一种含奈玛特韦组合物、治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂的制备方法和应用

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂制备方法和应用。


背景技术：

2.新冠疫情目前还没有降低病毒传播的方法。新冠病毒的不断进化，已经发现新冠病毒的多种变异株，其中，奥密克戎是sars-cov-2目前最普遍的变异毒株，有超强的传播能力。密切接触者属于新型冠状病毒感染的高风险人群，是新冠病毒传播链中的重要环节，对密切接触者的良好管理是防控新冠肺炎的关键。
3.针对密切接触者，在感染早期干预从而直接抑制新冠病毒，可能有助于减少传播，降低住院率缓解医疗压力，帮助结束 covid-19 大流行。最新的研究提到paxlovid是一款口服抗病毒药物，可降低新冠病毒在体内的繁殖能力。奈玛特韦加利托那韦（即paxlovid）是由辉瑞公司研发的一款新冠病毒治疗药物，由奈玛特韦片和利托那韦片组合包装（co-packaged）。
4.奈玛特韦是针对新冠病毒主蛋白酶（sars-cov-2 mpro）的抑制剂。sars-cov-2 mpro是对病毒复制必需的蛋白酶，可切割病毒编码的多蛋白，产生对病毒复制至关重要的较短的非结构蛋白。奈玛特韦可直接与sars-cov-2 mpro活性位点结合，选择性和可逆地抑制 sars-cov-2 mpro 活性，进而抑制病毒的复制。利托那韦是一种人类免疫缺陷病毒 1 型 (hiv-1) 蛋白酶抑制剂和cyp3a抑制剂，曾用于抗艾滋病病毒，但它对 sars-cov-2 mpro 没有活性。
5.由于只获得了紧急使用授权，其适应症范围限制非常严格，主要用于轻型和普通型且伴有进展为重症高风险因素的早期患者。目前已发表的iii期临床研究结果证明了paxlovid对非住院高危 covid-19 成年患者的疗效，结果表明，在确诊三天内服用该药的轻中度新冠患者与 covid-19 相关的住院或死亡风险降低约89%，并且有效地抑制了病毒的复制体现为用药组的病毒载量相对于安慰剂组更低。这一发现支持奈玛特韦在新冠治疗领域的广阔前景。利托那韦有助于减缓奈玛特韦的代谢分解。因此，早期吸入性使用奈玛特韦和利托那韦是抑制新冠病毒复制的有前景的干预方式。
6.但是，目前paxlovid是以口服方式给药，可能的不良反应包括过敏反应、肝损伤、对hiv药物的耐药性和其他一些问题（如味觉改变、腹泻、高血压、肌肉酸痛等）。由于对paxlovid的临床研究还不够充分，不排除会出现一些不可控严重的或新发的不良反应，导致其适应症受到了严格限制。另外奈玛特韦是药物代谢酶cyp3a4的底物，任何影响cyp3a4活性的药物都能影响paxlovid的代谢，进而影响paxlovid的有效性和安全性。
7.中药制剂如连花清瘟胶囊作为一种传统中药配方，已被证明对一系列流感病毒发挥广谱抗病毒作用。新冠流行以来，研究者们探究了连花清瘟在新冠患者中的疗效并发现其在新冠治疗中发挥了积极作用。后来研究发现连花清瘟通过抑制sars-cov-2复制和减少
细胞因子释放来发挥其抗冠状病毒活性。一项对与 covid-19 感染者有密切接触的受试者进行的前瞻性临床试验发现在医学隔离观察期间（14天）连花清瘟治疗组核酸检测阳性率显著低于对照组，提示连花清瘟胶囊可以预防与感染者密切接触后 covid-19 的进展。但是，单纯的中药制剂很难实现很好的治愈效果，适用范围较小。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于提出一种治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂制备方法和应用，对甲型h3n2流感病毒、副流感病毒、rsv具有较强的抑制作用，还对covid-19、sars-cov-2，sars-cov和柯萨奇等多种病毒有较好的抗病毒活性，同时对呼吸道感染的症状具有治疗作用。
9.本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供一种含奈玛特韦组合物，由以下原料制备而成：奈玛特韦、三七总皂苷、苦参碱、中药提取物。
10.作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量份制备而成：奈玛特韦15-20份、三七总皂苷2-5份、苦参碱1-3份、中药提取物10-20份。
11.作为本发明的进一步改进，所述中药提取物的制备方法如下：s1.将白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊分别洗净，干燥，粉碎，混合得到中药粉；s2.将步骤s1制得的中药粉加入水中，超声波沸腾提取，重复1-2次，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得到中药提取物。
12.作为本发明的进一步改进，所述白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊的质量比为10：（2-4）：（3-5）：（1-2）：（1-2）：（3-7）。
13.作为本发明的进一步改进，所述超声波功率为1000-2000w，提取时间为2-4h。
