硼替佐米包封剂、制备方法、硼替佐米脂质体制剂及应用

1.本公开属于药物载体领域，具体涉及硼替佐米包封剂、制备方法、硼替佐米脂质体制剂及应用。


背景技术：

2.由于硼替佐米毒性是由硼替佐米和血浆蛋白之间的非特异性相互作用引起的，通过生产硼替佐米脂质体来克服；脂质体可作为包含于水相或脂质双层中的治疗和诊断剂的递送载体；现有的硼替佐米脂质体对硼替佐米的包封率不高。


技术实现要素：

3.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供一种硼替佐米包封剂，通过硼替佐米包封剂对硼替佐米包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
4.本公开的目的可以通过以下技术方案实现：
5.一种硼替佐米包封剂，包封剂为脂质体制剂，所述脂质体制剂包括：氢化大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇为原料，以乙醇注入法制备脂质体，将脂质膜溶于65℃无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，将混合物注入65℃的水相，形成乳白色悬浮液的粗制脂质体，水相为150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体；将脂质体减小脂质体粒径后，去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇，获得产物。
6.当然在一些案例中，可直接通过粗制脂质体进行去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇，获得产物。但是会存在不利于硼替佐米脂质体制剂的后续应用；减少脂质体粒径的目的是将脂质体的粒径降低到100nm左右并且此步会使脂质体粒径更加均匀；在实际应用中，一般注射用的脂质体粒径要小于200nm。粒径太大不稳定且容易被快速代谢，100nm左右的脂质体在使用中能发生较好的高渗透长滞留效应。
7.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供一种硼替佐米包封剂的制备方法，通过制备的硼替佐米包封剂，硼替佐米包封剂对硼替佐米包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
8.本公开的目的可以通过以下技术方案实现：
9.一种硼替佐米包封剂的制备方法，包封剂为脂质体制剂，所述脂质体制剂制备包括：氢化大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇为原料，以乙醇注入法制备脂质体，将脂质膜溶于65℃无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，将混合物注入65℃的水相，形成乳白色悬浮液的粗制脂质体，水相为150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体；将脂质体减小脂质体粒径后，去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇，获得产物。
10.在一些公开中，上述的硼替佐米包封剂或者制备方法制备的硼替佐米包封剂，氢化大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为(50-60)：(35-45)：(5)。
11.在一些公开中，上述的磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐浓度为10mmol/l。
12.在一些公开中，上述的通过透析膜将脂质体减小脂质体粒径，透析膜的截留分子量3.5kda，透析温度为20-30℃。
13.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供一种硼替佐米包封剂的制备方法，通过制备的硼替佐米包封剂，硼替佐米包封剂对硼替佐米包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
14.本公开的目的可以通过以下技术方案实现：
15.一种硼替佐米包封剂的制备方法，包封剂为脂质体制剂，所述脂质体制剂制备包括：
16.氢化大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇加入乙醇中，充分搅拌至混合均匀得到混合液a，氢化大豆卵磷脂、胆固醇和二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的摩尔比为(50-60)：(35-45)：(5)；
17.将混合液a注入已加热至45-55℃的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌至乙醇除尽为止，得到脂质膜；
18.将脂质膜溶于65℃无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，将混合物注入65℃的水相，形成乳白色悬浮液的粗制脂质体，水相为150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体；
19.将粗制脂质体通过100-120nm聚碳酸酯薄膜滤膜挤出，重复10-15次，获得挤出后的粗制脂质体；
20.将挤出后的粗制脂质体用透析膜在下用磷酸盐缓冲溶液透析40-50h，去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇，得到产物。
21.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供上述硼替佐米包封剂应用于硼替佐米的包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
22.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供一种硼替佐米脂质体制剂，硼替佐米与上述的硼替佐米包封剂进行孵育，直至硼替佐米装载在所述硼替佐米包封剂中，除去游离的硼替佐米获得；应用于硼替佐米的包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
23.在一些公开中，孵育过程中，硼替佐米浓度为350-450μg/ml。
24.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供一种硼替佐米脂质体制剂，硼替佐米与上述的硼替佐米包封剂进行孵育(60℃水浴中孵育3h至过夜，返回冰水水浴冷却15min快速降温稳定结构)，直至硼替佐米装载在所述硼替佐米包封剂中，除去游离的硼替佐米获得；应用于硼替佐米的包封，解决了现有技术中对硼替佐米的包封率不高的问题。
25.在一些方面，针对现有技术的不足，本公开的目的在于提供上述的硼替佐米脂质体制剂在治疗多发性骨髓瘤的试剂中应用；用于解决在治疗多发性骨髓瘤的试剂中的对硼替佐米的包封率不高的问题。
26.本公开的有以下至少一种的有益效果：
27.以乙酸和一种名为甘露醇的多元醇作捕捉剂，采用远程加载的方法制备脂质体；
28.硼替佐米由于脂质体中甘露醇和乙酸的存在而产生浓度梯度，从而将硼替佐米负载到脂质体中，硼替佐米的硼酸能够与脂质体中甘露醇的两个羟基发生共价反应，从而提
高脂质体制剂中的硼替佐米包封率；
29.脂质体制剂具有较窄的粒径分布，多分散性指数(pdi)为0.152，在制药产品的可接受范围内；
