诱导或增强法尼醇X受体(FXR)介导的转录反应的方法

诱导或增强法尼醇x受体(fxr)介导的转录反应的方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年11月20提交的题为"methods of inducing or enhancing farnesoid x receptor(fxr)-mediated transcriptional response(诱导或增强法尼醇x受体(fxr)介导的转录反应的方法)"的美国临时专利申请序列号62/937,964的优先权权益，该申请的公开内容通过引用以其全部并入本文。
3.发明背景
4.法尼醇x受体(fxr)属于核受体家族。fxr被归类为核胆汁酸受体，因为其内源性配体是胆汁酸，例如，举例而言鹅脱氧胆酸(cdca)和胆酸。fxr在肝、肠、肾和肾上腺中高度表达。以其失活形式，fxr与类视黄醇x受体(rxr)形成异源二聚体，与dna(具有共有序列aggtcantgacct(seq id no:1)结合，并与协阻抑物复合。当fxr与其配体结合时，辅激活物取代了协阻抑物并且促进fxr-rxr二聚体的活性，从而直接或间接地打开与胆汁酸合成和运输、脂质代谢和葡萄糖稳态相关的基因。
5.fxr的激动剂被认为具有治疗肝疾病、肥胖症和糖尿病的治疗价值。因此，本领域需要开发可以作为fxr激动剂的分子。本发明满足了这一需要。
发明概要
6.本文提供了用式(i)、式(i-a)、式(ii)、式(ii-a)的化合物或其混合物治疗疾病和紊乱的方法。所述化合物可用于治疗或改善各种疾病和紊乱，包括肝疾病、肥胖症、糖尿病、腹泻、腹痛、高血压、皮肤瘙痒、肝癌、肝炎、胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝炎、原发性硬化性胆管炎、炎症和纤维化。
7.附图简述
8.当结合附图阅读时本发明的具体实施方式的下列详细描述将被更好地理解。为了说明本发明，在图中显示了示例性实施方式。然而，应该理解的是本发明并不限于图中所示的实施方式的精确排列和手段。
9.图1a-1d显示化合物(i)和(ii)对fxr介导的没有cdca(图1a)和有cdca(图1b)的转录反应或lxr介导的没有gw3965(图1c)和有gw3965(图1d)的转录反应的影响。
10.图2a-2d显示cdca、化合物(i)和化合物(ii)对hepg2细胞的fxr下游靶基因表达的影响，所述靶基因是cyp7a1(图2a)、ppara(图2b)、bacs(图2c)和klf11(图2d)。
11.图3显示了从提纯樟芝果实体的提取物中获得的三萜类化合物的结构。
12.图4是显示从提纯樟芝果实的提取物中获得的三萜类化合物的分子式(mf)、分子量(mw)和命名的表格。
13.发明详述
14.野生的牛樟芝(或樟芝)是一种独特的仅生长在中国台湾的牛樟上的蘑菇。三萜类化合物(i)至(xii)是从樟芝的果实体中分离的。使用hepg2 fxr-荧光素酶报道基因细胞，检测该三萜类化合物对fxr活性诱导的潜能。在十二个三萜类化合物中，化合物(i)和(ii)被发现诱导/增强fxr活性。
[0015][0016]
定义
[0017]
如本文中使用的，以下每一个术语具有在本节中与其相关联的含义。
[0018]
除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语通常具有与在本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。通常，在本文和在动物药理学、药物科学、分离科学和有机化学的实验室流程中使用的命名是众所周知的并且在本领域普遍使用的那些。应该理解的是只要本教导仍然可操作，步骤的次序或执行某些动作的次序是不重要的。此外，两个或更多的步骤或动作可以同时进行或不同时进行。
[0019]
如本文中使用的，冠词“一个”和“一种”指的是该冠词的一个或多个(即，至少一个)语法对象。举例来说，“一个要素”意味着一个要素或多于一个要素。
[0020]
如本文中使用的，术语“大约”被本领域的普通技术人员理解和在一定程度上在使用它的上下文中变化。如本文中使用的，当涉及测量值例如数量、时间(temporal duration)等等时，术语“大约”意味着包含从指定值变化
±
20％或
±
10％，更优选地
±
5％，更加优选地
±
1％，仍然更优选地
±
0.1％，因为这样的变化适合于执行本公开的方法。
[0021]
如本文中使用的术语“烷基”指的是具有从1至40个碳原子、1至20个碳原子、1至12个碳原子或者在一些实施方式中从1至8个碳原子的直链和支链烷基基团和环烷基基团。直链烷基基团的实例包括含有1至8个碳原子的烷基基团，诸如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基基团。支链烷基基团的实例包括但不限于异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基、异戊基和2,2-二甲基丙基基团。如本文中使用的，术语“烷基”包含正烷基、异烷基和反异烷基基团以及烷基的其他支链形式。
[0022]
代表性取代烷基基团可以被在本文中列出的任何基团例如氨基、羟基、含、氰基、
羧基、硝基、硫代、烷氧基和卤素基团取代一次或多次。
[0023]
如本文中使用的术语“芳基”是指在环上不包含杂原子的环芳香烃基团。因此芳基基团包括但不限于苯基、薁基、庚搭烯基(heptalenyl)、联苯、吲达基(indacenyl)、芴基、菲基、三亚苯基、芘基、并四苯基、基、二亚苯基、蒽基和萘基基团。在一些实施方式中，芳基基团在基团的环部分包含大约6至大约14个碳。如在本文中定义的，芳基基团可以是非取代的或取代的。代表性取代芳基基团可以被单取代或不止一次取代，诸如但不限于苯基基团在苯环的2-、3-、4-、5-或6-位置的任一个或多个处被取代，或萘基基团在其2-至8-位置的任一个或多个处被取代。
[0024]
如本文中使用的，术语“癌症”被定义为以异常细胞的快速和不受控制的生长为特征的疾病。癌细胞可以在局部扩散或通过血流和淋巴系统扩散至身体的其他部分。各种癌症的实例包括但不限于骨癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肾癌、肝癌、脑癌、淋巴瘤、白血病、肺癌等等。
