隆抗体。
11.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:67或seq id no:68的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:67的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:68的重链可变区氨基酸序列。
12.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:67或seq id no:68的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:67的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有seq id no:68的轻链可变区氨基酸序列。
13.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的重链可变区氨基酸序列和选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组
的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含seq id no:67的重链可变区氨基酸序列和seq id no:67的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含seq id no:68的重链可变区氨基酸序列和seq id no:68的轻链可变区氨基酸序列。
14.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:67或seq id no:68的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:68的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:67的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列。
15.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:67或seq id no:68的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:67的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与氨基酸序列seq id no:68至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。
16.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与选自包括seq id no:67或seq id no:68的组的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列和与选自包括seq id no:67或seq id no:68的组的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。
17.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与氨基酸序列seq id no:67至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列和与包含seq id no:67的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。
18.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与包含seq id no:68的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的重链可变区氨基酸序列和与包含seq id no:68的氨基酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的轻链可变区氨基酸序列。
19.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：可变重链互补决定区1(vh cdr1，在本文中也称为cdrh1)序列、可变重链互补决定区2(vh cdr2，在本文中也称为cdrh2)序列、可变重链互补决定区3(vh cdr3，在本文中也称为cdrh3)序列、可变轻链互补决定区1(vl cdr1，在本文中也称为cdrl1)序列、可变轻链互补决定区2(vl cdr2，在本文中也称为cdrl2)序列和可变轻链互补决定区3(vl cdr3，在本文中也称为cdrl3)序列，其中至少一个互补决定区(cdr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)或shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)或gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列
ggitgaplvfdi(seq id no:45)或ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)或rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)或vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)或qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
20.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个互补决定区(cdr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)的vl cdr3序列。