30.本发明中的粒径大小为118.82nm，相比以往的大多数硼替佐米脂质体制剂的粒径范围163-179nm,明显较小，这使得它们更适合于通过epr效应靶向肿瘤环境。
附图说明
31.为了更清楚地说明本公开实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
32.图1是本公开实施例制备的硼替佐米脂质体制剂的粒径；
33.图2是本公开实施例制备的硼替佐米脂质体制剂硼替佐米含量测定标准曲线。
具体实施方式
34.下面将结合本公开实施例中的附图，对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本公开一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本公开保护的范围。
35.一种硼替佐米脂质体制剂的制备方法，包括以下步骤：
36.实施例1
37.(1)将脂质体原料在圆底烧瓶中以所需量混合溶于乙醇，三种脂质体原料摩尔比为氢化大豆卵磷脂、胆固醇、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-mpeg2000)(55：40：5)；
38.(2)然后将此溶剂经注射器缓缓注入已加热至50℃的磷酸盐缓冲溶液中，并不断磁力搅拌至乙醇除尽为止，得到脂质膜；缓慢的目的为获得均匀的脂质膜。
39.(3)将脂质膜溶于65℃的无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，然后将其注入65℃的水相(150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体)中，得到粗制脂质体；
40.(4)然后将脂质体通过100nm聚碳酸酯薄膜滤膜挤出，反复10次；
41.(5)用27mm透析袋(截留分子量3.5kda，购于上海源叶生物)在25℃下用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析48h以去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇；
42.(6)通过将脂质体制剂与硼替佐米(400ug/ml)在60℃水浴中孵育3h，将硼替佐米远程装载在脂质体中，然后返回冰水水浴冷却15min快速降温稳定结构；
43.(7)然后，在室温下，用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析1次，用蔗糖磷酸盐缓冲液(蔗糖9.5％，磷酸盐10mm；ph 7.0)透析3次，除去游离的硼替佐米。
44.实施例2
45.(1)将脂质体原料在圆底烧瓶中以所需量混合溶于乙醇，三种脂质体原料摩尔比为氢化大豆卵磷脂/胆固醇/dspe-mpeg2000(50：45：5)；
46.(2)然后将此溶剂经注射器缓缓注入已加热至55℃的磷酸盐缓冲溶液中，并不断磁力搅拌至乙醇除尽为止，得到脂质膜；
47.(3)将脂质膜溶于预热的65℃无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，然后将其注入65℃的水相(150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体)中，得到粗制脂质体；
48.(4)然后将脂质体通过110nm聚碳酸酯薄膜滤膜挤出，反复12次，用于减小粒径；
49.(5)用27mm透析袋(截留分子量3.5kda，购于上海源叶生物)在25℃下用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析48h以去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇；
50.(6)通过将脂质体制剂与硼替佐米(350ug/ml)在60℃水浴中孵育5h，将硼替佐米远程装载在脂质体中，然后返回冰水水浴冷却15min快速降温稳定结构；
51.(7)然后，在室温下，用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析1次，用蔗糖磷酸盐缓冲液(蔗糖9.5％，磷酸盐10mm；ph 7.0)透析3次，除去游离的硼替佐米。
52.实施例3：
53.(1)将脂质体原料在圆底烧瓶中以所需量混合溶于乙醇，三种脂质体原料摩尔比为氢化大豆卵磷脂/胆固醇/dspe-mpeg2000(60：35：5)；
54.(2)然后将此溶剂经注射器缓缓注入已加热至55℃的磷酸盐缓冲溶液中，并不断磁力搅拌至乙醇除尽为止，得到脂质膜；
55.(3)将脂质膜溶于65℃无水乙醇中，在65℃下制成10％(v/v)的混合物，然后将其注入65℃的水相(150mm醋酸和150mm甘露醇的混合体)中，得到粗制脂质体；
56.(4)然后将脂质体通过120nm聚碳酸酯薄膜滤膜挤出，反复15次；
57.(5)用27mm透析袋(截留分子量3.5kda，购于上海源叶生物)在25℃下用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析48h以去除乙醇、脂外乙酸和甘露醇；
58.(6)通过将脂质体制剂与硼替佐米(450ug/ml)在60℃水浴中孵育过夜，将硼替佐米远程装载在脂质体中，然后返回冰水水浴冷却15min快速降温稳定结构；
59.(7)然后，在室温下，用10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.0)透析1次，用蔗糖磷酸盐缓冲液(蔗糖9.5％，磷酸盐10mm；ph 7.0)透析3次，除去游离的硼替佐米。
60.实施例4：
61.上述的硼替佐米脂质体制剂在治疗多发性骨髓瘤的试剂中应用；用于解决在治疗多发性骨髓瘤的试剂中的对硼替佐米的包封率不高的问题。
62.实施例5：
63.性能检查
64.nano-zs激光粒度仪用来测定实施例1样本中硼替佐米脂质体的平均粒径和粒径分布，高效液相色谱(hplc)用来测定硼替佐米的载药量，检测波长为270nm，色谱柱为c18柱，流动相a)水：乙腈-甲酸(715：285：1v/v)，b)甲醇-甲酸(200：800：1v/v)，35℃，进样量20min，流速1ml/min，得到数据如图1、2所示。
65.由图1可以看出，本发明中的脂质体制剂具有较窄的粒径分布，多分散性指数(pdi)为0.152，在制药产品的可接受范围内。本发明中的粒径大小为118.82nm，相比以往的大多数硼替佐米脂质体制剂的粒径范围163-179nm,明显较小。由图2可以看出％硼替佐米包封率＝(透析后硼替佐米浓度/透析前硼替佐米浓度)
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100＝327.88ug/ml/400ug/ml*100％＝81.97％，提高了硼替佐米脂质体制剂中的硼替佐米包封率。
66.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本公开的至少一个实施
例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
67.以上显示和描述了本公开的基本原理、主要特征和本公开的优点。本行业的技术人员应该了解，本公开不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本公开的原理，在不脱离本公开精神和范围的前提下，本公开还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本公开范围内。