1.本公开涉及基因疗法的领域，并且提供用于改善遗传病症的组合物和方法。
2.序列表
3.本技术含有已以ascii格式以电子方式提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。2020年10月23日创建的所述ascii拷贝名为51037-054wo3_sequence_listing_10.23.20_st25且大小为13,144字节。
4.发明背景
5.庞贝氏病(pompe disease)是由酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)基因的突变引起的溶酶体贮积症，所述酸性α-葡萄糖苷酶基因编码负责加工溶酶体糖原的酶。患有庞贝氏病的患者展现多种组织的临床表型，包括细胞中的糖原积累，心脏、呼吸和骨骼肌功能的缺陷以及中枢神经系统病状。这些缺陷中的一些通过使用重组人gaa(rhgaa)的酶替代疗法(ert)显著改善。临床功效受到hgaa ert的免疫原性和rhgaa未摄取到一些受侵袭组织中的限制。基因疗法也已经作为这种疾病的潜在治疗范例进行了研究。与实现受侵袭组织中治疗有效量的gaa的表达、同时抑制毒性副作用相关的困难阻碍了用于治疗庞贝氏病的基因疗法的开发。仍然需要实现这种平衡的组合物和方法。
技术实现要素：
6.本公开提供了可用于治疗糖原贮积症，如ii型糖原贮积症(其在本文中也称为庞贝氏病)的组合物和方法。使用本公开的所述组合物和方法，可向患有庞贝氏病的患者(例如，哺乳动物患者，如人类患者)施用含有编码酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)的转基因的病毒载体，如腺相关病毒(aav)载体。所述aav载体可以是例如假型化aav载体，如含有包装在来自aav8(aav2/8)或aav9(aav2/9)的衣壳蛋白内的aav2反向末端重复序列的aav载体。所述转基因可例如可操作地连接至转录调控元件，如诱导肌肉细胞和/或神经元细胞中的基因表达的启动子。可与本公开的组合物和方法结合使用的示例性启动子是肌肉肌酸激酶启动子、结蛋白启动子和cmv启动子等。所述aav载体可以治疗有效量，如以约1x10
13
个载体基因组(vg)/kg受试者体重(vg/kg)至约3x10
14
vg/kg的量(例如，以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg至约1x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg或1x10
14
vg/kg的量)施用于所述患者。
7.本公开部分地基于在患有庞贝氏病的患者中实现gaa表达和活性的治疗性增加、同时抑制毒性副作用的含有gaa转基因的aav载体的剂量的发现。目前已经发现，例如，在约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg范围内的含有编码gaa的转基因的aav载体的剂量(例如，约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg，如约4x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg或1x10
14
vg/kg的剂量)可在患有庞贝氏病的患者中引起gaa表达和活性的有益增加，同时避免可能与gaa过表达或施用过量的病毒载体相关的毒性副作用。使用本公开的组合物和方法，aav载体可以足以增强所述患者的gaa表达并减少所述患者神经元和肌肉组织中糖原的细胞累积、而不会引起毒性副作用的量施用于所述患者。
8.在第一方面，本公开的特征是一种通过向有需要的人类患者施用含有编码酸性gaa的转基因的aav载体来治疗所述患者的庞贝氏病的方法，其中所述aav载体以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
9.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体来改善所述患者的肌肉功能的方法，其中所述aav载体以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、
5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
10.在另一方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体来减少所述患者中的糖原累积的方法，其中所述aav载体以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/
kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在此方面的一些实施方案中，向所述患者施用所述aav载体使肌肉组织中(例如，心肌和/或骨骼肌组织中)和/或神经元组织中的糖原累积减少。
11.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体来改善所述患者的肺功能的方法，其中所述aav载体以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
12.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体来增加所述患者中的gaa表达的方法，其中所述aav载体以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/
kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
13.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/
kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量施用于所述患者。
14.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
15.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约4x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
16.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约5x10
13
vg/kg至约
2x10
14
vg/kg的量，如以约5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
17.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约6x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
18.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约7x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
19.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约8x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所
述患者。
20.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约9x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
21.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以约1x10
14
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
22.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以6x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。
23.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以7x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。
24.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以8x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。
25.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以9x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。
26.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
27.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.1x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
28.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
29.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
30.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.4x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
31.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
32.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.6x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
33.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.7x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
34.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.8x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
35.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以1.9x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
36.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
37.在本公开的任何上述方面的一些实施方案中，所述aav载体以含有指定量的单剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为所述指定量的两个或更多个剂量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以一起总计为所述指定量的两个至十个剂量(例如，以一起总计为所述指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为所述指定量的两个、三个或四个剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为所述指定量的两个剂量施用于所述患者。
38.在一些实施方案中，一起总计为所述指定量的所述aav载体的两个或更多个剂量彼此相隔例如一年或更长时间。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约12个月内(例如，彼此在约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周、48周、49周、50周、51周或52周内)施用于所述患者。例如，在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约1周至约48周内(例如，彼此在约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周或48周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约2周至约44周内(例如，彼此在约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周或44周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约3周至约40周内(例如，彼此在约3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周或40周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约4周至约36周内(例如，彼此在约4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周或36周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约5周至约32周内(例如，彼此在约5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周或32周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约6周至约24周内(例如，彼此在约6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周或24周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约12周至约20周内(例如，彼此在约12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约13周、14周、15周、16周、17周、18周或19周内施用于所述患者。
39.在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有所述指定量的两个或更多个剂量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以各自单独含有所述指定量的两个至十个剂量(例如，以各自单独含有所述指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有所述指定量的两个、三个或四个剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有所述指定量的两个剂量施用于所述患者。
40.在一些实施方案中，所述aav载体通过静脉内、鞘内、脑池内、脑室内、肌内、真皮内、透皮、肠胃外、鼻内、皮下、经皮、气管内、腹膜内、动脉内、血管内、吸入、灌注、灌洗和/或口服施用的方式施用于所述患者。例如，所述aav载体可通过静脉内、鞘内、脑池内、脑室内和/或肌内施用的方式施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体通过静脉内和/或鞘内施用的方式施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体通过静脉内施用的方式施用于所述患者。
41.在一些实施方案中，所述aav是aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aavrh74、aavrh.8或aavrh.10血清型。所述aav可以是假型化aav，如aav2/8或aav2/9。在一些实施方案中，所述aav含有重组衣壳蛋白。
42.在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因可操作地连接至诱导肌肉和/或神经元细胞中所述转基因的表达的启动子。所述启动子可以是例如，肌肉肌酸激酶(mck)启动子、结蛋白启动子、鸡β肌动蛋白启动子、巨细胞病毒(cmv)启动子、肌球蛋白轻链-2启动子、α肌动蛋白启动子、肌钙蛋白1启动子、na
/ca
2
交换体启动子、肌营养不良蛋白启动子、α7整联蛋白启动子、脑利钠肽启动子、αb-晶状体蛋白/小热休克蛋白启动子、α肌球蛋白重链启动子或心房利钠因子启动子。
43.在一些实施方案中，所述启动子是mck启动子。所述mck启动子可具有例如与seq id no:1至少85％同一的核酸序列(例如，与seq id no:185％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少90％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少95％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少97％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少98％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少99％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1 100％同一的核酸序列。
44.在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因可操作地连接至诱导肌肉和/或神经元细胞中所述转基因的表达的增强子。例如，所述编码gaa的转基因可以可操作地连接至cmv增强子、肌细胞增强因子2(mef2)增强子或myod增强子。
45.在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少85％同一的氨基酸序列(例
如，与seq id no:2 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少90％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少95％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少97％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少98％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少99％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:299％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2 100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述gaa与人野生型gaa的区别仅在于一个或多个保守氨基酸取代。在一些实施方案中，所述gaa与人类野生型gaa的区别在于一个或多个非保守氨基酸取代。
46.在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少85％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少90％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少95％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少97％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少98％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少99％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3 100％同一的核酸序列。