[0025]
如本文中使用的，术语“组合物”或“药物组合物”指的是在本发明中有用的至少一种化合物和药学上可接受载体的混合物，该药物组合物促进将化合物施用至患者或受试者。在本领域存在多种施用化合物的技术，包括但不限于静脉内、口服、气溶胶、肠胃外、眼部、鼻、肺和局部施用。
[0026]
如本文中使用的“疾病”是动物的一种健康状况，其中动物不能维持体内稳态，并且其中如果疾病没有改善，那么动物的健康会继续恶化。
[0027]
如本文中使用的“紊乱”在动物中是一种健康状况，在该状况下动物能够维持体内稳态，但在该状况下动物的健康状况相比于没有紊乱时更不利。未经治疗，紊乱并不一定会导致动物健康状况的进一步下降。
[0028]
如本文中使用的短语“抑制”意味着以可测量的量降低或者完全阻止分子、反应、相互作用、基因、mrna和/或蛋白质的表达、稳定性、功能或活性。抑制剂是例如结合到、部分或完全阻断刺激、减少、阻止、延迟活化作用、失活、脱敏或下调蛋白质、基因和mrna的稳定性、表达、功能和活性的化合物，例如拮抗剂。
[0029]
术语“患者”、“受试者”或“个体”在本文中可交替使用，并且指的是服从本文中描述的方法的任何动物或其细胞，不论在体外还是在原位。在非限制性实施方式中，所述患者、受试者或个体是人类。在其他实施方式中，所述患者是非人类的哺乳动物，包括例如家畜和宠物，诸如绵羊、牛、猪、犬、猫和鼠等哺乳动物。在还有的其他实施方式中，所述患者是鸟类动物或鸟。优选地，患者、个体或受试者是人类。
[0030]
如本文中使用的，术语“药学上可接受的”指的是诸如载体或稀释剂的材料，其不会废除化合物的生物活性或特性并且是相对无毒的，即该材料可以施用至个体并且不会引起不良的生物效应或以有害的方式与任何其包含的组合物的化合物相互作用。
[0031]
如本文中使用的，术语“药学上可接受的载体”意为药学上可接受的材料、组合物或载体，诸如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料，其涉及在患者内运载或运输在本发明内有用的化合物或运载或运输所述化合物至患者，使得它可以执行其预期功能。典型地，此类结构从一个器官或身体的一部分被运载或运输至另一个器官或身体的一部分。每种载体必须在与包含在本发明中有用的化合物的制剂的其他成分相容以及对患者无害的意义上是“可接受的”。可作为药学上可接受载体的材
料的一些实例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油类，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；乙二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；藻酸；无热原水(pyrogen-free water)；等渗盐水(isotonic saline)；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液和其他在药物制剂中使用的无毒相容物质。
[0032]
如本文中使用的，语言“药学上可接受的盐”指的是由药学上可接受的无毒酸制得的施用化合物的盐，所述药学上可接受的无毒酸包括无机酸、有机酸、溶剂化物、水合物或其笼型化合物。
[0033]
如本文中使用的术语“阻止”、“防止”或“预防”意指避免或延迟在受试者中与某种疾病或状况相关的症状的发生，所述受试者在药剂或化合物开始施用时没有出现此类症状。
[0034]“治疗性”处理是施用至表现出病理征兆的受试者的治疗，目的是减少或消除这些征兆。
[0035]
如本文中使用的，术语“治疗有效量”指的是足够或有效预防或治疗(延迟或预防发生、预防发展、抑制、减少或逆转)本文中描述的或考虑的疾病或症状的量，包括减轻此类疾病或状况的症状。
[0036]
如本文中使用的，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”被定义为治疗剂，即本发明的化合物(单独或与另一个药剂结合)应用或施用至患者，或治疗剂应用或施用至从患者身上分离的组织或细胞系(例如用于诊断或体外应用)，所述患者具有本文中考虑的状况、本文中考虑的状况的症状或发展本文中考虑的状况的可能，目的是治愈、痊愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响本文中考虑的状况、本文中考虑的状况的症状或发展本文中考虑的状况的可能。此类治疗可以基于从药物基因组学领域获得的知识进行具体的定制或修改。
[0037]
范围：在整个本公开中，本发明的各个方面都可以以范围格式表示。应该理解的是范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁并且不应该被解释为是对本发明范围的刻板的限制。因此，范围的描述应该被认为已具体公开的所有可能的亚范围以及在该范围内的单个数值。例如，范围的描述诸如1至6应该被认为已具体公开诸如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等亚范围，以及在该范围内的单个数字和小数例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度如何，这都适用。
[0038]
本文中使用了下列缩写词：fxr＝法尼醇x受体；rxr＝类视黄醇x受体；lxr＝肝x受体；cdca＝鹅脱氧胆酸；cyp7a1＝胆固醇7α-羟化酶；ppara＝过氧化物酶体增殖物激活受体α；bacs＝胆汁酸-coa合成酶。
[0039]
cdca具有结构：
[0040][0041]
方法
[0042]
在某些实施方式中，本发明提供了在需要其的受试者中治疗至少一种疾病或紊乱的方法。在某些实施方式中，该方法包括将治疗有效量的包含至少一种从牛樟芝(樟芝)中获得的法尼酯类x受体(fxr)激动剂的提取物施用至受试者。在某些实施方式中，施用增强了在受试者中fxr介导的转录反应。在某些其他实施方式中，施用诱导在受试者中fxr介导的转录反应。
[0043]
