TGF-β超家族I型和II型受体异多聚体及其用途的制作方法

tgf-β
超家族i型和ii型受体异多聚体及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2015年4月6日提交的美国临时申请顺序号62/143,579的优选权的权益。前述申请的公开内容通过引用以其整体结合到本文中。
3.发明背景
4.转化生长因子-β(tgf-β)超家族含有多种具有共同的序列元件和结构基序的生长因子。已知这些蛋白质在脊椎动物和无脊椎动物两者中对多种细胞类型发挥生物作用。该超家族的成员在图式形成和组织特化的胚胎发育期间发挥重要功能，并可影响各种分化过程，包括脂肪形成、肌发生、软骨发生、心脏发生、血细胞生成、神经发生和上皮细胞分化。该家族被分成两个通用系统分化进化枝：该超家族的较新进化的成员(这包括tgf-β、激活素和nodal)和该超家族较远缘的蛋白质的节点和进化枝(这包括多种bmp和gdf)。hinck(2012)febs letters 586:1860-1870。tgf-β家族成员不同的常常互补的生物作用。通过操控tgf-β家族成员的活性，常常可引起生物体的重大生理改变。例如piedmontese和belgian blue牛品种在gdf8(亦称肌肉生长抑制素)基因中携带引起肌肉质量明显增加的功能缺失突变。grobet等(1997)nat genet.,17(1)：71-4。此外，在人中，gdf8的无活性等位基因与肌肉质量增加和据报道的异常强度有关。schuelke等(2004)n engl j med,350:2682-8。
5.可通过提高或抑制由tgf-β家族的配体介导的信号转导(例如smad 1、2、3、5和/或8)实现肌肉、骨、脂肪、红细胞和其它组织的改变。因此，需要调节tgf-β超家族的不同配体的活性的作用剂。
6.发明概述
7.一方面，本公开内容提供包含至少一种tgf-β超家族i型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7多肽)(包括其片段和变体)和至少一种tgf-β超家族ii型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)(包括其片段和变体)的异多聚体复合体(heteromultimeric complex)。另一方面，本公开内容提供包含至少两种不同的tgf-β超家族i型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7多肽)(包括其片段和变体)的异多聚体复合体。又一方面，本公开内容提供包含至少两种不同的tgf-β超家族ii型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)(包括其片段和变体)的异多聚体复合体。任选，与其相应的同多聚复合体(例如actriib同二聚体和alk4同二聚体)相比，本文公开的异多聚体复合体(例如actriib:alk4异二聚体)具有不同的配体结合特异性/特征。如本文实施例所示，包含tgf-β超家族的i型和ii型受体多肽的异源多聚多肽复合体显示新的性质，包括新的配体结合特性。
8.异多聚体结构包括例如异二聚体、异三聚体和更高阶的复合体。参见例如图1、2、15、16、17、18、19。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体是异二聚体。优选本文所述tgf-β超家族i型和ii型受体多肽包含受体的配体结合域，例如tgf-β超家族i型或ii型受体的胞外域。因此，在某些方面，本文所述蛋白质复合体包含选自以下的ii型tgf-β超家族受体的胞外域：actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii及其截短物和变体，以及选自以
下的i型tgf-β超家族受体的胞外域：alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7及其截短物和变体。优选本文所述tgf-β超家族i型和ii型多肽，以及包含所述多肽的蛋白质复合体是可溶解的。在某些方面，本公开内容的异多聚体复合体与一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、缪勒抑制物质(mis)和lefty)结合。任选本公开内容的蛋白质复合体以大于或等于10-8
、10-9
、10-10
、10-11
或10-12
的kd与这些配体的一种或多种结合。一般而言，本公开内容的异多聚体拮抗(抑制)至少一种tgf-β超家族配体的一种或多种活性，而且活性的这类改变可采用本领域已知的各种测定法测量，包括例如如本文所述基于细胞的测定法。优选本公开内容的异多聚体在哺乳动物(例如小鼠或人)中显示至少4、6、12、24、36、48或72小时的血清半寿期。任选本公开内容的异多聚体在哺乳动物(例如小鼠或人)中可显示至少6、8、10、12、14、20、25或30天的血清半寿期。
9.在某些方面，本文所述异多聚体包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽，其中第一多肽包含tgf-β超家族i型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列，第二多肽包含tgf-β超家族ii型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列。另一方面，本文所述异多聚体包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽，其中第一多肽包含tgf-β超家族i型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列，第二多肽包含不同tgf-β超家族i型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列。又一方面，本文所述异多聚体包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽，其中第一多肽包含tgf-β超家族ii型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列，第二多肽包含不同tgf-β超家族ii型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列。任选tgf-β超家族i型受体多肽与相互作用对的第一成员直接连接，或间插序列(例如接头)可位于tgf-β超家族i型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列之间。同样，tgf-β超家族ii型受体多肽可与相互作用对的第二成员直接连接，或间插序列(例如接头)可位于tgf-β超家族ii型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列之间。接头的实例包括但不限于序列tggg(seq id no:62)、tgggg(seq id no:60)、sgggg(seq id no:61)、gggg(seq id no:59)和ggg(seq id no:58)。
10.本文所述相互作用对经设计以促进二聚化或形成更高阶的多聚体。在一些实施方案中，相互作用对可以是相互作用形成复合体、特别是异二聚体复合体的任2个多肽序列，但是有效实施方案也可使用形成同二聚体序列的互作用对。相互作用对的第一或第二成员可以是不对称对，意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。因此，不对称相互作用对的第一和第二成员可缔合形成异二聚体复合体。或者，相互作用对可为不受引导的(unguided)，意味着所述对的成员可彼此缔合或自身缔合而无实质性偏好，因此可具有相同或不同的氨基酸序列。因此，不受引导相互作用对的第一和第二成员可缔合形成同二聚体复合体或异二聚体复合体。任选相互作用对(例如不对称对或不受引导相互作用对)的第一成员与相互作用对的第二成员共价缔合。任选相互作用对(例如不对称对或不受引导相
互作用对)的第一成员与相互作用对的第二成员非共价缔合。任选相互作用对(例如不对称或不受引导相互作用对)的第一成员通过共价和非共价机制两者与相互作用对的第二成员缔合。
11.在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽是包含免疫球蛋白的fc结构域的融合蛋白。同样，在一些实施方案中，tgf-β超家族ii型受体多肽是包含免疫球蛋白的fc结构域的融合蛋白。传统的fc融合蛋白和抗体是不受引导相互作用对的实例，而多种工程改造的fc结构域被设计成不对称相互作用对[spiess等(2015)molecular immunology67(2a)：95-106]。因此，本文所述相互作用对的第一成员和/或第二成员可包含免疫球蛋白的恒定结构域，包括例如免疫球蛋白的fc部分。例如，相互作用对的第一成员可包含来源于igg(igg1、igg2、igg3或igg4)、iga(iga1或iga2)、ige或igm免疫球蛋白的fc结构域的氨基酸序列。例如，相互作用对的第一成员可包含与seq id no:200-214的任一个有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选相互作用对的第二成员可包含来源于igg(igg1、igg2、igg3或igg4)、iga(iga1或iga2)、ige或igm的fc结构域的氨基酸序列。所述免疫球蛋白结构域可包含促进异二聚体形成的一个或多个氨基酸修饰(例如缺失、添加和/或取代)。例如，相互作用对的第二成员可包含与seq id no:200-214的任一个有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，相互作用对的第一成员和第二成员包含来源于相同免疫球蛋白类别或亚类的fc结构域。在其它实施方案中，相互作用对的第一成员和第二成员包含来源于不同免疫球蛋白类别或亚类的fc结构域。同样，相互作用对(例如不对称对或不受引导相互作用对)的第一成员和/或第二成员包含修饰的免疫球蛋白的恒定结构域，包括例如修饰的免疫球蛋白的fc部分。例如，本公开内容的蛋白质复合体可包含第一修饰的免疫球蛋白fc部分和第二修饰的免疫球蛋白fc部分，所述第一修饰的fc部分包含与选自seq id no:200-214的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，所述第二修饰的fc部分可与第一修饰的免疫球蛋白fc部分的氨基酸序列相同或不同，包含与选自seq id no:200-214的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。所述免疫球蛋白结构域可包含促进异二聚体形成的一个或多个氨基酸修饰(例如缺失、添加和/或取代)。
[0012]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含i型和ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽来源于actriia受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于actriia受体。例如，actriia多肽可包含与本文公开的actriia序列(例如seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选actriia多肽可包含a)始于seq id no:9的21-30的氨基酸(例如氨基酸残基21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)，和b)止于seq id no:9的氨基酸110-135的任一个(例如110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134或135)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、
95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的actriia多肽可以是另包含对actriia是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，actriia多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于actriia多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在某些方面，包含actriia多肽的异聚体复合体另包含至少一种i型tgf-β超家族受体多肽。例如，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk1多肽可包含与a)始于seq id no:14的氨基酸22-34的任一个(例如氨基酸残基22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33和34)和b)止于seq id no:14的氨基酸95-118的任一个(例如氨基酸残基95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117和118)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk2多肽可包含与a)始于seq id no:18的氨基酸21-35的任一个(例如氨基酸残基21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34和35)，和b)止于seq id no:18的氨基酸99-123的任一个(例如氨基酸残基99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122和123)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk3多肽可包含与a)始于seq id no:22的氨基酸24-61的任一个(例如氨基酸残基24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60和61)，和b)止于seq id no:22的氨基酸130-152的任一个(例如氨基酸残基130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151和152)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方中，任选alk4多肽可包含与a)始于seq id no:26或83氨基酸23-34的任一个(例如氨基酸残基23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34)，和b)止于seq id no:26或83的氨基酸101-126的任一个(例如氨基酸残基101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列
或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如包含与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk5多肽可包含与a)始于seq id no:30或87的氨基酸25-36的任一个(例如氨基酸残基25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35和36)，和b)止于seq id no:30或87的氨基酸106-126的任一个(例如氨基酸残基106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk6多肽可包含与a)始于seq id no:34的氨基酸14-32的任一个(例如氨基酸残基14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31和32)，和b)止于seq id no:34的氨基酸102-126的任一个(例如氨基酸残基102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在这个和其它实施方案中，任选alk6多肽可包含与a)始于seq id no:91的氨基酸26-62的任一个(例如氨基酸残基26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62)，和b)止于seq id no:91的氨基酸132-156的任一个(例如氨基酸残基132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155和156)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在这个和其它实施方案中，任选alk7多肽可包含与始于seq id no:38的氨基酸21-28的任一个(例如氨基酸21、22、23、24、25、26、27或28)和止于seq id no:38的氨基酸92-113的任一个(例如seq id no:38的氨基酸92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。在某些方面，包含actriia多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽。例如，actriia异聚体复合体可另包含本文所述actriib多肽，包括例如包含与选自seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述bmprii多肽，包括例如包含与选自seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方
案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述misrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriia异聚体复合体可另包含本文所述tgfbrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0013]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含i型和ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽来源于actriib受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于actriib受体。例如，actriib多肽可包含与本文公开的actriib序列(例如seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选actriib多肽可包含与a)始于seq id no:1的氨基酸20-29的任一个(例如氨基酸残基20、21、22、23、24、25、26、27、28或29)，和b)止于seq id no:1的氨基酸109-134的任一个(例如氨基酸残基109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的actriib多肽可以是另包含对于actriib是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，actriib多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选在actriib多肽和异源多肽之间具有接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。优选包含actriib多肽的异聚体复合体另包含至少一种i型tgf-β超家族受体多肽。例如，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、
144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在某些方面，包含actriib多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽。例如，actriia异聚体复合体可另包含本文所述actriib多肽，包括例如包含与选自seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。例如，actriib异聚体复合体可另包含本文所述actriia多肽，包括例如包含与选自seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述bmprii多肽，包括例如包含与选自seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述misrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，actriib异聚体复合体可另包含本文所述tgfbrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0014]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含i型和ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽来源于tgfbrii受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于tgfbrii受体。例如，tgfbrii多肽可包含与本文公开的tgfbrii序列(例如seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选tgfbrii多肽可包含与a)始于seq id no:42的氨基酸23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或51的任一个，和b)止于seq id no:42的氨基酸143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165或166的任一个的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选tgfbrii多肽可包含与a)始于seq id no:67的氨基酸23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44的任一个，和b)止于seq id no:67的氨基酸163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190或191的任一个的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、
97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的tgfbrii多肽可以是另包含对tgfbrii是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，tgfbrii多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于tgfbrii多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。优选包含tgfbrii多肽的异聚体复合体另包含至少一种i型tgf-β超家族受体多肽。例如，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。任选包含tgfbrii多肽的异聚体复合体可另包含一种或多种其它的ii型tgf-β超家族受体多肽，包括例如本文所述actriia、actriib、bmprii和misrii多肽(例如包含选自seq id no:1、2、3、4、5、6、9、10、11、46、47、50、51、71、72、75、76、79、80、100、102、118、120、121、123、401、402、409、410、411和412的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽)。在某些方面，包含tgfbrii多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽。例如，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述actriia多肽，包括例如包含与选自seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述actriib多肽，包括例如包含与选自seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述misrii多肽，包括例如包
含与选自seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，tgfbrii异聚体复合体可另包含本文所述bmprii多肽，包括例如包含与选自seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0015]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含i型和ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽来源于bmprii受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于bmprii受体。例如，bmprii多肽可包含与本文公开的bmprii序列(例如seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选bmprii多肽可包含与a)始于seq id no:46或71的氨基酸27-34的任一个(例如氨基酸残基27、28、29、30、31、32、33和34)，和b)止于seq id no:46或71的氨基酸123-150的任一个(例如氨基酸残基123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149和150)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的bmprii多肽可以是另包含对bmprii是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，bmprii多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于bmprii多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。优选包含bmprii多肽的异聚体复合体另包含至少一种i型tgf-β超家族受体多肽。例如，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或
