一种通过提高补体C3、C4水平增强免疫力的铁皮石斛组合物及其制备方法和应用

一种通过提高补体c3、c4水平增强免疫力的铁皮石斛组合物及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种通过提高补体c3、c4水平增强免疫力的铁皮石斛组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.免疫力低下是指机体免疫系统识别和清除抗原性异物，不能维持机体内环境稳定。长期饮食、作息不规律会打破机体内环境稳定，造成机体免疫力低下。免疫力低下人群易受到致病因子的侵袭，且患病后不易康复，生活质量受到严重影响。随着人们对健康意识的增强，增强免疫力现已成为医疗卫生领域的重大需求。
3.补益类中药具有显著增强免疫力效果。目前65％以上铁皮石斛保健食品具有增强免疫力的功能，其中70％以上配伍西洋参。免疫力低下人群因正气不足，易外感寒邪，常伴有寒证症状。铁皮石斛和西洋参性寒凉，不适合寒证人群，服用后易造成该类人群出现腹泻等现象。故寻找适合寒证免疫低下人群的增强免疫力中药产品有重要意义。
4.人参味甘、苦，性温，具有大补元气、补脾益肺、生津养血的功效，现代药理学研究发现其增强免疫力作用较佳。人参和铁皮石斛配伍，全方药性温和。铁皮石斛人参配伍有关于增强免疫力的报道，但未见有铁皮石斛、人参和白术配伍增强免疫力的报道。目前尚未有关于中药增强寒证免疫力低下人群免疫力的报道，究其原因主要与缺少寒证免疫低下动物模型及评价方法有关。
5.免疫低下动物模型的建立常采用拟人不良生活方式法、束缚法、化学药物法和辐射法等方法，其中拟人不良生活方式法最贴近现实患者情况。故通过模拟人类嗜食寒凉、工作强度大、饮食不规律等不良生活方式建立寒证免疫力低下动物模型，该制备技术建立的动物模型具有中医寒证体征，且免疫功能指标变化趋势与常规免疫低下动物模型一致。此寒证免疫低下动物模型贴合实际，且较为稳定。
6.现代研究表明免疫力低下的发生发展与血液中补体水平降低有关。补体不仅能通过经典途径、凝集素途径和旁路途径调节免疫功能，还具有促进浆细胞生成增强体液免疫功能的作用。补体c3、c4是血清中含量较高的补体成分，在机体的免疫调节过程起到重要作用。研究表明，免疫低下人群血清补体(c3、c4)和免疫因子(igg、iga)水平显著降低。目前有关于铁皮石斛辅助糖皮质激素升高狼疮肾炎患者补体c3、c4水平的报道，尚未有铁皮石斛调节免疫低下人群补体c3、c4水平的报道。


技术实现要素：

7.针对现有技术存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种通过提高补体c3、c4水平增强免疫力的铁皮石斛组合物及其制备方法和应用。
8.为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
9.一种通过提高补体c3、c4水平增强免疫力的铁皮石斛组合物，其制备原料包括下
述重量份的药物组分：铁皮石斛10～40份、人参5～30份、白术5～20份。
10.进一步地，所述组合物的药效成分包括多糖和皂苷类物质，所述多糖类物质为铁皮石斛多糖，皂苷类物质为人参皂苷rg1。
11.一种铁皮石斛组合物的制备方法，包括如下步骤：
12.1)醇提：将人参粉碎，加入其质量的5～15倍乙醇水溶液，浸泡1～3h，然后于80～100℃温度下提取0.5～5h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去除醇得到醇提浓缩液；
13.2)水提：将铁皮石斛和白术粉碎后，与步骤1)醇提后的人参混合，加入固体总质量5～15倍的水，浸泡1～3h，然后于80～100℃温度下提取1～8h，提取液过滤；合并水提滤液与步骤1)的醇提浓缩液，再次减压浓缩去除溶剂，得到铁皮石斛组合物。
14.进一步地，步骤1)中乙醇水溶液的浓度为25～70％。
15.一种铁皮石斛组合物的应用，所述应用为在制备增强免疫力药物中的应用，组合物通过上调c3、c4水平，增强体液免疫功能而达到增强免疫力的目的。
16.免疫力低下与如下指标失常有关：
17.1)血清补体c3、c4水平降低，或者
18.2)血清igg、iga水平降低。
19.本发明的铁皮石斛组合物在制备增强免疫力的药品或食品中的应用：药品制备铁皮石斛组合物可与药学上认可的辅料组合以制得片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液，食品制备铁皮石斛组合物可以小剂量添加在各种允许添加量的保健食品中。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