47.在一些实施方案中，所述患者患有婴儿期发作性庞贝氏病。所述患者可为，例如，约一月龄至约一岁(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄、六月龄、七月龄、八月龄、九月龄、十月龄、十一月龄或十二月龄)。在一些实施方案中，所述患者为约一月龄至约六月龄(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄或六月龄)。
48.在一些实施方案中，在将所述aav载体施用于所述患者之前，所述患者表现出选自以下的症状：喂养困难、发育停滞、肌张力减退、进行性无力、呼吸窘迫、舌严重肥大和心肌增厚。
49.在一些实施方案中，所述患者患有迟发性庞贝氏病。例如，所述患者可表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约1％至约40％。
50.在一些实施方案中，所述患者先前未接受过gaa酶替代疗法。在一些实施方案中，
所述患者先前已接受过gaa酶替代疗法。
51.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约50％至约200％。
52.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出骨骼肌、心肌和/或神经元组织中糖原的减少。
53.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向有需要的人类患者施用增加gaa表达的剂来治疗所述患者的庞贝氏病的方法。根据此方面，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向所述受试者施用含有编码gaa的转基因的aav2/8载体后所观察到的gaa活性水平，其中所述编码gaa的转基因可操作地连接至mck启动子。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
54.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用增加gaa表达的剂来改善所述患者的肌肉功能的方法。根据此方面，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向所述受试者施用含有编码gaa的转基因的aav2/8载体后所观察到的gaa活性水平，其中所述编码gaa的转基因可操作地连接至mck启动子。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
55.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用增加gaa表达的剂来减少所述患者中的糖原累积的方法。根据此方面，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向所述受试者施用含有编码gaa的转基因的aav2/8载体后所观察到的gaa活性水平，其中所述编码gaa的转基因可操作地连接至mck启
动子。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在此方面的一些实施方案中，向所述患者施用所述剂使肌肉组织中(例如，心肌和/或骨骼肌组织中)和/或神经元组织中的糖原累积减少。
56.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用增加gaa表达的剂来改善所述患者的肺功能的方法。根据此方面，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向所述受试者施用含有编码gaa的转基因的aav2/8载体后所观察到的gaa活性水平，其中所述编码gaa的转基因可操作地连接至mck启动子。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/
kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
57.在另一个方面，本公开的特征是一种通过向被诊断为患有庞贝氏病的人类患者施用增加gaa表达的剂来增加所述患者中的gaa表达的方法。根据此方面，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向所述受试者施用含有编码gaa的转基因的aav2/8载体后所观察到的gaa活性水平，其中所述编码gaa的转基因可操作地连接至mck启动子。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/
kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
58.在本公开的前述五个方面中任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约
4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
59.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
60.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约4x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
61.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患
者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约5x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
62.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约6x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
63.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约7x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
64.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约8x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
65.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约9x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
66.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
14
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
67.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约6x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
68.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约7x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
69.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约8x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
70.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约9x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述
aav载体后所观察到的gaa活性水平。
71.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
72.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.1x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
73.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
74.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.3x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
75.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.4x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
76.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
77.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.6x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
78.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.7x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
79.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.8x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
80.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患
id no:1至少98％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1至少99％同一的核酸序列(例如，与seq id no:1 99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述mck启动子具有与seq id no:1 100％同一的核酸序列。
89.在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子可操作地连接至诱导肌肉和/或神经元细胞中所述转基因的表达的增强子。例如，所述编码gaa的核酸分子可以可操作地连接至cmv增强子、mef2增强子或myod增强子。
90.在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少85％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少90％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少95％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少97％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 97％、98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少98％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:2 98％、99％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2至少99％同一的氨基酸序列(例如，与seq id no:299％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的氨基酸序列)。在一些实施方案中，所述gaa具有与seq id no:2 100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述gaa与人野生型gaa的区别仅在于一个或多个保守氨基酸取代。在一些实施方案中，所述gaa与人野生型gaa的区别在于一个或多个非保守氨基酸取代。
91.在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少85％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少90％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少95％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少97％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少98％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3至少99％同一的核酸序列(例如，与seq id no:399％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的核酸分子具有与seq id no:3 100％同一的核酸序列。
92.在一些实施方案中，所述患者患有婴儿期发作性庞贝氏病。所述患者可为，例如，约一月龄至约一岁(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄、六月龄、七月龄、八月
龄、九月龄、十月龄、十一月龄或十二月龄)。在一些实施方案中，所述患者为约一月龄至约六月龄(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄或六月龄)。
93.在一些实施方案中，在将所述aav载体施用于所述患者之前，所述患者表现出选自以下的症状：喂养困难、发育停滞、肌张力减退、进行性无力、呼吸窘迫、舌严重肥大和心肌增厚。
94.在一些实施方案中，所述患者患有迟发性庞贝氏病。例如，所述患者可表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约1％至约40％。
95.在一些实施方案中，所述患者先前未接受过gaa酶替代疗法。在一些实施方案中，所述患者先前已接受过gaa酶替代疗法。
96.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约50％至约200％。
97.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出骨骼肌、心肌和/或神经元组织中糖原的减少。
98.在另一个方面，本公开的特征是一种药盒，所述药盒包括(i)aav载体，所述aav载体含有例如上文指定的量的编码gaa的转基因；或(ii)例如上文指定的量的增加gaa表达的剂。所述药盒还可含有例如包装插页，所述包装插页指示所述药盒的使用者根据本公开的任何上述方面的方法向人类患者施用所述aav载体或剂。
99.在另一个方面，本公开的特征是含有编码gaa的转基因的aav载体在制造用于治疗有需要的人类患者的庞贝氏病的药物中的用途，其中所述药物含有约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)的所述aav载体。例如，所述药物可含有约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、
1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
100.在另一个方面，本公开的特征是含有编码gaa的转基因的aav载体在制造用于改善被诊断为患有庞贝氏病的人类患者的肌肉功能的药物中的用途，其中所述药物含有约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)的所述aav载体。例如，所述药物可含有约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
101.在另一个方面，本公开的特征是含有编码gaa的转基因的aav载体在制造用于减少被诊断为患有庞贝氏病的人类患者中(例如，肌肉和/或神经元组织中)的糖原累积的药物中的用途，其中所述药物含有约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，约1x10
13
vg/kg至
约3x10
14
vg/kg的量)的所述aav载体。例如，所述药物可含有约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
102.在另一个方面，本公开的特征是含有编码gaa的转基因的aav载体在制造用于改善被诊断为患有庞贝氏病的人类患者的肺功能的药物中的用途，其中所述药物含有约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)的所述aav载体。例如，所述药物可含有约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、
6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
103.在另一个方面，本公开的特征是含有编码gaa的转基因的aav载体在制造用于增加被诊断为患有庞贝氏病的人类患者中的gaa表达的药物中的用途，其中所述药物含有约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)的所述aav载体。例如，所述药物可含有约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg、3x10
14
vg/kg、3.1x10
14
vg/kg、3.2x10
14
vg/kg、3.3x10
14
vg/kg、3.4x10
14
vg/kg、3.5x10
14
vg/kg、3.6x10
14
vg/kg、3.7x10
14
vg/kg、3.8x10
14
vg/kg、3.9x10
14
vg/
kg、4x10
14
vg/kg、4.1x10
14
vg/kg、4.2x10
14
vg/kg、4.3x10
14
vg/kg、4.4x10
14
vg/kg、4.5x10
14
vg/kg、4.6x10
14
vg/kg、4.7x10
14
vg/kg、4.8x10
14
vg/kg、4.9x10
14
vg/kg或5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
104.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。在一些实施方案中，所述药物含有约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量的所述aav载体。
105.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/
kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
106.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约4x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
107.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约5x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