21.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个cdr序列选自由以下组成的组：包括与包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr1序列；包括与包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr2序列；包括与包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr3序列；包括与包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr1序列；包括与包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr2序列；和包括与包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)的vl cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr3序列。
22.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个互补决定区(cdr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
23.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个cdr序列选自由以下组成的组：包括与包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr1序列；包括与包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr2序列；包括与包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列具有至少
90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr3序列；包括与包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr1序列；包括与包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr2序列；和包括与包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr3序列。
24.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：可变重链框架区1(vh fr1)序列、可变重链框架区2(vh fr2)序列、可变重链框架区3(vh fr3)序列、可变重链框架区4(vh fr4)序列、可变轻链框架区1(vl fr1)序列、可变轻链框架区2(vl fr2)序列、可变轻链框架区3(vl fr3)序列和可变轻链框架区4(vl fr4)序列，其中至少一个框架区(fr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seq id no:49)的vl fr1序列；包含氨基酸序列wyqqkpgkapkvliy(seq id no:50)的vl fr2序列；包含氨基酸序列gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seq id no:51)的vl fr3序列；包含氨基酸序列fgqgtrleikr(seq id no:52)的vl fr4序列；包含氨基酸序列evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfs(seq id no:57)的vh fr1序列；包含氨基酸序列wvrqapgkgleyvs(seq id no:58)的vh fr2序列；包含氨基酸序列rftisrdnskntlylqmgslraedmavyycar(seq id no:59)的vh fr3序列；和包含氨基酸序列wgqgtmvtvss(seq id no:60)的vh fr4序列。
25.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的组合：可变重链框架区1(vh fr1)序列、可变重链框架区2(vh fr2)序列、可变重链框架区3(vh fr3)序列、可变重链框架区4(vh fr4)序列、可变轻链框架区1(vl fr1)序列、可变轻链框架区2(vl fr2)序列、可变轻链框架区3(vl fr3)序列和可变轻链框架区4(vl fr4)序列，其中至少一个框架区(fr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列evqlvesgggwvqpggslrlscaasgftfs(seq id no:61)的vh fr1序列；包含氨基酸序列wvrqapgkgleyvs(seq id no:62)的vh fr2序列；包含氨基酸序列rftisrdnsknllyvhmgslkpedmamyycar(seq id no:63)的vh fr3序列；包含氨基酸序列wgqgtlvtvss(seq id no:64)的vh fr4序列；包含氨基酸序列diqmtqspsslsasigdrvtitc(seq id no:53)的vl fr1序列；包含氨基酸序列wyqqkpgkapkvliy(seq id no:54)的vl fr2序列；包含氨基酸序列gvpsrfigsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seq id no:55)的vl fr3序列；和包含氨基酸序列fgqgtrleikr(seq id no:56)的vl fr4序列。
26.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含seq id no:67或seq id no:68的重链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含选自seq id no:67的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含选自seq id no:68的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列编码。
27.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含seq id no:67或seq id no:68的轻链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含选自seq id no:67的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序