14.本发明进一步保护一种上述治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂的制备方法，包括以下步骤：s1.将中药提取物溶于水中，得到中药液；s2.将奈玛特韦、三七总皂苷、苦参碱进行球磨研细，得到混合粉末，然后加入甘油和丙二醇的混合溶剂中，加热搅拌，然后加入步骤s1中的中药液，搅拌混合均匀，得到治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
15.作为本发明的进一步改进，步骤s1中所述水为去离子水，所述中药提取物和去离子水的质量比为1：（1-2）。
16.作为本发明的进一步改进，步骤s2中所述球磨时间为2-4h，球磨至粒度在0.001-0.01mm之间。
17.作为本发明的进一步改进，步骤s2中所述甘油和丙二醇的混合溶剂的体积比为(2-4)：1；所述混合粉末和甘油和丙二醇的混合溶剂的质量体积比为1：（1-2）g/ml；所述加热至温度为35-45℃，搅拌时间为15-30min。
18.本发明进一步保护一种上述含奈玛特韦组合物在制备治疗早期病毒性呼吸道感染疾病中的应用，所述病毒性呼吸道感染疾病为covid-19。
19.本发明具有如下有益效果：三七总皂苷能显著促进白介素-2和干扰素-γ的分泌，
以及能调节免疫功能发挥抗病毒的作用，苦参碱对小鼠冠状病毒模型具有明显的治疗作用，与抑制炎症因子释放、抑制病毒复制、调节免疫等功能有关。两者协同，加入组合物中能明显降低病毒引起的炎症反应，提高免疫功能，抑制病毒的复制，具有很好的协同增效的作用。
20.本发明中药提取物由中药组合物包括白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊，获得的中药组合物对甲型h3n2流感病毒、副流感病毒、rsv具有较强的抑制作用，还对covid-19、sars-cov-2，sars-cov和柯萨奇等多种病毒有较好的抗病毒活性，同时对呼吸道感染的症状具有治疗作用。
21.局部给药还是全身给药是药物是否有效的重要因素。呼吸道传播是新冠感染最重要的途径，病毒首先在上呼吸道粘膜上皮细胞中定植并复制，然后沿着上呼吸道气管向下呼吸道迁移，最终到达肺。如果在暴露后早期将定植在上呼吸道的病毒抑制，有助于明显降低密切接触者新冠的感染率和病毒的传播。
22.第一，奈玛特韦组合物药物经实验证明可抑制病毒，包括新冠肺炎病毒的快速复制，从而抑制病毒的大量复制，起到很好的抑制病毒传播以及治疗效果；第二，暴露后病毒早期主要定植在上呼吸道，因此早期抑制上呼吸道病毒复制很关键，奈玛特韦组合物药物制成的气雾剂能够作用定植在上呼吸道的病毒，有出色的安全性和有效性。因此，早期吸入性使用治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂是降低新冠肺炎传播的有效药物选择之一。
具体实施方式
23.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
24.实施例1本实施例提供一种治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
25.原料组成（重量份）：奈玛特韦15份、三七总皂苷2份、苦参碱1份、中药提取物10份。
26.中药提取物的制备方法如下：s1.按照重量份称取以下原料：白花蛇舌草10份、金银花2份、连翘3份、黄芪1份、党参1份和雪菊3份；s2.将白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊分别洗净，干燥，粉碎，混合得到中药粉；s3.将步骤s2制得的中药粉加入水中，1000w超声波沸腾提取2h，重复1次，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得到中药提取物。
27.治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂的制备方法，包括以下步骤：s1.将中药提取物溶于去离子水中，中药提取物和去离子水的质量比为1:1，得到中药液；s2.将奈玛特韦、三七总皂苷、苦参碱进行球磨2h，球磨至粒度在0.001-0.01mm之间，得到混合粉末，然后加入二氟甲烷，加入后二氟甲烷的终浓度为5wt%，然后加入甘油和
丙二醇的混合溶剂（甘油和丙二醇的混合溶剂的体积比为2：1）中，混合粉末和混合溶剂的质量体积比为1：1g/ml，加热至35℃搅拌15min，然后加入步骤s1中的中药液，搅拌混合均匀，得到治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
28.实施例2本实施例提供一种治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
29.原料组成（重量份）：奈玛特韦20份、三七总皂苷5份、苦参碱3份、中药提取物20份。