21.本发明的组合物具有较好的增强免疫力作用，可显著升高免疫因子(igg、iga)水平，其发挥增强免疫力作用的途径之一是上调血清补体c3、c4水平；该中药组合物具有组方简单、疗效确切的特点，对寒证免疫力低下模型小鼠增强免疫力的效果优于铁皮石斛西洋参配伍，市场开发前景良好。
具体实施方式
22.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
23.本发明实施例中药物组合物的制备方法均为：
24.1)醇提：将人参粉碎，加入一定质量倍数的乙醇水溶液，浸泡一段时间，然后于80～100℃温度下提取0.5～5h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去除醇得到醇提浓缩液；
25.2)水提：将铁皮石斛和白术粉碎后，与步骤1)醇提后的人参混合，加入一定质量倍数的水，浸泡一段时间，然后于80～100℃温度下提取1～8h，提取液过滤；合并水提滤液与步骤1)的醇提浓缩液，再次减压浓缩去除溶剂，得到药物提取物。
26.实施例1
27.称取浙江产铁皮石斛10份，吉林产人参20份，白术5份，采用醇提加水提的提取工艺，将人参粉碎后，加入人参质量的8倍量40％乙醇水溶液，浸泡1h，80℃加热回流提取1h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去醇得到醇提浓缩液。将干铁皮石斛和白术混合粉碎后，和醇提后人参一起，加入固体总质量的8倍量蒸馏水，浸泡1h，80℃加热回流提取2h，提取液过滤后，将水提滤液和醇提浓缩液合并，减压浓缩去除水和乙醇制得提取物。
28.实施例2
29.称取浙江产铁皮石斛15份，吉林产人参15份，白术10份，采用醇提加水提的提取工艺，将人参粉碎后，加入人参质量的10倍量50％乙醇水溶液，浸泡2h，90℃加热回流提取2h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去醇得到醇提浓缩液。将干铁皮石斛和白术混合粉碎后，和醇提后人参一起，加入固体总质量的10倍量蒸馏水，浸泡2h，90℃加热回流提取4h，提取液过滤，将水提滤液和醇提浓缩液合并，减压浓缩去除水和乙醇制得提取物。
30.实施例3
31.称取浙江产铁皮石斛20份，吉林产人参10份，白术10份，采用醇提加水提的提取工艺，将人参粉碎后，加入人参质量的12倍量60％乙醇水溶液，浸泡3h，100℃加热回流提取3h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去醇得到醇提浓缩液。将干铁皮石斛和白术混合粉碎后，和醇提后人参一起，加入固体总质量的12倍量蒸馏水，浸泡3h，100℃加热回流提取6h，提取液过滤后，将水提滤液和醇提浓缩液合并，减压浓缩去除水和乙醇制得提取物。
32.对比例1
33.称取浙江产铁皮石斛15份，西洋参15份，采用醇提加水提的提取工艺，将西洋参粉碎后，加入西洋参质量的10倍量50％乙醇水溶液，浸泡2h，90℃加热回流提取2h，提取液过滤后，滤液减压浓缩去醇得到醇提浓缩液。将干铁皮石斛粉碎后，和醇提后西洋参一起，加入固体总质量的10倍量蒸馏水，浸泡2h，90℃加热回流提取4h，提取液过滤后，将水提滤液和醇提浓缩液合并，减压浓缩去除水和乙醇制得提取物。
34.增强免疫力药效学试验
35.提取物可以与各种药学上认可的辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液，每天用量选择在0.3～10g提取物/kg小鼠体重。
36.动物分组：icr小鼠，雄性，随机分为：正常对照组、模型对照组、实施例1组(提取物施药量2.8g/kg)、实施例2组(提取物施药量2.8g/kg)、实施例3组(提取物施药量2.8g/kg)和对比例1组(提取物施药量2.8g/kg)，每组10只。
37.其中，实施例1组、实施例2组、实施例3组和对比例1组的小鼠，分别施药实施例1-3和对比例1制得的提取物。
38.病理模型：除正常对照组外，各组小鼠晚间8点至次日上午8点禁食不禁水12h，并按20ml/kg小鼠体重灌服0℃冰水，且小鼠单日强制游泳至力竭(指小鼠出现发抖、在水面打转等表现)。