100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在某些方面，包含bmprii多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽。例如，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述actriia多肽，包括例如包含与选自seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述actriib多肽，包括例如包含与选自seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述misrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，bmprii异聚体复合体可另包含本文所述tgfbrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0016]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含i型和ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽来源于misrii受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于misrii受体。在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中ii型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于misrii受体。例如，misrii多肽可包含与本文公开的misrii序列(例如seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选misrii多肽可包含与a)始于seq id no:50、75或79的氨基酸17-24的任一个(例如氨基酸残基17、18、19、20、21、22、23和24)，和b)止于seq id no:50、75或79的氨基酸116-149的任一个(例如氨基酸残基116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148和149)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的misrii多肽可以是另包含对misrii是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，misrii多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于misrii多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组
分。优选包含misrii多肽的异聚体复合体另包含至少一个i型tgf-β超家族多肽。例如，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在某些方面，包含misrii多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的ii型tgf-β超家族受体多肽。例如，misrii异聚体复合体可另包含本文所述actriia多肽，包括例如包含与选自seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述actriib多肽，包括例如包含与选自seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述bmprii多肽，包括例如包含与选自seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，misrii异聚体复合体可另包含本文所述tgfbrii多肽，包括例如包含与选自seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、
99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0017]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk1受体。例如，alk1多肽可包含与本文公开的alk1序列(例如14、15、124、126、171、172、413、414、463和464)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk1多肽可包含与a)始于seq id no:14的氨基酸22-34的任一个(例如氨基酸残基22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33和34)和b)止于seq id no:14的氨基酸95-118的任一个(例如氨基酸残基95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117和118)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的alk1多肽可以是另包含对alk1是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk1多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于之间的接头结构域alk1多肽和异源多肽。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk1多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk1异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0018]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk2受体。例如，alk2多肽可包含与本文公开的alk2序列(例如18、19、136、138、173、174、421、422、465和
466)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk2多肽可包含与a)始于seq id no:18的氨基酸21-35的任一个(例如氨基酸残基21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34和35)，和b)止于seq id no:18的氨基酸99-123的任一个(例如氨基酸残基99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122和123)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的alk2多肽可以是另包含对alk2是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk2多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk2多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk2多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk2异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0019]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk3受体。例如，alk3多肽可包含与本文公开的alk3序列(例如22、23、115、117、175、176、407、408、467和468)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk3多肽可包含与a)始于seq id no:22的氨基酸24-61的任一个(例如氨基酸残基24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、
42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60和61)，和b)止于seq id no:22的氨基酸130-152的任一个(例如氨基酸残基130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151和152)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的alk3多肽可以是另包含对alk3是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk3多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk3多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk3多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk3异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0020]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk4受体。例如，alk4多肽可包含与本文公开的alk4序列(例如26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk4多肽可包含与a)始于seq id no:26或83的氨基酸23-34的任一个(例如氨基酸残基23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34)，和b)止于seq id no:26或83的氨基酸101-126的任一个(例如氨基酸残基101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨
基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的alk4多肽可以是另包含对alk4是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk4多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk4多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk4多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk4异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0021]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk5受体。例如，alk5多肽可包含与本文公开的alk5序列(例如30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk5多肽可包含与a)始于seq id no:30或87的氨基酸25-36的任一个(例如氨基酸残基25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35和36)，和b)seq id no:30或87的氨基酸106-126的任一个(例如氨基酸残基106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成的多肽。任选本公开内容的alk5多肽可以是另包含对alk5是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk5多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk5多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包
含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk5多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk5异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0022]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk6受体。例如，alk6多肽可包含与本文公开的alk6序列(例如34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk6多肽可包含与a)始于seq id no:34的氨基酸14-32的任一个(例如氨基酸残基14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31和32)，和b)止于seq id no:34的氨基酸102-126的任一个(例如氨基酸残基102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk6多肽可包含与a)始于seq id no:91的氨基酸26-62的任一个(例如氨基酸残基26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62)，和b)止于seq id no:91的氨基酸132-156的任一个(例如氨基酸残基132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155和156)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选公开内容的alk6多肽本可以是另包含对alk6是异
源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk6多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk6多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk6多肽的异聚体复合体另包含至少一种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk6异聚体复合体可另包含本文所述alk7多肽，包括例如包含与选自seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0023]
在一些实施方案中，本公开内容提供包含至少两种不同的i型tgf-β超家族受体多肽的异聚体多肽复合体，其中i型tgf-β超家族受体多肽的至少一种来源于alk7受体。例如，alk7多肽可包含与本文公开的alk7序列(例如38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选alk7多肽可包含与始于seq id no:38的氨基酸21-28的任一个(例如氨基酸21、22、23、24、25、26、27或28)和止于seq id no:38的氨基酸92-113的任一个(例如seq id no:38的氨基酸92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113)的多肽有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。任选本公开内容的alk7多肽可以是另包含对alk7是异源的一个或多个部分(结构域)的融合蛋白。例如，alk7多肽可与包含多聚化结构域的异源多肽融合，任选具有位于alk7多肽和异源多肽之间的接头结构域。在一些实施方案中，本文所述多聚化结构域包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，包含alk7多肽的异聚体复合体另包含至少一
种不同的i型tgf-β超家族多肽。例如，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk2多肽，包括例如包含与选自seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk3多肽，包括例如包含与选自seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk4多肽，包括例如包含与选自seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk5多肽，包括例如与选自seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk6多肽，包括例如包含与选自seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。在一些实施方案中，alk7异聚体复合体可另包含本文所述alk1多肽，包括例如包含与选自seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464的序列有至少70％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成的多肽。
[0024]
在一些实施方案中，本文公开的tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽包含选自以下的一个或多个修饰的氨基酸残基：糖基化氨基酸、聚乙二醇化氨基酸、法尼基化氨基酸、乙酰化氨基酸、生物素化氨基酸、与脂质部分缀合的氨基酸和与有机衍化剂缀合的氨基酸。在一些实施方案中，本文所述tgf-β超家族i型和/或ii型多肽被糖基化，并具有可获自多肽在哺乳动物细胞(包括例如cho细胞)中表达的糖基化模式。
[0025]
在某些方面，本公开内容提供编码本文所述任何tgf-β超家族i型和/或ii型多肽的核酸。本文公开的核酸可与启动子有效连接用于表达，本公开内容进一步提供用这类重组多核苷酸转化的细胞。优选细胞是哺乳动物细胞，例如cos细胞或cho细胞。
[0026]
在某些方面，本公开内容提供用于制备本文所述tgf-β超家族i型和/或ii型多肽的任一种以及包含所述多肽的蛋白质复合体的方法。所述方法可包括使本文公开的任何核酸在合适的细胞(例如cho细胞或cos细胞)中表达。所述方法可包括：a)将细胞培养在适于本文所述tgf-β超家族i型或ii型多肽表达的条件下，其中所述细胞用i型或ii型多肽表达构建体转化；和b)回收所表达的i型或ii型多肽。可采用从细胞培养物中获得蛋白质的任何众所周知的技术，回收作为粗产物、部分纯化或高度纯化的部分的本文所述tgf-β超家族i型和/或ii型多肽以及所述多肽的蛋白质复合体。
[0027]
在某些方面，本公开内容提供用于制备本文公开的任何异多聚体复合体的方法。所述方法可包括使本文公开的任何核酸在合适的细胞(例如cho细胞或cos细胞)中表达。所述方法可包括：a)获得包含含有本文公开的tgf-β超家族i型受体多肽的编码序列的核酸和包含本文公开的tgf-β超家族ii型受体多肽的编码序列的核酸的细胞；(b)在适于本文所述tgf-β超家族i型和ii型多肽表达的条件下培养所述细胞；和c)回收包含所表达的这类i型
和ii型多肽的异聚体复合体。采用从细胞培养物获得蛋白质的任何众所周知的技术，回收作为粗产物、部分纯化或高度纯化的部分的本文公开的异多聚体复合体。
[0028]
可将本文描述的任何蛋白质复合体掺入药物制剂中。任选所述药物制剂相对于其它多肽组分是至少80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％纯的。本文公开的任选药物制剂可包含一种或多种其它的活性剂。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含小于10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的i型受体多肽同多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含小于10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的ii型受体多肽同多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含小于10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的i型受体多肽同多聚体和小于10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的ii型受体多肽同多聚体。
[0029]
本公开内容进一步提供用于治疗或预防与例如受tgf-β超家族的一种或多种配体影响的肌肉、骨、脂肪、红细胞和其它组织有关的各种疾病和病症的方法和异多聚体复合体。所述疾病和病症包括但不限于与肌肉丢失或肌肉生长不足有关的病症(例如肌肉萎缩；肌营养不良，包括杜兴型肌营养不良、贝克肌营养不良和面肩胛肱骨肌营养不良；肌萎缩性侧索硬化和恶病质)和与不良体重增加有关的病症(例如肥胖症、2型糖尿病或非胰岛素依赖型糖尿病(niddm)、心血管疾病、高血压、骨关节炎、中风、呼吸问题和胆囊疾病)。在一些实施方案中，本文公开的异多聚体复合体可用于降低体脂肪含量或降低有需要的受试者的体脂肪含量增加的速率。在一些实施方案中，本文公开的异多聚体复合体可用于降低患者的胆固醇和/或甘油三酯水平。
[0030]
附图简述
[0031]
图1a和1b显示包含i型受体和ii型受体多肽的异聚体蛋白质复合体的2个图解实例。图1a表示包含一个i型受体融合多肽和一个ii型受体融合多肽的异二聚体蛋白质复合体，它可通过各多肽链内所含的多聚化结构域共价或非共价装配。两个装配的多聚化结构域构成相互作用对，它可以是受引导的或不受引导的。图1b表示包含与图1a一样的2个异二聚体复合体的杂四聚体蛋白质复合体。可预期更高阶的复合体。
[0032]
图2显示包含i型受体多肽(标示为“i”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6或alk7蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)和ii型受体多肽(标示为“ii”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的actriia、actriib、misrii、bmprii或tgfbrii蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)的异聚体蛋白质复合体的图解实例。在说明性实施方案中，i型受体多肽是包含相互作用对的第一成员(“c”)的融合多
肽的一部分，ii型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“d”)的融合多肽的一部分。在每个融合多肽中，接头可位于i型或ii型受体多肽和相互作用对的相应成员之间。相互作用对的第一或第二成员(c，d)可以是受引导的(guided)(不对称)对，意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合，或相互作用对可为不受引导的，意味着所述对的成员可彼此缔合或自身缔合而无实质性偏好且可具有相同或不同的氨基酸序列。传统的fc融合蛋白和抗体是不受引导相互作用对的实例，而多种工程改造的fc结构域被设计成受引导(不对称)相互作用对[例如，spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。
[0033]
图3显示根据多个actriib和actriia晶体结构的复合分析推导的具有直接接触用框标明的配体的残基的人actriia(seq id no:500)和人actriib(seq id no:2)的胞外域比对。
[0034]
图4显示无其胞内域的各种脊椎动物actriib前体蛋白(分别为seq id no:501、502、503、504、505和506)、无其胞内域的人actriia前体蛋白(seq id no:507)和共有actrii前体蛋白(seq id no:508)的多个序列比对。
[0035]
图5显示应用clustal 2.1对来自人igg同种型的fc结构域的多个序列比对。铰链区用点下划线标示。双下划线表示igg1 fc中经工程改造以促进不对称链配对的位置和相对于其它同种型igg2、igg3和igg4的相应位置的实例。
[0036]
图6显示actriib-fc:alk4-fc异二聚体蛋白质复合体与actriib-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比的配体结合数据。对于各个蛋白质复合体，配体通过k
off
(与配体信号转导抑制良好关联的动力学常数)排序，并以结合亲和力降序排列列出(结合最紧密的配体列在最前面)。在左边，黄色、红色、绿色和蓝色线表示解离速率常数量值。实心黑线表示其与异二聚体的结合与同二聚体相比提高或未改变的配体，而红色短划线表示与同二聚体相比结合大大减弱。如所示，actriib-fc:alk4-fc异二聚体显示与任一种同二聚体相比与激活素b的结合增强，与用actriib-fc同二聚体观察到的一样保持与激活素a、gdf8和gdf11牢固结合，且显示与bmp9、bmp10和gdf3的结合大大减弱。像actriib-fc同二聚体一样，异二聚体保持与bmp6的中等水平结合。
[0037]
图7显示actriib-fc:alk3-fc异二聚体蛋白质复合体与actriib-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，actriib-fc:alk3-fc异二聚体以异常高的亲和力结合bmp2和bmp4，并且显示与任一种同二聚体相比与bmp5、bmp6、bmp7、gdf5、gdf6和gdf7的结合增强。与actriib同二聚体相比，actriib-fc:alk3-fc异二聚体显示与激活素a、激活素b、bmp10、gdf8和gdf11的结合减弱，并且还区分这些配体至较大程度，尤其激活素a和激活素b之间。另外，对于actriib-fc:alk3-fc异二聚体，actriib-fc同二聚体以高亲和力结合bmp9和gdf3的能力不存在。
[0038]
图8显示actriib-fc:alk7-fc异二聚体蛋白质复合体与actriib-fc同二聚体和alk7-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，与actriib-fc同二聚体牢固结合的4-5种配体(激活素a、bmp10、gdf8和gdf11)显示与actriib-fc:alk7-fc异二聚体的结合减弱，例外的是保持与异二聚体紧密结合的激活素b。另外，与actriib-fc同二聚体中等结合的3种配体(gdf3、bmp6和尤其bmp9)显示与actriib-fc:alk7-fc异二聚体的结合减弱。相比之下，bmp5以中等强度结合actriib-fc:alk7异二聚体，尽管仅与actriib-fc同二聚体弱结合。无受测配体与alk7-fc同二聚体结合。
[0039]
图9显示actriib-fc:alk2-fc异二聚体蛋白质复合体与actriib-fc同二聚体和alk2-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，actriib-fc:alk2-fc异二聚体显示与激活素b优先地牢固结合，因此类似于actriib-fc:alk7-fc异二聚体(图8)。然而，actriib-fc:alk2-fc异二聚体通过保持actriib-fc同二聚体特有的与bmp9紧密结合，而部分不同于actriib-fc:alk7-fc。无受测配体与alk2-fc同二聚体结合。
[0040]
图10显示actriia-fc:alk4-fc异二聚体蛋白质复合体与actriia-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，actriia-fc:alk4-fc异二聚体显示与actriia-fc同二聚体相比，与激活素a的结合增强，尤其与激活素ac的结合增强，同时保持与激活素ab和gdf11牢固结合。另外，具有对actriia-fc同二聚体有最高亲和力的配体激活素b显示对actriia-fc:alk4-fc异二聚体的亲和力降低(尽管仍在高亲和力范围内)。actriia-fc:alk4-fc异二聚体还显示与actriia-fc同二聚体相比与bmp10的结合显著减弱。
[0041]
图11显示与actriib-fc同二聚体和alk1-fc同二聚体相比bmprii-fc:alk1-fc异二聚体蛋白质复合体的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，bmprii-fc:alk1-fc异二聚体大多保持alk1-fc同二聚体特有的与bmp9和bmp10牢固结合；然而，异二聚体显示用同二聚体不存在的针对bmp10优于bmp9的适度选择性。此外与alk1-fc同二聚体不一样，bmprii-fc:alk1-fc异二聚体与bmp15结合，尽管解离速率约为bmprii-fc同二聚体的10倍。
[0042]
