一种适用于芳香药用植物牛至多倍体诱导和培育的方法

技术特征：
1.一种牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，将牛至无菌苗茎段上萌动的腋芽在离体培养基上进行秋水仙素诱导，然后通过倍性鉴定进行四倍体筛选，再通过配套的离体快繁技术扩增，获得四倍体牛至植株。2.如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，所述的无菌苗的获得方式为：选取健康、无病虫害的牛至嫩梢作为外植体，表面灭菌后，接种于1/2ms 0.1～0.5mg/l6-ba 3％蔗糖的启动培养基中，待外植体恢复生长后接种于ms 0.5～1.0mg/l 6-ba 3％蔗糖的扩增培养基中，获得大量长势一致的无菌苗。3.如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，所述的秋水仙素的诱导方法为：配制诱导培养基ms 0.5～1.0mg/l 6-ba 0.05～0.2mg/l iba 3％蔗糖，趁灭菌后的诱导培养基未冷却固化前，量取诱导培养基灌装于无菌容器内，待诱导培养基充分冷却固化后，将所述的无菌苗剪成只有一个节的茎段，接种至所述诱导培养基中，使茎段叶腋处低于诱导培养基上表面，观察茎段腋芽的萌动情况，3～6天后，吸取0.1％秋水仙素无菌溶液，分次均匀滴加至上述容器内，置于黑暗环境中培养，所述诱导培养基与所述秋水仙素无菌溶液的体积比为10:0.1～1；24～72小时后将茎段从诱导培养基中取出，用无菌水清洗2～4次，接种至ms 0.05～0.2mg/l 6-ba 0.05～0.1mg/l naa 2％蔗糖的恢复培养基中。4.如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，经过秋水仙素诱导的芽生长至至少具有3对叶片时，剪取叶片，用流式细胞仪进行检测，确定倍性。5.如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，所述的配套的离体快繁技术包括：将鉴定为四倍体的诱导芽剪成具有一个节的茎段，接种于1/6～2/3ms 1/3～2/3n6 0.5～2.0mg/l 6-ba 0.1～0.3mg/l iba 3％蔗糖的增殖培养基中，20～25天后将茎段上分化出的不定芽分段剪下接种于ms 0.1～0.3mg/l 6-ba 0.05～0.2mg/l naa 3％蔗糖的壮苗培养基中，培养7～10天获得生长一致的牛至四倍体无菌苗。6.如权利要求5所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，所述的配套的离体快繁技术还包括：将获得的牛至四倍体无菌苗接种于1/2ms 0.1～0.5mg/l naa 2％蔗糖的生根培养基中进行生根培养。7.如权利要求6所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，所述的配套的离体快繁技术还包括：生根培养10～15天后，将牛至四倍体生根苗连同培养容器转移至温室，打开容器盖炼苗5～7天，栽种于常规培养基质中，正常管理。8.如权利要求2所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，外植体表面灭菌方法为：用洗洁精水浸泡10～20min后自来水冲洗5～8次至无洗洁精残留，转移至超净工作台内，加入75％酒精表面消毒10～30s，无菌水冲洗2次，用0.1～0.2％升汞消毒4～8min，无菌水冲洗6～8次。9.如权利要求3所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，0.1％秋水仙素无菌溶液的制备方法为：将秋水仙素用二甲基亚砜助溶后配制成0.1％的溶液，高压灭菌。

技术总结
本发明提供了一种适用于芳香药用植物牛至多倍体诱导和培育的方法。将牛至无菌苗茎段上萌动的腋芽在离体培养基上进行秋水仙素诱导，然后通过倍性鉴定进行四倍体筛选，再通过配套的离体快繁技术扩增，获得四倍体牛至植株。具体包括无菌苗培养、秋水仙素诱变处理、倍性鉴定、多倍体增殖培养、以及生根炼苗等步骤。该方法具有操作简单、时间短、诱导率高、混倍体率低、繁殖效率高等优势，是获得牛至多倍体的理想途径，可以作为培育牛至新种质的重要方法。法。


技术研发人员：石雷 王頔 李慧 夏菲 白红彤 闫一皓
受保护的技术使用者：中国科学院植物研究所
技术研发日：2022.04.02
技术公布日：2022/7/29