108.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约6x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/
kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
109.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约7x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
110.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约8x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
111.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约9x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
112.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1x10
14
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如约1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
113.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约6x10
13
vg/kg的量的所述aav载体。
114.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约7x10
13
vg/kg的量的所述aav载体。
115.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约8x10
13
vg/kg的量的所述aav载体。
116.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约9x10
13
vg/kg的量的所述aav载体。
117.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约
1x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
118.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.1x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
119.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
120.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.3x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
121.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.4x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
122.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.5x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
123.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.6x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
124.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.7x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
125.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.8x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
126.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约1.9x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
127.在本公开的前述五个方面中的任一个的一些实施方案中，所述药物含有约2x10
14
vg/kg的量的所述aav载体。
128.在一些实施方案中，所述aav载体被配制用于以含有所述量的单剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体被配制用于以一起总计为指定量的两个或更多个剂量(例如，以一起总计为所述指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体被配制用于以各自单独含有所述指定量的两个或更多个剂量(例如，以各自单独含有所述指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。
129.在一些实施方案中，所述aav载体被配制用于静脉内、鞘内、脑池内、脑室内、肌内、真皮内、透皮、肠胃外、鼻内、皮下、经皮、气管内、腹膜内、动脉内、血管内、吸入、灌注、灌洗和/或口服施用于所述患者。例如，所述aav载体可被配制用于静脉内、鞘内、脑池内、脑室内和/或肌内施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体被配制用于静脉内和/或鞘内施用于所述患者。例如，所述aav载体可被配制用于静脉内施用于所述患者。
130.在一些实施方案中，所述aav是aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aavrh74、aavrh.8或aavrh.10血清型。在一些实施方案中，所述aav是假型化aav，如aav2/8或aav2/9。在一些实施方案中，所述aav含有重组衣壳蛋白。
131.在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因可操作地连接至诱导肌肉和/或神经元细胞中所述转基因的表达的启动子。所述启动子可以是例如，mck启动子、结蛋白启动子、鸡β肌动蛋白启动子、cmv启动子、肌球蛋白轻链-2启动子、α肌动蛋白启动子、肌钙蛋白1启动子、na
/ca
2
交换体启动子、肌营养不良蛋白启动子、α7整联蛋白启动子、脑利钠肽启动子、α
no:3 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少97％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 97％、98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少98％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 98％、99％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3至少99％同一的核酸序列(例如，与seq id no:3 99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％同一的核酸序列)。在一些实施方案中，所述编码gaa的转基因具有与seq id no:3 100％同一的核酸序列。
136.在一些实施方案中，所述患者患有婴儿期发作性庞贝氏病。所述患者可为，例如，约一月龄至约一岁(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄、六月龄、七月龄、八月龄、九月龄、十月龄、十一月龄或十二月龄)。在一些实施方案中，所述患者为约一月龄至约六月龄(例如，约一月龄、两月龄、三月龄、四月龄、五月龄或六月龄)。
137.在一些实施方案中，在将所述aav载体施用于所述患者之前，所述患者表现出选自以下的症状：喂养困难、发育停滞、肌张力减退、进行性无力、呼吸窘迫、舌严重肥大和心肌增厚。
138.在一些实施方案中，所述患者患有迟发性庞贝氏病。例如，所述患者可表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约1％至约40％。
139.在一些实施方案中，所述患者先前未接受过gaa酶替代疗法。在一些实施方案中，所述患者先前已接受过gaa酶替代疗法。
140.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出的内源性gaa活性为未患庞贝氏病的相同性别和类似体重指数的人的所述内源性gaa活性的约50％至约200％。
141.在一些实施方案中，在向所述患者施用所述aav载体后，所述患者表现出骨骼肌、心肌和/或神经元组织中糖原的减少。
附图说明
142.图1a和1b是分别示出如下文的实施例1所述，用含有可操作地连接至肌肉肌酸激酶(mck)启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的小鼠的肌肉中酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)蛋白表达和酶活性水平的变化的图。
143.图2a、2b和2c是示出如下文的实施例1所述，用含有可操作地连接至mck启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的小鼠的肌肉中糖原含量的变化的图和代表性图像。
144.图3是示出如下文的实施例1所述，在用含有可操作地连接至mck启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的小鼠中，如通过连续握力测试测量的随时间推移的肌肉运动功能变化的图。
145.图4a和4b是示出如下文的实施例2所述，在用含有可操作地连接至mck启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物中丙氨酸转氨酶(alt)活性的变化的图。
146.图5a和5b是示出如下文的实施例2所述，在用含有可操作地连接至mck启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物中天冬氨酸转氨酶(ast)活性的变化的图。
147.图6a、6b和6c是示出如下文的实施例2所述，在用含有可操作地连接至mck启动子的人gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物(分别雄性、雌性和性别组合数据)中肌钙蛋白-i表达的变化的图。
148.图7是示出如下文的实施例2所述，用含有可操作地连接至mck启动子的食蟹猴gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物中肌钙蛋白-i表达的变化的图。
149.图8a和8b是示出如下文的实施例2所述，在用含有可操作地连接至mck启动子的gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物中脑利钠肽(bnp)表达的变化的图。
150.图9a和9b是示出如下文的实施例2所述，在用分别含有可操作地连接至mck启动子的人gaa或食蟹猴gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物的肌肉中，人或食蟹猴gaa蛋白表达的变化的图。
151.图10a和10b是示出如下文的实施例2所述，在用分别含有可操作地连接至mck启动子的人gaa或食蟹猴gaa转基因的aav2/8载体处理的非人灵长类动物的血清中，人或食蟹猴gaa蛋白表达的变化的图。
152.定义
153.如本文所用，术语“约”是指在所述值的上下5％以内的值。例如，如在本文所述的病毒载体的上下文中使用的“约1x10
13
vg/kg”包括高于或低于1x10
13
vg/kg的5％以内的量。此外，当在数值量列表的上下文中使用时，应理解当在数值量列表之前时术语“约”适用于所述列表中列举的每个单独的量。例如，“约1x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg或3x10
13
vg/kg”应解释为相当于单独叙述“约1x10
13
vg/kg”、“约2x10
13
vg/kg”和“约3x10
13
vg/kg”。
154.如本文在目标蛋白质如酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)的上下文中所使用，术语“活性”是指与所述蛋白质的野生型形式相关的生物学功能。例如，在酶的上下文中，术语“活性”是指蛋白质以产生相应化学反应的产物的方式实现底物转换的能力。可例如使用本领域已知的底物转换测定来检测并定量诸如gaa的酶的活性水平。
155.如本文所用，术语“施用(administering)”、“施用(administration)”等是指通过任何有效的途径直接给予患者治疗剂(例如，病毒载体)。示例性的施用途径在本文中进行了描述并且包括全身施用途径，如静脉内注射，以及直接向患者的中枢神经系统施用的途径，如通过鞘内注射或脑室内注射等。
156.如本文所用，“密码子优化”是指根据编码dna中的同义密码子(例如，编码相同氨基酸的密码子)的出现频率在不同物种中存在偏差的原理来修饰核酸序列的过程。这种密码子简并性允许相同的多肽由多种核苷酸序列编码。以这种方式修饰的序列在本文中称为“密码子优化的”。可对本说明书中描述的任何序列进行这一过程以增强表达或稳定性。可以诸如在例如美国专利号7,561,972、7,561,973和7,888,112中描述的方式进行密码子优化，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。可根据已知方法将围绕翻译起始位点的序列转化为共有kozak序列。参见例如，kozak等,nucleic acids res.15(20):8125-8148，其以引用的方式整体并入本文。可并入多个终止密码子。
157.如本文所用，术语“保守突变”、“保守取代”和“保守氨基酸取代”是指一个或多个氨基酸取代表现出相似物理化学性质(如极性、静电荷和空间体积)的一个或多个不同的氨基酸。以下表1中汇总20种天然存在的氨基酸中的每一种的这些性质。
158.表1.天然存在的氨基酸的代表性物理化学性质
[0159][0160][0161]
由此表应认识到，保守氨基酸家族包括(i)g、a、v、l和i；(ii)d和e；(iii)c、s和t；(iv)h、k和r；(v)n和q；以及(vi)f、y和w。因此，保守突变或取代是一个氨基酸取代同一氨基酸家族的成员的一种突变或取代(例如，ser取代thr或lys取代arg)。
[0162]
如本文所用，术语“剂量”是指在特定时刻施用于受试者以治疗病症或疾患，诸如治疗或改善本文所述的糖原贮积症(例如，庞贝氏病)的一种或多种症状的治疗剂(诸如本文所述的病毒载体)的量。如本文所定义的，如本文所述的治疗剂可在治疗期的过程中以单剂量或多剂量施用。在每种情况下，可使用治疗剂的一种或多种单位剂型(所述术语是指含有治疗剂的一种或多种离散组合物，它们共同构成所述剂的单剂量)来施用治疗剂。例如，可使用例如病毒载体的两个0.5x10
13
vg单位剂型来施用所述病毒载体的1x10
13
个载体基因
组(vg)的单剂量。
[0163]
如本文所用，术语“有效量”、“治疗有效量”等在关于治疗性组合物(如本文所述的载体构建体)使用时是指当施用于受试者(包括哺乳动物，例如人)时足以实现有益的或所需的结果，如临床结果的量。例如，在治疗糖原贮积症，如庞贝氏病的背景下，这些术语是指与未施用目标组合物的情况下所获得的应答相比，足以实现治疗应答的组合物的量。组合物(如本公开的载体构建体)的“有效量”、“治疗有效量”等还包括与对照相比，在受试者中产生有益的或所需的结果的量。
[0164]
如本文所用，术语“酶替代疗法”是指向患有遗传性功能丧失疾病的受试者(例如，哺乳动物受试者，如人)施用在所述受试者中天然地缺陷或缺乏的蛋白质。例如，在患有庞贝氏病的受试者的背景下，酶替代疗法是指向这样的受试者施用gaa蛋白。通常，酶替代疗法包括在受试者一生在多个剂量的过程中长期向受试者施用治疗性蛋白质。
[0165]
如本文所用，在基因的背景下，术语“表达(express)”和“表达(expression)”是指以下事件中的一个或多个：(1)从dna序列产生rna模板(例如，通过转录)；(2)rna转录物的加工(例如，通过剪接、编辑、5'帽形成和/或3
′
端加工)；(3)将rna翻译成多肽或蛋白质；以及(4)多肽或蛋白质的翻译后修饰。在编码蛋白质产物的基因的背景下，术语“基因表达”等与术语“蛋白质表达”等可互换使用。受试者中目标基因或蛋白质的表达可例如通过检测以下来进行评估：编码相应蛋白质的mrna的量或浓度的增加(如例如使用本文所述或本领域已知的rna检测程序，如定量聚合酶链反应(qpcr)和rna seq技术所评估的)、相应蛋白质的量或浓度的增加(如例如使用本文所述或本领域已知的蛋白质检测方法，如酶联免疫吸附测定(elisa)等所评估的)和/或从受试者获得的样品中相应蛋白质的活性的增加(例如，在酶的情况下，如使用本文所述或本领域已知的酶活性测定所评估的)。如本文所用，如果可在细胞中或在细胞所在的培养基中检测到上述事件中的一个或多个或全部，则认为所述细胞“表达”目标基因或蛋白质。例如，如果能够检测到(i)细胞或细胞群体产生相应的rna转录物，如mrna模板(例如，使用本文所述的rna检测程序)；(ii)rna转录物的加工(例如，剪接、编辑、5'帽形成和/或3'端加工，如使用本文所述的rna检测程序)；(iii)将rna模板翻译成蛋白质产物(例如，使用本文所述的蛋白质检测程序)；和/或(iv)蛋白质产物的翻译后修饰(例如，使用本文所述的蛋白质检测程序)，则认为目标基因或蛋白质由所述细胞或细胞群体“表达”。
[0166]
如本文所用，术语“可操作连接”是指第一分子连结到第二分子，其中所述分子的排列使得第一分子影响第二分子的功能。两个分子可为或可不为单个邻接分子的一部分且可为或可不为相邻的。例如，如果启动子调节细胞中目标可转录多核苷酸分子的转录，那么所述启动子可操作地连接至所述可转录多核苷酸分子。另外，如果转录调控元件的两个部分连结，使得一部分的转录激活功能不受另一部分的存在的不利影响，那么所述两个部分彼此可操作地连接。两个转录调控元件可借助接头核酸(例如，居间的非编码核酸)彼此可操作地连接或者可在不存在居间核苷酸的情况下彼此可操作地连接。
[0167]
相对于参考多核苷酸或多肽序列的“序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并且在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比之后，候选序列中与参考多核苷酸或多肽序列中的核酸或氨基酸同一的核酸或氨基酸的百分比。用于确定核酸或氨基酸序列同一性百分比的比对可以在本领域技术人员能力范围内的各种方式实现，例如，使用可公
开获得的计算机软件，诸如blast、blast-2或megalign软件。所属领域技术人员可确定适用于比对序列的参数，包括实现所比较序列的全长内的最大比对所需的任何算法。例如，可使用序列比较计算机程序blast生成序列同一性百分比值。作为说明，给定核酸或氨基酸序列a对于、与或针对给定核酸或氨基酸序列b的序列同一性百分比(其可替代地表述为给定核酸或氨基酸序列a对于、与或针对给定核酸或氨基酸序列b具有一定的序列同一性百分比)计算如下：
[0168]
100
×
(分数x/y)
[0169]
其中x是通过序列比对程序(例如，blast)在所述程序的a和b的比对中评分为相同匹配的核苷酸或氨基酸的数目，并且其中y是b中的核酸的总数。应当理解，在核酸或氨基酸序列a的长度不等于核酸或氨基酸序列b的长度的情况下，a对于b的序列同一性百分比将不等于b对于a的序列同一性百分比。
[0170]
如本文所用，术语“药物组合物”是指欲施用于受试者(如哺乳动物，例如人)以预防、治疗或控制侵袭或可能侵袭受试者的特定疾病或疾患的含有治疗性化合物的混合物。
