一种治疗心脏外科术后全身炎症反应的中药药物组方的制作方法

1.本发明属于医药生物技术领域，具体的，涉及一种治疗心脏外科术后全身炎症反应的中药药物组方。


背景技术：

2.心脏外科手术是治疗心血管疾病有效的治疗干预手段，然而却面临着创伤大、术后并发症和死亡率高等问题。其中一个主要原因是心脏手术可以导致机体产生全身炎症反应综合征(sirs)，sirs是机体受到外源性创伤打击时，促发初期炎症反应，同时产生内源性免疫炎性因子而形成的瀑布效应；sirs被认为与患者围术期并发症的发生率及死亡率的升高密切相关。术前存在的炎症相关合并症、手术创伤、体外循环、术中缺血再灌注损伤等与sirs的发生密切相关。目前一些研究已尝试某些抗炎药物来应对全身炎症反应，但这些药物的临床效果并不理想，同时其抗炎的分子细胞学机制仍需要进一步的研究。
3.心脏术后由于创伤、各个器官的缺血再灌注损伤等引起的一系列炎症反应，过程中伴随着炎性细胞的释放，各种代谢产物的产生，患者循环系统中白介素-6、白介素-2、肿瘤坏死因子(tnf)及c反应蛋白(crp)等炎症反应标记物水平明显升高，导致全身多器官功能障碍；同时由于炎症反应系统激活，中性粒细胞浸润，促炎细胞大量产生，天然免疫系统以及凝血系统中血小板活化等多种损伤机制，导致肺功能不全，胃肠道功能不全等多器官功能衰竭，死亡风险大大增加。
4.首先，胃肠道功能的紊乱，由于全麻加上围手术期胃肠粘膜的低灌注与缺血，心脏术后均出现不同程度的胃肠胀气、恶心、呕吐、纳差等症状，导致患者肠道摄入不足而引起营养不良，低血容量以及切口愈合不良等并发症；重症患者的胃肠功能失衡加重，加上长期大剂量的抗生素的使用从而引起肠道菌群失调，导致肠道炎症出现；然而肠道炎症状态下，肠道血管屏障渗漏增加，肠腔内的细菌毒素也随之进入血液循环之中，引起系统性全身炎症反应。目前临床上多采用留置胃管、胃肠营养、肛管排气等手段，但疗效甚微反而加重患者痛苦。所以如何去主动改善心脏术后患者胃肠道功能是临床外科目前面临的一个难题。
5.其次，急性肺损伤仍是心脏术后面临的常见并发症之一，发生率约为2.1％-25％，严重者甚至发展为急性呼吸窘迫综合征，进而导致患者死亡，死亡率约45％；尽管机械通气、体外膜肺(ecmo)支持、液体治疗策略以及激素、大剂量抗生素等可改善患者预后，但其导致的并发症和死亡率仍居高不下。如何在围术期加强肺保护，预防和治疗急性肺损伤的发生，成为临床医生亟待解决的问题。心脏术后的肺部并发症轻重程度不一，但一旦发生，就是造成患者术后死亡的主要原因。围手术期类固醇激素的使用虽然可以有效减轻体外循环相关的炎症反应、改善肺顺应性、降低肺血管阻力、减少细胞外水肿，但对急性肺损伤的作用有限，同时长期、大剂量的使用可引起菌群失调的风险。因而目前临床上针对急性肺损伤缺乏有效的干预措施。
6.另一方面，心脏外科手术伴有很高的脑损伤并发率，包括：脑卒中(1-3％)、认知功能障碍(20％)和术后谵妄(50％)。脑损伤引起的功能障碍在增加社会及家庭的负担的同
时，严重降低了患者的生活质量，更增加了心脏病患者术后的死亡率。导致心脏术后脑损伤的原因很多，脑缺血再灌注损伤引起的炎症反应也是一个值得考虑的因素。由于中枢神经系统拥有复杂的血管屏障，包括血-脑屏障和血-脑脊液屏障，正常情况下，脑血管屏障会限制血液中的大分子物质进入脑内，维持脑组织内环境处于稳定状态；但有研究人员观察到，在小鼠结肠炎急性期，小鼠大脑中的巨噬细胞数量增加，同时，小胶质细胞，神经系统主要的免疫监视细胞也处于被激活状态，说明肠道炎症能够迅速引起脑部炎症反应；在肠道炎症状态下，有害物质进入血液，脑血管屏障感受到了这种“威胁”，选择关闭来阻止有害物质进入，维持脑内稳态，然而隔绝了对外来往，有害物质不能进入，有益物质也不能进入，同时脑内产生的代谢产物同样运不出去，这时就产生了脑部并发症。