30.中药提取物的制备方法如下：s1.按照重量份称取以下原料：白花蛇舌草10份、金银花4份、连翘5份、黄芪2份、党参2份和雪菊7份；s2.将白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊分别洗净，干燥，粉碎，混合得到中药粉；s3.将步骤s2制得的中药粉加入水中，2000w超声波沸腾提取4h，重复2次，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得到中药提取物。
31.治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂的制备方法，包括以下步骤：s1.将中药提取物溶于去离子水中，中药提取物和去离子水的质量比为1:2，得到中药液；s2.将奈玛特韦、三七总皂苷、苦参碱进行球磨4h，球磨至粒度在0.001-0.01mm之间，得到混合粉末，然后加入二氟甲烷，加入后二氟甲烷的终浓度为5wt%，然后加入甘油和丙二醇的混合溶剂（甘油和丙二醇的混合溶剂的体积比为4：1）中，混合粉末和混合溶剂的质量体积比为1：2g/ml，加热至35-45℃搅拌30min，然后加入步骤s1中的中药液，搅拌混合均匀，得到治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
32.实施例3本实施例提供一种治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
33.原料组成（重量份）：奈玛特韦17份、三七总皂苷3份、苦参碱2份、中药提取物15份。
34.中药提取物的制备方法如下：s1.按照重量份称取以下原料：白花蛇舌草10份、金银花3份、连翘4份、黄芪1.5份、党参1.5份和雪菊5份；s2.将白花蛇舌草、金银花、连翘、黄芪、党参和雪菊分别洗净，干燥，粉碎，混合得到中药粉；s3.将步骤s2制得的中药粉加入水中，1500w超声波沸腾提取3h，重复2次，过滤，合并滤液，浓缩，干燥，得到中药提取物。
35.治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂的制备方法，包括以下步骤：s1.将中药提取物溶于去离子水中，中药提取物和去离子水的质量比为1:1.5，得到中药液；s2.将奈玛特韦、三七总皂苷、苦参碱进行球磨3h，球磨至粒度在0.001-0.01mm之间，得到混合粉末，然后加入二氟甲烷，加入后二氟甲烷的终浓度为5wt%，然后加入甘油和丙二醇的混合溶剂（甘油和丙二醇的混合溶剂的体积比为3：1）中，混合粉末和混合溶剂的质量体积比为1：1.5g/ml，加热至40℃搅拌20min，然后加入步骤s1中的中药液，搅拌混合均匀，得到治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂。
36.对比例1与实施例3相比，未添加三七总皂苷，其他条件均不改变。
37.原料组成（重量份）：奈玛特韦17份、苦参碱5份、中药提取物15份。
38.对比例2与实施例3相比，未添加苦参碱，其他条件均不改变。
39.原料组成（重量份）：奈玛特韦17份、三七总皂苷5份、中药提取物15份。
40.对比例3与实施例3相比，未添加奈玛特韦，其他条件均不改变。
41.原料组成（重量份）：三七总皂苷3份、苦参碱2份、中药提取物15份。
42.测试例1 对于抑制新型冠状病毒sars-cov-2感染的作用将处于对数生长期的vero细胞分别加入12孔细胞培养板，每孔的细胞量为2
×
105，待细胞贴壁生长6h后，将细胞培养上清移走，加入100
µ
l滴度为0.01的sars-cov-2的培养基和200
µ
l本发明实施例1-3和对比例1-4制得的治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂（空白组添加等量的丙二醇，paxlovid、连花清瘟胶囊组分别用丙二醇溶解药物，配制成含量为0.2g/ml的浓度），并继续培养24h。此时，弃去细胞培养上清，并将细胞固定后，染色并计算制得的含有奈玛特韦对sars-cov-2感染抑制率（%）。
43.感染抑制率（%）=（空白组感染数-测试组感染数）/空白组感染数
×
100%。
44.结果见表1。
45.表1组别抑制率（%）实施例187.6实施例289.2实施例392.5对比例180.4对比例278.9对比例345.6paxlovid85.5连花清瘟胶囊78.2由上表可知，本发明实施例1-3制得的治疗新型冠状病毒肺炎的奈玛特韦气雾剂具有良好的抑制新型冠状病毒sars-cov-2的感染作用，能在暴露后早期将定植在上呼吸道的病毒抑制，有助于明显降低密切接触者新冠的感染率和病毒的传播。
46.对比例1、2与实施例3相比，未添加三七总皂苷或苦参碱，抑制率下降，三七总皂苷能显著促进白介素-2和干扰素-γ的分泌，以及能调节免疫功能发挥抗病毒的作用，苦参碱对小鼠冠状病毒模型具有明显的治疗作用，与抑制炎症因子释放、抑制病毒复制、调节免疫等功能有关。两者协同，加入组合物中能明显降低病毒引起的炎症反应，提高免疫功能，抑制病毒的复制，具有很好的协同增效的作用。
47.对比例3与实施例3相比，未添奈玛特韦，抑制率明显下降，可见，奈玛特韦经实验证明可抑制病毒，包括新冠肺炎病毒的快速复制，从而抑制病毒的大量复制，起到很好的抑制病毒传播以及治疗效果。
48.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。