[0171]
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指适于与受试者如哺乳动物(例如人)的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应和其它问题并发症并与合理效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
[0172]
如本文所用，术语“启动子”是指dna上由rna聚合酶结合的识别位点。聚合酶驱动转基因的转录。适用于与本文所述的组合物和方法一起使用的示例性启动子例如在sandelin等,nature reviews genetics 8:424(2007)中进行了描述，所述文献涉及核酸调控元件的公开内容以引用的方式并入本文。此外，术语“启动子”可指合成启动子，所述合成启动子是在生物系统中不天然存在的调控性dna序列。合成启动子含有与自然界中不存在的多核苷酸序列组合的天然存在的启动子的部分，并且可使用各种转基因、载体和靶细胞类型来进行优化以表达重组dna。
[0173]
如本文所用，如果直接向患者施用治疗剂或者如果向患者施用在体内加工或代谢以便内源性地产生治疗剂的物质，则认为所述治疗剂被“提供”给患者。例如，可通过直接施用编码治疗性蛋白质(例如，gaa)的核酸分子或通过施用在体内加工以产生所需核酸分子的物质(例如，病毒载体或细胞)来向患者，如患有本文所述的糖原贮积症的患者提供所述核酸分子。
[0174]
如本文所用，术语“样品”是指从受试者分离的样本(例如，血液、血液组分(例如血清或血浆)、尿液、唾液、羊水、脑脊髓液、组织(例如胎盘或皮肤)、胰液、绒毛膜绒毛样品或细胞)。受试者可以是例如患有本文所述疾病，如溶酶体贮积症(例如，庞贝氏病)的患者。
[0175]
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指接受如本文所述的特定疾病或疾患(如溶酶体贮积症，例如庞贝氏病)的治疗的生物体。受试者和患者的实例包括接受本文所述的疾病或疾患的治疗的哺乳动物，如人。
[0176]
如本文所用，术语“转录调控元件”是指至少部分地控制目标基因的转录的核酸。转录调控元件可包括控制或帮助控制基因转录的启动子、增强子和其它核酸(例如聚腺苷酸化信号)。转录调控元件的实例描述于例如goeddel,gene expression technology:methods in enzymology 185(academic press,san diego,ca,1990)中。
[0177]
如本文所用，术语“转基因”是指编码基因产物(例如，本文所述的基因产物)的重
组核酸(例如，dna或cdna)。基因产物可以是rna、肽或蛋白质。除基因产物的编码区之外，转基因还可包含或可操作地连接至一个或多个元件以促进或增强表达，如启动子、增强子、去稳定结构域、应答元件、报告元件、绝缘子元件、聚腺苷酸化信号和/或其它功能元件。本公开的实施方案可利用任何已知的合适启动子、增强子、去稳定结构域、应答元件、报告元件、绝缘子元件、聚腺苷酸化信号和/或其它功能元件。
[0178]
如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗，其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理变化或病症，如尤其溶酶体贮积症(如庞贝氏病)的进展。有益的或所需的临床结果包括但不限于症状减轻、疾病程度减小、疾病状态稳定(即不恶化)、疾病进展延迟或减缓、疾病状态改善或缓和、以及缓解(无论是部分缓解还是全部缓解)，无论是可检测的还是不可检测的。在溶酶体贮积症(如庞贝氏病)的上下文中，患者的治疗可表现在一个或多个可检测变化中，如gaa蛋白或编码gaa的核酸(例如，dna或rna，如mrna)的浓度增加或gaa活性增加(例如，增加1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或更多。gaa蛋白的浓度可使用本领域中已知的蛋白质检测测定(包括本文所述的elisa测定)来测定。编码gaa的核酸的浓度可使用本文所述的核酸检测测定(例如，rna seq测定)来测定。另外，患有溶酶体贮积症(如庞贝氏病)的患者的治疗可表现在患者的肌肉功能(例如，心肌或骨骼肌功能)的改善以及肌肉协调的改善。
[0179]
如本文所用，术语“载体”是指可用作将目标基因递送到细胞(例如，哺乳动物细胞，如人细胞)中、如用于复制和/或表达目的的媒介物的核酸，例如dna或rna。可与本文所述的组合物和方法结合使用的示例性载体是质粒、dna载体、rna载体、病毒粒子或其它合适的复制子(例如，病毒载体)。已开发出多种载体用于将编码外源蛋白质的多核苷酸递送至原核或真核细胞中。此类表达载体的实例公开于例如wo 1994/11026中，所述专利的公开内容以引用的方式并入本文中。本文所述的表达载体含有多核苷酸序列以及例如用于表达蛋白质和/或将这些多核苷酸序列整合到哺乳动物细胞的基因组中的另外序列元件。可用于表达本文所述的转基因的某些载体包括含有引导基因转录的调控序列(如启动子区和增强子区)的质粒。其它可用于表达转基因的载体含有增强这些基因的翻译速率或改善源自基因转录的mrna的稳定性或核输出的多核苷酸序列。这些序列元件包括例如5’和3’非翻译区、内部核糖体进入位点(ires)和聚腺苷酸化信号位点以引导表达载体上携带的基因的有效转录。本文所述的表达载体也可含有编码用于选择含有这种载体的细胞的标记物的多核苷酸。合适的标记物的实例包括编码对抗生素，如氨苄青霉素(ampicillin)、氯霉素(chloramphenicol)、卡那霉素(kanamycin)或诺尔斯菌素(nourseothricin)的抗性的基因。
[0180]
如本文在治疗性蛋白质(如gaa)的上下文中所使用，蛋白质名称的使用取决于上下文是指编码所述蛋白质或相应蛋白质产物的基因，如本领域技术人员将理解的那样。术语“gaa”包括gaa基因或蛋白质的野生型形式，以及保留野生型gaa蛋白的治疗活性的野生型gaa蛋白的变体(例如，剪接变体、截短、多联体和融合构建体等)，以及编码它们的核酸。此类变体的实例是与野生型gaa蛋白的氨基酸序列，如下文的seq id no:2具有至少70％序列同一性(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、
82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性或更高同一性)的蛋白质：
[0181]
mgvrhppcshrllavcalvslataallghillhdfllvprelsgsspvleethpahqqgasrpgprdaqahpgrpravptqcdvppnsrfdcapdkaitqeqceargccyipakqglqgaqmgqpwcffppsypsyklenlsssemgytatltrttptffpkdiltlrldvmmetenrlhftikdpanrryevpletphvhsrapsplysvefseepfgvivrrqldgrvllnttvaplffadqflqlstslpsqyitglaehlsplmlstswtritlwnrdlaptpganlygshpfylaledggsahgvfllnsnamdvvlqpspalswrstggildvyiflgpepksvvqqyldvvgypfmppywglgfhlcrwgysstaitrqvvenmtrahfpldvqwndldymdsrrdftfnkdgfrdfpamvqelhqggrrymmivdpaisssgpagsyrpydeglrrgvfitnetgqpligkvwpgstafpdftnptalawwedmvaefhdqvpfdgmwidmnepsnfirgsedgcpnnelenppyvpgvvggtlqaaticasshqflsthynlhnlyglteaiashralvkargtrpfvisrstfaghgryaghwtgdvwssweqlassvpeilqfnllgvplvgadvcgflgntseelcvrwtqlgafypfmrnhnsllslpqepysfsepaqqamrkaltlryallphlytlfhqahvagetvarplflefpkdsstwtvdhqllwgeallitpvlqagkaevtgyfplgtwydlqtvpvealgslppppaaprepaihsegqwvtlpapldtinvhlragyiiplqgpgltttesrqqpmalavaltkggeargelfwddgeslevlergaytqviflarnntivnelvrvtsegaglqlqkvtvlgvatapqqvlsngvpvsnftyspdtkvldicvsllmgeqflvswc(seq id no:2)
[0182]
类似地，如本文在转录调控元件的上下文中所使用，术语“mck启动子”是指野生型mck启动子，如野生型人或鼠mck启动子，以及变体(例如，含有一个或多个核酸残基的插入、缺失和/或取代的变体)，达到所述启动子保留诱导肌肉和/或神经元细胞中可操作连接的基因的表达的能力的程度。可与本公开的组合物和方法结合使用的示例性mck启动子显示在下文的seq idno:1中：
[0183]
ccactacgggtctaggctgcccatgtaaggaggcaaggcctggggacacccgagatgcctggttataattaacccagacatgtggctgcccccccccccccaacacctgctgcctgagcctcacccccaccccggtgcctgggtcttaggctctgtacaccatggaggagaagctcgctctaaaaataaccctgtccctggtggatcccctgcatgcccaatcaaggctgtgggggactgagggcaggctgtaacaggcttgggggccagggcttatacgtgcctgggactcccaaagtattactgttccatgttcccggcgaagggccagctgtcccccgccagctagactcagcacttagtttaggaaccagtgagcaagtcagcccttggggcagcccatacaaggccatggggctgggcaagctgcacgcctgggtccggggtgggcacggtgcccgggcaacgagctgaaagctcatctgctctcaggggcccctccctggggacagcccctcctggctagtcacaccctgtaggctcctctatataacccaggggcacaggggctgcccccgggtcac
[0184]
(seq id no:1)
具体实施方式
[0185]
本公开提供了可用于治疗糖原贮积症，特别是ii型糖原贮积症(也称为庞贝氏病)的组合物和方法。根据本文所述的组合物和方法，可向患有庞贝氏病的患者(例如，人类患者)施用含有编码酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)的转基因的病毒载体，如腺相关病毒(aav)载体。aav载体可以是例如假型化aav载体，如含有包装在来自aav8(aav2/8)或aav9(aav2/9)的衣壳蛋白内的aav2反向末端重复序列的aav载体。在一些实施方案中，转基因可操作地连接至转录调控元件，如诱导肌肉细胞和/或神经元细胞中的基因表达的启动子。可与本公开的组合物和方法结合使用的示例性启动子是肌肉肌酸激酶启动子、结蛋白启动子和cmv启动子等。
[0186]
本公开部分地基于以下发现：即特定剂量的含有gaa转基因的aav载体能够在患有庞贝氏病的患者中实现gaa表达和活性的治疗性增加，同时抑制毒性副作用。特别地，在约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg范围内的含有编码gaa的转基因的aav载体的剂量(例如，约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg，如约4x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg或1x10
14
vg/kg的剂量)可在患有庞贝氏病的患者中引起gaa表达和活性的有益增加，同时避免可能与gaa过表达或施用过量的病毒载体相关的毒性副作用。使用本公开的组合物和方法，aav载体可以足以增强患者的gaa表达并减少患者神经元和肌肉组织中糖原的细胞累积、而不会引起毒性副作用的量施用于患者。
[0187]
在一些实施方案中，aav载体以约1x10
13
个载体基因组(vg)/kg受试者体重(vg/kg)至约3x10
14
vg/kg的量(例如，以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg至约1x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg或1x10
14
vg/kg的量)施用于患者。
[0188]
以下章节提供了对产生上述有益性质的治疗剂和给药方案的描述。以下章节还描述了可与本公开的组合物和方法结合使用的各种转基因、转录调控元件和转导剂。
[0189]
治疗方法
[0190]
庞贝氏病
[0191]
庞贝氏病(也称为ii型糖原贮积病或gsd ii)是由缺乏溶酶体酶gaa引起。所述疾病是其中gaa缺乏最终引起所有组织、尤其横纹肌细胞中的糖原累积的先天性代谢错误。另外，糖原累积在中枢神经系统内的作用和糖原累积对骨骼肌功能的作用已有记载。
[0192]
已知此病症的三种临床形式：小儿庞贝氏病、青少年庞贝氏病和成人庞贝氏病。小儿庞贝氏病在出生后不久发作且呈现进行性肌无力和心力衰竭。小儿形式的庞贝氏病的特征还在于心肌病的快速发展，且患者通常显示肌病和神经病变，导致通常在生命的第一年死亡。成人和青少年患者的症状在生命后期出现，且主要涉及骨骼肌和神经元。展现此形式庞贝氏病的患者最终因呼吸功能不全而死亡。患者可能异常地存活超过60年。所述疾病的严重程度与残余酸性α-葡萄糖苷酶活性相关，所述活性在所述疾病的迟发形式中为正常活性的10％-20％且在所述疾病的早发形式中小于正常活性的2％。
[0193]
人酸性α-葡萄糖苷酶
[0194]
示例性野生型gaa的氨基酸序列示于下文的seq id no:2中：
[0195]
mgvrhppcshrllavcalvslataallghillhdfllvprelsgsspvleethpahqqgasrpgprdaqahpgrpravptqcdvppnsrfdcapdkaitqeqceargccyipakqglqgaqmgqpwcffppsypsyklenlsssemgytatltrttptffpkdiltlrldvmmetenrlhftikdpanrryevpletphvhsrapsplysvefseepfgvivrrqldgrvllnttvaplffadqflqlstslpsqyitglaehlsplmlstswtritlwnrdlaptpganlygshpfylaledggsahgvfllnsnamdvvlqpspalswrstggildvyiflgpepksvvqqyldvvgypfmppywglgfhlcrwgysstaitrqvvenmtrahfpldvqwndldymdsrrdftfnkdgfrdfpamvqelhqggrrymmivdpaisssgpagsyrpydeglrrgvfitnetgqpligkvwpgstafpdftnptalawwedmvaefhdqvpfdgmwidmnepsnfirgsedgcpnnelenppyvpgvvggtlqaaticasshqflsthynlhnlyglteaiashralvkargtrpfvisrstfaghgryaghwtgdvwssweqlassvpeilqfnllgvplvgadvcgflgntseelcvrwtqlgafypfmrnhnsllslpqepysfsepaqqamrkaltlryallphlytlfhqahvagetvarplflefpkdsstwtvdhqllwgeallitpvlqagkaevtgyfplgtwydlqtvpvealgslppppaaprepaihsegqwvtlpapldtinvhlragyiiplqgpgltttesrqq
pmalavaltkggeargelfwddgeslevlergaytqviflarnntivnelvrvtsegaglqlqkvtvlgvatapqqvlsngvpvsnftyspdtkvldicvsllmgeqflvswc
[0196]
(seq id no:2)
[0197]
可与本文所述的组合物和方法结合使用的编码gaa多肽的示例性基因包括编码seq id no:2中所示的野生型gaa蛋白的基因，以及与seq id no:2的氨基酸序列至少85％同一(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％同一)的功能性gaa酶。可与本文所述的组合物和方法结合使用的编码gaa多肽的基因还包括相对于seq id no:2中所示的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸取代的那些，如具有一个或多个保守氨基酸取代的那些。例如，可与本文所述的组合物和方法结合使用的gaa多肽包括相对于seq id no:2的氨基酸序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25个或更多个保守氨基酸取代的那些。
[0198]
例如，在本公开的一些实施方案中，编码gaa多肽的基因具有与seq id no:3的核酸序列至少85％同一(例如，85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％同一)的核酸序列。seq id no:3的核酸序列编码具有以上seq id no:2的氨基酸序列的gaa多肽。seq id no:3的核酸序列是如下：
[0199]
atgggggtgaggcaccccccctgcagccacaggctgctggctgtgtgtgccctggtcagcctggccactgctgccctgctgggccacatcctgctgcatgacttcctgctggtgcccagagagctgtctggcagcagccctgtgctggaggaaacccaccctgcccaccagcagggggccagcaggcctggccccagggatgcccaggcccaccctggcaggcccagggctgtgcccacccagtgtgatgtgccccccaacagcaggtttgactgtgcccctgacaaggccatcacccaggagcagtgtgaggccaggggctgctgctacatccctgccaagcagggcctgcagggggcccagatgggccagccctggtgcttcttccccccctcatacccctcctacaagctggagaacctgagcagctctgagatgggctacactgccaccctgaccaggaccaccccgacgttcttccccaaggacatcctgaccctgaggctggatgtgatgatggagactgagaacaggctgcacttcaccatcaaggaccctgccaacaggagatatgaggtgcccctggaaaccccccatgtgcacagcagggcccccagccccctgtactctgtggagttctctgaggagccctttggggtgattgtgaggaggcagctggatggcagggtgctgctgaacaccactgtggcccccctgttctttgctgaccagttcctgcagctgagcaccagcctgcccagccagtacatcactggcctggctgagcacctgagccccctgatgctgagcaccagctggaccaggatcaccctgtggaacagggacctggcccccacccctggggccaacctgtatggcagccaccccttctacctggccctggaggatgggggctctgcccatggggtgttcctgctgaacagcaatgccatggatgtggtgctgcagcccagccctgccctgagctggaggagcactgggggcatcctggatgtgtacatcttcctgggccctgagcccaagtctgtggtgcagcagtacctggatgtggtgggctaccccttcatgcccccctactggggcctgggcttccacctgtgcagatggggctacagcagcactgccatcaccaggcaggtggtggagaacatgaccagggcccacttccccctggatgtgcagtggaatgacctggactacatggacagcaggagggacttcaccttcaacaaggatggcttcagggacttccctgccatggtgcaggagctgcaccaggggggcaggagatacatgatgattgtggaccctgccatcagcagctctggccctgctggcagctacaggccctatgatgagggcctgaggaggggggtgttcatcaccaatgagactggccagcccctgattggcaaggtctggcctggcagcactgccttccctgacttcaccaaccccactgccctggcctggtgggaggacatggtggctgagttccatgaccaggtgccctttgatggcatgtggattgacatgaatgagcccagcaacttcatcaggggctctgaggatggctgccccaacaatgagctggagaaccccccctatgtgcctggggtggtggggggcaccctgcaggctgccaccatctgtgccagcagccaccagttcctgagcacccactacaacctgcacaacctgtatggcctgactgaggccattgccagccacagggccctggtgaaggccaggggcaccaggccctttgtgatcagcaggagcacctttgctggcc