图12显示bmprii-fc:alk3-fc异二聚体蛋白质复合体与bmprii-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，bmprii-fc:alk3-fc异二聚体比alk3-fc同二聚体牢得多地与bmp6结合，反映了解离速率接近1/10。由于其与bmp2和bmp4的结合大多未改变，bmprii-fc:alk3异二聚体因此可被视为bmp2、bmp4和bmp6的联合抑制剂(joint inhibitor)。这种结合特征与alk3-fc同二聚体的截然不同，其与bmp4和bmp2异常牢固地结合将其鉴定为与以中等水平结合的4种配体(包括bmp6)相比对该配体对有高选择性。
[0043]
图13显示bmprii-fc:alk4-fc异二聚体蛋白质复合体与bmprii-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。bmprii-fc:alk4-fc异二聚体因以高或中等强度结合几种激活素配体而不同于两种同二聚体，且因仅弱结合bmp15而不同于bmprii-fc同二聚体。最值得注意的是，bmprii-fc:alk4-fc异二聚体牢固且以高选择性与异二聚体配体激活素ab结合。
[0044]
图14显示两种不同tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体蛋白质复合体与tgfβrii-fc同二聚体和alk5-fc同二聚体相比的配体结合数据。格式与图6相同。如所示，tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体因其对tgfβ2的高选择性同时仍保持对tgfβ1和tgfβ3相当多的亲和力而显著不同于tgfβrii-fc同二聚体。掺入tgfβrii结合的tgfβ2的长同种型的异二聚体比其短同种型对应物更牢和更多选择性。无受测配体与alk5-fc同二聚体结合。
[0045]
图15a-15d显示包含i型受体多肽(标示为“i”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6或alk7蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、
88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)和ii型受体多肽(标示为“ii”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的actriia、actriib、misrii、bmprii或tgfbrii蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)的异聚体蛋白质复合体的图解实例。在说明性实施方案中，i型受体多肽是包含相互作用对的第一成员(“c
1”)的融合多肽的一部分，ii型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“c
2”)的融合多肽的一部分。合适的相互作用对包括例如重链和/或轻链免疫球蛋白相互作用对、其截短物和变体例如本文描述的那些[例如，spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。在每个融合多肽中，接头可位于i型受体多肽或ii型受体多肽和相互作用对的相应成员之间。相互作用对的第一或第二成员可以是不受引导的，这意味着所述对的成员可彼此缔合或自身缔合而无实质性偏好，且它们可具有相同或不同的氨基酸序列。参见图15a。或者，相互作用对可以是受引导(不对称)对，这意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。参见图15b。可预期更高阶的复合体。参见图15c和15d。
[0046]
图16a-16g显示包含两种i型受体多肽(标示为“i”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6或alk7蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)和两种ii型受体多肽(标示为“ii”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的actriia、actriib、misrii、bmprii或tgfbrii蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)的异聚体蛋白质复合体的图解实例。
[0047]
在说明性实施方案16a中，第一i型受体多肽(从左到右)是包含相互作用对的第一成员(“c
1”)和另包含其它相互作用对的第一成员(“a
1”)的融合多肽的一部分；第二i型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“c
2”)和另包含相互作用对的第一成员(“a
2”)的融合多肽的一部分。第一ii型受体多肽(从左到右)是包含相互作用对的第二成员(“b
1”)的融合多肽的一部分；第二ii型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“b
2”)的融合多肽的一部分。a1和a2可相同或不同；b1和b2可相同或不同，且c1和c2可相同或不同。在每个融合多肽中，接头可位于i型受体多肽或ii型受体多肽和相互作用对的相应成员之间以及相互作用对之间。图16a是不受引导相互作用对的缔合的实例，这意味着所述对的成员可彼此缔合或自身
缔合而无实质性偏好且可具有相同或不同的氨基酸序列。
[0048]
在说明性实施方案16b中，第一ii型受体多肽(从左到右)是包含相互作用对的第一成员(“c
1”)和另包含其它相互作用对的第一成员(“a
1”)的融合多肽的一部分；第二ii型受体actriib多肽是包含相互作用对的第二成员(“b
2”)的融合多肽的一部分。第一i型受体多肽(从左到右)是包含相互作用对的第二成员(“b
1”)的融合多肽的一部分；第二i型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“c
2”)和另包含相互作用对的第一成员(“a
2”)的融合多肽的一部分。在每个融合多肽中，接头可位于i型受体或ii型受体多肽和相互作用对的相应成员之间以及相互作用对之间。图16b是受引导(不对称)相互作用对缔合的实例，这意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。
[0049]
合适的相互作用对包括例如本文描述的重链和/或轻链免疫球蛋白相互作用对、其截短物和变体[例如，spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。可预期更高阶的复合体。参见图16c-16f。采用类似方法，特别是使用轻链和/或重链免疫球蛋白、其截短物或变体的方法，可将相互作用对用于产生类似于抗体fab和f(ab’)2复合体的异二聚体[例如，spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。参见图16g。
[0050]
图17a和17b显示包含i型受体多肽(标示为“i”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6或alk7蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)和ii型受体多肽(标示为“ii”)(例如与来自人或其它物种例如本文所述其它物种的actriia、actriib、misrii、bmprii或tgfbrii蛋白的胞外域有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽，例如9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)和抗体的配体结合域(例如来源于与一种或多种tgf-β超家族配体结合的抗体的配体结合结构域)的异聚体蛋白质复合体的图解实例。在说明性实施方案中，i型受体多肽是包含相互作用对的第一成员(“c
1”)和另包含其它相互作用对的第一成员(“a
1”)的融合多肽的一部分。ii型受体多肽是包含相互作用对的第二成员(“b
1”)的融合多肽的一部分。可变重链(vh)多肽是包含相互作用对的第二成员(“c
2”)和另包含相互作用对的第一成员(“a
2”)的融合多肽的一部分。可变重链(v
l
)多肽是包含相互作用对的第二成员(“b
2”)的融合多肽的一部分。在每个融合多肽中，接头可位于i型受体或ii型受体多肽和相互作用对的相应成员之间、相互作用对之间和vh和v
l
多肽和相互作用对的成员之间。a1和a2可相同或不同；b1和b2可相同或不同，且c1和c2可相同或不同。合适的相互作用对包括例如本文描述的恒定重链和/或轻链免疫球蛋白相互作用对、其截短物和变体[例如，spiess等(2015)molecular immunology67(2a)：95-106]。图17a是受引导(不对称)相互作用对缔合的实例，这意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。图17b是不受引导相互作用对的缔合的实例，这意味着所述对的成员可彼
此缔合或自身缔合而无实质性偏好且可具有相同或不同的氨基酸序列。
[0051]
图18显示图解实例i型受体:ii型受体单阱(single-trap)多肽。i型受体:ii型受体单阱多肽可含有具有相同或不同序列的多个i型受体结构域(例如1、2、3、4、5、6、7、9、10个或更多个结构域)和具有相同或不同序列的多个ii型受体结构域(例如1、2、3、4、5、6、7、9、10个或更多个结构域)。这些i型受体和ii型受体结构域可以任何顺序排列，并且在i型1受体和ii型受体结构域的一个或多个之间可包含一个或多个接头结构域位置。所述配体阱可用作治疗或预防本文所述疾病或病症的治疗剂。
[0052]
图19a-19d显示包含至少一个i型受体:ii型受体单链阱(single chain trap)多肽的多聚体蛋白质复合体的图解实例。在说明性实施方案19a和19b中，第一i型受体:ii型受体单链阱多肽(从左到右)是包含相互作用对的第一成员(“c
1”)的融合多肽的一部分；第二i型受体:ii型受体单链阱多肽是包含相互作用对的第二成员(“c
2”)的融合多肽的一部分。c1和c2可相同或不同。第一和第二i型受体:ii型受体单链阱多肽可相同或不同。在每个融合多肽中，接头可位于i型受体:ii型受体单链阱多肽和相互作用对的相应成员之间。合适的相互作用对包括例如本文描述的重链和/或轻链免疫球蛋白相互作用对、其截短物和变体[例如，spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。图19a是不受引导相互作用对的缔合的实例，这意味着所述对的成员可彼此缔合或自身缔合而无实质性偏好且可具有相同或不同的氨基酸序列。图19b是受引导(不对称)相互作用对缔合的实例，这意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。可预期更高阶的复合体。另外，这类i型受体:ii型受体单链阱多肽同样可与一种或多种i型受体多肽和/或一种或多种ii型受体多肽共价或非共价缔合。参见图19c。同样，这类i型受体:ii型受体单链阱多肽同样可与共价或非共价缔合抗体的一个或多个配体结合域(例如与一种或多种i型受体:ii型受体异多聚体结合配体结合的抗体的配体结合结构域)。参见图19d。
[0053]
发明详述
[0054]
1.概述
[0055]
一方面，本公开内容涉及包含tgfβ超家族i型受体多肽的胞外域和tgfβ超家族ii型受体多肽的胞外域的异多聚体复合体、包含至少两种不同的tgfβ超家族i型受体多肽的胞外域的异多聚体复合体、包含至少两种不同的tgfβ超家族ii型受体多肽的胞外域的异多聚体复合体、制备所述异多聚体复合体的方法及其用途。如本文所述，在一些实施方案中，异多聚体复合体可包含选自以下的tgfβ超家族i型受体多肽的胞外域：alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7。同样，在一些实施方案中，这些异多聚体复合体可包含选自以下的tgfβ超家族ii型受体多肽的胞外域：actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii。在某些优选的实施方案中，相对于同多聚体复合体的相应样本，本公开内容的异多聚体复合体的tgfβ超家族配体结合特异性/概况改变(例如actriib:alk4异二聚体与actriib:actriib同二聚体复合体或alk4:alk4同二聚体复合体相比较)。
[0056]
tgf-β超家族由30种以上的分泌的因子组成，包括tgf-β、激活素、nodal、骨形态发生蛋白(bmp)、生长分化因子(gdf)和抗缪勒氏管激素(anti-mullerian hormone，amh)。参见例如weiss等(2013)developmental biology，2(1)：47-63。存在于脊椎动物和无脊椎动物两者中的超家族的成员，在动物生命发育的最早期在不同的组织和功能中无所不在地表达。实际上，tgf-β超家族蛋白质是干细胞自我更新、原肠胚形成、分化、器官形态发生和成
体组织稳态的关键介质。与这种普遍存在的活性一致，异常的tgf-β超家族信号转导与包括例如自身免疫性疾病、心血管疾病、纤维变性疾病和癌症在内的多种人类病理有关。
[0057]
tgf-β超家族的配体具有相同的二聚结构，其中一个单体的中心3-1/2转角螺旋紧靠由其它单体的β-折叠链形成的凹面上堆积。tgf-β家族成员的大多数被分子间二硫键进一步稳定。该二硫键跨越由两个其它二硫键形成的环，产生所称的
‘
半胱氨酸结(cysteine knot)’基序。参见例如lin等(2006)reproduction 132：179-190和hinck等(2012)febs letters 586：1860-1870。
[0058]
tgf-β超家族信号转导通过i型和ii型丝氨酸/苏氨酸激酶受体的异聚体复合体介导，这在配体刺激时使下游smad蛋白(例如smad蛋白1、2、3、5和8)磷酸化并将其激活。参见例如massagu
é
(2000)nat.rev.mol.cell biol.1:169-178。这些i型和ii型受体是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶特异性的胞质结构域组成。一般而言，i型受体介导胞内信号转导，而ii型受体是结合tgf-β超家族配体所必需的。i型和ii受体在配体结合后形成稳定的复合体，导致i型受体被ii型受体磷酸化。
[0059]
可根据它们结合的i型受体和它们激活的smad蛋白，将tgf-β家族分成两个系统发育分支。一个是更近进化支，这包括例如tgf-β、激活素、gdf8、gdf9、gdf11、bmp3和nodal，它通过激活smad 2和3的i型受体传送信号[hinck(2012)febs letters 586:1860-1870]。另一支包含较远缘的超家族蛋白质，包括例如bmp2、bmp4、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf1、gdf5、gdf6和gdf7，其通过smad 1、5和8传送信号。
[0060]
tgf-β同种型是tgf-β超家族的创立成员，其中在哺乳动物中有3种已知的同种型，名为tgf-β1、tgf-β2和tgf-β3。有生物活性的成熟tgf-β配体起同二聚体的作用，主要通过i型受体alk5传送信号，但还发现在内皮细胞中另通过alk1传送信号。参见例如goumans等(2003)mol cell 12(4)：817-828。tgf-β1是最丰富和遍在表达的同种型。已知tgf-β1在伤口愈合中具有重要作用，且表达组成型活性tgf-β1转基因的小鼠发生纤维变性。参见例如clouthier等(1997)j clin.invest.100(11)：2697-2713。tgf-β1还参与t细胞活化和t调节细胞维持。参见例如li等(2006)immunity 25(3)：455-471。tgf-β2表达最早描述于人成胶质细胞瘤细胞中，并出现在胚胎神经系统的神经元和星形胶质细胞中。已知tgf-β2抑制t淋巴细胞的白介素-2依赖性生长。tgf-β3最初从人横纹肌肉瘤细胞系中分离，从此以后一直存在于肺腺癌和肾癌细胞系。已知tgf-β3对腭和肺形态发生是重要的。参见例如kubiczkova等(2012)journal oftranslational medicine 10:183。
[0061]
激活素是tgf-β超家族的成员，且最初发现作为促卵泡激素分泌的调节物，但随后表征了各种生殖和非生殖作用。有3种主要的激活素形式(a、b和ab)，其是两个密切相关的β亚基的同/异二聚体(分别为βaβa、βbβb和βaβb)。人基因组还编码主要在肝中表达的激活素c和激活素e，且含有βc或βe的异二聚体形式也是已知的。在tgf-β超家族中，激活素是独特的多功能因子，可刺激卵巢和胎盘细胞的激素产生、支持神经元细胞存活、根据细胞类型正面或负面影响细胞周期进程，并且至少在两栖动物胚胎中诱导中胚层分化depaolo等(1991)proc soc ep biol med.198:500-512；dyson等(1997)curr biol.7:81-84；以及woodruff(1998)biochem pharmacol.55:953-963。在若干组织中，激活素信号转导被其相关的异二聚体抑制素拮抗。例如在来自垂体的促卵泡激素(fsh)分泌的调节中，激活素促进fsh合成
和分泌，同时抑制素降低fsh合成和分泌。可调节激活素生物活性和/或与激活素结合的其它蛋白质包括促滤泡素抑制素(fs)、促滤泡素抑制素相关蛋白(fsrp，亦称为flrg或fstl3)和α
2-巨球蛋白。
[0062]
如本文所述，与“激活素a”结合的作用剂是与βa亚基特异性结合的作用剂，不论在分离的βa亚基还是作为二聚体复合体(例如βaβa同二聚体或βaβb异二聚体)的情况下。在异二聚体复合体(例如βaβb异二聚体)的情况下，与“激活素a”结合的作用剂对βa亚基内存在的表位有特异性，但不与复合体的非βa亚基(例如复合体的βb亚基)内存在的表位结合。同样，本文公开的拮抗(抑制)“激活素a”的作用剂是抑制被βa亚基介导的一种或多种活性的作用剂，不论在分离的βa亚基还是作为二聚体复合体(例如βaβa同二聚体或βaβb异二聚体)的情况下。在βaβb异二聚体的情况下，抑制“激活素a”的作用剂是特异性抑制βa亚基的一种或多种活性，但不抑制复合体的非βa亚基(例如复合体的βb亚基)的活性的作用剂。该原则同样适用于结合和/或抑制“激活素b”、“激活素c”和“激活素e”的作用剂。本文公开拮抗“激活素ab”、“激活素ac”、“激活素ae”、“激活素bc”或“激活素be”的作用剂是抑制作为被βa亚基介导的一种或多种活性和作为被βb亚基介导的一种或多种活性的作用剂。相同原则适用于结合和/或抑制“激活素ac”、“激活素ae”、“激活素bc”或“激活素be”的作用剂。
[0063]
nodal蛋白在中胚层和内胚层诱导和形成以及在早期胚胎发生的中轴结构(例如心脏和胃)随后的组构中起作用。已表明发育中的脊椎动物胚胎的背部组织主要促进脊索和脊索前板的中轴结构，同时它募集周围细胞以形成非中轴胚胎结构。nodal似乎通过i型和ii型受体和称为smad蛋白的胞内效应子两者传送信号。研究支持这样的构想，即actriia和actriib起针对nodal的ii型受体的作用。参见例如sakuma等(2002)genes cells.2002,7:401-12。曾指出nodal配体与其辅因子(例如cripto或cryptic)相互作用以激活激活素i型和ii型受体，这使smad2磷酸化。nodal蛋白涉及对早期脊椎动物胚胎至关重要的许多事件，包括中胚层形成、前部图式形成(anterior patterning)和左-右轴特化。实验证据表明nodal信号转导刺激par3-lux(一种之前表明对激活素和tgf-β特异性起反应的一种萤光素酶报道分子)。然而，nodal不能够诱导ptlx2-lux(一种对骨形态发生蛋白起特异性反应的报道分子)。最新结果提供直接的生物化学证据，即nodal信号转导受smad2和smad3介导，smad2和smad3还介导由tgf-β和激活素引起的信号转导。更多的证据表明胞外蛋白质cripto或cryptic是nodal信号转导所必需的，使之与激活素或tgf-β信号转导截然不同。
[0064]
bmp和gdf一起形成共有tgf-β超家族的特征性折叠的半胱氨酸结细胞因子的家族。参见例如rider等(2010)biochem j.，429(1)：1-12。该家族包括例如bmp2、bmp4、bmp6、bmp7、bmp2a、bmp3、bmp3b(亦称为gdf10)、bmp4、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8、bmp8a、bmp8b、bmp9(亦称为gdf2)、bmp10、bmp11(亦称为gdf11)、bmp12(亦称为gdf7)、bmp13(亦称为gdf6)、bmp14(亦称为gdf5)、bmp15、gdf1、gdf3(亦称为vgr2)、gdf8(亦称为肌肉生长抑制素)、gdf9、gdf15和十五褶(decapentaplegic)。除诱导骨形成的能力(bmp因此得名)以外，bmp/gdf在各种组织发育中显示形态发生活性。bmp/gdf同二聚体和异二聚体与i型和ii型受体二聚体的组合相互作用产生多种可能的信号转导复合体，导致两套竞争性smad转录因子之一的活化。bmp/gdf具有高度特异性和局部化功能。这些以多种方式受调节，包括bmp/gdf表达的发育限制和通过以高亲和力与细胞因子结合的几种特异性bmp拮抗剂蛋白的分泌。令人好奇的是，多种这些拮抗剂像tgf-β超家族配体。
[0065]
生长分化因子-8(gdf8)亦称为肌肉生长抑制素。gdf8是骨骼肌质量的负调节剂，并在发育和成熟骨骼肌中高度表达。转基因小鼠中gdf8无效突变的特征在于骨骼肌显著肥大和增生。参见例如mcpherron等，nature(1997)387:83-90。在牛中，惊人地在人中，骨骼肌质量的类似增加在gdf8的天然存在的突变中是明显的。参见例如ashmore等(1974)growth,38:501-507；swatland和kieffer,j.anim.sci.(1994)38:752-757；mcpherron和lee,proc.natl.acad.sci.usa(1997)94:12457-12461；kambadur等,genome res.(1997)7:910-915；以及schuelke等(2004)nengl j med,350:2682-8。研究还显示，与人类hiv感染有关的肌肉消耗伴有gdf8蛋白表达增加。参见例如gonzalez-cadavid等，pnas(1998)95:14938-43。另外，gdf8可调节肌肉特异性酶(例如肌酸激酶)的产生并调节成肌细胞增殖。参见例如国际专利申请公布号wo 00/43781)。gdf8前肽可与成熟的gdf8结构域二聚体非共价结合，使其生物活性钝化。参见例如miyazono等(1988)j.biol.chem.,263:6407-6415；wakefield等(1988)j.biol.chem.,263；7646-7654；以及brown等(1990)growth factors,3:35-43。与gdf8或结构相关蛋白结合并抑制其生物活性的其它蛋白质包括促滤泡素抑制素，并可能促滤泡素抑制素相关蛋白。参见例如gamer等(1999)dev.biol.,208:222-232。
[0066]
gdf11，亦称为bmp11，是在小鼠发育期间在尾芽、肢芽、腭上颌弓和下颌弓及背根神经节表达的分泌蛋白。参见例如mcpherron等(1999)nat.genet.,22:260-264；以及nakashima等(1999)mech.dev.,80:185-189。gdf11在中胚层和神经组织两者的图式形成中起独特作用。参见例如gamer等(1999)dev biol.，208:222-32。表明了gdf11在发育中的鸡肢中是软骨发生和肌生成的负调节剂。参见例如gamer等(2001)dev biol.，229:407-20。gdf11在肌肉中的表达还表明其以与gdf8类似的方式在调节肌肉生长中的作用。另外，gdf11在脑中的表达表明gdf11还可具有涉及神经系统功能的活性。引人关注的是，发现gdf11在嗅上皮中抑制神经发生。参见例如wu等(2003)neuron.,37:197-207。因此，gdf11可在疾病例如肌肉疾病和神经变性疾病(例如肌萎缩性侧索硬化)的治疗中具有体外和体内应用。
[0067]
众所周知bmp7，亦称成骨蛋白-1(op-1)诱导软骨和骨形成。另外，bmp7调节多种生理过程。例如，bmp7可能是负责上皮骨发生现象的骨诱导因子。还发现bmp7在钙调节和骨稳态中起作用。像激活素一样，bmp7与ii型受体actriia和actriib结合。然而，bmp7和激活素将不同的i型受体募集到异聚体受体复合体。所观察到的主要bmp7 i型受体是alk2，而激活素专门与alk4结合(actriib)。bmp7和激活素诱导截然不同的生物应答，并刺激不同的smad途径。参见例如macias-silva等(1998)j biol chem.273:25628-36。
[0068]
抗缪勒氏管激素(amh)，亦称为缪勒氏管抑制物质(mullerian-inhibiting substance，mis)，是tgf-β家族糖蛋白。已鉴定出一种amh相关的ii型受体，命名为amhrii或者misrii。amh诱导人类男性胚胎中缪勒氏管的消退。amh在生殖年龄女性中表达，并且不随生理期或妊娠波动，但因卵母细胞数量和质量两者降低而逐步减少，表明amh可用作卵巢生理学的生物标志物。参见例如zec等(2011)biochemia medica 21(3)：219-30。
[0069]
激活素受体样激酶-1(alk1)，acvrl1基因的产物，或称为acvrlk1，是其表达主要受限于内皮细胞的i型受体。参见例如omim条目601284。alk1受tgf-β家族配体(例如bmp9和bmp10)结合的刺激，且alk1信号转导在发育性和病理性血管形成两者的调节中至关重要。alk1表达在早期小鼠发育中与血管发生和血管生成的部位重叠，alk1敲除小鼠因严重的血
管异常在胚期第11.5天左右死亡(参见例如cunha和pietras(2011)blood 117(26)：6999-7006)。alk1表达还描述于其它细胞类型例如肝星状细胞和软骨细胞中。另外，发现alk1连同激活素受体样激酶-2(alk2)对间充质干细胞中的bmp9诱导的成骨信号转导是重要的。参见例如cunha和pietras(2011)blood 117(26)：6999-7006。
[0070]
alk2，acvr1基因的产物，另称为actria或acvrlk2，是已表明结合激活素和bmp的i型受体。alk2对胚胎发生至关重要，因为alk2敲除小鼠在原肠胚形成后不久死亡。参见例如mishina等(1999)dev biol.213:314-326和omim条目102576。alk2的组成型活性突变与进行性骨化性纤维发育不良(fop)有关。fop是一种引起纤维组织(包括肌肉、肌腱和韧带)自发骨化或当受损时的罕见遗传紊乱。在人类中，alk2密码子206中精氨酸向组氨酸突变与fop天然存在的突变有关。该突变在无配体结合时通过alk2诱导bmp特异性信号转导。参见例如fukuda等(2009)j biol chem.284(11)：7149-7156和kaplan等(2011)annn.y.acad sci.1237：5-10。
[0071]
激活素受体样激酶-3(alk3)，bmpr1a基因的产物，亦称为acvrlk3，是介导bmp家族的多种配体的作用的i型受体。与具有遍在组织表达的几种i型受体不一样，alk3显示与更特化的功能性一致的受限表达模式。参见例如ten dijke(1993)oncogene，8：2879-2887和omim条目601299。alk3一般被视为对bmp2、bmp4、bmp7和其它bmp家族成员的高亲和力受体。bmp2和bmp7是成骨细胞分化的有效刺激物，目前在临床上在脊柱融合和某些不愈合骨折中用于诱导骨形成。alk3被视为在成骨细胞中介导bmp2和bmp4信号转导的关键受体。参见例如lavery等(2008)j.biol.chem.283:20948-20958。纯合子alk3敲除小鼠早在胚胎发生(大约第9.5天)时便死亡，然而，最近报导了在成骨细胞中携带条件性alk3破坏的成年小鼠显示骨质增加，尽管新形成的骨显示结构破坏的证据。参见例如kamiya(2008)j.bone miner.res.,23:2007-2017；以及kamiya(2008)development 135:3801-3811。这个结果与在临床应用中作为成骨剂的bmp2和bmp7(配体for alk3)的效应惊人地不同。
