肉豆蔻酸在制备抗脑衰老的药物中的应用

1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及肉豆蔻酸在制备抗脑衰老的药物中的应用。


背景技术：

2.随着全球老龄化人口的迅速增加，脑衰老及相关疾病(如阿尔茨海默病、脑萎缩等)给患者、家庭和社会经济带来了巨大的负担。阿尔茨海默病(ad)，又称为阿兹海默病、老人失智症、老年痴呆症、脑退化症，是一种持续性神经功能障碍，也是失智症中最普遍的成因，症状表现为逐渐严重的认知障碍(记忆障碍、学习障碍、注意障碍、空间认知机能、问题解决能力的障碍)，逐渐不能适应社会。目前尚未有特异性逆转脑衰老的药物，因此探索脑衰老的治疗药物迫在眉睫。海马体是大脑边缘系统的重要组成部分，包含各种信使受体，它不仅是神经内分泌系统的高级调节中枢，也是反应最敏感的区域。研究证实，海马体功能与衰老密切相关，海马体神经元随机体衰老而减少。因此，更深入地了解海马体衰老对于改善脑衰老相关疾病的治疗至关重要。
3.肉豆蔻酸(以下简称ma，iupac名称：十四烷酸，分子式：ch3(ch2)12cooh，cas#：544-63-8)是一种饱和脂肪酸，主要存在于豆蔻油、椰子油和棕榈仁油中。目前尚未报道ma对海马体神经元及脑衰老的影响。


技术实现要素：

4.基于此，本发明的目的在于提供肉豆蔻酸在制备抗脑衰老的药物中的应用。肉豆蔻酸可有效改善自然衰老小鼠的探索能力、空间记忆和海马体的衰老。
5.为达到上述目的，本发明采用如下技术方案。
6.肉豆蔻酸在制备抗脑衰老的药物中的应用。
7.在一些实施例中，所述药物可以改善空间记忆能力。
8.在一些实施例中，所述药物可以提高探索能力。
9.在一些实施例中，所述脑衰老为海马体衰老。
10.在一些实施例中，所述药物可以改善海马体神经元退变。
11.在一些实施例中，所述药物可以提高海马体中尼氏阳性细胞数量。
12.在一些实施例中，所述药物可以降低p16ink4a在海马体中的表达。
13.本发明还提供了肉豆蔻酸在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。
14.本发明还提供了肉豆蔻酸在制备治疗脑萎缩的药物中的应用。
15.本发明还提供了一种抗脑衰老的药物，所述药物包含肉豆蔻酸和药物学上可接受的载体。
16.本发明发现，肉豆蔻酸可以有效改善自然衰老小鼠的探索能力和空间记忆力，同时改善海马体神经元退变、增加海马体尼氏染色阳性细胞百分比和降低海马体衰老标志蛋白p16和p21。因此，肉豆蔻酸能有效抗脑衰老，可用于治疗脑衰老及脑衰老相关疾病，包括
distance)、小鼠静止时间(quiescent time)、中央区运动距离(distance center)、中央区进入次数(number ofcenter)、中央区滞留时间(time center)、四周区运动距离(distance periphery)、四周区进入次数(number ofperiphery)、四周区滞留时间(time periphery)、中央区滞留时间/四周区滞留时间(time center/time periphery)。
30.3.morris水迷宫
31.morris水迷宫用于评估小鼠的空间记忆。旷场实验后，进行morris水迷宫测试。将小鼠从面向池壁的四个象限放入池中，用supermaze软件(上海欣软信息技术有限公司，3.0版)记录小鼠从入水到站立到水下隐蔽平台上所需的时间作为逃避潜伏期。如果小鼠入水60s后仍未找到平台，则引导小鼠在平台上停留10s。每天四个象限，一共四天。第五天，进行空间探索实验。移除水迷宫平台并将小鼠从平台对面的位置入水。小鼠游泳时间为60s。每天训练的象限是随机安排的。记录参数：逃避潜伏期(escape latency)和穿越平台次数(platformcrossover number)。
32.4.海马体he染色和尼氏染色
33.冰上完整取出大脑半球，用4％多聚甲醛固定48h，然后包埋在石蜡中。将大脑半球在正中矢状面切开至海马体区，切片厚度5μm，分别用h&e染色液(servicebio,g1005，武汉)和nissl染色液(servicebio,g1036，武汉)染色。海马体切片h&e和nissl染色由数字病理扫描系统(3d histec ltd.,pannoramic midi)智能拍摄。
34.5.免疫组织化学染色(ihc)
35.ihc用于检测海马体p16和p21蛋白的表达。依次将脑组织切片脱蜡、抗原修复。加入一抗p16(affinity biosciences cat#af0228,rrid:ab_2833403，rabbit,1:200)和p21(beyotime cat#ap021,1:200)抗体，4℃孵育过夜。然后加入生物素标记二抗室温下孵育1h。常规dab染色后，苏木精染色并封片。数字病理扫描系统(3d histec ltd.，pannoramic midi)智能拍摄。image j 1.51分析软件(wayne rasband，美国国立卫生研究院)用于计算相对蛋白表达。
36.6.统计分析
37.检查所有数据的正态性和方差齐性。如果两个独立样本数据符合正态分布，则结果表示为平均值
±
标准差(sd)，并使用双侧独立样本t检验。如果两个独立样本数据不符合正态分布，则采用mann-whitney u检验并使用箱式图。采用双因素方差分析(anova)联合bonferroni多重比较分析morris水迷宫数据。p《0.05被认为具有统计学差异。使用graphpad prism 8.4.3版(graphpad software，san diego，california，usa)进行作图和统计分析。
38.二、实验结果
39.1.ma改善自然衰老小鼠探索能力和空间记忆能力
40.结果如图1所示，在旷场实验中，我们观察到ma治疗的小鼠探索能力提高，包括小鼠运动总距离(total distance)、中央区进入次数(number ofcenter)、中央区进入时间/四周区进入时间(time center/time periphery)增加；降低小鼠静止时间(quiescent time)(图1a)。在morris水迷宫中，我们观察小鼠逃避潜伏期(escape latency)减少，穿越平台次数(platform crossover number)增加，表明ma改善了海马体依赖的空间记忆(图1b-d)。
41.2.ma改善小鼠海马体神经元退变
42.进一步使用h&e和尼氏染色来证明ma对海马体组织形态学的影响。如图2所示，ma治疗后，衰老小鼠紊乱的海马体神经元得到改善(图2a)。定量结果表明，尼氏染色阳性细胞百分比增加，神经退变率降低(图2b-c)。ihc显示ma干预后经典衰老标志物p16显著降低，p21有降低趋势(图2d-f)。
43.综上所述，ma可以有效治疗脑衰老，尤其是改善海马体衰老，可用于制备治疗脑衰老以及脑衰老相关疾病的药物。
44.以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
45.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。