在某些实施方式中，本发明提供了在需要其的受试者中治疗与肠、肝、肾脏、和/或肾上腺有关的疾病或紊乱的方法。在某些实施方式中，该方法包括将治疗有效量的组合物施用至受试者，所述组合物包含至少一种从牛樟芝中获得的fxr激动剂或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或前体药物。在某些实施方式中，所述组合物如本文中其他地方所描述。
[0044]
在某些实施方式中，本发明提供了在需要其的受试者中治疗至少一种疾病或紊乱的方法，其中该方法包括将治疗有效量的组合物施用至受试者，所述组合物包含至少一种从牛樟芝中获得的fxr激动剂或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或前体药物。在各种实施方式中，所述组合物包含含有至少一种从牛樟芝(樟芝)中获得的法尼醇x受体(fxr)激动剂的提取物。
[0045]
在某些实施方式中，至少一种fxr激动剂是三萜类化合物。
[0046]
在某些实施方式中，三萜类化合物包括
[0047][0048]
其盐、溶剂化物、同分异构体、互变异构体或前体药物。在一些实施方式中，可以施用化合物(i)和化合物(ii)的组合。组合物中化合物(i)和化合物(ii)的相对量范围可以从10:1化合物(i):化合物(ii)至1:10化合物(i):化合物(ii)。
[0049]
在某些实施方式中，至少一种疾病或紊乱与选自肠、肝、肾脏和肾上腺之一有关。在某些实施方式中，至少一种疾病或紊乱选自肝疾病、肥胖症、糖尿病、腹泻、腹痛、高血压、皮肤瘙痒、肝癌、肝炎、胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝炎、原发性硬化性胆管炎、炎症和纤维化。
[0050]
在某些实施方式中，缺少鹅脱氧胆酸(cdca)时施用该组合物或提取物诱导大约60％至大约85％的fxr活性。在某些实施方式中，缺少鹅脱氧胆酸(cdca)时施用诱导大约60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84至大约85％的fxr活性。
[0051]
在某些实施方式中，在cdca存在时施用该组合物或提取物刺激fxr活性大约15％至大约30％。在某些实施方式中，在cdca存在时施用刺激fxr活性大约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29至大约30％。
[0052]
在某些实施方式中，施用该组合物或提取物对任何其他激素受体信号通路没有影响。在某些实施方式中，施用对肝x受体(lxr)介导的转录反应没有影响。如本文中使用的，术语“没有影响”意为本文中描述的任何组合物或提取物的施用不会使激素受体介导的转录反应增加或减少超过0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％。在一些实施方式中，该组合物或提取物不会使激素受体介导的转录反应增加或减少超过大约0.1至大约5％或超过大约0.1至大约2％。
[0053]
在某些实施方式中，fxr激动剂以大约10μm至大约85μm的浓度施用。在某些实施方式中，fxr激动剂以大约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80或大约85μm的浓度施用。
[0054]
在某些实施方式中，施用路径是选自静脉内、皮下、口服、气溶胶、肠胃外、眼、肺和局部施用的一种。
[0055]
在某些实施方式中，受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，受试者是人类。
[0056]
组合物
[0057]
在某些实施方式中，本发明提供了药物组合物，其包含至少一种fxr激动剂，所述fxr激动剂选自：
[0058][0059]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、或前体药物。在某些实施方式中，组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
[0060]
在某些实施方式中，组合物包括大约0.0001％至大约0.001％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物包括大约0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009或大约0.001％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物独立地包括大约0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009或大约0.001％w/w的化合物(iii)、化合物(iv)、化合物(v)、化合物(vi)、化合物(vii)、化合物(viii)、化合物(ix)、化合物(x)、化合物(xi)或化合物(xii)的至少一种。
[0061]
在某些实施方式中，组合物包括大约0.001至大约0.01％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物包括大约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009或大约0.01％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物独立地包括大约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、
0.009或大约0.01％w/w的化合物(iii)、化合物(iv)、化合物(v)、化合物(vi)、化合物(vii)、化合物(viii)、化合物(ix)、化合物(x)、化合物(xi)或化合物(xii)的至少一种。
[0062]
在某些实施方式中，组合物包括大约0.01至0.1％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。
[0063]
在某些实施方式中，组合物包括大约0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09或大约0.1％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。