[0072]
激活素受体样激酶-4(alk4)，acvr1b基因的产物，亦称为acvrlk4，是转导多种tgf-β家族配体(包括激活素、nodal和gdf)的信号转导的i型受体。alk4突变与胰腺癌有关，并且显性负截短的alk4同种型在人垂体肿瘤中高表达。参见例如tsuchida等(2008)endocrine journal 55(1)：11-21和omim条目601300。
[0073]
激活素受体样激酶-5(alk5)，tgfbr1基因的产物，在大多数细胞类型中广泛表达。几种tgf-β超家族配体，包括tgf-β、激活素和gdf-8，通过alk5传送信号，并激活下游smad 2和smad 3。小鼠alk5缺陷型在卵黄囊和胎盘的血管发育中显示严重缺陷，缺乏循环红细胞，并在妊娠中期死亡。发现这些胚胎具有正常的造血潜力，但增殖增加，且内皮细胞不当迁移。因此，alk5依赖性信号转导对血管生成是重要的，但对造血祖细胞的发育和功能性血细胞生成不重要。参见例如larsson等(2001)the embo journal，20(7)：1663-1673和omim条目190181。在内皮细胞中，alk5协同作用并与alk1信号转导相反。alk5抑制细胞迁移和增殖，值得注意的是alk1的相反作用。参见例如goumans等(2003)mol cell 12(4)：817-828。另外，alk5被认为负调节肌肉生长。发现肌肉中的alk5敲减(一种肌营养不良小鼠模型)减少纤维变性并提高与肌肉生长相关的基因的表达。参见例如kemaladewi等(2014)mol thernucleic acids 3,e156。
[0074]
激活素受体样激酶-6(alk6)是bmpr1b基因的产物，其缺乏与人和小鼠两者的软骨
发育异常和四肢缺陷有关。参见例如demirhan等(2005)j med genet.42:314-317。在小鼠中，alk6在整个发育中的骨骼中广泛表达，并且是软骨发生所必需的。参见例如yi等(2000)development 127:621-630和omim条目603248。
[0075]
激活素受体样激酶-7(alk7)是acvr1c基因的产物。alk7失效小鼠是有活力、能育的，并显示无骨骼或肢畸形。gdf3通过alk7的信号转导似乎在胰岛素敏感性和肥胖症中起作用。这得到alk7失效小鼠显示脂肪蓄积和对饮食诱导的肥胖症的抗性降低的结果的支持。参见例如andersson等(2008)pnas 105(20)：7252-7256。在多种不同的癌细胞系中，alk7介导的nodal信号转导涉及肿瘤促进和肿瘤抑制作用两者。参见例如de silva等(2012)frontiers in endocrinology 3:59和omim条目608981。
[0076]
本文所用术语“actrii”是指ii型激活素受体的家族。该家族包括由acvr2a基因编码的激活素受体iia型(actriia)和由acvr2b基因编码的激活素受体ii b型(actriib)两者。actrii受体是结合多种tgf-β超家族配体的tgf-β超家族ii型受体，所述配体包括激活素、gdf8(肌肉生长抑制素)、gdf11和bmp亚型，值得注意的是bmp6和bmp7。actrii受体涉及多种生物病症，包括肌肉和神经肌肉病症(例如肌营养不良、肌萎缩性侧索硬化(als)和肌肉萎缩)、不需要的骨/软骨生长、脂肪组织病症(例如肥胖症)、代谢紊乱(例如2型糖尿病)和神经变性病症。参见例如tsuchida等(2008)endocrine journal 55(1)：11-21；knopf等，u.s.8,252,900和omim条目102581和602730。
[0077]
由tgfbr2基因编码的转化生长因子β受体ii(tgfbrii)是已知结合tgf-β配体并激活下游smad 2和smad 3效应子的ii型受体。参见例如hinck(2012)febs letters 586：1860-1870和omim条目190182。tgf-β通过tgfbrii的信号转导在t细胞增殖、t调节细胞维持和前软骨干细胞增殖中至关重要。参见例如li等(2006)immunity 25(3)：455-471和cheng等,int.j.mol.sci.2014,15,12665-12676。
[0078]
由bmpr2基因编码的骨形态发生蛋白受体ii(bmprii)是被认为结合某些bmp配体的ii型受体。在某些情况下，与bmprii的有效配体结合依赖于合适tgfbr i型受体的存在。参见例如rosenzweig等(1995)pnas 92:7632-7636。bmprii的突变与人的肺动脉高压有关。参见omim条目600799。
[0079]
缪勒抑制物质受体ii(misrii)，amhr2基因的产物，另称为抗缪勒激素ii型受体，是ii型tgf-β受体。misrii结合mis配体，但需要合适的i型受体(例如alk3或alk6)的存在用于信号转导。参见例如hinck(2012)febs letters 586:1860-1870和omim条目600956。misrii参与人的性别分化，并且是人类男性中缪勒激素管消退所必需的。amh在生殖年龄女性中表达，并且不随生理期或妊娠波动，但发现在卵母细胞数量和质量两者下降时逐步减少，表明amh可用作卵巢生理学的生物标志物。参见例如zec等(2011)biochemia medica 21(3)：219-30和omim条目600956。
[0080]
在某些方面，本公开内容涉及a)包含tgfβ超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7)的胞外域和tgfβ超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)的胞外域的异多聚体复合体，b)包含至少两种tgfβ超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7)的胞外域的异多聚体复合体和包含至少两种tgfβ超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)的胞外域的异多聚体复合体，优选可溶性异多聚体复合体拮抗一种或多种tgfβ超
家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、缪勒抑制物质(mis)和lefty)引发的胞内信号转导(例如smad 2/3和/或smad1/5/8信号转导)的用途。如本文所述，所述拮抗剂异多聚体复合体可用于治疗或预防与例如肌肉丢失、肌肉生长不足、神经变性、骨丢失、骨密度降低和/或矿化、骨生长不足、代谢紊乱(例如肥胖症)和红细胞病症(例如贫血)有关的各种病症/病况。
[0081]
具体地讲，本公开内容的数据表明包含tgfβ超家族i型受体多肽的胞外域和tgfβ超家族ii型受体多肽的胞外域的异多聚体复合体与其相应的同多聚体复合体相比具有不同的配体结合特异性/特征。
[0082]
用于本说明书的术语一般具有本领域、本公开内容的情况下和使用各术语的具体情况下的普通含义。下面或本说明书其它部分论述了某些术语以在描述本公开内容的组合物和方法和如何制备和使用它们时向从业者提供额外的指导。术语的任何应用的范围或含义从它使用的上下文来看将是显而易见的。
[0083]
术语“异聚体”或“异多聚体”是包含至少一个第一多肽和第二多肽的复合体，其中第二多肽在氨基酸序列中因至少一个氨基酸残基不同于第一多肽。异聚体可包含由第一和第二多肽形成的“异二聚体”或可形成更高阶的结构，其中存在第一和第二多肽以外的多肽。异多聚体的示例性结构包括异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它寡聚体结构。异二聚体在本文命名为x:y或等同于命名为x-y，其中x表示第一多肽，y表示第二多肽。更高阶的异聚体和寡聚体结构在本文以相应的方式命名。在某些实施方案中，异多聚体重组的(例如一个或多个多肽组分可以是重组蛋白)、分离的和/或纯化的。
[0084]
在其所有语法形式和拼写变体情况下的“同源的”是指具有“共同进化起源”的两种蛋白质之间的关系，包括来自相同生物物种的超家族的蛋白质以及来自不同的生物物种的同源蛋白质。所述蛋白质(及其编码核酸)具有序列同源性，正如通过其序列相似性所反应的，不论从百分比同一性还是根据特定残基或基序和保守位置的存在来看。然而，在通用用法中和在本技术中，术语“同源”当用副词例如“高度地”修饰时可指序列相似性，并且可与共同进化起源相关或不相关。
[0085]
在其所有语法形式情况下的术语“序列相似性”是指可共有或不共有共同进化起源的核酸或氨基酸序列之间同一性或一致性的程度。
[0086]“百分比(％)序列同一性”就参比多肽(或核苷酸)序列而论定义为在比对序列和引入空位(如有需要)后达到最大百分比序列同一性并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分，候选序列中与参比多肽(核苷酸)序列中的氨基酸残基(或核酸)相同的氨基酸残基(或核酸)的百分比。例如可应用可公开获取的计算机软件例如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件，以本领域技术内的各种方法，实现用于确定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对。本领域的技术人员可确定用于比对序列的合适参数，包括达到待比较的序列全长内最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，％氨基酸(核酸)序列同一性值应用序列比较计算机程序align-2产生。align-2序列比较计算机程序由genentech,inc.创建，源代码随用户程序说明书保存于u.s.copyright office,
washington d.c.，20559中，其中以登记在美国版权登记号txu510087下。align-2程序可公开获自genentech,inc.,，south san francisco，calif.，或可由源代码编制。align-2程序可在unix操作系统编制以供应用，包括数字unix v4.0d。所有序列比较参数通过align-2程序设置，不再变化。
[0087]
在其所有语法形式情况下，“激动”是指激活蛋白质和/或基因(例如通过激活或扩增该蛋白质的基因表达或通过诱导无活性的蛋白质进入活性状态)或提高蛋白质和/或基因的活性的过程。
[0088]
在其所有语法形式情况下，“拮抗”是指抑制蛋白质和/或基因(例如通过抑制或降低该蛋白质的基因表达或通过诱导活性蛋白质进入无活性状态)或降低蛋白质和/或基因的活性的过程。
[0089]
如本文所用，除非另有说明，否则“基本上不与x结合”意指针对“x”具有大于约10-7
、10-6
、10-5
、10-4
或更大(例如通过用于测定kd的测定法无可检测结合)的kd的作用剂，其中“x”是特定的作用剂，例如蛋白质或核酸。
[0090]
术语“约”和“大约”在本说明书和权利要求书中与数值连用时表示本领域技术人员熟悉和可接受的准确度区间。一般而言，所述准确度区间为
±
10％。或者，且特别是在生物系统，术语“约”和“大约”可指给定值的数量级以内的值，优选≤5倍，更优选≤2倍。
[0091]
本文公开的数值范围包括限定该范围的数值。
[0092]
术语“a”和“an”包括复数指示物，除非其中使用该术语的上下文另有明确规定。术语“a”(或“an”)以及术语“一个或多个”和“至少一个”在本文可互换使用。此外，“和/或”当在本文使用时被认为两个或更多个特定特征或组分的每一个与或不与另一个一起的具体公开。因此，术语“和/或”当用于短语例如本文的“a和/或b”时欲包括“a和b”、“a或b”、“a”(单独的)和“b”(单独的)。同样，术语“和/或”在用于短语例如“a、b和/或c”时欲包括以下方面的每一个：a、b和c；a、b、c；a或c；a或b；b或c；a和c；a和b；b和c；a(单独的)；b(单独的)；和c(单独的)。
[0093]
在整个本说明书中，措词“包含”或变化例如“含有”或“包括”应理解为意味着包括规定的整体或整体群，但不排除任何其它的整体或整体群。
[0094]
2.tgf-β超家族i型受体和ii型受体复合体
[0095]
在某些方面，本公开内容涉及包含来自人或其它物种(例如本文所述其它物种)的一种或多种tgf-β超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7蛋白，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)和来自人或其它物种(例如本文所述其它物种)的一种或多种tgf-β超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii蛋白，例如seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)的异多聚体复合体；包含来自人或其它物
种(例如本文所述其它物种)的至少两种不同的tgf-β超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7蛋白，例如seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476)的异多聚体复合体；和包含来自人或其它物种(例如本文所述其它物种)的至少两个不同的tgf-β超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii蛋白，例如seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462)的异多聚体复合体，其在本文一般称为“异多聚体复合体”或“异多聚体”。优选异多聚体是可溶解的，例如，异多聚体包含至少一种tgfβ超家族i型受体多肽的可溶解部分和至少一种tgfβ超家族ii型受体多肽的可溶解部分(结构域)。一般而言，tgfβ超家族i型和ii型受体的胞外域相当于i型和ii型受体的可溶解部分。因此，在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含tgfβ超家族i型受体多肽的胞外域(例如一种或多种alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和/或alk7受体胞外域)和/或tgfβ超家族ii型受体多肽的胞外域(例如一种或多种actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和/或misrii受体胞外域)。本文公开了alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6、alk7、actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii的示例性胞外域，这类序列及其片段、功能变体和修饰形式可按照本公开内容的发明使用(例如异多聚体组合物及其用途)。本公开内容的异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和更高阶寡聚体结构。参见例如图1、2和15-17。在某些优选的实施方案中，本公开内容的异多聚体是异二聚体。
[0096]
限定性结构基序(称为三指毒素折叠)对于配体被i型和ii型受体结合是重要的，并且由位于各单体受体胞外域内可变位置内的10、12或14个保守的半胱氨酸残基形成。参见例如greenwald等(1999)nat struct biol 6:18-22；hinck(2012)febs lett 586:1860-1870。通过这些保守半胱氨酸的最外面界定的tgfβ超家族受体的核心配体结合结构域，相当于seq id no:1(actriib前体)的第29-109位；seq id no:9(actriia前体)的第30-110位；seq id no:14(alk1前体)的第34-95位；seq id no:18(alk2前体)的第35-99位；seq id no:22(alk3前体)的第61-130位；seq id no:26和83(alk4前体)的第34-101位；seq id no:30和87(alk5前体)的第36-106位；seq id no:34(alk6同种型b前体)的第32-102位；seq id no:38、305和309(alk7前体)的第28-92位；seq id no:42(tgfbrii同种型b前体)的第51-143位；seq id no:46和71(bmprii前体)的第34-123位；seq id no:50、75和79(misrii前体)的第24-116位；seq id no:67(tgfbrii同种型a前体)的第44-168位和seq id no:91(alk6同种型a前体)的第62-132位。这些半胱氨酸界定的核心序列两侧结构上不太有序的氨基酸可被在任一端截短1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37个残基而又不必改变配体结合。n端和/或c端截短的示例性胞外域包括seq id no:2、3、5、6、10、11、15、19、23、27、31、35、39、43、47、51、68、72、76、80、84、88、92、302、306、310和313。
[0097]
在优选的实施方案中，本公开内容的异多聚体结合和/或抑制(拮抗)包括但不限于以下的一种或多种tgf-β超家族配体的活性：bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty。具体地讲，本公开内容的异多聚体复合体可用于拮抗被一种或多种tgfβ超家族配体引发的信号转导(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导)，这可采用例如基于细胞的测定法(例如本文所述的那些)测定。如本文所述，所述拮抗剂异多聚体复合体可用于治疗或预防与例如肌肉丢失、肌肉生长不足、神经变性、骨丢失、骨密度降低和/或矿化、骨生长不足和/或肥胖症有关的病症/病况。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体具有与其相应的同多聚体复合体相比不同的配体结合特异性/特征(例如alk4:actriib异二聚体与相应的actriib或alk4同二聚体)。
[0098]
本文所用术语“actriib”是指来自任何物种的激活素受体iib型(actriib)蛋白家族和通过诱变或其它修饰衍生自这类actriib蛋白的变体。本文对actriib的提及要理解为是提及任一种目前已鉴定的形式。actriib家族的成员一般是跨膜蛋白，由包含富含半胱氨酸区的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0099]
术语“actriib多肽”包括包含actriib家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。在本公开内容以及国际专利申请公布号wo 2006/012627、wo 2008/097541和wo 2010/151426中提供了这类变体actriib多肽的实例，所述专利申请通过引用以其整体结合到本文中。本文所述所有actriib相关多肽的氨基酸的编号以下文提供的人actriib前体蛋白序列(seq id no:1)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0100]
人actriib前体蛋白序列如下：
[0101][0102][0103]
信号肽用单下划线表示；胞外域用粗体字表示；可能的内源n联糖基化位点用表示。
[0104]
加工的(成熟的)胞外actriib多肽序列如下：
[0105]
grgeaetreciyynanwelertnqsglercegeqdkrlhcyaswrnssgtielvkkgcwlddfncydr
qecvateenpqvyfcccegnfcnerfthlpeaggpevtyeppptapt(seq id no:2)。
[0106]
在一些实施方案中，可产生在n端具有“sgr
…”
序列的蛋白质。胞外域的c端“尾”用单下划线表示。“尾”缺失的序列(一种δ15序列)如下：
[0107]
grgeaetreciyynanwelertnqsglercegeqdkrlhcyaswrnssgtielvkkgcwlddfncydrqecvateenpqvyfcccegnfcnerfthlpea(seq id no:3)。
[0108]
在文献中还报道了在seq id no:1(a64)的64位具有丙氨酸的actriib形式。参见例如hilden等(1994)blood，83(8)：2163-2170。申请人断定包含具有a64取代的actriib胞外域的actriib-fc融合蛋白对激活素和gdf11具有相对低的亲和力。相比之下，在64位具有精氨酸(r64)的同一actriib-fc融合蛋白对激活素和gdf11具有低纳摩尔至高微微摩尔范围的亲和力。因此，具有r64的序列在本公开内容中用作人actriib的“野生型”参比序列。
[0109]
在64位具有丙氨酸的actriib形式如下：
[0110][0111][0112]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0113]
可变a64形式的加工的(成熟的)胞外actriib多肽序列如下：
[0114]
grgeaetreciyynanwelertnqsglercegeqdkrlhcyaswanssgtielvkkgcwlddfncydrqecvateenpqvyfcccegnfcnerfthlpeaggpevtyeppptapt(seq id no:5)
[0115]
在一些实施方案中，可产生在n端具有“sgr
…”
序列的蛋白质。胞外域的c端“尾”用单下划线表示。“尾”缺失的序列(δ15序列)如下：
[0116]
grgeaetreciyynanwelertnqsglercegeqdkrlhcyaswanssgtielvkkgcwlddfncydrqecvateenpqvyfcccegnfcnerfthlpea(seq id no:6)
[0117]
编码人actriib前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:7)，表示genbank参比序列nm_001106.3的核苷酸25-1560，其编码actriib前体的氨基酸1-513。所示序列提供64位的精氨酸，并且可经修饰因而提供丙氨酸。信号序列用下划线表示。
[0118][0119][0120]
编码加工的胞外人actriib多肽的核酸序列如下(seq id no:8)。所示序列提供64位的精氨酸，并且可经修饰因而提供丙氨酸。
1870]。因此，由这些保守半胱氨酸的最外面界定的人actriib的核心配体结合结构域相当于seq id no:1(actriib前体)的29-109位。因此，这些半胱氨酸界定的核心序列两侧的结构上不太有序的氨基酸在n端可被截短约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个残基和/或在c端达约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个残基而又不必改变配体结合。n端和/或c端截短的示例性actriib胞外域包括seq id no:2、3、5和6。
[0126]
attisano等人表明actriib的胞外域c端脯氨酸结的缺失降低受体对激活素的亲和力。含有本文seq id no:1的氨基酸20-119的actriib-fc融合蛋白“actriib(20-119)-fc”，相对于actriib(20-134)-fc与gdf11和激活素的结合减弱，其包括脯氨酸结区和完整的近膜域(参见例如美国专利号7,842,663)。然而，相对于野生型，actriib(20-129)-fc蛋白保持类似但略微降低的活性，即使脯氨酸结区遭破坏。
[0127]
因此，预期止于氨基酸134、133、132、131、130和129(相对于seq id no:1)的actriib胞外域全都有活性，但止于134或133的构建体可能有最大活性。同样，预期残基129-134任一个的突变(相对于seq id no:1)不会大幅度地改变配体结合亲和力。支持这一点的是，本领域已知p129和p130的突变(相对于seq id no:1)基本上不减弱配体结合。因此，本公开内容的actriib多肽可早在氨基酸109(最后的半胱氨酸)处终止，然而，预期止于109和119或其之间(例如109、110、111、112、113、114、115、116、117、118或119)的形式的配体结合减弱。氨基酸119(相对于本文的seq id no:1)是不太保守的，因此容易改变或截短。止于128(相对于seq id no:1)或稍后的actriib多肽可保持配体结合活性。相对于seq id no:1，止于119和127或其之间(例如119、120、121、122、123、124、125、126或127)的actriib多肽可具有中间结合能力。这些形式的任一个对于使用是合乎需要的，这取决于临床或实验背景。
[0128]
在actriib的n端，预期始于氨基酸29或之前(相对于seq id no:1)的蛋白质可保留配体结合活性。氨基酸29表示起始半胱氨酸。24位(相对于seq id no:1)的丙氨酸至天冬酰胺突变引入n-联糖基化序列而不实质性地影响配体结合[美国专利号7,842,663]。这证实了信号切割肽和半胱氨酸交联区(相当于氨基酸20-29)之间区域中的突变是绝对容许的。具体地讲，始于20、21、22、23和24位(相对于seq id no:1)的actriib多肽可保持大致的配体结合活性，而且还预期始于25、26、27、28和29位(相对于seq id no:1)的actriib多肽保留配体结合活性。例如美国专利号7,842,663表明，出人意料地，始于22、23、24或25的actriib构建体可具有最大活性。
[0129]
总之，actriib的活性部分(例如配体结合部分)的通式包含seq id no:1的氨基酸29-109。因此actriib多肽例如可包含与始于相当于seq id no:1的氨基酸20-29任一个的残基(例如始于氨基酸20、21、22、23、24、25、26、27、28或29的任一个)和止于相当于seq id no:1的氨基酸109-134任一个的位置(例如止于氨基酸109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134的任一个)的actriib的部分有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列或基本上由其组成或由其组成。其它实例包括始于seq id no:1的20-29位(例如20、21、22、23、24、25、26、27、28或29位的任一个)或21-29位(例如21、22、23、24、25、26、27、28或29位的任一
个)和止于seq id no:1的119-134位(例如119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134位的任一个)、119-133位(例如119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132或133位的任一个)、129-134位(例如129、130、131、132、133或134位的任一个)或129-133位(例如129、130、131、132或133位的任一个)的多肽。其它实例包括始于seq id no:1的20-24位(例如位的任一个20、21、22、23或24)、21-24位(例如位的任一个21、22、23或24)或22-25位(例如22、22、23或25位的任一个)和止于seq id no:1的109-134位(例如109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134位的任一个)、119-134位(例如119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134位的任一个)或129-134位(例如129、130、131、132、133或134位的任一个)的构建体。还预期这些范围内的变体，特别是与seq id no:1的相应部分有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的那些。
[0130]
