一种山药组培快繁方法

1.本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种山药组培快繁方法。


背景技术：

2.山药dioscorea opposite thunb，别名薯蓣，是薯蓣科薯蓣属一年生或多年生缠绕性藤本植物。山药能形成肥大的地下肉质块茎供食用或药用"，其营养丰富，药、食皆宜，深受广大人们喜爱，具有健脾养胃、补肺益肾、止泻利湿的功效，对糖尿病、肿瘤等都有较好的防治作用。
3.组织培养是通过人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，可实现短时间大量繁殖。现有技术的山药组培快繁方法多注重外源激素的作用，并没有针对内源激素的变化与调控效应，制定适合特定山药品种的组培体系，造成试管苗的生根效果不是很理想，进一步降低移栽成活率。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种山药组培快繁方法。
5.本发明采用如下技术方案：
6.一种山药组培快繁方法，以山药幼嫩茎段为外植体，消毒后置于诱导培养基中进行诱导培养，得到不定芽；将不定芽转移至增殖培养基中进行
7.增殖培养获得丛生芽；将丛生芽转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗，试管苗经炼苗、移栽至基质中获得山药种苗；
8.其中，壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖25-30g，琼脂6-9g，iba 0.4-0.5mg，d-arg 0.1-0.15mg。
9.进一步的，消毒步骤具体为：将山药的幼嫩茎用流水冲洗干净，切成2-3cm带1-2个节间部的茎段，用75％的酒精浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后用质量分数1％的hgcl2溶液浸泡3-5min，后用无菌水冲洗3-4次，再用滤纸吸干表面水分。
10.更进一步的，所述诱导培养基以1/2ms为基本培养基，每升添加蔗糖25-30g，琼脂6-9g，6-ba 0.4-0.6mg，naa 0.1-0.2mg。
11.更进一步的，所述诱导培养的条件为：培养温度为25-26℃，先暗培养8-10h，后光处理4-5h，光强为600-800lx，交替进行，直至诱导出不定芽。
12.更进一步的，所述增殖培养基以ms为基本培养基，每升添加蔗糖25-30g，琼脂6-9g，kt 0.8-1mg，naa 0.2-0.3mg。
13.更进一步的，所述不定芽的增殖的条件为：培养温度为23-24℃，光照时间为12h/d，光强为1000-1200lx。
14.更进一步的，所述壮苗生根培养的条件为：培养温度24-25℃，光照时间为12h/d，光强为1300-1500lx。
15.本发明具有如下有益效果：
16.本发明结果证明，乙哚丁酸(iba)和d-精氨酸(d-arg)具有良好的协同作用，可促进丛生芽生根，提高根系的数量和质量，进一步为提高试管苗的移栽成活率提供基础。
具体实施方式
17.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
18.以下实施例涉及山药品种为雅山药1号。
19.实施例1
20.(1)外植体选取及消毒：以山药幼嫩茎段为外植体，将山药的幼嫩茎用流水冲洗干净，切成2-3cm带1-2个节间部的茎段，用75％的酒精浸泡15s，无菌水冲洗1次，然后用质量分数1％的hgcl2溶液浸泡4min，后用无菌水冲洗3次，再用滤纸吸干表面水分；
21.(2)诱导培养：将消毒后的外植体接种于诱导培养基中进行诱导培养(接种数为100)，得到不定芽；所述诱导培养基以1/2ms为基本培养基，每升添加蔗糖26g，琼脂7g，6-ba 0.5mg，naa 0.15mg；所述诱导培养的条件为：培养温度为25℃，先暗培养8h，后光处理4h，光强为700lx，交替进行，直至诱导出不定芽；诱导培养20天后，所有的外植体均诱导出不定芽；
22.结果：诱导率为100％，且萌发出的不定芽长出2片以上的叶。
23.(3)将不定芽切取单芽后转移至增殖培养基中进行不定芽的增殖(接种数为80)，培养25d，长成3-5片叶的丛生芽；所述增殖培养基以ms为基本培养基，每升添加蔗糖30g，琼脂8g，kt 0.9mg，naa 0.25mg；所述不定芽的增殖的条件为：培养温度为24℃，光照时间为12h/d，光强为1200lx；
24.结果：增殖系数平均可达4.8。
25.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g，iba 0.45mg，d-arg 0.13mg；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
26.结果：培养35天后的生根率为100％，且试管苗根系数量平均为5.2根，长度平均为1.25cm，10天左右即可生根，根系长而粗。
27.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为100％。
28.实施例2
29.基本同实施例1，区别在于步骤(4)和步骤(5)：
30.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g，iba 0.4mg，d-arg 0.1mg；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
31.结果：培养35天后的生根率为94％，且试管苗根系数量平均为4.8根，长度平均为1.16cm，11天左右即可生根，根系长而粗。
32.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为96.66％。
33.实施例3
34.基本同实施例1，区别在于步骤(4)和步骤(5)：
35.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g，iba 0.5mg，d-arg 0.15mg；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
36.结果：培养35天后的生根率为96％，且试管苗根系数量平均为5.1根，长度平均为1.22cm，10天左右即可生根，根系长而粗。
37.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为100％。
38.为证明本发明的技术效果，还设置有以下对比例：
39.对比例1
40.基本同实施例1，区别在于步骤(4)和步骤(5)：
41.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g，iba 0.45mg；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
42.结果：培养35天后的生根率为82％，且试管苗根系数量平均为2.8根，长度平均为0.76cm，15天左右可生根，根系短而细。
43.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为80％。
44.对比例2
45.基本同实施例1，区别在于步骤(4)和步骤(5)：
46.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g，d-arg 0.13mg；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
47.结果：培养35天后的生根率为76％，且试管苗根系数量平均为1.4根，长度平均为0.57cm，25天左右可生根，根系短而细。
48.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园
土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为60％。
49.对比例3
50.基本同实施例1，区别在于步骤(4)和步骤(5)：
51.(4)将超过3cm的丛生芽(50株)切下转入壮苗生根培养基中进行壮苗生根培养，得到试管苗；所述壮苗生根培养基以3/4ms为基本培养基，每升添加蔗糖28g，琼脂8g；所述壮苗生根培养的条件为：培养温度25℃，光照时间为12h/d，光强为1400lx；
52.结果：培养35天后的生根率为32％，且试管苗根系数量平均为0.6根，长度平均为0.24cm，30天左右可生根，根系极短而细。
53.(5)将长至5cm高的试管苗(30株)在自然条件下，打开组培瓶瓶盖炼苗4天，然后取出试管苗，用清水洗净附着在根部的培养基，然后移栽在至基质(基质组成按质量比为菜园土：河沙：珍珠岩：粉煤灰＝4:2:2:1)中，保持湿度和透气，空气湿度为75％，温度为24℃，由此得到山药种苗，10天后的移栽成活率为20％。
54.需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
55.尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
56.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。