[0064]
在某些实施方式中，组合物包括大约0.1至1％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物包括大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或大约1％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。在某些实施方式中，组合物独立地包括大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或大约1％w/w的化合物(iii)、化合物(iv)、化合物(v)、化合物(vi)、化合物(vii)、化合物(viii)、化合物(ix)、化合物(x)、化合物(xi)或化合物(xii)的至少一种。
[0065]
在某些实施方式中，该组合物包括核心或基质，所述核心包含至少一种被至少一种药学上可接受的赋形剂包衣的fxr激动剂，所述基质包含至少一种散布着至少一种药学上可接受的赋形剂的fxr激动剂。在一些实施方式中，所述核心是惰性核心，所述至少一种fxr激动剂是所述核心上的涂层。
[0066]
在一些实施方式中，化合物(i)或化合物(ii)的前体药物分别包括式(i-a)或(ii-a)的化合物：
[0067][0068]
在式(i-a)和(ii-a)的化合物中r1、r2和r3中的每一个可以是在体内施用式(i-a)或(ii-a)的化合物至受试者后新陈代谢或化学裂解的任何合适的基团。在某些实施方式中，r1、r2和r3中的一个或多个是氢。在其他实施方式中，r1、r2和r3的至少一个不是氢。
[0069]
r1和r2的非限制性实例包括c(＝o)-c
1-6
烷基、c(＝o)-oc
1-6
烷基、c(＝o)-芳基、c(＝o)-o-芳基、p(＝o)(oh)2或天然存在的氨基酸的酯。r3的非限制性实例包括c
1-6
烷基、芳基、或天然存在的氨基酸的酯。
[0070]
在各种实施方式中，式(i)或式(i-a)的化合物是组合物中仅有的药学上或治疗上的活性剂。在各种实施方式中，式(ii)或式(ii-a)的化合物是组合物中仅有的药学上或治疗上的活性剂。在各种实施方式中，式(i)或式(i-a)的化合物和式(ii)或式(ii-a)的化合物是组合物中仅有的药学上或治疗上的活性剂。
[0071]
施用/剂量/制剂
[0072]
施用方案可影响有效量的组成。治疗性制剂可在疾病或紊乱发生之前或之后施用
至受试者。进一步，几个分开剂量以及交错剂量可以每天或连续施用，或者剂量可以持续输注，或者可以是推注。进一步，如由治疗或预防情况的紧急性表明的，治疗性制剂的剂量可以按比例增加或减少。
[0073]
将本发明的组合物施用至患者(优选地哺乳动物，更优选地人类)可以使用已知程序，以对治疗、改善或预防疾病或紊乱有效的剂量和时段进行。达到治疗效果必需的治疗化合物的有效量可根据下述因素而变化，诸如患者的疾病或紊乱状态；患者的年龄、性别和体重；以及治疗化合物治疗、改善或预防疾病或紊乱的能力。剂量方案可进行调整以提供最佳的治疗反应。例如，如治疗情况的紧急性表明的，几个分开剂量可以每天施用或者剂量可以按比例减少。本发明的治疗化合物的有效剂量范围的非限制性实例是从大约1和5,000mg/kg体重/每天。在本领域的普通技术人员将能够研究相关因素并且在没有过度的实验的情况下做出关于治疗化合物的有效量的决定。
[0074]
本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变以便获得这样的活性成分的量，其有效地达到对特定患者、组合物和施用方式的期望的治疗反应并且对患者没有毒性。
[0075]
特别地，所选的剂量水平取决于多种因素，包括所使用的特定化合物的活性，施用的时间，化合物的排泄的速率，治疗的持续时间，与该化合物联合使用的其他药物、化合物或材料，接受治疗的患者的年龄、性别、体重、身体状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域中众所周知的类似因素。
[0076]
具有本领域普通技术的医生，例如内科医生或兽医可以容易地确定所需药物组合物的有效量并开出处方。例如内科医生或兽医可以开始在药物组合物中以低于为达到期望的治疗效果所需的剂量水平使用本发明化合物的剂量，并且逐步增加剂量直至达到期望效果。
[0077]
在具体的实施方式中，特别有利的是以剂量单位形式配制该化合物，以便于施用和剂量均匀性。如本文中使用的剂量单位形式指的是适用作为被治疗患者的单一剂量的物理上离散的单位；每个单位包含预定量的治疗化合物，该预定量计算为与所需的药物载体联合产生期望的治疗效果。本发明的剂量单位形式取决于并直接依赖于：(a)治疗化合物的独特特性和要达到的特定治疗效果，和(b)在混配/配制此类用于治疗患者心力衰竭的治疗化合物的技术上的内在局限性。
[0078]
在某些实施方式中，本发明的组合物使用一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体进行配制。在某些实施方式中，本发明的药物组合物包括治疗有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体。
[0079]
载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等等)及其适当混合物和植物油的溶剂或分散介质。
[0080]
在某些实施方式中，本发明的组合物以范围从每天1次至5次或更多的剂量施用至患者。在其他实施方式中，本发明的组合物施用至患者的剂量范围包括但不限于：每天一次、每两天一次、每三天一次至每周一次和每两周一次。本领域技术人员容易明白，施用本发明的各种组合的组合物的频率因人而异，这取决于许多因素，包括但不限于年龄、要治疗的疾病或紊乱、性别、整体健康状况和其他因素。因此，本发明不应被解释为限于任何特定的剂量方案，并且施用至任何患者的精确剂量和组合物是由主治医师在考虑到患者的所有
point,pa.获得的opadry
tm
薄膜包衣系统(例如opadry
tm
oy type、oyc type、organic enteric oy-p type、aqueous enteric oy-a type、oy-pm type和opadry