本文所述变异可以不同方式组合。在一些实施方案中，actriib变体包含在配体结合袋中不超过1、2、5、6、7、8、9、10或15个保守氨基酸变化和在配体结合袋的40、53、55、74、79和/或82位上0、1或多个非保守变化。结合袋以外的部位(在其中可特别好地容许变化性)包括胞外域的氨基和羧基端(如上所述)和42-46和65-73位(相对于seq id no:1)。在a64背景下，65位(n65a)处天冬酰胺向丙氨酸变化实际上提高配体结合，因此预期在r64背景下对配体结合无有害作用[美国专利号7,842,663]。这个变化可能排除a64背景下n65的糖基化，因此表明，这个区的重大变化可能是容许的。虽然r64a变化不太容许，但r64k是极为容许的，因此可容许64位处另一个碱性残基，例如h[美国专利号7,842,663]。另外，本领域描述的诱变程序的结果表明，在actriib中常常有有利于保守的氨基酸位置。相对于seq id no:1，这些包括80位(酸性或疏水氨基酸)、78位(疏水，特别是色氨酸)、37位(酸性，特别是天冬氨酸或谷氨酸)、56位(碱性氨基酸)、60位(疏水氨基酸，特别是苯丙氨酸或酪氨酸)。因此，本公开内容提供在actriib多肽中可为保守的氨基酸构架。可能需要保守的其它位置如下：52位(酸性氨基酸)、55位(碱性氨基酸)、81位(酸性)、98位(极性或带电荷的，特别是e、d、r或k)，均相对于seq id no:1。
[0131]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种actriib多肽的异多聚体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容的actriib多肽是可溶解的(例如actriib的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容的actriib多肽与一种或多种tgf-β超家族配体结合。因此，在一些实施方案中，用于本公开内容的actriib多肽抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如抑制smad信号转导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含始于相当于seq id no:1的氨基酸20-29的残基(例如始于氨基酸20、21、22、23、24、25、26、27、28或29的任一个)和止于相当于seq id no:1的氨基酸109-134的位置(例如止于氨基酸109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133或134的任一个)的actriib的部分有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、86％、
87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成。在其它优选的实施方案中，本公开内容的异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸25-131有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含至少一种actriib多肽，其与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、99％或100％同一性。在某些实施方案中，本公开内容的异多聚体包含至少一种actriib多肽，其中相当于seq id no:1的l79的氨基酸位置不是酸性氨基酸(即不是天然存在的d或e氨基酸残基或人工酸性氨基酸)。
[0132]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含actriia多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“actriia”是指来自任何物种的激活素受体iia型(actriia)蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于这类actriia蛋白的变体。本文对actriia的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。actriia家族的成员一般是跨膜蛋白，由包含富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0133]
术语“actriia多肽”包括包含actriia家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。在整个本公开内容以及国际专利申请公布号wo2006/012627(其通过引用以其整体结合到本文中)中提供这类变体actriia多肽的实例。本文所述的所有actriia相关多肽的氨基酸的编号以下文提供的人actriia前体蛋白序列(seq id no:9)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0134]
人actriia前体蛋白序列如下：
[0135][0136][0137]
信号肽用单下划线表示；胞外域用粗体字表示；可能的内源n联糖基化位点用表示。
[0138]
加工的胞外人actriia多肽序列如下：
[0139]
ilgrsetqeclffnanwekdrtnqtgvepcygdkdkrrhcfatwknisgsieivkqgcwlddincydrtdcvekkdspevyfcccegnmcnekfsyfpemevtqptsnpvtpkpp(seq id no:10)
[0140]
胞外域的c端“尾”用单下划线表示。“尾”缺失的序列(δ15序列)如下：
[0141]
ilgrsetqeclffnanwekdrtnqtgvepcygdkdkrrhcfatwknisgsieivkqgcwlddincydrtdcvekkdspevyfcccegnmcnekfsyfpem(seq id no:11)
[0142]
编码人actriia前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:12)，相当于genbank参比序列nm_001616.4的核苷酸159-1700。信号序列用下划线表示。
[0143][0144][0145]
编码加工的胞外actriia多肽的核酸序列如下：
[0146][0147]
有活性的(例如配体结合)actriia多肽的通式是包含始于seq id no:9的氨基酸30和止于氨基酸110的多肽的通式。因此，本公开内容的actriia多肽可包含与seq id no:9的氨基酸30-110有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的多肽。任选本公开内容的actriia多肽包含任选分别始于范围为1-5(例如1、2、3、4或5)或3-5(例如3、4或5)的位置和止于范围为110-116(例如110、111、112、113、114、115或116)或110-115(例如110、111、112、113、114或115)的位置的seq id no:9的氨基酸12-82有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性和相对于seq id no:9包含在配体结合袋中不超过1、2、5、10或15个保守氨基酸变化和在配体结合袋的40、53、55、74、79和/或82位的0、1或多个非保守变化的多肽。
[0148]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种actriia多肽、其包括其片段、功能变体和修饰形式的异多聚体复合体。优选用于本公开内容发明(例如包含actriia多肽的异多聚体复合体及其用途)的actriia多肽是可溶解的(例如actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本发明本公开内容的actriia多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:9、10、11、118、120、409或410任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种actriia多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:9、10、11、118、120、409或410任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种actriia多肽、由其组成或基本由其组成。
[0149]
在某些方面，本公开内容涉及包含tgfbrii多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“tgfbrii”是指来自任何物种的转化生长因子-β受体ii(tgfbrii)蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生自所述蛋白质的变体。本文对tgfbrii的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。tgfbrii家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0150]
术语“tgfbrii多肽”包括包含tgfbrii家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。所有本文所述的tgfbrii相关多肽的氨基酸的编号以下面人tgfbrii前体蛋白序列(seq id no:42)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0151]
典型的人tgfbrii前体蛋白序列(ncbi ref seq np_003233.4)如下：
[0152][0153]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0154]
加工的胞外tgfbrii多肽序列如下：
[0155]
tipphvqksvnndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifq(seq id no:43)
[0156]
编码tgfbrii前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:44)，相当于genbank参比序列nm_003242.5的核苷酸383-2083。信号序列用下划线表示。
[0157]
[0158][0159]
编码加工的胞外tgfbrii多肽的核酸序列如下：
[0160]
acgatcccaccgcacgttcagaagtcggttaataacgacatgatagtcactgacaacaacggtgcagtcaagtttccacaactgtgtaaattttgtgatgtgagattttccacctgtgacaaccagaaatcctgcatgagcaactgcagcatcacctccatctgtgagaagccacaggaagtctgtgtggctgtatggagaaagaatgacgagaacataacactagagacagtttgccatgaccccaagctcccctaccatgactttattctggaagatgctgcttctccaaagtgcattatgaaggaaaaaaaaaagcctggtgagactttcttcatgtgttcctgtagctctgatgagtgcaatgacaacatcatcttctcagaagaatataacaccagcaatcctgacttgttgctagtcatatttcaa(seq id no:45)
[0161]
tgfbrii的可变同种型，同种型a(np_001020018.1)如下：
[0162][0163]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0164]
加工的胞外tgfbrii多肽序列(同种型a)如下：
[0165]
tipphvqksdvemeaqkdeiicpscnrtahplrhinndmivtdnngavkfpqlckfcdvrfstcdnqkscmsncsitsicekpqevcvavwrkndenitletvchdpklpyhdfiledaaspkcimkekkkpgetffmcscssdecndniifseeyntsnpdlllvifq(seq id no:68)
[0166]
编码tgfbrii前体蛋白(同种型a)的核酸序列见下(seq id no:69)，相当于genbank参比序列nm_001024847.2的核苷酸383-2158。信号序列用下划线表示。
[0167]
[0168][0169][0170]
编码加工的胞外tgfbrii多肽(同种型a)的核酸序列如下：
[0171]
acgatcccaccgcacgttcagaagtcggatgtggaaatggaggcccagaaagatgaaatcatctgccc
cagctgtaataggactgcccatccactgagacatattaataacgacatgatagtcactgacaacaacggtgcagtcaagtttccacaactgtgtaaattttgtgatgtgagattttccacctgtgacaaccagaaatcctgcatgagcaactgcagcatcacctccatctgtgagaagccacaggaagtctgtgtggctgtatggagaaagaatgacgagaacataacactagagacagtttgccatgaccccaagctcccctaccatgactttattctggaagatgctgcttctccaaagtgcattatgaaggaaaaaaaaaagcctggtgagactttcttcatgtgttcctgtagctctgatgagtgcaatgacaacatcatcttctcagaagaatataacaccagcaatcctgacttgttgctagtcatatttcaa(seq id no:70)。
[0172]
前述tgfβrii同种型的任一种(seq id no:42、43、67和68)可在位于接近tgfβrii ecd的c端的谷氨酸残基对(seq id no:42的151和152位；seq id no:43的129和130位；seq id no:67的176和177位；或seq id no:68的154和155位)之间掺入36个氨基酸的插入(seq id no:95)，正如tgfβrii同种型c中天然存在的一样(konrad等，bmc genomics 8:318，2007)。
[0173]
grckirhigs nnrlqrstcq ntgwesahvm ktpgfr(seq id no:95)
[0174]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种tgfbrii多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的tgfbrii多肽(例如包含tgfbrii多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本发明本公开内容的tgfbrii多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含含或不含上述seq id no:95的插入、与seq id no:42、43、67或68的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种tgfbrii多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由含或不含seq id no:95的插入、与seq id no:42、43、67或68的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种tgfbrii多肽组成或基本由其组成。
[0175]
在某些方面，本公开内容涉及包含bmprii多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“bmprii”是指来自任何物种的骨形态发生蛋白受体ii型(bmprii)蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述bmprii蛋白的变体。本文对bmprii的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。bmprii家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0176]
术语“bmprii多肽”包括包含bmprii家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。所有本文所述bmprii相关多肽的氨基酸的编号以下面人bmprii前体蛋白序列(seq id no:46)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0177]
典型的人bmprii前体蛋白序列(ncbi ref seq np_001195.2)如下：
[0178][0179][0180]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0181]
加工的胞外bmprii多肽序列如下：
[0182]
sqnqerlcafkdpyqqdlgigesrishengtilcskgstcyglwekskgdinlvkqgcwshigdpqechyeecvvtttppsiqngtyrfcccstdlcnvnftenfpppdttplspphsfnrdet(seq id no:47)
[0183]
编码bmprii前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:48)，相当于genbank参比序列nm_001204.6的核苷酸1149-4262。信号序列用下划线表示。
[0184]
atgacttcctcgctgcagcggccctggcgggtgccctggctaccatggaccatcctgctggtcagcactgcggctgcttcgcagaatcaagaacggctatgtgcgtttaaagatccgtatcagcaagaccttgggataggtgagagtagaatctctcatgaaaatgggacaatattatgctcgaaaggtagcacctgctatggcctttgggagaaatcaaaaggggacataaatcttgtaaaacaaggatgttggtctcacattggagatccccaagagtgtcactatgaagaatgtgtagtaactaccactcctccctcaattcagaatggaacataccgtttctgctgttgtagcacagatttatgtaatgtcaactttactgagaattttccacctcctgacacaacaccactcagtccacctcattcatttaaccgagatgagacaataatcattgctttggcatcagtctctgtattagctgttttgatagttgccttatgctttggatacagaatgttgacaggagaccgtaaacaaggtcttcacagtatgaacatgatggaggcagcagcatccgaaccctctcttgatctagataatctgaaactgttggagctgattggccgaggtcgatatggagcagtatataaaggctccttggatgagcgtccagttgctgtaaaagtgttttcctttgcaaaccgtcagaattttatcaacgaaaagaacatttacagagtgcctttgatggaacatgacaacattgcccgctttatagttggagatgagagagtcactgcagatggacgcatggaatatttg
cttgtgatggagtactatcccaatggatctttatgcaagtatttaagtctccacacaagtgactgggtaagctcttgccgtcttgctcattctgttactagaggactggcttatcttcacacagaattaccacgaggagatcattataaacctgcaatttcccatcgagatttaaacagcagaaatgtcctagtgaaaaatgatggaacctgtgttattagtgactttggactgtccatgaggctgactggaaatagactggtgcgcccaggggaggaagataatgcagccataagcgaggttggcactatcagatatatggcaccagaagtgctagaaggagctgtgaacttgagggactgtgaatcagctttgaaacaagtagacatgtatgctcttggactaatctattgggagatatttatgagatgtacagacctcttcccaggggaatccgtaccagagtaccagatggcttttcagacagaggttggaaaccatcccacttttgaggatatgcaggttctcgtgtctagggaaaaacagagacccaagttcccagaagcctggaaagaaaatagcctggcagtgaggtcactcaaggagacaatcgaagactgttgggaccaggatgcagaggctcggcttactgcacagtgtgctgaggaaaggatggctgaacttatgatgatttgggaaagaaacaaatctgtgagcccaacagtcaatccaatgtctactgctatgcagaatgaacgcaacctgtcacataataggcgtgtgccaaaaattggtccttatccagattattcttcctcctcatacattgaagactctatccatcatactgacagcatcgtgaagaatatttcctctgagcattctatgtccagcacacctttgactataggggaaaaaaaccgaaattcaattaactatgaacgacagcaagcacaagctcgaatccccagccctgaaacaagtgtcaccagcctctccaccaacacaacaaccacaaacaccacaggactcacgccaagtactggcatgactactatatctgagatgccatacccagatgaaacaaatctgcataccacaaatgttgcacagtcaattgggccaacccctgtctgcttacagctgacagaagaagacttggaaaccaacaagctagacccaaaagaagttgataagaacctcaaggaaagctctgatgagaatctcatggagcactctcttaaacagttcagtggcccagacccactgagcagtactagttctagcttgctttacccactcataaaacttgcagtagaagcaactggacagcaggacttcacacagactgcaaatggccaagcatgtttgattcctgatgttctgcctactcagatctatcctctccccaagcagcagaaccttcccaagagacctactagtttgcctttgaacaccaaaaattcaacaaaagagccccggctaaaatttggcagcaagcacaaatcaaacttgaaacaagtcgaaactggagttgccaagatgaatacaatcaatgcagcagaacctcatgtggtgacagtcaccatgaatggtgtggcaggtagaaaccacagtgttaactcccatgctgccacaacccaatatgccaatgggacagtactatctggccaaacaaccaacatagtgacacatagggcccaagaaatgttgcagaatcagtttattggtgaggacacccggctgaatattaattccagtcctgatgagcatgagcctttactgagacgagagcaacaagctggccatgatgaaggtgttctggatcgtcttgtggacaggagggaacggccactagaaggtggccgaactaattccaataacaacaacagcaatccatgttcagaacaagatgttcttgcacagggtgttccaagcacagcagcagatcctgggccatcaaagcccagaagagcacagaggcctaattctctggatctttcagccacaaatgtcctggatggcagcagtatacagataggtgagtcaacacaagatggcaaatcaggatcaggtgaaaagatcaagaaacgtgtgaaaactccctattctcttaagcggtggcgcccctccacctgggtcatctccactgaatcgctggactgtgaagtcaacaataatggcagtaacagggcagttcattccaaatccagcactgctgtttaccttgcagaaggaggcactgctacaaccatggtgtctaaagatataggaatgaactgtctg(seq id no:48)
[0185]
编码胞外bmprii多肽的核酸序列如下：
[0186]
tcgcagaatcaagaacggctatgtgcgtttaaagatccgtatcagcaagaccttgggataggtgagagtagaatctctcatgaaaatgggacaatattatgctcgaaaggtagcacctgctatggcctttgggagaaatcaaaaggggacataaatcttgtaaaacaaggatgttggtctcacattggagatccccaagagtgtcactatgaagaatgtgtagtaactaccactcctccctcaattcagaatggaacataccgtttctgctgttgtagcacagatttatgtaatgtcaactttactgagaattttccacctcctgacacaacaccactcagtccacctcattcatttaaccgagatgagaca(seq id no:49)
[0187]
bmprii的可变同种型，同种型2(genbank:aaa86519.1)如下：
[0188][0189]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0190]
加工的胞外bmprii多肽序列(同种型2)如下：
[0191]
sqnqerlcafkdpyqqdlgigesrishengtilcskgstcyglwekskgdinlvkqgcwshigdpqechyeecvvtttppsiqngtyrfcccstdlcnvnftenfpppdttplspphsfnrdet(seq id no:72)
[0192]
编码人bmprii前体蛋白(同种型2)的核酸序列见下(seq id no:73)，相当于genbank参比序列u25110.1的核苷酸163-1752。信号序列用下划线表示。
[0193]