列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含选自seq id no:68的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列编码。
28.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含seq id no:67的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列和编码包含氨基酸序列seq id no:67的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含编码包含seq id no:68的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列的核酸序列和编码包含氨基酸序列seq id no:68的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。
29.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含选自由seq id no:67或seq id no:68组成的组的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:67的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:68的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。
30.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含选自由seq id no:67或seq id no:68组成的组的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:67的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:68的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列编码。
31.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:67的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列和与编码包含seq id no:67的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由包含与编码包含seq id no:68的氨基酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列的核酸序列和与编码包含seq id no:68的氨基酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的核酸序列编码。
32.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含核酸序列seq id no:71或seq id no:72的重链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含核酸序列seq id no:71的重链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含选自seq id no:72的核酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列编码。
33.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含核酸序列seq id no:69或seq id no:70的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合
片段由编码包含核酸序列seq id no:69的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含选自seq id no:70的核酸序列的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。
34.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含seq id no:71的核酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列和编码包含核酸序列seq id no:69的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由编码包含seq id no:72的核酸序列的重链氨基酸序列的核酸序列和编码包含核酸序列seq id no:70的轻链氨基酸序列的核酸序列编码。
35.在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段并入多特异性抗体或其抗原结合片段中，其中多特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂特异性结合slc34a2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段并入双特异性抗体或其抗原结合片段中，其中双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂特异性结合slc34a2。
36.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有选自由seq id no:67或seq id no:68组成的组的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有seq id no:67的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有氨基酸序列seq id no:68的重链可变区氨基酸序列。
37.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有选自由seq id no:67或seq id no:68组成的组的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有seq id no:67的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有seq id no:68的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。