7.因此，通过调节胃肠道功能的中药药物组方，调理胃肠道功能，抑制心脏术后的全身炎症反应，同时解决肺部和脑部并发症问题，从而降低心脏手术患者围手术期并发症和死亡率。
8.基于此，提出本发明。


技术实现要素：

9.本发明首先涉及一种中药药物组方lxhcf，所述的药物组方lxhcf为预制中药颗粒配方，配方成份包括：黑顺片、干姜、山萸肉、黄连、酒川军、丹参、当归、炒白术、苍术、枳壳、厚朴、陈皮、茯苓、泽兰、威灵仙、红藤、肉桂；
10.预制配方中所有预制中药颗粒成份的用量及比例如下：
11.黑顺片6份、干姜6份、山萸肉10份、黄连6份、酒川军3份、丹参15份、当归10份、炒白术10份、苍术10份、枳壳10份、厚朴10份、陈皮6份、茯苓10份、泽兰10份、威灵仙10份、红藤10份、肉桂5份。
12.所述的药物组方lxhcf采用同厂家生产的中药配方颗粒，按照预制配方的成份配置。
13.本发明还涉及所述的药物组方的如下应用：
14.(1)制备治疗心脏外科术后全身炎症反应的药物；
15.(2)制备治疗心脏外科术后恢复的药物；
16.(3)制备用于治疗心脏外科术后全身炎症反应的联用型药物；
17.(4)制备治疗心脏外科术后恢复的联用型药物；
18.所述的联用型药物为：与抗生素联用；所述的抗生素为广谱抗生素；优选的，所述的抗生素为头孢类抗生素。
19.所述的心脏外科术为有心肌缺血损伤过程同时引起全身多个脏器有缺血再灌注损伤的心脏外科手术，具体的，所述的心脏外科术包括：
20.(1)全麻非体外循环下冠状动脉旁路移植术，
21.(2)全麻体外循环下冠状动脉旁路移植术，
22.(3)全麻体外循环下心脏瓣膜修复或置换术，
23.(4)全麻体外循环下成人先天性心脏病矫治术。
24.本发明的有益效果在于：
25.(1)本发明的药物组方，可以有效缓解心脏外科术后全身炎症反应，能够改善心脏
外科患者的术后预后情况；
26.(2)本发明的药物组方，与传统的心脏外科术后施用抗生素进行抗炎治疗可以联合用药，能够更有效的改善患者的预后。
27.(3)本发明的药物组方中，其中三味药对药物的功能相对比较关键：
28.1)制附片(黑顺片)的主要成分是生物碱：二萜生物碱型，乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等；
29.2)黄连的主要成分是生物碱：异喹啉类生物碱，小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀等；
30.3)酒大黄的主要成分是蒽醌类：大黄素、大黄酚、大黄酸及其苷类、大黄二蒽酮、番泻苷等。
附图说明
31.图1，给予lxhcf治疗能够显著降低模型小鼠由ami引起的炎症反应：
32.1a：心脏术后1、3、7天wbc含量；
33.1b：心脏术后1、3、7天mon含量；
34.1c：心脏术后1、3、7天neut含量；
35.1d：心脏术后1、3、7天neut(％)；
36.1e：心脏术后1、3、7天mon(％)。
37.##p《0.01,#p《0.05vs.假手术组；**p《0.01,*p《0.05vs.am模型小鼠组。
38.图2，给予lxhcf对心脏术后引起的炎症反应的抑制效果，
39.2a：心脏术后3天crp含量；
40.2b：心脏术后7天crp含量；
41.2c：心脏术后3天il-6含量；
42.2d：心脏术后7天il-6含量；
43.##p《0.01,#p《0.05vs.假手术组,**p《0.01,*p《0.05vs.am模型小鼠组。
44.图3，给予lxhcf对心脏术后7天小鼠心脏病理结构的影响：图中指向左下方向的箭头为炎性细胞浸润或异物，指向右上方向的箭头为坏死心肌。放大倍数，400倍。
具体实施方式
45.1、材料与试剂