atgacttcctcgctgcagcggccctggcgggtgccctggctaccatggaccatcctgctggtcagcactgcggctgcttcgcagaatcaagaacggctatgtgcgtttaaagatccgtatcagcaagaccttgggataggtgagagtagaatctctcatgaaaatgggacaatattatgctcgaaaggtagcacctgctatggcctttgggagaaatcaaaaggggacataaatcttgtaaaacaaggatgttggtctcacattggagatccccaagagtgtcactatgaagaatgtgtagtaactaccactcctccctcaattcagaatggaacataccgtttctgctgttgtagcacagatttatgtaatgtcaactttactgagaattttccacctcctgacacaacaccactcagtccacctcattcatttaaccgagatgagacaataatcattgctttggcatcagtctctgtattagctgttttgatagttgccttatgctttggatacagaatgttgacaggagaccgtaaacaaggtcttcacagtatgaacatgatggaggcagcagcatccgaaccctctcttgatctagataatctgaaactgttggagctgattggccgaggtcgatatggagcagtatataaaggctccttggatgagcgtccagttgctgtaaaagtgttttcctttgcaaaccgtcagaattttatcaacgaaaagaacatttacagagtgcctttgatggaacatgacaacattgcccgctttatagttggagatgagagagtcactgcagatggacgcatggaatatttgcttgtgatggagtactatcccaatggatctttatgcaagtatttaagtctccacacaagtgactgggtaagctcttgccgtcttgctcattctgttactagaggactggcttatcttcacacagaattaccacgaggagatcattataaacctgcaatttcccatcgagatttaaacagcagaaatgtcctagtgaaaaatgatggaacctgtgttattagtgactttggactgtccatgaggctgactggaaatagactggtgcgcccaggggaggaagataatgcagccataagcgaggttggcactatcagatatatggcaccagaagtgctagaaggagctgtgaacttgagggactgtgaatcagctttgaaacaagtagacatgtatgctcttggactaatctattgggagatatttatgagatgtacagacctcttcccaggggaatccgtaccagagtaccagatggcttttcagacagaggttggaaaccatcccacttttgaggatatgcaggttctcgtgtctagggaaaaacagagacccaagttcccagaagcctggaaagaaaatagcctggcagtgaggtcactcaaggagacaatcgaagactgttgggaccaggatgcagaggctcggcttactgcacagtgtgctgaggaaaggatggctgaacttatgatgatttgggaaagaaacaaatctgtgagcccaacagtcaatccaatgtctactgctatgcagaatgaacgtagg(seq id no:73)
[0194]
编码胞外bmprii多肽(同种型2)的核酸序列如下：
[0195]
tcgcagaatcaagaacggctatgtgcgtttaaagatccgtatcagcaagaccttgggataggtgagagtagaatctctcatgaaaatgggacaatattatgctcgaaaggtagcacctgctatggcctttgggagaaatcaaaaggggacataaatcttgtaaaacaaggatgttggtctcacattggagatccccaagagtgtcactatgaagaatgtgtagtaactaccactcctccctcaattcagaatggaacataccgtttctgctgttgtagcacagatttatgtaatgtcaactttactgagaattttccacctcctgacacaacaccactcagtccacctcattcatttaaccgagatgagaca(seq id no:74)
[0196]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种bmprii多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的bmprii多肽(例如包含bmprii多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本发明本公开内容的bmprii多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、411或412的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种bmprii多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:46、47、71、72、121、123、411或412的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种bmprii多肽组成或基本由其组成。
[0197]
在某些方面，本公开内容涉及包含misrii多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“misrii”是指来自任何物种的缪勒抑制物质受体ii型(misrii)蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述misrii蛋白的变体。本文对misrii的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。misrii家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0198]
术语“misrii多肽”包括包含misrii家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。所有本文所述misrii相关多肽的氨基酸的编号以下面的人misrii前体蛋白序列(seq id no:50)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0199]
典型的人misrii前体蛋白序列(ncbi ref seq np_065434.1)如下：
[0200]
[0201]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0202]
加工的胞外misrii多肽序列如下：
[0203]
ppnrrtcvffeapgvrgstktlgelldtgtelprairclysrccfgiwnltqdraqvemqgcrdsdepgceslhcdpsprahpspgstlftcscgtdfcnanyshlpppgspgtpgsqgpqaapgesiwmal(seq id no:51)
[0204]
编码misrii前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:52)，相当于genbank参比序列nm_020547.2的核苷酸81-1799。信号序列用下划线表示。
[0205]
atgctagggtctttggggctttgggcattacttcccacagctgtggaagcacccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggcacagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactggtgctgctggggctgttcctcctcctcctgctgctgctgggcagcatcatcttggccctgctacagcgaaagaactacagagtgcgaggtgagccagtgccagagccaaggccagactcaggcagggactggagtgtggagctgcaggagctgcctgagctgtgtttctcccaggtaatccgggaaggaggtcatgcagtggtttgggccgggcagctgcaaggaaaactggttgccatcaaggccttcccaccgaggtctgtggctcagttccaagctgagagagcattgtacgaacttccaggcctacagcacgaccacattgtccgatttatcactgccagccgggggggtcctggccgcctgctctctgggcccctgctggtactggaactgcatcccaagggctccctgtgccactacttgacccagtacaccagtgactggggaagttccctgcggatggcactgtccctggcccagggcctggcatttctccatgaggagcgctggcagaatggccaatataaaccaggtattgcccaccgagatctgagcagccagaatgtgctcattcgggaagatggatcgtgtgccattggagacctgggccttgccttggtgctccctggcctcactcagccccctgcctggacccctactcaaccacaaggcccagctgccatcatggaagctggcacccagaggtacatggcaccagagctcttggacaagactctggacctacaggattggggcatggccctccgacgagctgatatttactctttggctctgctcctgtgggagatactgagccgctgcccagatttgaggcctgacagcagtccaccacccttccaactggcctatgaggcagaactgggcaatacccctacctctgatgagctatgggccttggcagtgcaggagaggaggcgtccctacatcccatccacctggcgctgctttgccacagaccctgatgggctgagggagctcctagaagactgttgggatgcagacccagaagcacggctgacagctgagtgtgtacagcagcgcctggctgccttggcccatcctcaagagagccacccctttccagagagctgtccacgtggctgcccacctctctgcccagaagactgtacttcaattcctgcccctaccatcctcccctgtaggcctcagcggagtgcctgccacttcagcgttcagcaaggcccttgttccaggaatcctcagcctgcctgtaccctttctcctgtg(seq id no:52)
[0206]
编码胞外人misrii多肽的核酸序列如下：
[0207]
cccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggcacagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactg(seq id no:53)
[0208]
人misrii前体蛋白序列的可变同种型，同种型2(ncbi ref seq np_001158162.1)如下：
[0209][0210]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0211]
加工的胞外misrii多肽序列(同种型2)如下：
[0212]
ppnrrtcvffeapgvrgstktlgelldtgtelprairclysrccfgiwnltqdraqvemqgcrdsdepgceslhcdpsprahpspgstlftcscgtdfcnanyshlpppgspgtpgsqgpqaapgesiwmal(seq id no:76)
[0213]
编码misrii前体蛋白(同种型2)的核酸序列见下(seq id no:77)，相当于genbank参比序列nm_001164690.1的核苷酸81-1514。信号序列用下划线表示。
[0214]
atgctagggtctttggggctttgggcattacttcccacagctgtggaagcacccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggcacagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactggtgctgctggggctgttcctcctcctcctgctgctgctgggcagcatcatcttggccctgctacagcgaaagaactacagagtgcgaggtgagccagtgccagagccaaggccagactcaggcagggactggagtgtggagctgcaggagctgcctgagctgtgtttctcccaggtaatccgggaaggaggtcatgcagtggtttgggccgggcagctgcaaggaaaactggttgccatcaaggccttcccaccgaggtctgtggctcagttccaagctgagagagcattgtacgaacttccaggcctacagcacgaccacattgtccgatttatcactgccagccgggggggtcctggccgcctgctctctgggcccctgctggtactggaactgcatcccaagggctccctgtgccactacttgacccagtacaccagtgactggggaagttccctgcggatggcactgtccctggcccagggcctggcatttctccatgaggagcgctggcagaatggccaatataaaccaggtattgcccaccgagatctgagcagccagaatgtgctcattcgggaagatggatcgtgtgccattggagacctgggccttgccttggtgctccctggcctcactcagccccctgcctggacccctactcaaccacaaggcccagctgccatcatggaagctggcacccagaggtacatggcaccagagctcttggacaagactctggacctacaggattggggcatggccctccgacgagctgatatttactctttggctctgctcctgtgggagatactgagccgctgcccagatttgaggcctgcagtccaccacccttccaactggcctatgaggcagaactgggcaatacccctacctctgatgagctatgggccttggcagtgcaggagaggaggcgtccctacatcccatccacctggcgctgctttgccacagaccctgatgggc(seq id no:77)
[0215]
核酸序列编码加工的可溶性(胞外)人misrii多肽(同种型2)如下：cccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggca
cagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactg(seq id no:78)
[0216]
人misrii前体蛋白序列的可变同种型，同种型3(ncbi ref seq np_001158163.1)如下：
[0217][0218]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0219]
加工的胞外misrii多肽序列(同种型3)如下：
[0220]
ppnrrtcvffeapgvrgstktlgelldtgtelprairclysrccfgiwnltqdraqvemqgcrdsdepgceslhcdpsprahpspgstlftcscgtdfcnanyshlpppgspgtpgsqgpqaapgesiwmal(seq id no:80)
[0221]
编码人misrii前体蛋白(同种型3)的核酸序列见下(seq id no:81)，相当于genbank参比序列nm_001164691.1的核苷酸81-1514。信号序列用下划线表示。
[0222]
atgctagggtctttggggctttgggcattacttcccacagctgtggaagcacccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggcacagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactggtgctgctggggctgttcctcctcctcctgctgctgctgggcagcatcatcttggccctgctacagcgaaagaactacagagtgcgaggtgagccagtgccagagccaaggccagactcaggcagggactggagtgtggagctgcaggagctgcctgagctgtgtttctcccaggtaatccgggaaggaggtcatgcagtggtttgggccgggcagctgcaaggaaaactggttgccatcaaggccttcccaccgaggtctgtggctcagttccaagctgagagagcattgtacgaacttccaggcctacagcacgaccacattgtccgatttatcactgccagccgggggggtcctggccgcctgctctctgggcccctgctggtactggaactgcatcccaagggctccctgtgccactacttgacccagtacaccagtgactggggaagttccctgcggatggcactgtccctggcccagggcctggcatttctccatgaggagcgctggcagaatggccaatataaaccaggtattgcccaccgagatctgagcagccagaatgtgctcattcgggaagatggatcgtgtgccattggagacctgggccttgccttggtgctccctggcctcactcagccccctgcctggacccctactcaaccacaaggcccagctgcca
tcatggaagaccctgatgggctgagggagctcctagaagactgttgggatgcagacccagaagcacggctgacagctgagtgtgtacagcagcgcctggctgccttggcccatcctcaagagagccacccctttccagagagctgtccacgtggctgcccacctctctgcccagaagactgtacttcaattcctgcccctaccatcctcccctgtaggcctcagcggagtgcctgccacttcagcgttcagcaaggcccttgttccaggaatcctcagcctgcctgtaccctttctcctgtg(seq id no:81)
[0223]
编码加工的可溶性(胞外)人misrii多肽(同种型3)的核酸序列如下：
[0224]
cccccaaacaggcgaacctgtgtgttctttgaggcccctggagtgcggggaagcacaaagacactgggagagctgctagatacaggcacagagctccccagagctatccgctgcctctacagccgctgctgctttgggatctggaacctgacccaagaccgggcacaggtggaaatgcaaggatgccgagacagtgatgagccaggctgtgagtccctccactgtgacccaagtccccgagcccaccccagccctggctccactctcttcacctgctcctgtggcactgacttctgcaatgccaattacagccatctgcctcctccagggagccctgggactcctggctcccagggtccccaggctgccccaggtgagtccatctggatggcactg(seq id no:82)
[0225]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种misrii多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的misrii多肽(例如包含misrii多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本发明本公开内容的misrii多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:50、51、75、76、79或80的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种misrii多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:50、51、75、76、79或80的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种misrii多肽组成或基本由其组成。
[0226]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk1多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk1”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-1蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk1蛋白的变体。本文对alk1的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk1家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0227]
术语“alk1多肽”包括包含alk1家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk1相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk1前体蛋白序列(seq id no:14)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0228]
人alk1前体蛋白序列(ncbi ref seq np_000011.2)如下：
[0229][0230]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0231]
加工的胞外alk1多肽序列如下：
[0232]
dpvkpsrgplvtctcesphckgptcrgawctvvlvreegrhpqehrgcgnlhrelcrgrptefvnhyccdshlcnhnvslvleatqppseqpgtdgq(seq id no:15)
[0233]
编码人alk1前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:16)，相当于genbank参比序列nm_000020.2的核苷酸284-1792。信号序列用下划线表示。
[0234]
atgaccttgggctcccccaggaaaggccttctgatgctgctgatggccttggtgacccagggagaccctgtgaagccgtctcggggcccgctggtgacctgcacgtgtgagagcccacattgcaaggggcctacctgccggggggcctggtgcacagtagtgctggtgcgggaggaggggaggcacccccaggaacatcggggctgcgggaacttgcacagggagctctgcagggggcgccccaccgagttcgtcaaccactactgctgcgacagccacctctgcaaccacaacgtgtccctggtgctggaggccacccaacctccttcggagcagccgggaacagatggccagctggccctgatcctgggccccgtgctggccttgctggccctggtggccctgggtgtcctgggcctgtggcatgtccgacggaggcaggagaagcagcgtggcctgcacagcgagctgggagagtccagtctcatcctgaaagcatctgagcagggcgacagcatgttgggggacctcctggacagtgactgcaccacagggagtggctcagggctccccttcctggtgcagaggacagtggcacggcaggttgccttggtggagtgtgtgggaaaaggccgctatggcgaagtgtggcggggcttgtggcacggtgagagtgtggccgtcaagatcttctcctcgagggatgaacagtcctggttccgggagactgagatctataacacagtgttgctcagacacgacaacatcctaggcttcatcgcctcagacatgacctcccgcaactcgagcacgcagctgtggctcatcacgcactaccacgagcacggctccctctacgactttctgcagagacagacgctggagccccatctggctctgaggctagctgtgtccgcggcatgcggcctggcgcacctgcacgtggagatcttcggtacacagggcaaaccagccattgcccaccgcgacttcaagagccgcaatgtgctggtcaagagcaacctgcagtgttgcatcgccgacctgggcctggctgtgatgcactcacagggcagcgattacctggacatcggcaacaacccgagagtgggcaccaagcggtacatggcacccgaggtgctggacgagcagatccgcacggactgctttgagtcctacaagtggactgacatctgggcctttggcctggtgctgtgggagattgcccgccggaccatcgtgaatggcatcgtggaggactatagaccacccttctatgatgtggtgcccaatgaccccagctttgaggacatgaagaaggtggtgtgtgtggatcagcagacccccaccatccctaaccggctggctgcagacccggtcctctcaggcctagctcagatgatgcgggagtgctggtacccaaacccctctgcccgactcaccgcgctgcggatcaagaagacactacaaaaaattagcaacagtccagagaagcctaaagtgattcaa(seq id no:16)
[0235]
编码加工的胞外alk1多肽的核酸序列如下：
[0236]
gaccctgtgaagccgtctcggggcccgctggtgacctgcacgtgtgagagcccacattgcaaggggcctacctgccggggggcctggtgcacagtagtgctggtgcgggaggaggggaggcacccccaggaacatcggggctgcgggaacttgcacagggagctctgcagggggcgccccaccgagttcgtcaaccactactgctgcgacagccacctctgcaaccacaacgtgtccctggtgctggaggccacccaacctccttcggagcagccgggaacagatggccag(seq id no:17)
[0237]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk1多肽(例如包含alk1多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk1的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk1多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:14、15、124、126、413或414的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk1多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:14、15、124、126、413或414的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk1多肽组成或基本由其组成。
[0238]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk2多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk2”是指自任何物种的激活素受体样激酶-2蛋白的家族来和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk2蛋白的变体。本文对alk2的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk2家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0239]
术语“alk2多肽”包括包含alk2家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk2相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk2前体蛋白序列(seq id no:18)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0240]