38.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列和含有选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。
39.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列和含有选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含含有seq id no:seq id no:67的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列和含有seq id no:67的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。，双特异性抗体或其抗原结合片段，包含含有seq id no:seq id no:68的氨基酸序列的重链可变区氨基酸序列和含有seq id no:68的氨基酸序列的轻链可变区氨基酸序列。
id no:45)或ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)或rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)或vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)或qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
45.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个互补决定区(cdr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)的vl cdr3序列。
46.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个cdr序列选自由以下组成的组：包括与包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr1序列；包括与包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr2序列；包括与包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr3序列；包括与包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr1序列；包括与包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr2序列；和包括与包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)的vl cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr3序列。
47.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个互补决定区(cdr)序列选自由以下组成的组：包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
48.在一些实施方案中，多特异性抗体或其抗原结合片段，例如，双特异性抗体或其抗原结合片段的至少一个臂包含以下的组合：vh cdr1序列、vh cdr2序列、vh cdr3序列、vl cdr1序列、vl cdr2序列和vl cdr3序列，其中至少一个cdr序列选自由以下组成的组：包括与包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr1序列；包括与包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr2序列；包括与包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vh cdr3序列；包括与包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr1序列；包括与包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr2序列；和包括与包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的vl cdr3序列。
49.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的重链可变区氨基酸序列和选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的轻链可变区氨基酸序列的抗slc34a2抗体结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2上的相同表位。
50.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含以下的抗slc34a2抗体结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2上的相同表位：包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit(seq id no:39)的vl cdr3序列。
51.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含以下的抗slc34a2抗体结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2上的相同表位：包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
52.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的重链可变区氨基酸序列和选自由seq id no:67和seq id no:68组成的组的轻链可变区氨基酸序列的抗slc34a2抗体交叉竞争结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2。