46.elisa试剂盒，包括il-6(282012331)和tnf-a(206101311)，购自联科生物生物，小鼠crp检测试剂盒(c080385)购自武汉华美生物工程有限公司。
47.药物制备：lxhcf配方颗粒放到碾钵中碾成细粉，然后用灭菌的蒸馏水稀释至0.5g/ml及2.5g/ml，冷藏备用。
48.中药配方颗粒，是指使用每一味中药提取颗粒，按照预制配方的比例，配置起来形成的配方颗粒。其制备过程应符合国家药监局《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》的行政规定。
49.2、动物饲养
50.8-10周龄的健康c57bl/6小鼠，雄性。购自北京维通利华实验动物技术有限公司，
动物许可证号：scxk(京)2016-0006。所有参与实验的动物都符合道德和法律的要求。饲养于中国医学科学院药物研究所实验动物中心，所有动物均置于室温25℃、相对湿度45-55％的环境中，12小时的明暗交替光照周期变化。所有实验研究均获得中国医学科学院动物研究伦理委员会批准。
51.3、急性心肌梗死模型建立
52.采用结扎冠脉左前降支方法建立急性心肌梗死模型。操作方法简要描述如下：
53.(1)用2％异氟烷吸入和异氟烷输送系统麻醉小鼠，在左胸上做一个小的皮肤切口(1.2厘米)，解剖和收缩胸大肌和胸小肌后，暴露第四肋间间隙。随后用弯止血钳在第四肋间开一个小孔，打开胸膜和心包；
54.(2)止血钳微微打开，心脏平稳而轻轻地从间隙弹出。使用6-0丝线结扎冠状动脉左前降支；
55.(3)当左室前壁变白时，表明结扎是成功的。
56.结扎后，立即将心脏放回胸腔内，手动排空空气并封闭肌肉和皮肤。然后让老鼠呼吸室内空气，并在恢复期进行监测。
57.假手术组除未结扎左前降支外，均采用相同的手术方法。
58.4、给药
59.动物适应性喂养11天后，随机分组(共6组)为：
60.(1)假手术组；
61.(2)模型组；
62.(3)lxhcf-l(5g/kg)组；
63.(4)lxhcf-h(25g/kg)组；
64.(5)头孢克肟组(cefixime，0.08g/kg)组；
65.(6)头孢克肟 lxhcf组(cefixime 0.08g/kg lxhcf 25g/kg)组。
66.造模成功后，分别灌胃给予相应药物。假手术组(n＝13)和模型组(n＝13)灌胃给予去离子水，lxhcf-l组(5g/kg，n＝13)、lxhcf-h组(25g/kg，n＝13)、头孢克肟组(cefixime，0.08g/kg)和头孢克肟 lxhcf-l组(cefixime 0.08g/kg lxhcf-l 25g/kg)灌胃给予相应药物。实验期间每天灌胃2次，连续7天。
67.5、血常规检测
68.给药第3天和第7天，进行小鼠眼眶取血，每只小鼠取20μl的全血用mek-7222k血细胞计数仪进行分析。计算白细胞总数(wbc)、单核细胞总数(mon)、中性粒细胞总数(neut)、单核细胞百分率(mon％)和中性粒细胞百分率(neut％)。
69.6、酶联免疫法检测血浆il-6、crp含量
70.实验结束后，小鼠禁食过夜，用戊巴比妥麻醉。眼眶取血，3500rpm离心10min，检测血清il-6、crp活性。按照试剂盒标准操做进行检测：将100μl样品加入96孔板中，板上涂有捕获抗体。然后将96孔板37℃孵育60分钟，将96孔板中的溶液扔掉，并用1
×
冲洗缓【确认后修改】冲液清洗3次，然后加入相应的抗体试剂孵育60min，然后再次洗涤平板，加入辣根过氧化物酶溶液孵育20min，最后加入显色剂和终止液。多功能酶标仪在450nm处检测od值。
71.7、h&e染色评价心肌组织病理学
72.实验结束后，处死小鼠，立即分离出心脏组织。去部分心脏组织用多聚甲醛固定并
进行石蜡包埋。切4μm心肌组织切片进行h&e染色，以评估炎症病变。染色方法参照文献进行。