atggcagatatgctggccactggactggggatgtgtggagcagctgggagcagctggccagctctgtgcctgagatcctgcagttcaacctgctgggggtgcccctggtgggggctgatgtgtgtggcttcctgggcaacacctctgaggagctgtgtgtgaggtggacccagctgggggccttctaccccttcatgaggaaccacaacagcctgctgagcctgccccaggagccctacagcttctctgagcctgcccagcaggccatgaggaaggccctgaccctgagatatgccctgctgccccacctgtacaccctgttccaccaggcccatgtggctggggagactgtggccaggcccctgttcctggagttccccaaggacagcagcacctggactgtggaccaccagctgctgtggggggaggccctgctgatcacccctgtgctgcaagctggcaaggctgaggtgactggctacttccccctgggcacttggtatgacctgcagactgtgcctgtggaggccctgggcagcctgccccccccccctgctgccccacgggagcctgccatccactctgagggccagtgggtgaccctgcctgcccccctggacaccatcaatgtgcacctgagggctggctacatcatccccctgcaaggccctggcctgaccaccactgagagcaggcagcagcccatggccctggctgtggccctgaccaaggggggggaggccaggggggagctgttctgggatgatggggagagcctggaggtgctggagaggggggcctacacccaggtgatcttcctggccaggaacaacaccattgtgaatgagctggtgagggtgacctctgagggggctggcctgcagctgcagaaggtcactgtgctgggggtggccactgccccccagcaggtgctgagcaatggggtgcctgtgagcaacttcacctacagccctgacaccaaggtgctggacatctgtgtgagcctgctgatgggggagcagttcctggtcagctggtgctga
[0200]
(seq id no:3)
[0201]
本文所述的转录调控元件能够可操作地连接至转基因，如在溶酶体贮积病患者(如患有庞贝氏病的那些患者)中缺乏的gaa。可将含有在本文所述的调控元件的转录控制下的溶酶体酶的构建体并入载体(或本文所述的其它转染剂)中并施用于患者以治疗溶酶体贮积症。有利地，本文所述的含有转基因的治疗剂(例如，病毒载体)可促进编码缺乏的溶酶体酶(例如gaa)的基因在受所述疾病侵袭的那些细胞(如肌细胞和中枢神经系统细胞)中的转录。此外，本文所述的治疗剂赋予避免可能与gaa过表达或施用大量编码gaa的病毒载体相关的毒性的额外益处。本文所述的病毒载体和给药方案的有利性质进一步详细报告于下文实施例1中。
[0202]
给药方案
[0203]
涉及aav-gaa载体的给药方案
[0204]
使用本公开的组合物和方法，可以约1x10
13
vg/kg至约5x10
14
vg/kg的量(例如，以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量)向患有糖原贮积症(例如，庞贝氏病)的患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/
kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg或3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。以这样的量向所述患者施用所述载体可实现使所述患者中的gaa表达增加(例如)至野生型水平的50％或200％以内而不会引起毒性副作用的有益效果。
[0205]
例如，在一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量施用于所述患者。
[0206]
在一些实施方案中，所述aav载体以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、
6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0207]
在一些实施方案中，所述aav载体以约4x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0208]
在一些实施方案中，所述aav载体以约5x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0209]
在一些实施方案中，所述aav载体以约6x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/
kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0210]
在一些实施方案中，所述aav载体以约7x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0211]
在一些实施方案中，所述aav载体以约8x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0212]
在一些实施方案中，所述aav载体以约9x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0213]
在一些实施方案中，所述aav载体以约1x10
14
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0214]
在一些实施方案中，所述aav载体以6x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以7x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以8x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以9x10
13
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.1x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，
所述aav载体以1.2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.4x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.5x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.6x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.7x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.8x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以1.9x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。
[0215]
本文所述的aav载体可以含有指定量的单剂量施用于患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为指定量的两个或更多个剂量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以一起总计为指定量的两个至十个剂量(例如，以一起总计为指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为指定量的两个、三个或四个剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以一起总计为指定量的两个剂量施用于所述患者。
[0216]
在一些实施方案中，一起总计为指定量的aav载体的两个或更多个剂量彼此相隔例如一年或更长时间。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约12个月内(例如，彼此在约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周、48周、49周、50周、51周或52周内)施用于所述患者。例如，在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约1周至约48周内(例如，彼此在约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周、44周、45周、46周、47周或48周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约2周至约44周内(例如，彼此在约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周、40周、41周、42周、43周或44周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约3周至约40周内(例如，彼此在约3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周、36周、37周、38周、39周或40周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约4周至约36周内(例如，彼此在约4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周、32周、33周、34周、35周或36周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约5周至约32周内(例如，彼此在约5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周、24周、25周、26周、27周、28周、29周、30周、31周或32周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约6周至约24周内(例如，彼此在约6周、7周、8周、9周、10周、11周、12
周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周或24周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约12周至约20周内(例如，彼此在约12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周或20周内)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述两个或更多个剂量彼此在约13周、14周、15周、16周、17周、18周或19周内施用于所述患者。
[0217]
在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有指定量的两个或更多个剂量施用于所述患者。例如，所述aav载体可以各自单独含有指定量的两个至十个剂量(例如，以各自单独含有指定量的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量)施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有指定量的两个、三个或四个剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以各自单独含有指定量的两个剂量施用于所述患者。
[0218]
涉及实现与aav2/8-mck-gaa类似的gaa表达水平的剂的给药方案
[0219]
使用本公开的组合物和方法，可以足以刺激在向相同性别和类似体重指数的人类受试者施用含有在mck启动子控制下的gaa转基因的aav2/8载体时观察到的gaa表达的量向患有糖原贮积症(例如，庞贝氏病)的人类患者施用促进gaa表达的剂。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg或3x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0220]
例如，在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量
施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0221]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约3x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、
9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0222]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约4x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0223]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约5x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0224]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约6x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、
6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0225]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约7x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0226]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约8x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0227]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约9x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0228]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用
于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
14
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0229]
在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约6x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约7x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约8x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约9x10
13
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.1x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.3x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.4x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.5x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.6x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的
人类受试者中以约1.7x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.8x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1.9x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0230]
在一些实施方案中，所述剂以单剂量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述剂以两个或更多个剂量施用于所述患者。
[0231]
用于将外源核酸递送至靶细胞的方法
[0232]
转染技术
[0233]
可用于将转基因(如本文所述的gaa转基因)引入靶细胞中的技术在本领域中是已知的。例如，可使用电穿孔通过将静电势施加至目标细胞而对哺乳动物细胞(例如，人靶细胞)进行透化。以此方式经受外部电场的哺乳动物细胞(如人细胞)随后易于摄取外源核酸。哺乳动物细胞的电穿孔详细描述于例如chu等,nucleic acids research 15:1311(1987)中，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文。类似技术nucleofection
tm
利用施加的电场，以刺激外源多核苷酸摄取到真核细胞的核中。nucleofection
tm
和可用于进行此技术的方案详细描述于，例如，distler等,experimental dermatology 14:315(2005)以及us 2010/0317114中，所述文献各自的公开内容以引用的方式并入本文。
[0234]
可用于转染靶细胞的其它技术包括挤压穿孔方法。此技术诱导细胞的快速机械变形，以刺激通过响应于所施加的应力而形成的膜孔摄取外源dna。此技术的优点在于，载体不是将核酸递送到细胞(诸如人靶细胞)中所必需的。挤压-穿孔详细描述于，例如，sharei等,journal of visualized experiments 81:e50980(2013)中，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文。