53.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含以下的抗slc34a2抗体交叉竞争结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2：包含氨基酸序列syvmh(seq id no:43)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gvsssgdstfyvdsvkg(seq id no:44)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggitgaplvfdi(seq id no:45)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsisrfln(seq id no:37)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vtsslqs(seq id no:38)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsyntpit
(seq id no:39)的vl cdr3序列。
54.本公开的合适的抗slc34a2抗体还包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与包含以下的抗slc34a2抗体交叉竞争结合至人slc34a2和/或食蟹猴slc34a2：包含氨基酸序列shimy(seq id no:46)的vh cdr1序列；包含氨基酸序列gissnglssyyvdsvkg(seq id no:47)的vh cdr2序列；包含氨基酸序列ggrdrvpavfdy(seq id no:48)的vh cdr3序列；包含氨基酸序列rasqsigtfln(seq id no:40)的vl cdr1序列；包含氨基酸序列vasslqs(seq id no:41)的vl cdr2序列；和包含氨基酸序列qqsysvpit(seq id no:42)的vl cdr3序列。
55.本发明还提供了使用结合slc34a2的可活化抗体，特别是结合并中和或以其他方式抑制slc34a2的至少一种生物活性和/或slc34a2介导的信号传导的可活化抗体来治疗受试者中与slc34a2的异常表达和/或活性相关的症状、预防所述症状和/或延迟所述症状的发作或进展或缓解所述症状的方法。
56.本发明还提供了治疗受试者中与正在表达slc34a2或正在异常表达slc34a2的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状、预防所述症状和/或延迟所述症状的发作或进展或缓解所述症状的方法，所述方法结合、靶向、中和、杀伤或以其他方式抑制正在表达或正在异常表达slc34a2的细胞的至少一种生物活性。
57.本发明还提供了治疗受试者中与正在表达slc34a2的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状、预防所述症状和/或延迟所述症状的发作或进展或缓解所述症状的方法，所述方法结合、靶向、中和、杀伤或以其他方式抑制正在表达slc34a2的细胞的至少一种生物活性。
58.本发明还提供了治疗受试者中与正在异常表达slc34a2的细胞的存在、生长、增殖、转移和/或活性相关的症状、预防所述症状和/或延迟所述症状的发作或进展或缓解所述症状的方法，所述方法结合、靶向、中和、杀伤或以其他方式抑制正在异常表达slc34a2的细胞的至少一种生物活性。
59.在一些实施方案中，哺乳动物slc34a2选自由人slc34a2和食蟹猴slc34a2组成的组。在一些实施方案中，ab以小于1nm的解离常数特异性结合人slc34a2或食蟹猴slc34a2。在一些实施方案中，哺乳动物slc34a2为人slc34a2。在一些实施方案中，哺乳动物slc34a2为食蟹猴slc34a2。
60.在一些实施方案中，ab具有以下特征中的一个或多个：(a)ab特异性结合至人slc34a2；(b)ab特异性结合至人slc34a2和食蟹猴slc34a2。
61.在一些实施方案中，ab以小于或等于5nm、小于或等于10nm、小于或等于50nm、小于或等于等于100nm、小于或等于500nm和/或小于或等于1000nm的ec50阻断天然配体或受体结合至哺乳动物slc34a2的能力。
62.在一些实施方案中，ab以5nm至1000nm、5nm至500nm、5nm至100nm 5nm至50nm、5nm至10nm、10nm至1000nm、10nm至500nm、10nm至100nm 10nm至50nm、50nm至1000nm、50nm至500nm、50nm至100nm、100nm至1000nm、100nm至500nm、500nm至1000nm的ec50阻断天然配体结合至哺乳动物slc34a2的能力。
63.在一些实施方案中，本公开的ab抑制或减少表达哺乳动物slc34a2的细胞的生长、增殖和/或转移。在不希望受任何理论束缚的情况下，本公开的ab可通过特异性结合至
slc34a2并且抑制、阻断和/或防止天然配体或受体与哺乳动物slc34a2的结合而抑制或减少表达哺乳动物slc34a2的细胞的生长、增殖和/或转移。
64.在一些实施方案中，抗体包含缀合至ab的剂。在一些实施方案中，缀合至ab或抗体的ab的剂为治疗剂。在一些实施方案中，剂为抗肿瘤剂。在一些实施方案中，剂为毒素或其片段。如本文所用，毒素的片段为保留毒性活性的片段。在一些实施方案中，剂通过可裂解接头缀合至ab。在一些实施方案中，剂通过不可裂解接头缀合至ab。在一些实施方案中，剂通过在细胞内或溶酶体环境中可裂解接头缀合至ab。在一些实施方案中，剂为微管抑制剂。在一些实施方案中，剂为核酸损伤剂，诸如dna烷基化剂、dna裂解剂、dna交联剂、dna嵌入剂或其他dna损伤剂。在一些实施方案中，剂为选自表5中列出的组的剂。在一些实施方案中，剂为多拉司他汀。在一些实施方案中，剂为澳瑞他汀或其衍生物。在一些实施方案中，剂为澳瑞他汀e或其衍生物。在一些实施方案中，剂为单甲基澳瑞他汀e(mmae)。在一些实施方案中，剂为单甲基澳瑞他汀d(mmad)。在一些实施方案中，剂为类美登素或类美登素衍生物。在一些实施方案中，剂为dm1或dm4。在一些实施方案中，剂为倍癌霉素或其衍生物。在一些实施方案中，剂为卡奇霉素(calicheamicin)或其衍生物。在一些实施方案中，剂为吡咯并苯并二氮杂。在一些实施方案中，剂为吡咯并苯并二氮杂二聚体。
65.在一些实施方案中，剂包含具有式(i)结构的分子：
[0066][0067]