73.8、统计分析
74.所有数据均以平均数表示
±
标准偏差，spss软件检查方差齐性，采用单因素方差分析和lsd或
75.dunnett’s t3进行显著性差异分析。p《0.05，p《0.01时，差异具有统计学意义。
76.实施例1、给予lxhcf治疗能够显著降低模型小鼠由ami引起的炎症反应
77.ami造模1天后，各组wbc、mon、neut、mon％、neut％
78.【白细胞总数(wbc)、单核细胞总数(mon)、中性粒细胞总数(neut)、单核细胞百分率(mon％)和中性粒细胞百分率(neut％)】均无显著性变化。
79.术后3天进行检测的结果表明：
80.(1)与假手术组比，模型小鼠wbc、mon、neut含量显著性增加(p《0.05，0.01)。
81.(2)与模型组相比，lxhcf-l显著降低术后模型小鼠wbc、mon、neut、mon％(p《0.05，0.01)，降低率分别为37.8％、82.5％、50.3％和70.6％；
82.(3)抗生素组对模型小鼠wbc、mon、neut、mon％、neut％均无明显影响；
83.(4)抗生素 lxhcf组，显著降低上述指标(p《0.05，0.01)。
84.术后7天进行检测的结果表明，各组小鼠wbc、mon、neut、mon％、neut％数值有所回落，此外：
85.(1)与假手术组比，模型小鼠wbc、mon、neut、mon％、neut％无显著性差异(p》0.05)；
86.(2)与模型组比较，lxhcf-l明显降低wbc含量和neut％(p《0.05)、lxhcf-h明显降低neut％(p《0.05)；
87.上述结果表明，lxhcf对ami引起的炎症反应有明显抑制作用；单独应用抗生素并不能改善ami引起的炎症反应，联合lxhcf干预后，明显改善炎症反应。
88.实施例2、给与lxhcf治疗能够显著降低ami模型小鼠crp、il-6的表达量
89.术后3天，按照前述方法检测各组小鼠的crp、il-6量，结果表明：
90.(1)与假手术组比，模型组小鼠血浆crp显著升高(p《0.01)；
91.(2)与模型组相比，抗生素组对模型小鼠crp水平无明显影响，
92.(3)lxhcf-h、lxhcf-l、抗生素 lxhcf显著降低模型小鼠血浆crp水平(p《0.05、0.01)。
93.术后7天，进一步进行检测，结果显示，
94.(1)与假手术组比，模型组crp无显著性差异；
95.(2)与模型组相比，lxhcf-l仍显著降低模型小鼠血浆crp水平(p《0.05)
96.上述结果表明，术后3、7天，与假手术组比，模型组小鼠血浆il-6水平显著性升高(p《0.05、0.01)；与模型组相比，antibiotic对术后模型小鼠il-6水平无明显影响，lxhcf-l、antibiotic lxhcf显著降模型小鼠il-6水平(p《0.05、0.01)；lxhcf-h明显降低心脏术后7天crp水平(p《0.05)，提示lxhcf对心脏术后引起的炎症反应有抑制作用。
97.实施例3、lxhcf给药后，对ami模型小鼠心肌组织病理状况有显著改善
98.给药结束后，为进一步观察lxhcf对心肌组织病理学的改善作用，按照前述方法，
对心脏组织进行h&e染色。结果显示，
99.(1)模型组可见有心肌局灶变性坏死，心肌萎缩、断裂、伴有炎症细胞浸润，成纤维细胞增生及早期心肌纤维化；
100.(2)抗生素(antibiotic)组心肌局灶变性坏死，心肌萎缩、断裂、伴有炎症细胞浸润，未见明显改善；
101.(3)lxhcf-h、lxhcf-l、antibiotic lxhcf不同程度地减轻心脏炎症反应，减少炎性细胞浸润，改善模型小鼠组织病理学异常。
102.最后需要说明的是，以上实施例仅用于帮助本领域技术人员理解本发明的实质，不用于限定本发明的保护范围。