[0235]
脂质转染代表可用于转染靶细胞的另一技术。此方法涉及将核酸负载到脂质体中，所述脂质体通常具有朝向脂质体外部的阳离子型官能团(如季胺或质子化胺)。这由于细胞膜的阴离子性质而促进脂质体与细胞之间的静电相互作用，最终引起外源核酸的摄取，例如通过脂质体与细胞膜的直接融合或通过复合物的胞吞作用。脂质转染详细描述于例如美国专利号7,442,386中，所述专利的公开内容以引用的方式并入本文中。利用与细胞膜的离子相互作用来引起外来核酸摄取的类似技术包括使细胞与阳离子聚合物-核酸复合物接触。与多核苷酸缔合以赋予有利于与细胞膜相互作用的正电荷的示例性阳离子型分子是激活的树枝状聚合物(描述于例如dennig,topics in current chemistry 228:227(2003)中，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文)和二乙基氨基乙基(deae)-葡聚糖，使用所述二乙基氨基乙基(deae)-葡聚糖作为转染剂详细描述于例如gulick等，current protocols in molecular biology 40:i:9.2:9.2.1(1997)中，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文。磁珠是可用于以温和且有效的方式转染靶细胞的另一工具，
这是因为此方法利用施加的磁场来引导核酸的摄取。此技术详细描述于例如us 2010/0227406中，所述专利的公开内容以引用的方式并入本文。
[0236]
另一可用于诱导靶细胞对外源核酸的摄取的工具是激光转染(laserfection)，所述技术涉及将细胞暴露于特定波长的电磁辐射以温和地对细胞进行透化并允许多核苷酸穿透细胞膜。此技术详细描述于例如rhodes等，methods in cell biology 82:309(2007)中，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0237]
微囊泡代表可用于根据本文所述的方法修饰靶细胞基因组的另一潜在媒介物。例如，可使用通过共过表达糖蛋白vsv-g与例如基因组修饰蛋白(如核酸酶)引起的微囊泡将蛋白质有效地递送到细胞中，随后催化内源多核苷酸序列的位点特异性裂解以制备用于共价并入目标多核苷酸(如基因或调控序列)的细胞的基因组。使用此类囊泡(也称为gesicle)进行真核细胞的遗传修饰详细描述于例如quinn等，genetic modification of target cells by direct delivery of active protein[摘要].在：methylation changes in early embryonic genes in cancer[摘要]中，在：美国基因与细胞治疗学会第18届年会记录(proceedings of the 18th annual meeting of the american society of gene and cell therapy)；2015年5月13日,摘要编号122中。
[0238]
通过基因编辑技术并入靶基因
[0239]
除上述工具外，已开发出可用于将目标基因并入靶细胞(如人细胞)中的多种工具。可用于将编码靶基因的多核苷酸并入靶细胞中的一种此类方法涉及使用转座子。转座子是编码转座酶且含有两侧为5’和3’切除位点的目标多核苷酸序列或基因的多核苷酸。一旦转座子递送到细胞中，转座酶基因的表达便立即开始并产生从转座子裂解目标基因的活性酶。此活性通过转座酶对转座子切除位点的位点特异性识别来介导。在一些情况下，这些切除位点可以是末端重复序列或反向末端重复序列。一旦从转座子切除，目标基因便立即可通过存在于细胞核基因组内的相似切除位点的转座酶催化的裂解整合到哺乳动物细胞的基因组中。这允许目标基因在互补切除位点插入到裂解的核dna中，且将目标基因连结到哺乳动物细胞基因组的dna的磷酸二酯键的后续共价连接完成并入过程。在某些情况下，转座子可以是逆转录转座子，使得编码靶基因的基因首先转录成rna产物且然后在并入哺乳动物细胞基因组中之前逆转录成dna。示例性转座子系统是piggybac转座子(详细描述于例如wo 2010/085699中)和睡美人转座子(详细描述于例如us 2005/0112764中)，所述专利各自涉及转座子用于基因递送到目标细胞的用途的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0240]
将靶基因整合到靶细胞基因组中的另一工具是成簇规则间隔的短回文重复序列(crispr)/cas系统，所述系统最初进化为细菌和古菌抵抗病毒感染的适应性防御机制。crispr/cas系统包括质粒dna内的回文重复序列和相关cas9核酸酶。此dna和蛋白质系综通过首先将外来dna并入crispr基因座中来引导靶序列的位点特异性dna裂解。含有这些外来序列和crispr基因座的重复序列-间隔区元件的多核苷酸进而在宿主细胞中转录以产生向导rna，所述向导rna随后可与靶序列退火并使cas9核酸酶定位于此位点。以此方式，可在外来多核苷酸中引起高位点特异性cas9介导的dna裂解，这是因为使cas9紧密靠近靶dna分子的相互作用是由rna:dna杂交来管控。因此，可设计crispr/cas系统以裂解任何目标靶dna分子。已利用此技术来编辑真核基因组(hwang等，nature biotechnology 31:227(2013))且可用作位点特异性编辑靶细胞基因组的有效方式以在并入编码靶基因的基因之前裂解
dna。使用crispr/cas调节基因表达已描述于例如美国专利号8,697,359中，所述专利涉及使用crispr/cas系统进行基因组编辑的公开内容以引用的方式并入本文中。在将目标基因并入靶细胞中之前用于位点特异性裂解基因组dna的替代性方法包括使用锌指核酸酶(zfn)和转录激活因子样效应物核酸酶(talen)。与crispr/cas系统不同，这些酶不含用来定位于特定靶序列的向导多核苷酸。而靶特异性由这些酶内的dna结合结构域控制。zfn和talen在基因组编辑应用中的用途描述于例如urnov等,nature reviews genetics 11:636(2010)；和joung等,nature reviews molecular cell biology 14:49(2013)中，所述文献各自涉及用于基因组编辑的组合物和方法的公开内容以引用的方式并入本文。
[0241]
可用于将编码靶基因的多核苷酸并入靶细胞基因组中的其它基因组编辑技术包括使用可被合理设计以位点特异性裂解基因组dna的arcus
tm
大范围核酸酶(meganuclease)。根据已对此类酶建立的所定义的结构-活性关系，使用这些酶将编码靶基因的基因并入哺乳动物细胞的基因组中是有利的。单链大范围核酸酶可在某些氨基酸位置经修饰以产生在所需位置选择性裂解dna的核酸酶，从而使得靶基因位点特异性并入靶细胞的核dna中。这些单链核酸酶已广泛描述于例如美国专利号8,021,867和us 8,445,251中，所述专利各自涉及用于基因组编辑的组合物和方法的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0242]
用于将外源核酸递送到靶细胞的载体
[0243]
用于核酸递送的病毒载体
[0244]
病毒基因组提供可用于将目标基因有效递送到靶细胞(例如哺乳动物细胞，如人细胞)基因组中的丰富载体源。病毒基因组是尤其可用于基因递送的载体，这是因为含于此类基因组内的多核苷酸通常通过一般化或专门的转导并入靶细胞的基因组中。这些过程作为天然病毒复制周期的一部分进行，且不需要添加蛋白质或试剂来诱导基因整合。病毒载体的实例包括aav、逆转录病毒、腺病毒(例如ad5、ad26、ad34、ad35和ad48)、细小病毒(例如腺相关病毒)、冠状病毒、负链rna病毒如正粘病毒(例如流感病毒)、弹状病毒(例如狂犬病病毒和水疱性口炎病毒)、副粘病毒(例如麻疹病毒和仙台(sendai)病毒)、正链rna病毒(例如微小核糖核酸病毒和甲病毒)和双链dna病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如1型和2型单纯疱疹病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barr virus)、巨细胞病毒)和痘病毒(例如牛痘、改良型安卡拉牛痘(mva)、鸡痘和金丝雀痘)。可用于递送编码本发明的抗体轻链和重链或抗体片段的多核苷酸的其它病毒包括例如诺沃克病毒(norwalk virus)、披膜病毒(togavirus)、黄病毒、呼肠孤病毒(reovirus)、乳多泡病毒、嗜肝dna病毒和肝炎病毒。逆转录病毒的实例包括：禽白血病肉瘤病毒、哺乳动物c型病毒、b型病毒、d型病毒、htlv-blv群、慢病毒、泡沫病毒(coffin,j.m.,retroviridae:the viruses and their replication,fundamental virology，第3版，b.n.fields等编，lippincott-raven publishers,philadelphia,1996)。其它实例包括鼠类白血病病毒、鼠类肉瘤病毒、小鼠乳房肿瘤病毒、牛白血病病毒、猫白血病病毒、猫肉瘤病毒、禽白血病病毒、人t细胞白血病病毒、狒狒内源病毒、长臂猿白血病病毒、梅森-菲舍(mason pfizer)猴病毒、猿猴免疫缺陷病毒、猿猴肉瘤病毒、劳斯肉瘤病毒(rous sarcoma virus)和慢病毒。载体的其它实例描述于例如美国专利号5,801,030中，所述专利涉及用于基因疗法的病毒载体的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0245]
用于核酸递送的aav载体
[0246]
在一些实施方案中，将本文所述的组合物和方法的核酸并入raav载体和/或病毒粒子中以促进所述核酸引入细胞中。可用于本发明的raav载体是重组核酸构建体，所述重组核酸构建体包含(1)待表达的转基因(例如编码gaa蛋白的多核苷酸)和(2)促进异源基因的整合和表达的病毒核酸。病毒核酸可包括aav的将dna顺式复制和包装(例如功能性itr)到病毒粒子中所需的那些序列。在典型应用中，转基因编码gaa，这可用于校正患有溶酶体贮积症(如庞贝氏病)的患者中的gaa缺乏。此类raav载体还可含有标记物或报告基因。有用的raav载体具有一个或多个整体或部分缺失的aav wt基因，但保留功能性侧接itr序列。aav itr可具有适于特定应用的任一血清型(例如源自血清型2)。使用raav载体的方法描述于例如tal等，j.biomed.sci.7:279-291(2000)以及monahan和samulski,gene delivery 7:24-30(2000)中，所述文献各自涉及用于基因递送的aav载体的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0247]
本文所述的核酸和载体可并入raav病毒粒子中以促进核酸或载体引入细胞中。aav的衣壳蛋白构成病毒粒子的外部非核酸部分且由aav cap基因编码。cap基因编码病毒粒子组装所需的三种病毒外壳蛋白vp1、vp2和vp3。raav病毒粒子的构建已描述于例如美国专利号5,173,414；5,139,941；5,863,541；5,869,305；6,057,152；和6,376,237；以及rabinowitz等，j.virol.76:791-801(2002)和bowles等，j.virol.77:423-432(2003)中，所述文献各自涉及用于基因递送的aav载体的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0248]
可与本文所述的组合物和方法结合使用的raav病毒粒子包括源自多种aav血清型(包括aav 1、aav 2、aav 3、aav 4、aav 5、aav 6、aav7、aav 8和aav 9)的那些病毒粒子。对于靶向肌细胞，包括至少一种血清型1衣壳蛋白的raav病毒粒子可为尤其有用的。包括至少一种血清型6衣壳蛋白的raav病毒粒子也可为尤其有用的，这是因为血清型6衣壳蛋白的结构类似于血清型1衣壳蛋白，且因此预期也使gaa在肌细胞中高表达。还发现raav血清型9是肌细胞的有效转导物。不同血清型的aav载体和aav蛋白的构建和使用描述于例如chao等，mol.ther.2:619-623(2000)；davidson等，proc.natl.acad.sci.usa 97:3428-3432(2000)；xiao等，j.virol.72:2224-2232(1998)；halbert等，j.virol.74:1524-1532(2000)；halbert等，j.virol.75:6615-6624(2001)；和auricchio等，hum.molec.genet.10:3075-3081(2001)中，所述文献各自涉及用于基因递送的aav载体的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0249]
假型化raav载体也可与本文所述的组合物和方法结合使用。假型化载体包括给定血清型(例如aav9)的aav载体，所述载体因衣壳基因源自除给定血清型之外的血清型(例如aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8等)而假型化。例如，代表性假型化载体是编码治疗性蛋白的aav8载体或aav9载体，所述载体因衣壳基因源自aav血清型2而假型化。涉及假型化raav病毒粒子的构建和使用的技术为本领域中已知且描述于例如duan等，j.virol.75:7662-7671(2001)；halbert等，j.virol.74:1524-1532(2000)；zolotukhin等，methods,28:158-167(2002)；和auricchio等，hum.molec.genet.,10:3075-3081(2001)中。
[0250]
可使用在病毒粒子衣壳内具有突变的aav病毒粒子比非突变衣壳病毒粒子更有效地感染特定细胞类型。例如，适宜aav突变体可具有促进aav靶向特定细胞类型的配体插入突变。aav衣壳突变体(包括插入突变体、丙氨酸筛选突变体和表位标签突变体)的构建和表
征描述于wu等，j.virol.74:8635-45(2000)中。可用于本发明方法中的其它raav病毒粒子包括通过病毒的分子育种以及通过外显子改组生成的那些衣壳杂合体。参见例如soong等，nat.genet.,25:436-439(2000)以及kolman和stemmer,nat.biotechnol.19:423-428(2001)。
[0251]
药物组合物和施用途径
[0252]
本文所述的治疗剂可含有转基因(如编码溶酶体酶(例如gaa)的转基因)并且可并入媒介物中以施用于患者(如患有溶酶体贮积症(例如，庞贝氏病)的人类患者)中。含有含可操作连接至治疗性转基因的本文所述转录调控元件的载体(如病毒载体)的药物组合物可使用本领域中已知的方法来制备。例如，此类组合物可使用例如生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(remington's pharmaceutical science第16版，osol,a.编(1980)；以引用的方式并入本文中)并以所需形式、例如以冻干制剂或水溶液形式来制备。
[0253]
含有可操作连接至治疗性转基因的转录调控元件的病毒载体(如aav载体和本文所述的其它载体)可通过多种施用途径施用于患者(例如人类患者)。施用途径可随着例如疾病的发作和严重程度而变化，且可包括例如真皮内施用、透皮施用、肠胃外施用、静脉内施用、肌内施用、鼻内施用、皮下施用、经皮施用、气管内施用、腹膜内施用、动脉内施用、血管内施用、吸入、灌注、灌洗和口服施用。血管内施用包括递送到患者的血管系统中。在一些实施方案中，施用是施用于视为静脉的血管中(静脉内)，且在一些施用中，施用是施用于视为动脉的血管中(动脉内)。静脉包括但不限于颈内静脉、外周静脉、冠状静脉、肝静脉、门静脉、大隐静脉、肺静脉、上腔静脉、下腔静脉、胃静脉、脾静脉、肠系膜下静脉、肠系膜上静脉、头静脉和/或股静脉。动脉包括但不限于冠状动脉、肺动脉、肱动脉、颈内动脉、主动脉弓、股动脉、外周动脉和/或睫动脉。预期递送可通过或到达微动脉或毛细血管。
[0254]
本文所述的核酸和病毒载体的混合物可在适当地与一种或多种赋形剂、载体或稀释剂混合的水中制备。分散液也可于甘油、液体聚乙二醇和它们的混合物以及于油中制备。在正常储存和使用条件下，这些制品可含有防腐剂以防止微生物生长。适于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末(描述于us 5,466,468中，其公开内容以引用的方式并入本文)。在任一情况下，制剂可为无菌的且可为流体，达到存在容易可注射性的程度。制剂在制造和储存条件下可以是稳定的并且可在防止微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用的条件下保存。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和/或植物油的溶剂或分散介质。可例如通过使用包衣诸如卵磷脂、通过在分散液的情况下维持所需要的粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可通过多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等)来预防微生物的作用。在许多情况下，将优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。延长可注射组合物的吸收可通过在组合物中使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来达成。
[0255]
例如，如果需要，可将含有本文所述的药物组合物的溶液适当地缓冲，并且首先用足够的盐水或葡萄糖使液体稀释剂等渗。这些特定的水溶液尤其适用于静脉内、肌内、皮下和腹膜内施用。就这一点而言，可采用的无菌水性介质将为本领域技术人员根据本公开内容所已知的。例如，可将一个剂量溶解于1ml等渗nacl溶液中并且添加到1000ml皮下输液流体中或在建议的输注部位注射。根据所治疗受试者的疾患，将必要地出现一定的剂量变化。
在任一情况中，负责施用的人将决定适用于个别受试者的剂量。此外，对于人施用，制剂可满足fda生物制剂标准办公室(fda office of biologics standards)要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准。
[0256]
实施例
[0257]
提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供本文所述的组合物和方法可如何使用、制备和评价的描述，并且旨在纯粹是对本发明的举例说明且不旨在限制发明人所认定的发明范围。
[0258]
实施例1.在庞贝氏病小鼠模型中建立酸性α-葡萄糖苷酶的治疗性表达、同时避免毒性副作用
[0259]
目标
[0260]
庞贝氏病(ii型糖原贮积病，酸性麦芽糖酶缺乏症)是一种由溶酶体酶酸性α-葡萄糖苷酶(gaa)的缺乏引起的常染色体隐性病症。gaa在溶酶体内将糖原降解为葡萄糖。gaa活性严重降低或缺失导致溶酶体和细胞质糖原累积。这最终可能导致受侵袭更严重的个体因心脏和呼吸功能受损而死亡。
[0261]
本研究的目的是评价含有可操作地连接至肌肉肌酸激酶(mck)启动子的gaa转基因的aav2/8载体(本文称为“aav2/8-mck-gaa”)在成年gaa-/-小鼠中给药后12周时间段的药效学反应和潜在毒性。
[0262]
材料和方法
[0263]
72只gaa-/-小鼠和18只野生型同窝仔鼠参加了研究。向每组18只小鼠(雄性和雌性各9只；10-12周龄)施用单次静脉内注射(通过尾静脉)媒介物或0.3x10
14
、1.0x10
14
或3.0x10
14
vg/kg剂量的aav2/8-mck-gaa(raav8-emck-hgaa)。其中，群组-1动物(每个剂量组5只雄性和5只雌性加媒介物对照)被指定用于安全性评价。
[0264]
每天监测动物的一般健康状况；每周进行详细的临床观察结果、体重和功能评估。在给药后第12周或第13周对动物实施安乐死以进行临床病理学和组织病理学评价。测定了临床化学、血液学和抗gaa抗体，并收集了一组完整的组织用于组织病理学评价