其中r1为氢或c
1-6
烷基；其中r选自由以下组成的组：氢、c
1-6
烷基、接头或基团x1-y1-*，其中*为与氮的连接点；并且其中y1为氧羰基，并且x1为c
1-6
烷基、9-芴基甲基、苄基或叔丁基。在一些实施方案中，抗体缀合至一个或多个当量的剂。
[0068]
在一些实施方案中，剂通过具有式(ii)结构的接头缀合至抗体：
[0069][0070]
其中r3为连接至式(ii)的剂，其中连接点为氮、硫、氧或碳原子；并且其中r2为连接至式(ii)的部分，其中连接点选自由以下组成的组：氯基、碘基、溴基和硫醇基。
[0071]
在一些实施方案中，剂通过接头缀合至抗体，其中剂和接头具有式(iii)结构：
[0072][0073]
其中r2为与所述ab的连接点。
[0074]
在一些实施方案中，抗体缀合至一个当量的剂。在一些实施方案中，抗体缀合至两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或大于十个当量的剂。在一些实施方案中，抗体是具有均一数目的当量的缀合的剂的抗体混合物的一部分。在一些实施方案中，抗体是具有非均一数目的当量的缀合的剂的抗体混合物的一部分。在一些实施方案中，抗体混合物使得缀合至每一抗体的剂的平均数目为零至一、一至二、二至三、三至四、四至五、五至六、六至七、七至八、八至九、九至十、和十以及更大。在一些实施方案中，抗体混合物使得缀合至每一抗体的剂的平均数目为一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更大。在一些实施方案中，抗体包含一个或多个位点特异性氨基酸序列修饰，使得赖氨酸和/或半胱氨酸残基的数目相对于抗体的原始氨基酸序列增加或减少，因此在一些实施方案中相应地增加或减少可缀合至抗体的剂的数目，或在一些实施方案中，以位点特异性方式限制剂与抗体的缀合。在一些实施方案中，修饰的抗体用一种或多种非天然氨基酸以位点特异性方式修饰，因此在一些实施方案中将剂的缀合限制在仅非天然氨基酸的位点。
[0075]
在一些实施方案中，剂为抗炎剂。在一些实施方案中，抗体还包含可检测部分。在一些实施方案中，可检测部分为诊断剂。
[0076]
在一些实施方案中，抗体的ab天然地含有一个或多个二硫键。在一些实施方案中，ab可被设计成包括一个或多个二硫键。
[0077]
在一些实施方案中，抗体药物缀合物(adc)可包括一种或多种多肽，所述一种或多种多肽包括轻链序列或轻链可变结构域序列、和重链序列或重链可变结构域序列、接头、和毒素的组合。
[0078]
在一些实施方案中，将抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体在治疗期间和/或之后与一种或多种另外的剂诸如例如化学治疗剂、抗炎剂和/或免疫抑制剂组合施用。在一些实施方案中，将抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂配制成单一的治疗性组合物，并且同时施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂。或者，抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂是彼此分开的，例如，各自被配制成单独的治疗性组合物，并且同时施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂，或者在治疗方案期间在不同时间施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂。例如，在施用另外的剂之前施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体，在施用另外的剂之后施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体，或以交替方式施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂。如本文所述，以单剂量或多剂量施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂。
[0079]
在一些实施方案中，同时施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和一种或多
种另外的剂。例如，可将抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和一种或多种另外的剂配制在单一组合物中或作为两种或更多种单独的组合物施用。在一些实施方案中，依次施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和一种或多种另外的剂，或在治疗方案期间在不同时间施用抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体和另外的剂。
[0080]
在一些实施方案中，抗slc34a2抗体或缀合的抗slc34a2抗体在治疗期间和/或之后与一种或多种另外的剂诸如(作为非限制性实例)化学治疗剂、抗炎剂和/或免疫抑制剂，诸如烷基化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素和/或任何其他核酸损伤剂组合施用。在一些实施方案中，另外的剂为紫杉烷，诸如紫杉醇(例如)。在一些实施方案中，另外的剂为抗代谢物，诸如吉西他滨。在一些实施方案中，另外的剂为烷基化剂，诸如基于铂的化学治疗剂，诸如卡铂或顺铂。在一些实施方案中，另外的剂为靶向剂，诸如激酶抑制剂，例如索拉非尼(sorafenib)或埃罗替尼(erlotinib)。在一些实施方案中，另外的剂为靶向剂，诸如另一抗体，例如单克隆抗体(例如贝伐珠单抗(bevacizumab))、双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，另外的剂为蛋白酶体抑制剂，诸如硼替佐米(bortezomib)或卡非佐米(carfilzomib)。在一些实施方案中，另外的剂为免疫调节剂，诸如来那度胺(lenolidominde)或il-2。在一些实施方案中，另外的剂为辐射。在一些实施方案中，另外的剂为被本领域技术人员视为标准护理的剂。在一些实施方案中，另外的剂为本领域技术人员众所周知的化学治疗剂。
[0081]