tm
white,32k18400)。口服施用的液体制备物可以是溶液剂、糖浆剂、混悬剂的形式。液体制备物可以用药学上可接受的添加剂通过常规方法制备，所述添加剂诸如悬浮剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性载体(例如，杏仁油、油性酯或乙醇)；和防腐剂(例如甲基或丙基对羟基苯甲酸盐或山梨酸)。
[0089]
本文中描述的组合物可以以适合于口服或口腔施用的制剂制备、包装或销售。例如可通过压缩或注塑成型活性成分，任选地与一种或多种附加成分一起，制备包括本文中所描述化合物的片剂。压缩片剂可以通过在合适的装置中压缩自由流动形式的活性成分诸如粉状或颗粒状制备物，任选地与一种或多种粘合剂、润滑剂、赋形剂、表面活性剂和分散剂混合而制备。注塑成型的片剂可以通过在合适的装置中注塑成型活性成分、药物上可接受的载体和至少足够湿润混合物的液体的混合物而制造。在片剂制造中使用的药学上可接受的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、造粒和崩解剂、分散剂、表面活性剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。
[0090]
合适的分散剂包括但不限于马铃薯淀粉、乙醇酸淀粉钠、泊洛沙姆407或泊洛沙姆188。一种或多种分散剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种分散剂可各自分别以相对于剂型重量的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0091]
表面-活性剂(表面活性剂)包括阳离子、阴离子或非离子表面活性剂或其组合。合适的表面活性剂包括但不限于：山嵛基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苯索氯铵、溴化苯度氯铵、1-乙氧羰基十五烷基三甲基溴化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷三甲基溴化铵、十六烷三甲基氯化铵、十六烷基氯化吡啶、二癸基二甲基氯化铵、溴化二甲基双十八烷基铵、氯化二甲基双十八烷基铵、度米芬、月桂基甲基葡糖醇聚醚-10羟丙基二氯化铵、四甲基氢氧化铵、通佐溴胺、司拉氯铵、奥替尼啶二盐酸盐、奥拉氟、n-油烯基-1,3-丙二胺、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸、烷基苯磺酸盐、十二烷基硫酸铵、全氟壬酸铵、多库酯、椰油酰两性基二乙酸二钠、十二烷醇硫酸镁、全氟丁磺酸、全氟壬酸、全氟辛磺酸、全氟辛酸、月桂基硫酸钾、烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂酸钠、月桂醇醚硫酸钠、月桂酰肌氨酸钠、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠、壬酰氧基苯磺酸钠、烷醇聚醚(pareth)硫酸钠、硬脂酸钠、磺基琥珀酸酯钠、聚西托醇1000、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇、椰子油二乙醇酰胺、椰子油单乙醇酰胺、癸基葡糖苷、癸基聚葡萄糖、单硬脂酸甘油酯、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇ca-630、异鲸蜡醇聚醚-20、月桂基葡萄糖苷、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇p-40、壬苯醇醚-9、壬基酚聚醚、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(np-40)、八甘醇单十二烷基醚、n-辛基-β-d-硫代吡喃葡萄糖苷、辛基糖苷、油醇、peg-10向日葵油甘油酯类、五甘醇单十二烷基醚、聚多卡醇、泊洛沙姆、泊洛沙姆407、聚氧乙基化牛油胺、聚甘油蓖麻醇酯、聚山梨醇酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、山梨聚糖、山梨糖醇酐单月桂酸酯、山梨醇酐单硬脂酸酯、山梨醇酐三硬脂酸酯、硬脂醇、表面活性素、triton x-100和吐温80。一种或多种表面活性剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种表面活性剂可各自分别以相对于剂型重量
的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0092]
合适的稀释剂包括但不限于：碳酸钙、碳酸镁、氧化镁、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙和磷酸钠、80(75％-α-单水乳糖和25％纤维素粉末)、甘露醇、预胶化淀粉、淀粉、蔗糖、氯化钠、滑石、无水乳糖和粒状乳糖。一种或多种稀释剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种稀释剂可各自分别以相对于剂型重量的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0093]
合适的造粒和崩解剂包括但不限于：蔗糖、共聚维酮、玉米淀粉、微晶纤维素、甲基纤维素、乙醇酸淀粉钠、预胶化淀粉、聚维酮、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、柠檬酸、交联羧甲基纤维素钠、纤维素、羧甲基纤维素钙、胶态二氧化硅、交联聚维酮和藻酸。一种或多种造粒或崩解剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种造粒或崩解剂可各自分别以相对于剂型重量的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0094]