[0265]
结果
[0266]
死亡率
[0267]
所有野生型和aav2/8-mck-gaa处理的动物都存活到研究终止。第2组中的两只媒介物处理的gaa-/-小鼠(1只雌性，2506和1只雄性，2005)分别在第35天和第66天被发现死亡，并被送去进行全面组织病理学检查。
[0268]
在12周研究过程期间，所有动物均显示体重均的稳定增加。
[0269]
剂量保证和生物相容性
[0270]
进行剂量保证分析，以通过评价载体基因组滴度和来自流过液的测试物品的衣壳滴度来确定用于输注aav2/8-mck-gaa的材料是否不管怎样都会损害本研究中的药物递送和暴露。
[0271]
通过将药物产品aav2/8-mck-gaa保持在输注设备内持续0、3或6小时来模拟潜在暴露的最大时间而进行剂量保证。来自研究的结果表明，随时间推移，药物产品暴露于施用装置对所述产品的浓度没有显著影响。这些数据证明，aav2/8-mck-gaa药物产品对暴露的装置表面具有最小结合亲和力。
[0272]
临床病理学
[0273]
相对于野生型小鼠，媒介物处理的庞贝氏病(gaa-/-)小鼠的天冬氨酸转氨酶(ast)增加最少。ast升高可以是肌肉损伤的指示，其是gaa-/-小鼠的表型特征。在gaa-/-小鼠中以0.3x10
14
、1.0x10
14
或3.0x10
14
vg/kg的剂量单次静脉内注射aav2/8-mck-gaa且3个月观察期后，ast的增加不太明显，在0.3x10
14
vg/kg剂量组中最显著。在所有aav2/8-mck-gaa剂量水平下，相对于野生型对照小鼠，经处理的gaa-/-小鼠中ast的这种降低或正常化被认为是测试物品的积极作用。
[0274]
由于所获得的样品数量有限，所以无法从血液学数据中做出明确的解释。
[0275]
免疫学
[0276]
通过基于elisa的合格测定从研究终止时采集的血清样品评价对人gaa蛋白的体液免疫。数据的总结呈现于表2中。
[0277]
媒介物处理的gaa-/-小鼠在研究终止时对抗gaa抗体呈阴性，而aav2/8-mck-gaa处理的小鼠显示出强烈但高度可变的抗gaa应答。与中剂量和高剂量小鼠相比，经低剂量(0.3x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的小鼠具有更高的总体抗gaa滴度。这些数据证明，aav2/8-mck-gaa的施用在小鼠中驱动针对人gaa蛋白的稳健免疫应答，持续至12周。
[0278]
表2：在12周小鼠血清中的aav2/8-mck-gaa总抗gaa抗体
[0279][0280][0281]
组织病理学
[0282]
在雄性或雌性中没有aav2/8-mck-gaa相关的死亡，并且没有aav2/8-mck-gaa相关的肉眼可见的发现。在庞贝氏病(gaa-/-)小鼠的心脏中存在aav2/8-mck-gaa测试物品相关的不良发现，其包括在≥3x10
13
vg/kg下在雄性的心脏中最小至轻度纤维化以及相关的最小肌纤维变性/坏死(1/5雄性在0.3x10
14
vg/kg下，3/5雄性在1x10
14
vg/kg下，并且1/5雄性在3x10
14
vg/kg下)。其它测试物品相关的显微镜检查发现结果包括：在≥1x10
13
vg/kg下雌性和0.3x10
14
vg/kg下雄性的心脏中的最小单核细胞浸润；在1x10
14
vg/kg下，在一只雄性和一只雌性的心脏中的最小混合白细胞浸润；在≥0.3x10
14
vg/kg下，在雄性和雌性的一处或多处骨骼肌中的最小至轻度单核细胞浸润。在≥0.3x10
14
vg/kg下在雄性的肝脏中测试物品相关的显微镜检查发现结果包括相对于庞贝氏病媒介物对照的空泡形成减少，而在≥0.3x10
14
vg/kg下雌性相对于庞贝氏病媒介物对照具有增加的空泡形成。aav2/8-mck-gaa的积极作用包括在多个组织中没有空泡形成(空泡形成是庞贝氏病的特征)，包括：在3x10
14
vg/kg下，在所有动物的四头肌、三头肌和膈肌中没有肌纤维空泡形成；在≥
0.3x10
14
vg/kg下，脑脉络丛中空泡形成的发生率和/或严重程度略有下降；在3x10
14
vg/kg下雄性和在≥1x10
14
vg/kg雌性的脊髓中神经元空泡形成的严重程度略有下降；背根神经节中神经元空泡形成的严重程度和发生率两者均降低，在经aav2/8-mck-gaa处理的动物中轴突/髓鞘变性的发生率降低或不存在，前列腺和精囊的间质细胞空泡形成的发生率降低，以及趋向甲状旁腺主细胞中空泡形成的发生率和/或严重程度降低的轻微aav2/8-mck-gaa处理相关的趋势。
[0283]
gaa蛋白和gaa活性
[0284]
平均而言，与对照相比，低剂量(0.3x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的小鼠在心脏和四头肌中具有更高的gaa蛋白水平。与对照和低剂量处理的动物相比，中剂量组(1x10
14
vg/kg)和高剂量组(3x10
14
vg/kg)在两种检查的肌肉中具有甚至更高水平的gaa蛋白(图1a)。这些数据显示施用aav2/8-mck-gaa后，肌肉中gaa表达的剂量依赖性增加。
[0285]
在gaa酶活性水平方面观察到结果的相同剂量依赖性模式。平均而言，与对照相比，低剂量(0.3x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的小鼠在膈肌、心脏和四头肌中具有更高的gaa酶活性。再次，与这些组相比，中剂量(1x10
14
vg/kg)和高剂量(3x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的小鼠在所检查的所有组织中具有甚至更高的gaa酶活性(图1b)。这些数据显示施用aav2/8-mck-gaa后，肌肉中gaa酶活性的剂量依赖性增加。
[0286]
组织糖原累积
[0287]
对膈肌、心脏和四头肌活检物的分析揭示了经aav2/8-mck-gaa处理的小鼠中糖原浓度的剂量依赖性降低。与测试哪种组织无关，跨肌肉的总体结果模式都是相同的。与媒介物处理的gaa-/-对照相比，所有三种剂量的aav2/8-mck-gaa均引发糖原减少，其中最高剂量引发最大减少。具体而言，在心脏和四头肌中，所有剂量都使糖原恢复至与媒介物处理的wt对照相当的水平(图2a)。这种结果模式还通过在四头肌中用过碘酸希夫以及苏木精和曙红(h&e)染色进行可视化得到了额外的支持(图2b和2c)。在膈肌中，中剂量和高剂量引发了与对照相当的糖原水平的恢复。这些结果揭示了肌肉中的稳健剂量依赖性糖原清除。
[0288]
握力反应测试：
[0289]
为了评价aav2/8-mck-gaa处理对等张/等长肌肉强度和感觉运动协调功能的影响，进行了握力反应测试。在此测定中，评价了小鼠在60秒时间段内抓住倒置金属丝网的能力。使用此测试，观察到时间依赖性功能校正。具体而言，分别在媒介物或aav2/8-mck-gaa施用后5-6周，在低于wt对照的水平下进行四个敲除组(媒介物处理的；低、中和高aav2/8-mck-gaa处理的剂量组)(至掉落的秒数)(图3)。虽然gaa-/-媒介物处理的对照的功能表现最差，但在aav2/8-mck-gaa处理的小鼠中观察到的功能表现以剂量依赖性方式更优异。av2/8-mck-gaa高剂量处理组的表现最接近wt对照。在病毒载体施用后12周，高剂量组的表现与wt对照相当。这些结果表明，aav2/8-mck-gaa可改善功能性运动缺陷。
[0290]
结论
[0291]
媒介物处理的gaa-/-动物中的早期死亡可能与此模型中的疾病进展有关，可能是由于进行性神经变性和肌肉功能丧失所致。keeler,2019的一项最近研究报告了在本研究中使用的相同品系的gaa-/-小鼠中的死亡在22周龄左右开始，其中约50％的gaa-/-小鼠到约36周龄过早死亡。
[0292]
剂量保证研究证实了给药装置与药物产品aav2/8-mck-gaa的相容性，而没有由于
与装置的非特异性结合所致的损失。这些数据证实，所有剂量的aav2/8-mck-gaa都成功地施用于gaa-/-而没有损失。在所检查的所有组织中，gaa蛋白和酶活性水平以剂量依赖性方式增加。
[0293]
临床病理学显示在所有剂量水平下aav2/8-mck-gaa对gaa-/-小鼠中的ast的积极影响，但在0.3x10
14
vg/kg的最低剂量下最显著，从而使这些小鼠中的ast正常化。
[0294]
组织病理学显示在所有aav2/8-mck-gaa剂量组中，雄性gaa-/-小鼠心脏中的最小至轻度纤维化。在一些经aav2/8-mck-gaa处理的动物的心脏和骨骼肌中观察到最小至轻度单核细胞浸润。在骨骼肌、脑、脊髓、背根神经节、外周轴突、雄性性腺和甲状旁腺中观察到在减少细胞内空泡形成方面的积极测试物品作用。
[0295]
在用aav2/8-mck-gaa处理的雄性的病理学发现结果中观察到的性别偏差可能部分归因于所观察到的较高aav转导，所述较高aav转导据报告与雌性相比，在雄性小鼠中发生(davidoff，2003)。davidoff及同事先前表明，在全身递送aav2或aav5载体后，雄性小鼠中aav颗粒是雌性小鼠中的5至13倍高。
[0296]
在所有测试剂量组和所有检查的组织中观察到aav2/8-mck-gaa处理对糖原清除的积极作用。在中剂量和高剂量处理组中观察到最大改善，其中糖原正常化为在wt对照中观察到的水平。
[0297]
aav2/8-mck-gaa处理也介导了握力的功能校正。以时间和剂量依赖性方式，在aav2/8-mck-gaa施用后12周，在高剂量组中观察到完全功能恢复。
[0298]
实施例2.在庞贝氏病小鼠模型中建立酸性α-葡萄糖苷酶的治疗性表达、同时避免毒性副作用
[0299]
目标
[0300]
这项glp研究的目标是检查在给药后12周时间段内aav2/8-mck-gaa在幼年食蟹猴中的潜在毒性和安全性药理学。
[0301]
材料和方法
[0302]
具有低血清抗aav8中和抗体水平(对于aav2/8-mck-gaa处理的滴度为5或更低)的25只2-4岁的幼猴(14只雄性，11只雌性)参加了研究。表3概述研究设计。在研究第1天向动物施用单次静脉内输注媒介物、三种剂量(0.6x10
14
、2x10
14
或5x10
14
vg/kg)之一的aav2/8-mck-人gaa(aav2/8-mck-gaa)或一个剂量(2x10
14
vg/kg)的aav2/8-mck-食蟹猴gaa。
[0303]
表3：研究设计
[0304]
[0305][0306]
每天监测动物的一般健康状况。至少每周进行一次详细的临床观察结果和体重评估。在给药前以及第4周和第12周期间进行眼科检查。在给药前以及第4周、第8周和第12周期间，使用夹套式外部遥测术收集ecg波形；使用ponemah软件(5.0版)获取数据。源自ecg波形的参数包括心率和rr、pr、qrs和qt间期。根据从给药前数据确定的个体校正因子(qt
ca
)对每只动物进行qt校正。对ecg描记的定性评估由通过职业验证的兽医心脏病专家进行。在给药前以及第3周、第4周、第8周和第12周期间评估血压。超声心动图在给药前以及第4周、第8周和第12周进行，并由通过职业验证的兽医心脏病专家进行评估。在给药前以及第4周、第8周和第12周期间进行神经系统电池(总体态度、行为、运动功能、颅神经、本体感受和姿势反应以及脊神经)。
[0307]
在给药前以及第3天(仅血液学)、第7天、第14天、第21天、第28天、第56天、第73天和第84天收集临床病理学样本以用于评估血液学、凝血、临床化学、尿液分析和心脏生物标志物(肌钙蛋白-i、bnp以及ck-mb、ck-mm、ck-bb)。收集生物分析样品用于评估基线时的抗aav8中和抗体(nab)以及基线和第14天、第35天和第84天的抗gaa总igg抗体(tab)。还收集
全血用于外周血单核细胞(pbmc)分离以及在基线、第28天和第84天对人gaa和aav8衣壳的t细胞应答的评价。
[0308]
在第85天对动物实施安乐死。所有动物都进行了完整的尸体剖检检查，并记录了所选器官的重量。收集一组综合组织用于组织病理学评价。
[0309]
结果
[0310]
死亡率
[0311]
来自高剂量组(5x10
14
vg/kg)的两只动物，一只雄性(动物4003)和一只高剂量雌性(动物4501)分别在第82天和第79天进行了计划外的尸体剖检。剩余的20只动物，10只雄性和10只雌性存活直到第85天计划的终末安乐死。
[0312]
临床观察结果
[0313]
在存活直到研究终止的22只动物中的20只中没有aav2/8-mck-gaa相关的临床体征。在研究终止前一周期间，在高剂量(5.0x10
14
vg/kg)组中的两只动物(雄性4003和雌性4501)中临床体征明显。对于雄性4003，没有观察到的令人担忧的临床体征，但由于超声心动图发现问题，此动物被提前3天送至早期安乐死。对于雌性4501，未观察到临床体征直到第77天。在第78天，动物驼背且虚弱。在第79天超声心动图记录后，动物摸起来冷，侧躺，并且不能从麻醉中恢复。由于病情迅速下降，所述动物提前6天在第79天实施安乐死。
[0314]
在所研究的剩余动物中发生的所有临床观察结果都被认为与测试物品无关，因为它们发生在包括对照在内的所有剂量组中，是孤立的事件，被认为与程序相关，和/或是在进行类似研究程序的实验室圈养的食蟹猴中常见的偶然发现。这些临床体征包括皮肤色素减退、擦伤和瘀伤。
[0315]
体重
[0316]
除尸体剖检前一周外，对体重没有aav2/8-mck-gaa相关的影响。然而，这些变化发生在所有剂量组中，并且不被认为与测试物品相关。
[0317]
所有动物在研究持续时间内体重增加或保持。体重波动被认为是偶然的和/或具有在食蟹猴中通常观察到的变化幅度。
[0318]
安全性药理学评估
[0319]
神经系统评估
[0320]
在研究持续时间内，神经系统评估中没有aav2/8-mck-gaa相关的变化。
[0321]
通过夹套式外部遥测术进行ecg和心率
[0322]
定性地，基于给药前与给药后心电图记录的比较，在任何剂量水平下均未发现aav2/8-mck-gaa相关的节律或波形形态异常。在所有aav2/8-mck-gaa处理组中，心率存在普遍非剂量反应性升高，这不被认为是不利的。
[0323]
超声心动图
[0324]
≥2.0x10
14
vg/kg剂量的aav2/8-mck-gaa通过超声心动图显示心脏功能的不利变化，导致两只动物提前终止，在第79天一只雌性和在第82天一只雄性。0.6x10
14
vg/kg低剂量aav2/8-mck-gaa中的一些动物在第79天的超声心动图参数与给药前相比显示轻微但有意义的差异。低剂量(0.6x10
14
vg/kg)组中的一只动物(2003)具有预先存在的肺反流，所述肺反流没有受到aav2/8-mck-gaa的不利影响。不确定这些是否代表食蟹猴体内的散发性生物学变化或与麻醉深度的个体差异相关的波动(sleeper,2008)。
[0325]
血液学
[0326]
在血液学参数中，未观察到显著变化。总白细胞计数高度可变，但没有注意到指示aav2/8-mck-gaa相关变化的特定模式。
[0327]
血液学参数中注意到的差异不被认为与aav2/8-mck-gaa相关，并且被归因于生物学变异，因为它们是散发性的，类似于对照和/或研究前值的波动，和/或具有通常在类似研究条件下的食蟹猴中观察到的变化幅度。
[0328]
凝血
[0329]
在凝血方面，在施用任何剂量的aav2/8-mck-gaa情况下均未注意到变化。
[0330]
凝血参数中注意到的差异不被认为与aav2/8-mck-gaa相关，并且被归因于生物学变异，因为它们是散发性的，类似于对照和/或研究前值的波动，和/或具有通常在类似研究条件下的食蟹猴中观察到的变化幅度。
[0331]
临床化学
[0332]
在临床化学中，注意到丙氨酸转氨酶(alt)活性的时间依赖性最小至轻度增加。在第7天，在所有aav2/8-mck-gaa剂量组雄性以及中剂量(1x10
14
vg/kg)和高剂量(5x10
14
vg/kg)组雌性中alt瞬时升高，在第14天下降，然后可变地增加至第84天。与alt相比，天冬氨酸转氨酶(ast)活性略有增加，但幅度较小且时间点较少。alt和ast的增加可能与骨骼肌和心肌组织中关于病理学报告的炎症有关，肝细胞效应的贡献最小(如果有的话)。没有注意到肝细胞效应的其它指标。alt和ast值在雄性中是可变的并且是剂量依赖性的，但在雌性中并非如此(图4a、4b、5a和5b)。
[0333]
还注意到白蛋白的最小至轻度减少，球蛋白的最小至轻度增加，以及主要在雄性中、但也在aav2/8-mck-gaa高剂量(5x10
14
vg/kg)雌性中在第56至84天的agr最小减少，暗示最小急性期反应，没有注意到其它明显指标。在雄性的大多数时间点和雌性的偶尔时间点，甘油三酯值轻度至中度增加。这可能与急性期反应相关，但也可能与其它可能性相关，因为在研究期间存在潜在肝细胞效应。尿素氮在多个时间点最小至轻度增加，但肌酐没有伴随增加；因此，这被认为是肾前性的。在研究期间钙浓度最小至轻度下降并且可能是白蛋白浓度下降的结果，因为白蛋白是钙的全身性载体。在第84天，高剂量(5x10
14
vg/kg雌性)中磷轻度增加( 48％)，但这一点的原因尚不确定，并且此时间点的值低于研究前最高值。
[0334]
临床化学参数中的剩余差异不被认为与aav2/8-mck-gaa相关，并且被归因于生物学变异，因为它们是散发性的，类似于对照和/或研究前值的波动，和/或具有通常在类似研究条件下的食蟹猴中观察到的变化幅度。
[0335]
心脏生物标志物
[0336]
在媒介物处理的(第1组)动物、低剂量(0.6x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的(第2组)动物或aav2/8-mck-食蟹猴gaa处理的(第5组)动物中，未注意到肌钙蛋白-i的变化(图6a、6b、6c和7)。肌钙蛋白-i在两种性别中的中剂量(2.0x10
14
vg/kg)和高剂量(5.0x10
14
vg/kg)中最小至显著增加，在一些动物中从第21天开始且所有动物到第56天显著增加。通常在第21天至第56天注意到峰值，其中高剂量雄性4001在第84天达到峰值。在峰值后，大多数动物在第73天逐渐减少，但一些动物保持相似直到第84天。肌钙蛋白-i的增加表明心肌损伤并且与心肌组织病理学中注意到的炎症相对应。一般而言，增加的肌钙蛋白-i与bnp的显著增加相对应，但与ck-mb的任何显著变化不对应。
[0337]
在第84天，在中剂量雌性3501( 363％)和高剂量雄性4001( 697％)中脑利钠肽(bnp)值显著增加(图8a和8b)。虽然与研究前值相比，在高剂量雄性4001中肌酸激酶(ck)略微更高，但任一动物中肌酸激酶-mb(ck-mb)均未增加，表明在此时间点的任何心肌效应。此外，高剂量雄性4003在第56天具有bnp的最小增加，但到计划外第82天，bnp值已经减少，并且仅略高于研究前测量下限。中剂量雄性3003在第7天和第14天具有最小增加，到第21天减少至研究前，然后在第84天最小增加(分别为 92％、 97％和 35％)。中剂量雌性3503在第84天具有bnp的最小增加( 81％)。雌性3501在第84天具有尿素氮的最小增加( 230％)，而无肌酐的伴随增加。这些动物中bnp的增加通常与肌钙蛋白-i的增加相对应，并且表明心肌损伤，并与组织病理学上注意到的心肌炎症相对应。没有注意到ck-mm、ck-mb或ck-bb的明显增加。确实发生可变性，但在对照组内也注意到了这种可变性。
[0338]
尿液分析
[0339]
在尿液分析参数中，在施用任何剂量的aav2/8-mck-gaa后均未注意到变化。
[0340]
尿液分析参数的差异不被认为与aav2/8-mck-gaa相关，并且归因于生物学变异或污染物干扰，因为它们是散发性的，类似于对照和/或研究前值的波动，缺乏其它临床病理学参数的相关变化，和/或具有通常在类似研究条件下的食蟹猴中观察到的变化幅度。
[0341]
剂量保证和生物相容性
[0342]
进行剂量保证分析，以通过评价载体基因组滴度和来自流过液的测试物品的衣壳滴度来确定用于输注aav2/8-mck-gaa的材料是否不管怎样都会损害此glp研究中的药物递送和暴露。
[0343]
通过将药物产品aav2/8-mck-gaa保持在输注设备内持续0、3或6小时来模拟潜在暴露的最大时间而进行剂量保证。来自研究的结果表明，随时间推移，药物产品暴露于施用装置对所述产品的浓度没有显著影响。这些数据证明，aav2/8-mck-gaa药物产品对暴露的装置表面具有最小结合亲和力并确保了准确给药。
[0344]
gaa蛋白和gaa活性
[0345]
平均而言，与对照相比，低剂量(0.6x10
14