在一些实施方案中，另外的剂为另一抗体或其抗原结合片段、另一缀合的抗体或其抗原结合片段、另一可活化抗体或其抗原结合片段和/或另一缀合的可活化抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的剂为与第一抗体或其抗原结合片段、第一缀合的抗体或其抗原结合片段、可活化抗体或其抗原结合片段和/或缀合的可活化抗体或其抗原结合片段针对相同的靶标，例如针对slc34a2的另一抗体或其抗原结合片段、另一缀合的抗体或其抗原结合片段、另一可活化抗体或其抗原结合片段和/或另一缀合的可活化抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的剂为与第一抗体或其抗原结合片段、第一缀合的抗体或其抗原结合片段、可活化抗体或其抗原结合片段和/或缀合的可活化抗体或其抗原结合片段针对不同的靶标的另一抗体或其抗原结合片段、另一缀合的抗体或其抗原结合片段、另一可活化抗体或其抗原结合片段和/或另一缀合的可活化抗体或其抗原结合片段。
[0082]
在一些实施方案中，另外的抗体或其抗原结合片段、缀合的抗体或其抗原结合片段、可活化抗体或其抗原结合片段和/或缀合的可活化抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、结构域抗体、单链、fab片段、f(ab’)2片段、scfv、scab、dab、单结构域重链抗体或单结构域轻链抗体。在一些实施方案中，另外的抗体或其抗原结合片段、缀合的抗体或其抗原结合片段、可活化抗体或其抗原结合片段和/或缀合的可活化抗体或其抗原结合片段为小鼠抗体、其他啮齿动物抗体、嵌合抗体、人源化抗体或完全人单克隆抗体。
[0083]
本公开还提供了通过在导致抗slc34a2抗体多肽表达的条件下培养细胞来产生所述多肽的方法，其中所述细胞包含编码本文所述的抗体的分离的核酸分子，和/或包括这些分离的核酸序列的载体。本公开提供了通过在导致抗体表达的条件下培养细胞来产生所述抗体的方法，其中所述细胞包含编码本文所述的抗体的分离的核酸分子，和/或包含这些分离的核酸序列的载体。
[0084]
本发明还提供了一种制造结合slc34a2的抗体的方法，所述方法通过以下步骤进
行：(a)在导致所述抗体表达的条件下培养包含编码所述抗体的核酸构建体的细胞，其中所述抗体或其抗原结合片段(ab)特异性结合slc34a2；以及(b)回收所述抗体。
[0085]
本发明提供了预防受试者的slc34a2介导的疾病、延迟所述疾病的进展、治疗所述疾病、缓解所述疾病的症状或以其他方式改善所述疾病的方法，所述方法通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗slc34a2抗体和/或缀合的抗slc34a2抗体来进行。
[0086]
本发明还提供了预防受试者的癌症、延迟所述癌症的进展、治疗所述癌症、缓解所述癌症的症状或以其他方式改善所述癌症的方法，所述通过向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗slc34a2抗体和/或缀合的抗slc34a2抗体来进行。前列腺特异性膜抗原(slc34a2)是一种2型跨膜糖蛋白，在包括癌在内的所有形式的前列腺组织中具有高和受限的表达。研究一致表明在所有类型的前列腺组织中皆存在slc34a2表达，且在癌组织中slc34a2表达增加。slc34a2还在其他癌症中表达，更具体地说，在与这些癌症相关的新血管系统中表达。
附图说明
[0087]
图1展示了两种抗slc34a2抗体的tm。
[0088]
图2展示两种抗slc34a2抗体和adc不结合至其他slc34家族成员。
[0089]
图3a和图3b展示了pk研究，其指示两种缀合的抗slc34a2抗体的稳定性，ot1比ot2更稳定。
[0090]
图4展示了两种缀合的抗slc34a2抗体在靶标阳性ovcar3细胞中的体外细胞毒性。ot#1和ot#2以与基准adc相比10倍以上的ec50高效杀伤靶标阳性ovcar3细胞。ot#1的脱靶活性低于ot#2。
[0091]
图5a和图5b展示了两种缀合的抗slc34a2抗体在卵巢ovcar3小鼠模型中的体内毒性。
[0092]
图6展示了两种缀合的抗slc34a2抗体在卵巢pdx模型ag-ov37小鼠模型中的体内毒性。
[0093]
图7展示ot#1抑制人肺癌模型nci-h441的生长。
[0094]
图8展示ot#1抑制人肺癌模型rerf-lc-ad1的生长。
[0095]
图9展示ot#1在大鼠中表现出良好的pk特性。
具体实施方式
[0096]
本公开提供了特异性结合slc34a2的单克隆抗体(mab)和抗slc34a2药物缀合物。
[0097]
在一些实施方案中，本公开的化合物可缀合的靶标结合部分包括抗slc34a2抗体，其实例在以下序列中描述：
[0098]
表9.vl cdr氨基酸序列
[0099][0100]
表10.vh cdr氨基酸序列
[0101][0102][0103]
表11.vl fr氨基酸序列
[0104][0105]
表12.vh fr氨基酸序列
[0106][0107]
表13.vl结构域氨基酸序列
[0108]
可变区(双下划线)，恒定区(虚线下划线)
[0109][0110][0111]
表14.vh结构域氨基酸序列
[0112]
可变区(双下划线)，恒定区(虚线下划线)
[0113][0114]
表15.vl核酸序列
[0115]
[0116][0117]
表16.vh核酸序列
[0118]
[0119][0120]
实施例
[0121]
实施例1.抗slc34a2抗体的产生和表征
[0122]
为了在转染的人胚肾293细胞中以重组方式表达slc34a2抗体，将slc34a2抗体可变重链和轻链序列分别克隆到人重链igg1和人轻链igκ恒定区上游的质粒构建体中。将完整的slc34a2抗体人重链和轻链盒克隆到克隆载体中启动子/增强子的下游。将多聚腺苷酸化位点包括在抗体编码序列的下游。将表达重组slc34a2抗体的构建体转染到293细胞中。通过流式细胞术和biacore评估从重组293细胞分泌的蛋白a纯化的slc34a2抗体与细胞表面slc34a2的结合。
[0123]
随后通过sds-page、sec、ce-sds、差示扫描量热法(dsc)、结合亲和力测定和旁系同源物/同系物结合评定来表征纯化的抗体。图1显示了dsc测定，其指示两种抗slc34a2抗体的tm：chv83-3a23.g1(l328c)k的fab tm为77.6℃，且chv83-1b15.g1(l328c)k的fab tm为71.4℃，与ot#2相比，ot#1具有优越的体外热稳定性。表1显示这两种抗slc34a2抗体以高亲和力结合至重组slc34a2，并且在人、食蟹猴和大鼠中具有交叉反应性。图2显示抗slc34a2抗体和adc特异性结合至slc34a2，但不与其他slc34家族蛋白结合。
[0124]
表1.抗slc34a2抗体对重组slc34a2的结合亲和力
[0125][0126]
