一种川贝母鳞茎组织培养再生方法与流程

技术特征：
1.一种川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：s1外植体处理：选川贝母鳞片作为外植体，消毒，备用；s2胚性愈伤组织诱导：将s1处理后的鳞片接种至胚性愈伤诱导培养基中，在25
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2℃下暗培养至形成胚性愈伤组织；s3增殖培养：将s2中获得的胚性愈伤组织按40g/l转接至增殖培养基中，在25℃恒温摇床上120r/min暗培养，每15日继代1次，连续继代4次；s4分化培养：对s3中获得的培养物离心去上清后，将留下的细胞团转接至分化培养基中，在25℃恒温摇床上120r/min暗培养，期间至少更换一次培养基，直至分化出直径为1～2mm的体胚；s5萌发培养：将s4获得的体胚接种到体胚萌发培养基上进行萌发，先将体胚置于10℃下暗培养7～14日，然后再将其转至培养条件温度为20～25℃，光周期8/16h，光照强度1000～1500lux的环境下进行培养至体胚发育成基部有白色粗根的乳白色小鳞茎；s6植株再生：将s5中得到的已生根的小鳞茎从愈伤组织中分离并转接到sh基础培养基上继续培养至小鳞茎分化抽芽，期间至少更换一次新鲜培养基，培养条件为20～25℃，光周期12/12h，光照强度2000lux；所述胚性愈伤诱导培养基以每升计算，其制备方法为：在sh培养基母液中加入1～2mg的2,4-d、0.5～1mg的6-ba、0.5～2mg的naa和30g蔗糖后用水定容至于一升，调节ph至5.8，最后加入2.5g的琼脂；所述增殖培养基以每升计算，其制备方法为：在sh培养基母液中加入1～2mg的2,4-d、0.5～1mg的naa和30g蔗糖后用水定容至一升，调节ph至5.8；所述分化培养基以每升计算，其制备方法为：在sh培养基母液加入0.5～2mg的6-ba和45g的蔗糖后用水定容至一升，调节ph至5.8；所述萌发培养基以每升计算，其制备方法为：在sh培养基母液加入0.5～2mg的6-ba和30g的蔗糖后用水定容至一升，调节ph至5.8后加入0.5～2g的活性炭和2.5g的琼脂；所述sh基础培养基以每升计算，其制备方法为：在sh培养基母液加入30g的蔗糖后用水定容至一升，调节ph至5.8后加入0.5～2g的活性炭和2.5g的琼脂。2.根据权利要求1所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s5中，所述将体胚置于10℃下暗培养的时间为7日。3.根据权利要求1所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s3中，所述胚性愈伤组织为从s2中形成的胚性愈伤组织中挑选的浅黄色、疏松呈颗粒状的胚性愈伤组织。4.根据权利要求3所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s3中，每个月用20目不锈钢筛网对培养物进行过滤，保留直径小于1mm的细胞继续增殖培养。5.根据权利要求1所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s2中，所述川贝母鳞片切成大小为0.5cm2的块状后再接种至胚性愈伤诱导培养基中。6.根据权利要求1所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s1中，所述消毒方法为先在流水下对整个川贝母鳞茎进行涮洗，去掉表面粗皮和须根；随后将鳞片由内而外分开，再用软刷蘸取洗洁精对其进行涮洗后，最后在自来水下将洗洁精漂净。将洗净的鳞片放入无菌瓶并转入超净工作台内，用75％酒精浸泡15～30s，再用0.1％hgcl2浸泡
8～15min，无菌水漂洗5～8次，用无菌滤纸吸干表面水分。7.根据权利要求1所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法，其特征在于：在步骤s4中，每7日更换一次培养基；在步骤s6中，每30日更换一次培养基。

技术总结
本发明涉及一种川贝母鳞茎组织培养再生方法。本发明所述的川贝母鳞茎组织培养再生方法包括以下环节：S1外植体处理、S2胚性愈伤组织诱导、S3增殖培养、S4分化培养、S5萌发培养、S6植株再生。其中本发明提供的川贝母鳞茎组织培养再生方法通过在液体环境对川贝母鳞茎愈伤组织进行增殖培养实现短时间内大量增殖，并通过在萌发培养环节对体胚进行短期低温暗培养处理提高体胚的萌发率，从而进一步提高植株的增殖效率。的增殖效率。的增殖效率。


技术研发人员：张连娟 林亮 万阳 袁万立 王亚金 张方圆 张权
受保护的技术使用者：云南龙藏生物科技有限公司
技术研发日：2022.04.28
技术公布日：2022/8/5