vg/kg)aav2/8-mck-gaa处理的动物在四头肌中具有约1-2倍高的人gaa酶活性，并且在心脏中约2-5倍高。中剂量(2.0x10
14
vg/kg)在四头肌中具有约42-52倍高的人gaa活性，并且在心脏中具有约84-89倍高的人gaa活性。相比之下，高剂量(5.0x10
14
vg/kg)动物平均而言在四头肌中具有约53-69倍高的人gaa活性，并且在心脏中具有约47-88倍高的人gaa活性(图9a)。这些数据显示在施用a av2/8-mck-gaa后人gaa酶蛋白表达和活性的剂量依赖性增加。
[0346]
平均而言，与对照相比，aav2/8-mck-食蟹猴gaa处理的动物在四头肌和心脏中具有更高的食蟹猴gaa(图9b)。
[0347]
免疫学
[0348]
抗aav8抗体
[0349]
在基线、研究前，评估动物的抗aav8中和抗体(nab)以指导随机分组到处理组，以使得aav2/8-mck-gaa处理的动物具有5或更低的滴度，并且媒介物处理的动物具有10或》20的滴度。
[0350]
对hgaa的体液应答
[0351]
通过基于elisa的合格测定，从给药前、给药后第14天或第15天、第35天和第84天
采集的血清样品评价对人或食蟹猴gaa蛋白的体液免疫。关于对hgaa的人gaa蛋白应答的数据总结呈现于图10a和表4中。
[0352]
所有给药前和第14天动物的抗gaa滴度均《80。在第35天，在所有aav2/8-mck-gaa处理的动物中存在抗gaa滴度的剂量依赖性增加(范围349
–
2,400)，并且在第84天存在更稳健增加(范围7,760
–
54,400)。在第35天和第84天，在雄性和雌性中存在抗gaa滴度的显著差异，其中雄性具有较高平均滴度。这些数据证明，靶向gaa的肌肉细胞表达的aav2/8-mck-gaa静脉内递送导致全身暴露，所述全身暴露引发食蟹猴中对人gaa的体液免疫应答。
[0353]
表4：食蟹猴血清中的aav2/8-mck-gaa抗gaa抗体
[0354][0355][0356]
kg＝千克；n＝数量； ive＝阳性样品；sd＝标准偏差；vg＝载体基因组
[0357]
通过基于elisa的合格测定，从给药后第15天、第35天和第84天采集的血清样品评价对食蟹猴gaa蛋白的体液免疫。所有动物的抗食蟹猴gaa滴度均《1。随时间推移，没有观察到抗gaa滴度的变化(图10b)。这些结果表明食蟹猴gaa蛋白没有引发免疫应答。
[0358]
对aav8和hgaa的细胞免疫应答
[0359]
使用合格的ifn-γelispot测定，从给药前、给药后第28天和第84天采集的分离的外周血单核细胞(pbmc)样品评价对aav8衣壳肽池(a、b、c)和人gaa肽池(a、b、c和d)的细胞免疫。在分离的pbmc中，在所有剂量水平下早在第28天就观察到作为斑点形成单位(sfu)的外周t细胞应答。汇总数据呈现于表5和表6中。
[0360]
一些媒介物处理的动物显示出对aav8衣壳肽池的阳性t细胞应答，这与其已知的预筛选aav8nab滴度一致。分配到aav2/8-mck-gaa处理组的动物在给药前均未显示出阳性
应答(表)。所有低剂量(0.6x10
14
vg/kg)处理的动物在第28天和第84天对针对aav8的t细胞应答保持阴性。中剂量(2.0x10
14
vg/kg)处理的动物在第28天在1/3雄性和2/3雌性中显示出阳性elispot信号，但在第84天则没有。在高剂量(5.0x10
14
vg/kg)下，雄性在第28天显示出阳性t细胞应答，但在第84天则没有，而雌性在第28天和第84天均显示出阳性信号。这些数据表明，当存在对aav8的t细胞应答时，所述t细胞应答最常发生在第28天，尤其是当载体负荷高≥2.0x10
14
vg/kg时。
[0361]
在研究的持续时间内，所有媒介物处理的动物对hgaa t细胞应答均呈阴性。在低剂量(0.6x10
14
vg/kg)下，1/3雄性在第28天对池a、c和d具有阳性sfu，到第84天增加至2/3雄性。0/3低剂量雌性显示出阳性elispot信号。在中剂量(2.0x10
14
vg/kg)下，1/3雄性和1/3雌性在第28天具有阳性sfu，并且在第84天，2/3雄性和1/3雌性呈阳性。在高剂量(5.0x10
14
vg/kg)下，1/3雄性和1/3雌性在第28天具有阳性elispot信号，到第84天多达3/3雄性和2/3雌性具有阳性sfu。对gaa的t细胞应答中的唯一一致模式是到第84天在中剂量和高剂量组动物中对肽池a和d的反应性。对池b和c的反应在雄性与雌性之间有所不同。
[0362]
表5：来自食蟹猴pbmc的aav2/8-mck-gaa ifn-γaav8t细胞应答
[0363][0364][0365]
a、b、c＝aav8肽池；kg＝千克；n＝数量；sd＝标准偏差；vg＝载体基因组
[0366]
表6：来自食蟹猴pbmc的aav2/8-mck-gaa ifn-γgaa t细胞应答
[0367][0368]
a、b、c、d＝hgaa肽池；kg＝千克；n＝数量； ive＝阳性样品；sd＝标准偏差；
[0369]
vg＝载体基因组
[0370]
总体病理学
[0371]
没有注意到测试物品相关的总体发现。给予0.6x10
14
vg/kg的1只雄性(动物编号2002)的肺部的多灶性深红色变色与相关区域广泛的最小肺泡出血和轻度色素沉着肺泡巨噬细胞被认为是背景变化，最可能与肺螨(肺刺螨属(pneumonyssus sp.))相关，并且与aav2/8-mck-gaa的施用无关。
[0372]
器官重量
[0373]
没有注意到测试物品相关的器官重量变化。存在与其相应对照不同的分离器官重量值(绝对和/相对)。然而，不存在模式、趋势或相关数据表明这些值是毒理学相关的。因此，所观察到的器官重量差异被认为在生物学变异的正常范围内，并且因此与aav2/8-mck-gaa的施用无关。
[0374]
组织病理学
[0375]
将用于组织病理学的组织用h&e以及马森氏三色(masson's trichrome)染色。在雄性和雌性中通常≥2x10
14
vg/kg下，在主要研究和早期死亡动物两者中观察到的显著aav2/8-mck-gaa相关的显微镜发现包括混合细胞间质性炎症伴两亲性间质性颗粒物质以及心脏、骨骼肌和平滑肌中的偶发肌纤维变性、肝脏中的混合细胞炎症、脂肪组织的混合细胞炎症伴罕见的褐色脂肪细胞变性、以及背根神经节的神经胶质增生伴罕见神经元变性。发现结果关于主要器官系统进行了论述。
[0376]
心脏、骨骼肌和平滑肌
[0377]
心脏、骨骼肌(膈肌、食道、肱二头肌、胸大肌-附着于胸骨、阴道-附着的骨骼肌、肛
提肌和肛门外括约肌-附着于直肠、肱三头肌、四头肌、眼睛的球后-直肌和眼睑肌肉、静脉内施用部位的肱肌)和罕见平滑肌(食道和直肠的肌层)中的改变包括最小至显著混合细胞间质性炎症，其特征在于可变数量的淋巴细胞、浆细胞、组织细胞伴间质性两亲性颗粒物质和偶发肌纤维变性。对于雄性和雌性通常≥2x10
14
vg/kg下观察到这些变化，除了在相同剂量范围下变化主要限于雄性的直肠以及变化在所有剂量组中相似、但在雄性中更频繁且更严重的肱三头肌和四头肌以外。心脏的变化在心室中最显著，但在心房中也明显。骨骼肌的变化在膈肌、食道、直肠和胸骨(附着的肌肉)中更严重，伴偶发肌纤维再生和由炎症细胞包裹在单个肌纤维中；与直肠中的骨骼肌(结肠直肠交界处)相比，食道中的平滑肌受到同等影响并且通常不太严重。与提交的心脏切片的相应对照相比，马森氏三色染色没有展现染色增加，从而指示不存在与上述受影响心肌细胞的变性/坏死相关的胶原蛋白增加。
[0378]
一只对照雌性(动物1502)心肌中的最小炎症浸润被认为是偶然发现，因为据报告心脏中的局灶性、少量淋巴细胞/组织细胞/浆细胞浸润物是食蟹猴中的常见背景发现(chamanza,2010；chamanza,2006；gaillot-drevon,2006)。这些变化通常特征在于特发性炎症性浸润物的局灶性间质性分布，伴有肌细胞的最小至轻度变性或坏死；在心脏中，这些浸润物通常仅限于心内膜下或心外膜下，正如也在本研究中的一只对照雌性中所见。
[0379]
肝脏
[0380]
肝脏的变化通常仅限于≥0.6x10
14
vg/kg下的雄性并且包括最小至中度混合细胞炎症，其特征在于可变数量的淋巴细胞和组织细胞，以及全部以经常破坏肝板的总体肝门(和罕见被膜下)分布排列的较少浆细胞和嗜中性粒细胞，伴有分离的单个肝细胞，以及偶发单个细胞坏死和桥接炎症模式(雌性，动物3503)。
[0381]
脂肪组织
[0382]
对于雄性和雌性两者，通常在≥2x10
14
vg/kg/天下的脂肪组织变化包括最小至中度混合细胞(淋巴细胞、组织细胞和浆细胞)炎症和偶发脂肪细胞变性，其特征在于不良微空泡化为在与食道、甲状腺、胸骨、胸腺、心脏、主动脉和肾脏相邻的褐色脂肪中观察到的具有破裂肉膜的不规则形状的脂肪细胞；这种变化在甲状腺和胸腺中最明显。在一只高剂量雄性(动物4002)中也注意到心包白色脂肪中的最小混合细胞炎症。
[0383]
背根神经节
[0384]
背根神经节的变化包括非剂量依赖性的最小至轻度神经胶质增生(单核细胞)，伴有偶发单个神经元变性。
[0385]
所观察到的剩余显微镜发现结果被认为是偶然的，具有通常在食蟹猴中观察到的性质(sato,2012；chamanza,2010；chamanza,2006；gaillot-drevon,2006)，和/或在对照和给药动物中具有相似的发生率和严重程度，并且因此被认为与aav2/8-mck-gaa的施用无关。
[0386]
结论
[0387]
通过静脉内输注施用aav2/8-mck-gaa可耐受达0.6x10
14
vg/kg，但在5x10
14
vg/kg的最高剂量下导致两只动物的计划外安乐死，一只雌性(动物4501)在第79天并且一只雄性(动物4003)在第82天。剂量保证证实了测试物品给药不受与输液设备的结合的影响。生物分析数据证实了转化为gaa蛋白的gaa mrna的表达，并且在所有剂量组的所有动物中都证明了功能性gaa酶活性。gaa蛋白和酶活性水平以及抗gaa总抗体在所有检查的组织中以剂
量响应方式增加，并且似乎在雄性中高于雌性。此外，在aav2/8-mck-食蟹猴gaa处理的动物中，食蟹猴gaa蛋白水平在所有检查的组织中也增加。在两只早期死亡动物中，与媒介物对照相比，雌性(4501)显示心脏中约33倍高的gaa活性水平，而雄性(4003)具有心脏中约61倍高的gaa活性水平。t细胞介导的抗aav8/gaa和总抗gaa抗体两者似乎都不会不利地影响gaa蛋白或组织酶活性水平。
[0388]
≥2x10
14
vg/kg的剂量导致心脏中的临床、功能和微观变化。在≥2x10
14
vg/kg的剂量下肌钙蛋白-i和bnp与心肌损伤一致。alt和ast的变化被认为与外周中的肌肉肌纤维变性/再生有关，并且与肝脏无关。超声心动图显示在≥2.0x10
14
vg/kg的剂量下心脏功能受到不良损害，并且导致高剂量组(5.0x10
14
vg/kg)中的两只动物提前终止，一只雌性在第79天和一只雄性在第82天。在心脏、骨骼肌和平滑肌中观察到剂量依赖性的最小至中度微观变化，包括混合细胞间质性炎症，其特征在于可变数量的淋巴细胞、浆细胞、组织细胞伴间质性两亲性颗粒物质和偶发肌纤维变性。在早期死亡和主要研究阶段动物两者中普遍观察到的另外组织学改变包括肝脏中的混合细胞炎症(雄性在≥0.6x10
14
vg/kg/天下，并且雌性在≥2x10
14
vg/kg/下)；给予5x10
14
vg/kg/天的一只雌性胆囊中的混合细胞炎症和水肿；对于雄性和雌性两者(食道、甲状腺、胸骨、胸腺、心脏、肾脏和主动脉)在通常≥2x10
14
vg/kg/天下，器官周围混合细胞炎症和偶发褐色脂肪细胞变性，其中主要研究动物中的发病率和严重程度较高；以及雄性和雌性中背根神经节的剂量依赖性神经胶质增生伴罕见神经元变性。
[0389]
总之，aav2/8-mck-gaa的低剂量(0.6x10
14
vg/kg)被良好耐受，而≥2x10
14
vg/kg的剂量与心肌损伤以及肌肉中(伴偶发肌纤维变性)、还有肝脏、脂肪组织和背根神经节中的伴随混合细胞炎症一致。0.6x10
14
vg/kg的aav2/8-mck-gaa剂量被定义为无不良作用限值(noael)。
[0390]
实施例3.根据本公开的给药方案通过施用aav-gaa载体治疗人类患者的庞贝氏病
[0391]
使用本公开的组合物和方法，可以约1x10
13
vg/kg至约3x10
14
vg/kg的量向患有糖原贮积症(例如，庞贝氏病)的患者施用含有编码gaa的转基因的aav载体。例如，所述aav载体可以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/
kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg或3x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。以这样的量向所述患者施用所述载体可实现使所述患者中的gaa表达增加(例如)至野生型水平的50％或200％以内而不会引起毒性副作用的有益效果。
[0392]
例如，在一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量施用于所述患者。在一些实施方案中，所述aav载体以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量施用于所述患者。
[0393]
另外或可替代地，可以足以刺激在向相同性别和类似体重指数的人类受试者施用含有在mck启动子控制下的gaa转基因的aav2/8载体时观察到的gaa表达的量向患有糖原贮积症(例如，庞贝氏病)的人类患者施用促进gaa表达的剂。例如，所述剂可以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约1x10
13
vg/kg、1.1x10
13
vg/kg、1.2x10
13
vg/kg、1.3x10
13
vg/kg、1.4x10
13
vg/kg、1.5x10
13
vg/kg、1.6x10
13
vg/kg、1.7x10
13
vg/kg、1.8x10
13
vg/kg、1.9x10
13
vg/kg、2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、
3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg、2x10
14
vg/kg、2.1x10
14
vg/kg、2.2x10
14
vg/kg、2.3x10
14
vg/kg、2.4x10
14
vg/kg、2.5x10
14
vg/kg、2.6x10
14
vg/kg、2.7x10
14
vg/kg、2.8x10
14
vg/kg、2.9x10
14
vg/kg或3x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0394]
例如，在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg、2.1x10
13
vg/kg、2.2x10
13
vg/kg、2.3x10
13
vg/kg、2.4x10
13
vg/kg、2.5x10
13
vg/kg、2.6x10
13
vg/kg、2.7x10
13
vg/kg、2.8x10
13
vg/kg、2.9x10
13
vg/kg、3x10
13
vg/kg、3.1x10
13
vg/kg、3.2x10
13
vg/kg、3.3x10
13
vg/kg、3.4x10
13
vg/kg、3.5x10
13
vg/kg、3.6x10
13
vg/kg、3.7x10
13
vg/kg、3.8x10
13
vg/kg、3.9x10
13
vg/kg、4x10
13
vg/kg、4.1x10
13
vg/kg、4.2x10
13
vg/kg、4.3x10
13
vg/kg、4.4x10
13
vg/kg、4.5x10
13
vg/kg、4.6x10
13
vg/kg、4.7x10
13
vg/kg、4.8x10
13
vg/kg、4.9x10
13
vg/kg、5x10
13
vg/kg、5.1x10
13
vg/kg、5.2x10
13
vg/kg、5.3x10
13
vg/kg、5.4x10
13
vg/kg、5.5x10
13
vg/kg、5.6x10
13
vg/kg、5.7x10
13
vg/kg、5.8x10
13
vg/kg、5.9x10
13
vg/kg、6x10
13
vg/kg、6.1x10
13
vg/kg、6.2x10
13
vg/kg、6.3x10
13
vg/kg、6.4x10
13
vg/kg、6.5x10
13
vg/kg、6.6x10
13
vg/kg、6.7x10
13
vg/kg、6.8x10
13
vg/kg、6.9x10
13
vg/kg、7x10
13
vg/kg、7.1x10
13
vg/kg、7.2x10
13
vg/kg、7.3x10
13
vg/kg、7.4x10
13
vg/kg、7.5x10
13
vg/kg、7.6x10
13
vg/kg、7.7x10
13
vg/kg、7.8x10
13
vg/kg、7.9x10
13
vg/kg、8x10
13
vg/kg、8.1x10
13
vg/kg、8.2x10
13
vg/kg、8.3x10
13
vg/kg、8.4x10
13
vg/kg、8.5x10
13
vg/kg、8.6x10
13
vg/kg、8.7x10
13
vg/kg、8.8x10
13
vg/kg、8.9x10
13
vg/kg、9x10
13
vg/kg、9.1x10
13
vg/kg、9.2x10
13
vg/kg、9.3x10
13
vg/kg、9.4x10
13
vg/kg、9.5x10
13
vg/kg、9.6x10
13
vg/kg、9.7x10
13
vg/kg、9.8x10
13
vg/kg、9.9x10
13
vg/kg、1x10
14
vg/kg、1.1x10
14
vg/kg、1.2x10
14
vg/kg、1.3x10
14
vg/kg、1.4x10
14
vg/kg、1.5x10
14
vg/kg、1.6x10
14
vg/kg、1.7x10
14
vg/kg、1.8x10
14
vg/kg、1.9x10
14
vg/kg或2x10
14
vg/kg的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。在一些实施方案中，所述剂以足以在所述患者中实现一定gaa活性水平的量施用于所述患者，所述一定gaa活性水平相当于在与所述患者相同性别和类似体重指数的人类受试者中以约2x10
13
vg/
kg至约2x10
14
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg的量，如以约2x10
13
vg/kg至约4x10
13
vg/kg(例如，约3x10
13
vg/kg)的量或以约5x10
13
vg/kg至约7x10
13
vg/kg(例如，约6x10
13
vg/kg)的量向所述受试者施用所述aav载体后所观察到的gaa活性水平。
[0395]
为了在施用上述治疗剂后评估患者的gaa表达水平，本领域技术人员可分析以下事件中的一个或多个：(1)从编码gaa的dna序列产生rna模板；(2)编码gaa蛋白的rna转录物的加工(例如，通过剪接、编辑、5'帽形成和/或3'端加工)；(3)rna翻译成gaa多肽或蛋白质；以及(4)gaa多肽或蛋白质的翻译后修饰。gaa的表达可例如通过检测以下来进行评估：编码相应蛋白质的mrna的量或浓度的增加(如例如使用本文所述或本领域已知的rna检测程序，如定量聚合酶链反应(qpcr)和rna seq技术所评估的)、相应蛋白质的量或浓度的增加(如例如使用本文所述或本领域已知的蛋白质检测方法，如酶联免疫吸附测定(elisa)等所评估的)和/或从受试者获得的样品中gaa蛋白活性的增加。
[0396]
其它实施方案
[0397]
本说明书中所提及的所有出版物、专利以及专利申请以引用的方式并入本文，其引用的程度犹如每个独立的出版物或专利申请被具体地和单独地指出以引用的方式并入。
[0398]
尽管本发明已经结合其具体的实施方案进行了描述，但应当了解能够对它进行进一步的修改并且本技术旨在涵盖任何基本根据本发明的原理而对本发明进行的变动、使用或适应性调整，并且包括虽然不属于本发明但属于本发明所属领域的已知或习用实施手段的和属于上文所述的实质特征的以及符合权利要求范围之内的变更。
[0399]
其它实施方案在权利要求内。
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