人alk2前体蛋白序列(ncbi ref seq np_001096.1)如下：
[0241][0242][0243]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0244]
加工的胞外alk2多肽序列如下：
[0245]
medekpkvnpklymcvceglscgnedhcegqqcfsslsindgfhvyqkgcfqvyeqgkmtcktppspg
qaveccqgdwcnrnitaqlptkgksfpgtqnfhle(seq id no:19)
[0246]
编码人alk2前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:20)，相当于genbank参比序列nm_001105.4的核苷酸431-1957。信号序列用下划线表示。
[0247]
atggtagatggagtgatgattcttcctgtgcttatcatgattgctctcccctcccctagtatggaagatgagaagcccaaggtcaaccccaaactctacatgtgtgtgtgtgaaggtctctcctgcggtaatgaggaccactgtgaaggccagcagtgcttttcctcactgagcatcaacgatggcttccacgtctaccagaaaggctgcttccaggtttatgagcagggaaagatgacctgtaagaccccgccgtcccctggccaagccgtggagtgctgccaaggggactggtgtaacaggaacatcacggcccagctgcccactaaaggaaaatccttccctggaacacagaatttccacttggaggttggcctcattattctctctgtagtgttcgcagtatgtcttttagcctgcctgctgggagttgctctccgaaaatttaaaaggcgcaaccaagaacgcctcaatccccgagacgtggagtatggcactatcgaagggctcatcaccaccaatgttggagacagcactttagcagatttattggatcattcgtgtacatcaggaagtggctctggtcttccttttctggtacaaagaacagtggctcgccagattacactgttggagtgtgtcgggaaaggcaggtatggtgaggtgtggaggggcagctggcaaggggagaatgttgccgtgaagatcttctcctcccgtgatgagaagtcatggttcagggaaacggaattgtacaacactgtgatgctgaggcatgaaaatatcttaggtttcattgcttcagacatgacatcaagacactccagtacccagctgtggttaattacacattatcatgaaatgggatcgttgtacgactatcttcagcttactactctggatacagttagctgccttcgaatagtgctgtccatagctagtggtcttgcacatttgcacatagagatatttgggacccaagggaaaccagccattgcccatcgagatttaaagagcaaaaatattctggttaagaagaatggacagtgttgcatagcagatttgggcctggcagtcatgcattcccagagcaccaatcagcttgatgtggggaacaatccccgtgtgggcaccaagcgctacatggcccccgaagttctagatgaaaccatccaggtggattgtttcgattcttataaaagggtcgatatttgggcctttggacttgttttgtgggaagtggccaggcggatggtgagcaatggtatagtggaggattacaagccaccgttctacgatgtggttcccaatgacccaagttttgaagatatgaggaaggtagtctgtgtggatcaacaaaggccaaacatacccaacagatggttctcagacccgacattaacctctctggccaagctaatgaaagaatgctggtatcaaaatccatccgcaagactcacagcactgcgtatcaaaaagactttgaccaaaattgataattccctcgacaaattgaaaactgactgt(seq id no:20)
[0248]
编码胞外alk2多肽的核酸序列如下：
[0249]
atggaagatgagaagcccaaggtcaaccccaaactctacatgtgtgtgtgtgaaggtctctcctgcggtaatgaggaccactgtgaaggccagcagtgcttttcctcactgagcatcaacgatggcttccacgtctaccagaaaggctgcttccaggtttatgagcagggaaagatgacctgtaagaccccgccgtcccctggccaagccgtggagtgctgccaaggggactggtgtaacaggaacatcacggcccagctgcccactaaaggaaaatccttccctggaacacagaatttccacttggag(seq id no:21)
[0250]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk2多肽(例如包含alk2多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk2的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk2多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:18或19的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk2多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:18或19的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk2多肽组成或基本由其组成。
[0251]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk3多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk3”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-3蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk3蛋白的变体。本文对alk3的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk3家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0252]
术语“alk3多肽”包括包含alk3家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk3相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk3前体蛋白序列(seq id no:22)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0253]
人alk3前体蛋白序列(ncbi ref seq np_004320.2)如下：
[0254][0255]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0256]
加工的胞外alk3多肽序列如下：
[0257][0258]
编码人alk3前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:24)，相当于genbank参比序列nm_004329.2的核苷酸549-2144。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0259][0260]
编码胞外人alk3多肽的核酸序列如下：
[0261][0262][0263]
有活性的(例如配体结合)alk3多肽的通式是包含始于seq id no:22的任何氨基酸位置25-31(即25、26、27、28、29、30或31位)和止于seq id no:22的任何氨基酸位置140-152(即140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151或152)的多肽的通式。参见美国专利8,338,377，其教导内容通过引用以其整体结合到本文中。
[0264]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk3多肽(例如包含alk3多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk3的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk3多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含至少一种alk3多肽，其包含始于seq id no:22的任何氨基酸25-31位(即25、26、27、28、29、30或31位)和止于seq id no:22的任何氨基酸140-153位(即140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151或152)的氨基酸、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:22、23、115、117、407或408的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk3多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:22、23、115、117、407或408的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk3多肽组成或基本由其组成。
[0265]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk4多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk4”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-4蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk4蛋白的变体。本文对alk4的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk4家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0266]
术语“alk4多肽”包括包含alk4家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk4相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk4前体蛋白序列(seq id no:26)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0267]
典型的人alk4前体蛋白序列(ncbi ref seq np_004293)如下：
[0268][0269]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0270]
加工的胞外人alk4多肽序列如下：
[0271]
sgprgvqallcactsclqanytcetdgacmvsifnldgmehhvrtcipkvelvpagkpfyclssedlrnthccytdycnridlrvpsghlkepehpsmwgpve(seq id no:27)
[0272]
编码alk4前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:28)，相当于genbank参比序列nm_004302.4的核苷酸78-1592。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0273]
atggcggagtcggccggagcctcctccttcttcccccttgttgtcctcctgctcgccggcagcggcgg
gtccgggccccggggggtccaggctctgctgtgtgcgtgcaccagctgcctccaggccaactacacgtgtgagacagatggggcctgcatggtttccattttcaatctggatgggatggagcaccatgtgcgcacctgcatccccaaagtggagctggtccctgccgggaagcccttctactgcctgagctcggaggacctgcgcaacacccactgctgctacactgactactgcaacaggatcgacttgagggtgcccagtggtcacctcaaggagcctgagcacccgtccatgtggggcccggtggagctggtaggcatcatcgccggcccggtgttcctcctgttcctcatcatcatcattgttttccttgtcattaactatcatcagcgtgtctatcacaaccgccagagactggacatggaagatccctcatgtgagatgtgtctctccaaagacaagacgctccaggatcttgtctacgatctctccacctcagggtctggctcagggttacccctctttgtccagcgcacagtggcccgaaccatcgttttacaagagattattggcaagggtcggtttggggaagtatggcggggccgctggaggggtggtgatgtggctgtgaaaatattctcttctcgtgaagaacggtcttggttcagggaagcagagatataccagacggtcatgctgcgccatgaaaacatccttggatttattgctgctgacaataaagataatggcacctggacacagctgtggcttgtttctgactatcatgagcacgggtccctgtttgattatctgaaccggtacacagtgacaattgaggggatgattaagctggccttgtctgctgctagtgggctggcacacctgcacatggagatcgtgggcacccaagggaagcctggaattgctcatcgagacttaaagtcaaagaacattctggtgaagaaaaatggcatgtgtgccatagcagacctgggcctggctgtccgtcatgatgcagtcactgacaccattgacattgccccgaatcagagggtggggaccaaacgatacatggcccctgaagtacttgatgaaaccattaatatgaaacactttgactcctttaaatgtgctgatatttatgccctcgggcttgtatattgggagattgctcgaagatgcaattctggaggagtccatgaagaatatcagctgccatattacgacttagtgccctctgacccttccattgaggaaatgcgaaaggttgtatgtgatcagaagctgcgtcccaacatccccaactggtggcagagttatgaggcactgcgggtgatggggaagatgatgcgagagtgttggtatgccaacggcgcagcccgcctgacggccctgcgcatcaagaagaccctctcccagctcagcgtgcaggaagacgtgaagatc(seq id no:28)
[0274]
编码胞外alk4多肽的核酸序列如下：
[0275]
tccgggccccggggggtccaggctctgctgtgtgcgtgcaccagctgcctccaggccaactacacgtgtgagacagatggggcctgcatggtttccattttcaatctggatgggatggagcaccatgtgcgcacctgcatccccaaagtggagctggtccctgccgggaagcccttctactgcctgagctcggaggacctgcgcaacacccactgctgctacactgactactgcaacaggatcgacttgagggtgcccagtggtcacctcaaggagcctgagcacccgtccatgtggggcccggtggag(seq id no:29)
[0276]
人alk4前体蛋白序列的的可变同种型，同种型c(ncbi ref seq np_064733.3)如下：
[0277][0278]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0279]
加工的胞外alk4多肽序列(同种型c)如下：
[0280]
sgprgvqallcactsclqanytcetdgacmvsifnldgmehhvrtcipkvelvpagkpfyclssedlrnthccytdycnridlrvpsghlkepehpsmwgpve(seq id no:84)
[0281]
编码alk4前体蛋白(同种型c)的核酸序列见下(seq id no:85)，相当于genbank参比序列nm_020328.3的核苷酸78-1715。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0282]
atggcggagtcggccggagcctcctccttcttcccccttgttgtcctcctgctcgccggcagcggcgggtccgggccccggggggtccaggctctgctgtgtgcgtgcaccagctgcctccaggccaactacacgtgtgagacagatggggcctgcatggtttccattttcaatctggatgggatggagcaccatgtgcgcacctgcatccccaaagtggagctggtccctgccgggaagcccttctactgcctgagctcggaggacctgcgcaacacccactgctgctacactgactactgcaacaggatcgacttgagggtgcccagtggtcacctcaaggagcctgagcacccgtccatgtggggcccggtggagctggtaggcatcatcgccggcccggtgttcctcctgttcctcatcatcatcattgttttccttgtcattaactatcatcagcgtgtctatcacaaccgccagagactggacatggaagatccctcatgtgagatgtgtctctccaaagacaagacgctccaggatcttgtctacgatctctccacctcagggtctggctcagggttacccctctttgtccagcgcacagtggcccgaaccatcgttttacaagagattattggcaagggtcggtttggggaagtatggcggggccgctggaggggtggtgatgtggctgtgaaaatattctcttctcgtgaagaacggtcttggttcagggaagcagagatataccagacggtcatgctgcgccatgaaaacatccttggatttattgctgctgacaataaagcagactgctcattcctcacattgccatgggaagttgtaatggtctctgctgcccccaagctgaggagccttagactccaatacaagggaggaaggggaagagcaagatttttattcccactgaataatggcacctggacacagctgtggcttgtttctgactatcatgagcacgggtccctgtttgattatctgaaccggtacacagtgacaattgaggggatgattaagctggccttgtctgctgctagtgggctggcacacctgcacatggagatcgtgggcacccaagggaagcctggaattgctcatcgagacttaaagtcaaagaacattctggtgaagaaaaatggcatgtgtgccatagcagacctgggcctggctgtccgtcatgatgcagtcactgacaccattgacattgccccgaatcagagggtggggaccaaacgatacatggcccctgaagtacttgatgaaaccattaatatgaaacactttgactcctttaaatgtgctgatatttatgccctcgggcttgtatattgggagattgctcgaagatgcaattctggaggagtccatgaagaatatcagctgccatattacgacttagtgccctctgacccttccattgaggaaatgcgaaaggttgtatgtgatcagaagctgcgtcccaacatccccaactggtggcagagttatgaggcactgcgggtgatggggaagatgatgcgagagtgttggtatgccaacggcgcagcccgcctgacggccctgcgcatcaagaagaccctctcccagctcagcgtgcaggaagacgtgaagatc(seq id no:85)
[0283]
编码胞外alk4多肽(同种型c)的核酸序列如下：
[0284]
tccgggccccggggggtccaggctctgctgtgtgcgtgcaccagctgcctccaggccaactacacgtgtgagacagatggggcctgcatggtttccattttcaatctggatgggatggagcaccatgtgcgcacctgcatccccaaagtggagctggtccctgccgggaagcccttctactgcctgagctcggaggacctgcgcaacacccactgctgctacactgactactgcaacaggatcgacttgagggtgcccagtggtcacctcaaggagcctgagcacccgtccatgtggggcccggtggag(seq id no:86)
[0285]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk4多肽(例如包含alk4多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk4的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk4多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、403或404的氨基酸序列有至
少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk4多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:26、27、83、84、104、106、403或404的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk4多肽组成或基本由其组成。
[0286]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk5多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk5”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-5蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk4蛋白的变体。本文对alk5的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk5家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0287]
术语“alk5多肽”包括包含alk5家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk5相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk5前体蛋白序列(seq id no:30)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0288]
典型的人alk5前体蛋白序列(ncbi ref seq np_004603.1)如下：
[0289][0290]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0291]
加工的胞外alk5多肽序列如下：
[0292]
aallpgatalqcfchlctkdnftcvtdglcfvsvtettdkvihnsmciaeidliprdrpfvcapssktgsvtttyccnqdhcnkielpttvksspglgpvel(seq id no:31)
[0293]
编码alk5前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:32)，相当于genbank参比序列nm_004612.2的核苷酸77-1585。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0294]
atggaggcggcggtcgctgctccgcgtccccggctgctcctcctcgtgctggcggcggcggcggcggcggcggcggcgctgctcccgggggcgacggcgttacagtgtttctgccacctctgtacaaaagacaattttacttgtgtgacagatgggctctgctttgtctctgtcacagagaccacagacaaagttatacacaacagcatgtgtatagctgaaattgacttaattcctcgagataggccgtttgtatgtgcaccctcttcaaaaactgggtctgtgactacaacatattgctgcaatcaggaccattgcaataaaatagaacttccaactactgtaaagtcatcacctggccttggtcctgtggaactggcagctgtcattgctggaccagtgtgcttcgtctgcatctcactcatgttgatggtctatatctgccacaaccgcactgtcattcaccatcgagtgccaaatgaagaggacccttcattagatcgcccttttatttcagagggtactacgttgaaagacttaatttatgatatgacaacgtcaggttctggctcaggtttaccattgcttgttcagagaacaattgcgagaactattgtgttacaagaaagcattggcaaaggtcgatttggagaagtttggagaggaaagtggcggggagaagaagttgctgttaagatattctcctctagagaagaacgttcgtggttccgtgaggcagagatttatcaaac
tgtaatgttacgtcatgaaaacatcctgggatttatagcagcagacaataaagacaatggtacttggactcagctctggttggtgtcagattatcatgagcatggatccctttttgattacttaaacagatacacagttactgtggaaggaatgataaaacttgctctgtccacggcgagcggtcttgcccatcttcacatggagattgttggtacccaaggaaagccagccattgctcatagagatttgaaatcaaagaatatcttggtaaagaagaatggaacttgctgtattgcagacttaggactggcagtaagacatgattcagccacagataccattgatattgctccaaaccacagagtgggaacaaaaaggtacatggcccctgaagttctcgatgattccataaatatgaaacattttgaatccttcaaacgtgctgacatctatgcaatgggcttagtattctgggaaattgctcgacgatgttccattggtggaattcatgaagattaccaactgccttattatgatcttgtaccttctgacccatcagttgaagaaatgagaaaagttgtttgtgaacagaagttaaggccaaatatcccaaacagatggcagagctgtgaagccttgagagtaatggctaaaattatgagagaatgttggtatgccaatggagcagctaggcttacagcattgcggattaagaaaacattatcgcaactcagtcaacaggaaggcatcaaaatg(seq id no:32)