合适的粘合剂包括但不限于：明胶、阿拉伯胶、预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、无水乳糖、单水乳糖、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚维酮、聚丙烯酰胺、蔗糖、右旋糖、麦芽糖、明胶、聚乙二醇。一种或多种粘合剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种粘合剂可各自分别以相对于剂型重量的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0095]
合适的润滑剂包括但不限于：硬脂酸镁、硬脂酸钙、氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、矿物油、聚乙二醇、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、月桂醇醚硫酸钠、苯甲酸钠、硬脂酸、硬脂富马酸酸钠、二氧化硅和滑石。一种或多种润滑剂可各自分别以相对于剂型重量的大约0.01％w/w至大约90％w/w的量存在于组合物中。一种或多种润滑剂可各自分别以相对于剂型重量的至少、大于或小于大约0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％w/w的量存在于组合物中。
[0096]
片剂可以是非包衣的或者它们可以使用已知的方法包衣以实现受试者胃肠道内的延迟崩解，从而提供活性成分的持续释放和吸收。举例来说，诸如单硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯的材料可用于包衣片剂。进一步举例来说，片剂可以使用美国专利号4,256,108；4,160,452；和4,265,874中描述的方法进行包衣以形成渗透控释片剂。片剂可进一步包括甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂或这些物质的某种组合，以提供药学上美观和可口的制备物。
[0097]
片剂也可以肠溶包衣，使得包衣在一定的ph值诸如大约ph 5.0至大约ph 7.5下开始溶解，从而释放本文中所描述的化合物。包衣可以包含例如具有酸性或碱性基团的
l,s,fs和/或e聚合物，以允许在特定位置(包括在肠的任何期望部分)释放本文中所描述的化合物。包衣也可以包含例如带有阳离子或中性基团的rl和/或rs聚合物，以允许通过不依赖ph值的溶胀来实现本文中所描述的化合物的定时控释。
[0098]
肠胃外施用
[0099]
对于非肠道施用，本发明的化合物可配制用于注射或输注，例如静脉内、肌肉内或皮下注射或输注，或用于以推注剂量和/或连续输注施用。可使用含油或含水载体中的混悬剂、溶液剂或乳剂，任选地含有其他配方剂诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
[0100]
额外施用形式
[0101]
本发明的额外剂型包括如美国专利号6,340,475、6,488,962、6,451,808、5,972,389、5,582,837和5,007,790中所描述的剂型。本发明的额外剂型还包括如美国专利申请号20030147952、20030104062、20030104053、20030044466、20030039688、和20020051820中所描述的剂型。本发明的额外剂型还包括如pct申请号wo 03/35041、wo 03/35040、wo 03/35029、wo 03/35177、wo 03/35039、wo 02/96404、wo 02/32416、wo 01/97783、wo 01/56544、wo 01/32217、wo 98/55107、wo 98/11879、wo 97/47285、wo 93/18755和wo 90/11757中所描述的剂型。
[0102]
控释制剂和药物递送系统
[0103]
在某些实施方式中，本发明的制剂可以是但不限于短期、快速解离以及可控的，例如缓释、延迟释放和脉冲式释放制剂。
[0104]
术语缓释按其传统意义使用，指的是药物制剂在延长的时段内提供药物的逐渐释放，并且虽然不一定但可能导致在延长的时段内药物的血液水平基本恒定。该时段可以长达一个月或更长时间并且释放的时段应该比相同剂量的以推注形式施用的时段长。
[0105]
对于缓释，所述化合物可用为其提供缓释特性的合适的聚合物或疏水材料配制。因此，使用本发明方法的化合物可以以微粒的形式，例如通过注射或者通过植入以晶片或圆盘的形式施用。
[0106]
在本发明的某些实施方式中，本发明的化合物使用缓释制剂单独或与另一药剂结合施用至患者。
[0107]
术语延迟释放在本文中按其传统意义使用，指的是药物制剂在药物施用后的一些延迟之后提供药物的最初释放，并且虽然不一定但可能包括从大约10min直至12h的延迟。
[0108]
术语脉冲式释放在本文中按其传统意义使用，指的是药物制剂以为了在药物施用后产生药物的脉冲型血浆分布的方式提供药物的释放。
[0109]
术语立即释放按其传统意义使用，指的是药物制剂在药物施用之后提供药物的立即释放。
[0110]
如本文中使用的，短期指的是在药物施用之后的任何时段最长为并包括大约8h、大约7h、大约6h、大约5h、大约4h、大约3h、大约2h、大约1h、大约40min、大约20min或大约10min以及其任何或全部的整数或小数增量。
[0111]
如本文中使用的，快速解离(rapid-offset)指的是在药物施用之后的任何时段最长为并且包括大约8h、大约7h、大约6h、大约5h、大约4h、大约3h、大约2h、大约1h、大约40min、大约20min或大约10min以及其任何和全部的整数或小数增量。
[0112]
给药
[0113]
本发明的化合物的治疗有效量或剂量取决于患者的年龄、性别和体重，患者当前的医疗状况和正在接受治疗的患者的心力衰竭的进展。本领域技术人员能够根据这些和其他因素确定适当的剂量。
[0114]
本发明的化合物的适宜剂量可以在每天大约0.01mg至大约5,000mg的范围内，诸如从大约0.1mg至大约1,000mg，例如从大约1mg至大约500mg，诸如每天大约5mg至大约250mg。该剂量可以以单次剂量或以多次剂量施用，例如每天1次至4次或更多次。当使用多次剂量时，每个剂量的量可以相同或不同。例如，每天1mg的剂量可作为两次0.5mg剂量施用，在两次剂量之间大约有12h的间隔。