39.给药方式：各组动物每日灌胃给药一次，灌胃容积均为1ml/100g，连续42天；正常对照组和模型对照组给予相应体积的水，其它组别给予药液。
40.指标测定：对各组小鼠进行粪便色泽、硬度评分和含水量测定，血清中补体(c3、c4)和免疫因子(igg、iga)水平检测。
41.(1)对模型小鼠粪便状态胃寒证的影响
42.如表1所示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠粪便评分显著降低，粪便含水量显著升高，提示模型小鼠出现腹泻、便溏等胃寒证胃肠道问题。与模型对照组相比，实施例3组小鼠粪便色泽和硬度评分显著升高，实施例2、3组小鼠粪便含水量显著降低；对比例1组小鼠粪便色泽和硬度评分有降低趋势，且粪便含水量有增加趋势。
43.表1对模型小鼠粪便状态的影响
[0044][0045]
注：与正常组比较，
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p《0.01，
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p《0.05；与模型组比较，
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p《0.01，
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p《0.05。
[0046]
(2)对模型小鼠血清补体c3、c4的影响
[0047]
如表2所示，正常对照组相比，模型对照组小鼠血清补体c3、c4水平显著降低。与模型对照组相比，实施例2、3组小鼠血清补体c3水平显著升高，实施例1、2、3组小鼠血清补体c4水平显著升高；对比例1组小鼠血清补体c3、c4水平有升高趋势，但无显著性差异。可见，铁皮石斛组合物可通过增加补体c3、c4，发挥增强免疫力。
[0048]
表2对模型小鼠血清补体c3、c4的影响
[0049][0050]
注：与正常组比较，
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p《0.01，
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p《0.05；与模型组比较，
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p《0.01，
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p《0.05。
[0051]
(3)对模型小鼠血清免疫因子水平的影响
[0052]
如表3所示，与正常对照组相比，模型对照组小鼠血清iga、igg水平显著降低，说明模型小鼠体液免疫功能明显降低。与模型对照组相比，实施例2、3组小鼠igg水平显著升高，实施例3组小鼠iga水平显著升高；对比例1组小鼠免疫因子水平有升高趋势，无显著性差异。可见，铁皮石斛组合物具有较好增强免疫力作用。
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表3对模型小鼠血清免疫因子的影响
[0054][0055]
注：与正常组比较，
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p《0.01，
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p《0.05；与模型组比较，
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p《0.01，
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p《0.05。
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综上，本发明的组合物具有较好的增强免疫力功效，可显著升高免疫因子(igg、
iga)水平，其发挥增强免疫力作用的途径之一是上调血清补体c3、c4。该中药组合物具有组方简单、疗效确切的特点，对寒证小鼠的增强免疫力效果优于铁皮石斛西洋参配伍，市场开发应用前景良好。
[0057]
本说明书所述的内容仅仅是对发明构思实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式。