实施例2.抗slc34a2抗体的缀合和表征
[0127]
表2显示了两种抗体的adc收率。ot#1始终与agl-01332-93缀合，而ot#2展现非典型的过度缀合行为，包括高h2。
[0128]
表2.两种抗slc34a2抗体的adc收率
[0129][0130]
表3显示了抗slc34a2抗体与缀合的slc34a2抗体之间的结合亲和力比较，指示ot1的缀合不影响slc34a2结合。
[0131]
表3.抗slc34a2抗体和adc对重组slc34a2的结合亲和力
glo(promega)测定评估细胞活力。在synergy酶标仪(biotek)上测定发光。使用graph pad prism软件计算存活％与adc浓度曲线和ec50。
[0139]
图4指示ot#1展现有效的体外细胞毒性，并且比ot#2更具特异性。
[0140]
实施例4.缀合的抗slc34a2抗体在ovcar3肿瘤小鼠模型中的体内功效
[0141]
向各4-6周龄的雌性cb17/scid或nsg小鼠皮下植入两到五片ovcar3卵巢肿瘤。当平均肿瘤体积达到约200mm3时，将小鼠大小匹配并随机分为治疗组和对照组，然后向每个治疗组以2mg/kg和5mg/kg静脉内给予单剂量的ags83 adc。每周两次通过外径卡尺测量来确定肿瘤大小。
[0142]
使用kruskal-wallis检验对肿瘤体积数据进行统计分析，并使用参数anova f检验对数据秩进行kruskal-wallis检验的实施。每个治疗组与对照组的肿瘤生长抑制百分比计算为[(对照-对照基线)-(治疗-治疗基线)]/(对照-对照基线)x 100％。肿瘤消退百分比定义为(治疗基线-治疗)/治疗基线x 100％。
[0143]
图5显示在卵巢模型ovcar3中ot#1和ot#2表现出有效的剂量依赖性tgi。在ovcar3中，在5mg/kg下两种ot引导物均诱导肿瘤消退；在2mg/kg下两种ot引导物与基准adc相比均诱导统计学上更大的tgi。
[0144]
实施例5.缀合的抗slc34a2抗体在卵巢pdx模型ag-ov37小鼠模型中的体内功效
[0145]
向各4-6周龄的雌性cb17/scid或nsg小鼠皮下植入两到五片ag-ov37卵巢肿瘤。当平均肿瘤体积达到约200mm3时，将小鼠大小匹配并随机分为治疗组和对照组，然后向每个治疗组以2mg/kg和5mg/kg静脉内给予单剂量的ags83 adc。每周两次通过外径卡尺测量来确定肿瘤大小。
[0146]
使用kruskal-wallis检验对肿瘤体积数据进行统计分析，并使用参数anova f检验对数据秩进行kruskal-wallis检验的实施。每个治疗组与对照组的肿瘤生长抑制百分比计算为[(对照-对照基线)-(治疗-治疗基线)]/(对照-对照基线)x 100％。肿瘤消退百分比定义为(治疗基线-治疗)/治疗基线x 100％。
[0147]
图6显示在卵巢pdx模型ag-ov37中ot#1表现出比ot#2和基准adc更有效的tgi。在ag-ov37中，在2和5mg/kg下两种ot引导物与基准adc相比均诱导统计学上更大的tgi；在2mg/kg下ot#1诱导消退，但ot#2和基准adc没有诱导消退。
[0148]
实施例6.缀合的抗slc34a2抗体在人肺癌nci-h441小鼠模型中的体内功效
[0149]
向各4-6周龄的cb17/scid小鼠皮下植入两到五片nci-h441人肺癌细胞系。当平均肿瘤体积达到约200mm3时，将小鼠大小匹配并随机分为治疗组和对照组，然后向每个治疗组以5mg/kg静脉内给予单剂量的ags83 adc。每周两次通过外径卡尺测量来确定肿瘤大小。
[0150]
使用kruskal-wallis检验对肿瘤体积数据进行统计分析，并使用参数anova f检验对数据秩进行kruskal-wallis检验的实施。每个治疗组与对照组的肿瘤生长抑制百分比计算为[(对照-对照基线)-(治疗-治疗基线)]/(对照-对照基线)x 100％。肿瘤消退百分比定义为(治疗基线-治疗)/治疗基线x 100％。
[0151]
图7显示ot#1抑制人肺癌模型nci-h441的生长。在nci-h441中，与同种型对照相比，5mg/kg单剂量的ot#1诱导显著的肿瘤生长抑制和16％的消退。
[0152]
实施例7.缀合的抗slc34a2抗体在人肺癌rerf-lc-ad1小鼠模型中的体内功效
[0153]
向各4-6周龄的cb17/scid或nsg小鼠皮下植入两到五片rerf-lc-ad1人肺癌细胞
系。当平均肿瘤体积达到约200mm3时，将小鼠大小匹配并随机分为治疗组和对照组，然后向每个治疗组以2.5mg/kg或5mg/kg静脉内给予单剂量的ags83 adc。每周两次通过外径卡尺测量来确定肿瘤大小。
[0154]
使用kruskal-wallis检验对肿瘤体积数据进行统计分析，并使用参数anova f检验对数据秩进行kruskal-wallis检验的实施。每个治疗组与对照组的肿瘤生长抑制百分比计算为[(对照-对照基线)-(治疗-治疗基线)]/(对照-对照基线)x 100％。肿瘤消退百分比定义为(治疗基线-治疗)/治疗基线x 100％。
[0155]
图8显示ot#1抑制人肺癌模型rerf-lc-ad1的生长。在rerf-lc-ad1中，ot#1在2.5和5mg/kg每周给药下诱导剂量依赖性的统计学上显著的肿瘤生长抑制。
[0156]
实施例8.大鼠中缀合的抗slc34a2抗体的非glp多剂量毒性研究
[0157]
目的：评估chv83-3a23.g1(l328c)k-agl-01332-93(ot#1)的毒性和毒代动力学
[0158]
研究设计
[0159][0160]
测量包括生前：临床观察、体重、食物消耗、临床病理学、尿液分析、ba/tk；和死后：大体病理学、器官重量、解剖病理学。
[0161]
研究设计：为期4周的研究，无恢复期，剂量水平：0、10、20、40mg/kg
[0162]
结果：在第29天体重减轻(约10％)，仅在40mg/kg下临床观察到肿胀(颈部)。对红细胞量、肝毒性生物标志物、血浆蛋白，以及骨髓、肾、肝、脾的组织病理学的影响被认为是潜在可逆的(未评估可逆性)。一般来说，相较于10和20mg/kg，40mg/kg下的结果具有更大的严重程度/发生率。adc定位与血液脉管系统区域有关，与组织病理学结果无关。图9显示ot#1在大鼠中表现出良好的pk特性。
[0163]
其他实施方案
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尽管已结合本发明的详细描述对本发明进行了描述，但前述描述旨在说明本发明的范围而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在所附权利要求的范围内。