[0115]
应理解，每天给药的化合物的量在非限制性实例中可以每天、每隔一天、每2天、每3天、每4天或每5天施用。例如，每隔一天施用一次的情况下，每天5mg的剂量可以在周一开始，第一次的之后每天5mg的剂量在周三施用，第二次的之后每天5mg的剂量在周五施用，以此类推。
[0116]
在其中患者的状态的确改善的情况下，根据医生的自行决定权，本发明的抑制剂的施用可任选地连续不断地给予；或者暂时减少正在施用的药物剂量或暂时停止一定时长(即“药物假期”)。药物假期的长度任选地在2天和1年之间变化，仅仅举例来说包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。在药物假期期间的剂量减少包括10％-100％，仅仅举例来说包括10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
[0117]
一旦患者的病情发生改善，必要时可施用维持剂量。随后，施用的剂量或频率或两者随病毒负荷降低至保持改善疾病的水平。在某些实施方式中，在任何症状和/或感染的复发后，患者需要长期的间歇性治疗。
[0118]
在本发明方法中使用的化合物可以以单位剂型配制。术语“单位剂型”指的是适合作为正在接受治疗的患者的单一剂量的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的活性材料，该预定量计算为产生期望的治疗效果，任选地与合适的药物载体联合。单位剂型可以是针对单次每日剂量或多次每日剂量之一(例如，每天大约1次至4次或更多次)。当使用多次每日剂量时，单位剂型可以是每次剂量相同或不同。
[0119]
此类治疗方案的毒性和治疗效果可任选地在细胞培养物或实验动物中确定，包括但不限于ld
50
(对50％的人口致死的剂量)和ed
50
(对50％人口治疗有效的剂量)的测定。毒性与治疗效果之间的剂量比率是治疗指数，其表示为ld
50
与ld
50
之间的比值。从细胞培养物分析和动物研究中获得的数据可任选地用于配制在人类中使用的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在包括毒性最小的ed
50
的循环浓度的范围内。任选地，根据使用的剂型和利用的施用途径，剂量在这个范围内变化。
[0120]
本文中引用的各个和每一项专利、专利申请和出版物的公开在此通过引用以其全部并入本文。虽然本发明是参考具体实施方式公开的，但很明显本发明的其他实施方式和变型可以由其他本领域普通技术人员在不背离本发明的真正精神和范围的情况下想到。所附权利要求旨在被解释为包括所有此类实施方式和等价变型。
[0121]
本领域普通技术人员仅仅使用常规试验将辨别出或者能够确定本文中描述的具体的程序、实施方式、权利要求和实例的众多等同物。此类等同物被认为是在本发明的范围
内，并包含在本发明所附的权利要求中。例如应该理解的是在反应条件下使用本领域认可的替代品以及仅仅使用常规试验的修改在本技术的范围内，所述反应条件包括但不限于反应时间、反应大小/体积和实验试剂诸如溶剂、催化剂、压力、大气条件例如氮气氛和还原剂/氧化剂。
[0122]
需要理解的是，无论本文何处提供值和范围，这些值和范围所包含的所有值和范围都意味着包含于本发明的范围内。此外，本技术也考虑这些范围内的所有值以及值的范围的上限或下限。
[0123]
下列实施例进一步说明本发明的各方面。然而，它们绝不是对如本文所述的本发明教导或公开的限制。
[0124]
实验实施例
[0125]
通过参考下列实验实施例对本发明进行进一步详细的描述。这些实施例仅提供用于说明的目的，并且除非特别说明，否则其不旨在是限制性的。因此，本发明决不应该被解释为限于以下实施例，而是应该被解释为包含由于本文提供的教导而变得明显的任何和所有变化。
[0126]
在没有进一步描述的情况下，认为本领域普通技术人员可以使用前面的描述和下列说明性实施例制造和利用本发明的化合物并实践要求专利保护的方法。因此下列工作实施例具体地指出了本发明的优选实施例，并且不应被解释为以任何方式限制本公开的其余部分。
[0127]
材料和方法：
[0128]
fxr荧光素酶报道基因细胞
–
fxr荧光素酶报道基因细胞
–
hepg2癌细胞用于筛选研究。用在pgl4.2荧光素酶报道基因质粒中插入3个重复响应元件(ttcccagggtcattgtcctctgatg)(seq id no:2)的fxr报道基因dna或在pgl4.2荧光素酶报道基因质粒中插入3个重复响应元件(ggcaagaggtaactgtcggtcaaatcct)(seq id no:3)的lxr报道基因dna稳定转染hepg2细胞。在含有10％fbs的rpmi-1640培养基中通过嘌呤霉素(1ug/ml)筛选报道基因细胞。
[0129]
荧光素酶检测
–
将报道基因细胞在37℃-co2培养箱中用0、10、20、40和80μm的化合物处理24h，对于fxr报道基因细胞，用或不用鹅脱氧胆酸(cdca)，或对于lxr报道基因细胞，用或不用gw3965。用荧光素酶裂解缓冲液裂解细胞，之后加入含有荧光素的荧光素酶缓冲液，产生发光。使用发光酶标仪记录发光。
[0130]
实时定量
–
pcr(rt-qpcr)
–
fxr靶基因的实时定量pcr(rt-qpcr)：使用罗氏高纯度rna分离试剂盒从nzz化合物处理的细胞中提取rna。然后使用bio-rad iscript advanced cdna合成试剂盒从rna样本中生成用于rt-qpcr的cdna。在cfx pcr仪(bio-rad)中使用表1所示的引物和itaq
tm
universalgreen supermix进行qpcr。使用由纯化的pcr产物产生的标准曲线，基于阈值周期相对于内部对照β-肌动蛋白的变化计算相对mrna的表达。
[0131]
表1.fxr靶基因的qrt-pcr引物
[0132][0133]
实施例1：抑制胆固醇7α-羟化酶(cyp7a1)
[0134]
对于三萜类化合物对胆固醇7α-羟化酶(cyp7a1)的抑制作用，观察到在大约35μm至45μm的浓度下化合物(i)对cyp7a1的抑制作用比化合物(ii)或cdca对cyp7a1的抑制作用强大约40％。
[0135]
实施例2：过氧化物酶体增殖物激活受体α(ppara)的mrna表达
[0136]
观察到在大约75μm至85μm的浓度下，由化合物(i)诱导的ppara的mrna表达比由化合物(ii)诱导的高大约两倍。
[0137]
实施例3：胆汁酸-coa合成酶(bacs)的mrna表达
[0138]
观察到由化合物(i)或化合物(ii)诱导的bacs的mrna表达比cdca诱导的bacs表达低大约2倍
[0139]
实施例4：klf11的mrna表达
[0140]
观察到在大约75μm至85μm的浓度下，化合物(i)或化合物(ii)诱导的klf11 mrna表达比缺乏三萜类化合物和/或cdca时高大约3倍至大约5倍。
[0141]
实施例5：三萜类化合物对激素信号通路的影响
[0142]
表2显示了12种纯化合物对不同激素受体信号通路的选择性。
[0143]
表2
[0144][0145]
表内：
↑
＝ec
50
值后刺激。
↓
＝ic
50
值后抑制
[0146]
在12个纯化的化合物中，化合物(i)和(ii)作为激动剂诱导fxr介导的转录反应。化合物(i)和(ii)对其他激素受体信号通路没有影响。
[0147]
化合物(iv)可抑制e2触发的erα介导的ic
50
大约为80μm的转录反应。
[0148]
化合物(vii)可抑制e2、vd3、dht对erβ(ic
50
＝40μm)、vdr(ic
50
＝20μm)和ar(ic
50
＝40μm)的作用。
[0149]
化合物viii可抑制vd3、dht对vdr(ic
50
＝25μm)和ar(ic
50
＝25μm)的作用。化合物x和xii在双相作用模型下可刺激vdr活性(ec
50
＝1.5μm)。
[0150]
列举实施方式
[0151]
提供了下列示例性实施方式，其编号不应被解释为指定重要性程度：
[0152]
实施方式1提供了在需要其的受试者中治疗至少一种疾病或紊乱的方法，所述方法包括：
[0153]
将治疗有效量的包含从牛樟芝(樟芝)中获得的至少一种选择性法尼醇x受体(fxr)激动剂的提取物施用至受试者，和
[0154]
在受试者中增强或诱导fxr介导的转录反应。
[0155]
实施方式2提供实施方式1所述的方法，其中至少一种fxr激动剂是三萜类化合物。
[0156]
实施方式3提供实施方式1-2中任一项所述的方法，其中所述三萜类化合物是：
[0157][0158]
和其盐、溶剂化物、同分异构体、互变异构体或前体药物。
[0159]
实施方式4提供实施方式1-3中任一项所述的方法，其中至少一种疾病或紊乱与选自肠、肝、肾脏和肾上腺之一有关。
[0160]
实施方式5提供实施方式1-4中任一项所述的方法，其中至少一种疾病或紊乱选自肝疾病、肥胖症、糖尿病、腹泻、腹痛、高血压、皮肤瘙痒、肝癌、肝炎、胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝炎、原发性硬化性胆管炎、炎症和纤维化。
[0161]
实施方式6提供实施方式1-5中任一项所述的方法，其中在缺少鹅脱氧胆酸(cdca)时施用诱导大约60％至大约85％的fxr活性。
[0162]
实施方式7提供实施方式1-6中任一项所述的方法，其中在存在cdca时施用刺激fxr活性大约15％至大约30％。
[0163]
实施方式8提供实施方式1-7中任一项所述的方法，其中施用对任何其他激素受体信号通路没有影响。
[0164]
实施方式9提供实施方式1-8中任一项所述的方法，其中施用对肝x受体(lxr)介导的转录反应没有影响。
[0165]
实施方式10提供实施方式1-9中任一项所述的方法，其中浓度大约35μm至85μm。
[0166]
实施方式11提供实施方式1-10中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
[0167]
实施方式12提供实施方式1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
[0168]
实施方式13提供在需要其的受试者中治疗肠道、肝、肾脏或肾上腺疾病或紊乱的方法，所述方法包括将治疗有效量的包含至少一种fxr激动剂的组合物施用至受试者，所述fxr激动剂选自：
[0169][0170]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或前体药物。
[0171]
实施方式14提供实施方式1-13所述的方法，其中所述施用是通过选自静脉内、皮下、口服、气溶胶、肠胃外、眼、肺和局部施用的途径。
[0172]
实施方式15提供药物组合物，其包含至少一种fxr激动剂，所述fxr激动剂选自
[0173][0174]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或前体药物；以及至少一种药学上可接受的赋形剂，其中所述组合物包含大约0.0001％至大约1％w/w的至少一种来自牛樟芝的既不是化合物(i)也不是化合物(ii)的三萜类化合物。
[0175]
实施方式16提供实施方式15所述的药物组合物，其中所述组合物包括核心或基质，所述核心包含至少一种被至少一种药学上可接受的赋形剂包衣的fxr激动剂，所述基质包含至少一种散布着至少一种药学上可接受的赋形剂的fxr激动剂。
[0176]
实施方式17提供在需要其的受试者中治疗至少一种疾病或紊乱的方法，所述方法包括将治疗有效量的实施方式15-16的组合物施用至受试者。
[0177]
实施方式18提供实施方式17所述的方法，其中所述疾病或紊乱选自肝疾病、肥胖
症、糖尿病、腹泻、腹痛、高血压、皮肤瘙痒、肝癌、肝炎、胆汁性胆管炎、非酒精性脂肪肝炎、原发性硬化性胆管炎、炎症和纤维化。
[0178]
其它实施方式
[0179]
在本文中变量的任何定义中要素列表的陈述(recitation)包括将该变量定义为任何单个要素或所列要素的组合(或亚组合)。本文中实施方式的陈述包括实施方式作为任何单个实施方式或与任何其他实施方式或其部分结合。
[0180]
本文中引用的各个和每一项专利、专利申请和出版物的公开在此通过引用以其全部并入本文。虽然本发明是参考具体实施方式公开的，但很明显本发明的其他实施方式和变型可以由其他本领域普通技术人员在不背离本发明的真正精神和范围的情况下想到。所附权利要求旨在被解释为包括所有此类实施方式和等价变型。