[0295]
编码胞外人alk5多肽的核酸序列如下：
[0296]
gcggcgctgctcccgggggcgacggcgttacagtgtttctgccacctctgtacaaaagacaattttacttgtgtgacagatgggctctgctttgtctctgtcacagagaccacagacaaagttatacacaacagcatgtgtatagctgaaattgacttaattcctcgagataggccgtttgtatgtgcaccctcttcaaaaactgggtctgtgactacaacatattgctgcaatcaggaccattgcaataaaatagaacttccaactactgtaaagtcatcacctggccttggtcctgtggaactg(seq id no:33)
[0297]
人alk5前体蛋白序列的可变同种型，同种型2(ncbi ref seq xp_005252207.1)如下：
[0298][0299]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0300]
加工的胞外alk5多肽序列(同种型2)如下：
[0301]
aallpgatalqcfchlctkdnftcvtdglcfvsvtettdkvihnsmciaeidliprdrpfvcapssktgsvtttyccnqdhcnkielpttgpfsvksspglgpvel(seq id no:88)
[0302]
编码人alk5前体蛋白(同种型2)的核酸序列见下(seq id no:89)，相当于genbank参比序列xm_005252150.1的核苷酸77-1597。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0303][0304][0305]
编码加工的胞外alk5多肽的核酸序列如下：
[0306]
gcggcgctgctcccgggggcgacggcgttacagtgtttctgccacctctgtacaaaagacaattttacttgtgtgacagatgggctctgctttgtctctgtcacagagaccacagacaaagttatacacaacagcatgtgtatagctgaaattgacttaattcctcgagataggccgtttgtatgtgcaccctcttcaaaaactgggtctgtgactacaacatattgctgcaatcaggaccattgcaataaaatagaacttccaactactggccctttttcagtaaagtcatcacc
tggccttggtcctgtggaactg(seq id no:90)
[0307]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk5多肽(例如包含alk5多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk5的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk5多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:30、31、87或88的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk5多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:30、31、87或88的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk5多肽组成或基本由其组成。
[0308]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk6多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk6”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-6蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生于所述alk6蛋白的变体。本文对alk6的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk6家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0309]
术语“alk6多肽”包括包含alk6家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk6相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk6前体蛋白序列(seq id no:34)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0310]
典型的人alk6前体蛋白序列(ncbi ref seq np_001194.1)如下：
[0311][0312]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0313]
加工的胞外alk6多肽序列如下：
[0314]
kkedgestaptprpkvlrckchhhcpedsvnnicstdgycftmieeddsglpvvtsgclglegsdfqcrdtpiphqrrsieccternecnkdlhptlpplknrdfvdgpihhr(seq id no:35)
[0315]
编码alk6前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:36)，相当于genbank参比序列nm_001203.2的核苷酸275-1780。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0316]
atgcttttgcgaagtgcaggaaaattaaatgtgggcaccaagaaagaggatggtgagagtacagcccccaccccccgtccaaaggtcttgcgttgtaaatgccaccaccattgtccagaagactcagtcaacaatatttgcagcacagacggatattgtttcacgatgatagaagaggatgactctgggttgcctgtggtcacttctggttgcctaggac
tagaaggctcagattttcagtgtcgggacactcccattcctcatcaaagaagatcaattgaatgctgcacagaaaggaacgaatgtaataaagacctacaccctacactgcctccattgaaaaacagagattttgttgatggacctatacaccacagggctttacttatatctgtgactgtctgtagtttgctcttggtccttatcatattattttgttacttccggtataaaagacaagaaaccagacctcgatacagcattgggttagaacaggatgaaacttacattcctcctggagaatccctgagagacttaattgagcagtctcagagctcaggaagtggatcaggcctccctctgctggtccaaaggactatagctaagcagattcagatggtgaaacagattggaaaaggtcgctatggggaagtttggatgggaaagtggcgtggcgaaaaggtagctgtgaaagtgttcttcaccacagaggaagccagctggttcagagagacagaaatatatcagacagtgttgatgaggcatgaaaacattttgggtttcattgctgcagatatcaaagggacagggtcctggacccagttgtacctaatcacagactatcatgaaaatggttccctttatgattatctgaagtccaccaccctagacgctaaatcaatgctgaagttagcctactcttctgtcagtggcttatgtcatttacacacagaaatctttagtactcaaggcaaaccagcaattgcccatcgagatctgaaaagtaaaaacattctggtgaagaaaaatggaacttgctgtattgctgacctgggcctggctgttaaatttattagtgatacaaatgaagttgacataccacctaacactcgagttggcaccaaacgctatatgcctccagaagtgttggacgagagcttgaacagaaatcacttccagtcttacatcatggctgacatgtatagttttggcctcatcctttgggaggttgctaggagatgtgtatcaggaggtatagtggaagaataccagcttccttatcatgacctagtgcccagtgacccctcttatgaggacatgagggagattgtgtgcatcaagaagttacgcccctcattcccaaaccggtggagcagtgatgagtgtctaaggcagatgggaaaactcatgacagaatgctgggctcacaatcctgcatcaaggctgacagccctgcgggttaagaaaacacttgccaaaatgtcagagtcccaggacattaaactc(seq id no:36)
[0317]
编码加工的胞外alk6多肽的核酸序列如下：
[0318]
aagaaagaggatggtgagagtacagcccccaccccccgtccaaaggtcttgcgttgtaaatgccaccaccattgtccagaagactcagtcaacaatatttgcagcacagacggatattgtttcacgatgatagaagaggatgactctgggttgcctgtggtcacttctggttgcctaggactagaaggctcagattttcagtgtcgggacactcccattcctcatcaaagaagatcaattgaatgctgcacagaaaggaacgaatgtaataaagacctacaccctacactgcctccattgaaaaacagagattttgttgatggacctatacaccacagg(seq id no:37)
[0319]
人alk6前体蛋白序列的可变同种型，同种型2(ncbi ref seq np_001243722.1)如下：
[0320][0321]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0322]
加工的胞外alk6多肽序列(同种型2)如下：
[0323]
nfldnmllrsagklnvgtkkedgestaptprpkvlrckchhhcpedsvnnicstdgycftmieeddsglpvvtsgclglegsdfqcrdtpiphqrrsieccternecnkdlhptlpplknrdfvdgpihhr(seq id no:92)
[0324]
编码人alk6前体蛋白(同种型2)的核酸序列见下，相当于genbank参比序列nm_001256793.1的核苷酸22-1617。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0325]
atgggttggctggaagaactaaactggcagcttcacattttcttgctcattcttctctctatgcacacaagggcaaacttccttgataacatgcttttgcgaagtgcaggaaaattaaatgtgggcaccaagaaagaggatggtgagagtacagcccccaccccccgtccaaaggtcttgcgttgtaaatgccaccaccattgtccagaagactcagtcaacaatatttgcagcacagacggatattgtttcacgatgatagaagaggatgactctgggttgcctgtggtcacttctggttgcctaggactagaaggctcagattttcagtgtcgggacactcccattcctcatcaaagaagatcaattgaatgctgcacagaaaggaacgaatgtaataaagacctacaccctacactgcctccattgaaaaacagagattttgttgatggacctatacaccacagggctttacttatatctgtgactgtctgtagtttgctcttggtccttatcatattattttgttacttccggtataaaagacaagaaaccagacctcgatacagcattgggttagaacaggatgaaacttacattcctcctggagaatccctgagagacttaattgagcagtctcagagctcaggaagtggatcaggcctccctctgctggtccaaaggactatagctaagcagattcagatggtgaaacagattggaaaaggtcgctatggggaagtttggatgggaaagtggcgtggcgaaaaggtagctgtgaaagtgttcttcaccacagaggaagccagctggttcagagagacagaaatatatcagacagtgttgatgaggcatgaaaacattttgggtttcattgctgcagatatcaaagggacagggtcctggacccagttgtacctaatcacagactatcatgaaaatggttccctttatgattatctgaagtccaccaccctagacgctaaatcaatgctgaagttagcctactcttctgtcagtggcttatgtcatttacacacagaaatctttagtactcaaggcaaaccagcaattgcccatcgagatctgaaaagtaaaaacattctggtgaagaaaaatggaacttgctgtattgctgacctgggcctggctgttaaatttattagtgatacaaatgaagttgacataccacctaacactcgagttggcaccaaacgctatatgcctccagaagtgttggacgagagcttgaacagaaatcacttccagtcttacatcatggctgacatgtatagttttggcctcatcctttgggaggttgctaggagatgtgtatcaggaggtatagtggaagaataccagcttccttatcatgacctagtgcccagtgacccctcttatgaggacatgagggagattgtgtgcatcaagaagttacgcccctcattcccaaaccggtggagcagtgatgagtgtctaaggcagatgggaaaactcatgacagaatgctgggctcacaatcctgcatcaaggctgacagccctgcgggttaagaaaacacttgccaaaatgtcagagtcccaggacattaaactc(seq id no:93)
[0326]
编码加工的胞外alk6多肽的核酸序列如下：
[0327]
aacttccttgataacatgcttttgcgaagtgcaggaaaattaaatgtgggcaccaagaaagaggatggtgagagtacagcccccaccccccgtccaaaggtcttgcgttgtaaatgccaccaccattgtccagaagactcagtcaacaatatttgcagcacagacggatattgtttcacgatgatagaagaggatgactctgggttgcctgtggtcacttctggttgcctaggactagaaggctcagattttcagtgtcgggacactcccattcctcatcaaagaagatcaattgaatgctgcacagaaaggaacgaatgtaataaagacctacaccctacactgcctccattgaaaaacagagattttgttgatggacctatacaccacagg(seq id no:94)
[0328]
在某些实施方案中，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽的异多聚体复合体，其包括其片段、功能变体和修饰形式。优选用于本公开内容发明的alk6多肽(例如包含alk6多肽的异多聚体复合体及其用途)是可溶解的(例如alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，用于本公开内容发明的alk6多肽结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体包含与seq id no:34、35、91或92的氨基酸序列有至少至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk6多肽。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体复合体由与seq id no:34、35、91或92的氨基酸序列有至少至少
70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的至少一种alk6多肽组成或基本由其组成。
[0329]
在某些方面，本公开内容涉及包含alk7多肽的蛋白质复合体。本文所用术语“alk7”是指来自任何物种的激活素受体样激酶-7蛋白的家族和蛋白通过诱变或其它修饰衍生于所述alk7的变体。本文对alk7的提及要理解为是提及目前已鉴定形式的任一种。alk7家族的成员一般是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。
[0330]
术语“alk7多肽”包括包含alk7家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和模拟肽形式)的多肽。本文所述的所有alk7相关多肽的氨基酸的编号以下面的人alk7前体蛋白序列(seq id no:38)的编号为基础，除非另有特别标注。
[0331]
已描述了人alk7的4种天然存在的同种型。典型的人alk7同种型1前体蛋白的序列(ncbi ref seq np_660302.2)如下：
[0332][0333]
信号肽用单下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0334]
加工的胞外alk7同种型1多肽序列如下：
[0335]
elspglkcvcllcdssnftcqtegacwasvmltngkeqvikscvslpelnaqvfchssnnvtkteccftdfcnnitlhlptaspnapklgpme(seq id no:39)
[0336]
编码人alk7同种型1前体蛋白的核酸序列见下(seq id no:40)，相当于genbank参比序列nm_145259.2的核苷酸244-1722。信号序列用下划线表示，胞外域用粗体字表示。
[0337]
atgacccgggcgctctgctcagcgctccgccaggctctcctgctgctcgcagcggccgccgagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagcatcaccaaatgccccaaaacttggacccatggagctggccatcattattactgtgcctgtttgcctcctgtccatagctgcgatgctgacagtatgggcatgccagggtcgacagtgctcctacaggaagaaaaagagaccaaatgtggaggaaccactctctgagtgcaatctggtaaatgctggaaaaactctgaaagatctgatttatgatgtgaccgcctctggatctggctctggtctacctctgttggttcaaaggacaattgcaaggacgattgtgcttcaggaaatagtaggaaaaggtagatttggtgaggtgtggcatggaagatggtgtggggaagatgtggctgtgaaaatattctcctccagagatgaaagatcttggtttcgtgaggcagaaatttaccagacggtcatgctgcgacatgaaaacatccttggtttcattgctgctgacaacaaagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggc
tccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaatcaaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc(seq id no:40)
[0338]
编码加工的胞外alk7多肽(同种型1)的核酸序列如下：
[0339]
gagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagcatcaccaaatgccccaaaacttggacccatggag(seq id no:41)
[0340]
呈其加工形式的人alk7的可变同种型，同种型2的氨基酸序列(ncbi ref seq np_001104501.1)如下表示(seq id no:301)，其中胞外域用粗体字表示。
[0341][0342]
胞外alk7多肽(同种型2)的氨基酸序列如下：
[0343]
mltngkeqvikscvslpelnaqvfchssnnvtkteccftdfcnnitlhlptaspnapklgpme(seq id no:302)。
[0344]
编码加工的alk7多肽(同种型2)的核酸序列见下(seq id no:303)，相当于ncbi参比序列nm_001111031.1的核苷酸279-1607。胞外域用粗体字表示。
[0345]
[0346][0347]
编码胞外alk7多肽(同种型2)的核酸序列如下(seq id no:304)：
[0348]
atgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagcatcaccaaatgccccaaaacttggacccatggag(seq id no:304)
[0349]
可变人alk7前体蛋白，同种型3的氨基酸序列(ncbi ref seq np_001104502.1)如下表示(seq id no:305)，其中信号肽用单下划线表示。
[0350]
[0351]
加工的alk7多肽(同种型3)的氨基酸序列如下(seq id no:306)。该同种型缺乏跨膜结构域，因此提出作为其整体是可溶解的(roberts等，2003，biol reprod 68:1719-1726)。如下所述预测了seq id no:306的n端变体。
[0352][0353]
编码未加工的alk7多肽前体蛋白(同种型3)的核酸序列见下(seq id no:307)，相当于ncbi参比序列nm_001111032.1的核苷酸244-1482。信号序列用实线下划线表示。
[0354]
atgacccgggcgctctgctcagcgctccgccaggctctcctgctgctcgcagcggccgccgagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacaggtctacctctgttggttcaaaggacaattgcaaggacgattgtgcttcaggaaatagtaggaaaaggtagatttggtgaggtgtggcatggaagatggtgtggggaagatgtggctgtgaaaatattctcctccagagatgaaagatcttggtttcgtgaggcagaaatttaccagacggtcatgctgcgacatgaaaacatccttggtttcattgctgctgacaacaaagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggctccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaatcaaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc(seq id no:307)
[0355]
编码加工的alk7多肽(同种型3)的核酸序列如下(seq id no:308)：
[0356]
gagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacaggtctacctctgttggttcaaaggacaattgcaaggacgattgtgcttcaggaaatagtaggaaaaggtagatttggtgaggtgtggcatggaagatggtgtggggaagatgtggctgtgaaaatattctcctccagagatgaaagatcttggtttcgtgaggcagaaatttaccagacggtcatgctgcgacatgaaaacatccttggtttcattgctgctgacaacaaagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggctccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaat
caaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctcaactttgtgtcaaagaagactgcaaagcc(seq id no:308)
[0357]
可变人alk7前体蛋白，同种型4的氨基酸序列(ncbi ref seq np_001104503.1)如下表示(seq id no:309)，其中信号肽用单下划线表示。
[0358][0359]
加工的alk7多肽(同种型4)的氨基酸序列如下(seq id no:310)。像alk7同种型3一样，同种型4缺乏跨膜结构域，因此提出作为其整体是可溶解的(roberts等，2003，biol reprod 68:1719-1726)。如下所述预测了seq id no:310的n端变体。
[0360][0361][0362]
编码未加工的alk7多肽前体蛋白(同种型4)的核酸序列见下(seq id no:311)，相当于ncbi参比序列nm_001111033.1的核苷酸244-1244。信号序列用实线下划线表示。
[0363]
atgacccgggcgctctgctcagcgctccgccaggctctcctgctgctcgcagcggccgccgagctctcgccaggactgaagtgtgtatgtcttttgtgtgattcttcaaactttacctgccaaacagaaggagcatgttgggcatcagtcatgctaaccaatggaaaagagcaggtgatcaaatcctgtgtctcccttccagaactgaatgctcaagtcttctgtcatagttccaacaatgttaccaaaaccgaatgctgcttcacagatttttgcaacaacataacactgcaccttccaacagataatggaacttggactcaactttggctggtatctgaatatcatgaacagggctccttatatgactatttgaatagaaatatagtgaccgtggctggaatgatcaagctggcgctctcaattgctagtggtctggcacaccttcatatggagattgttggtacacaaggtaaacctgctattgctcatcgagacataaaatcaaagaatatcttagtgaaaaagtgtgaaacttgtgccatagcggacttagggttggctgtgaagcatgattcaatactgaacactatcgacatacctcagaatcctaaagtgggaaccaagaggtatatggctcctgaaatgcttgatgatacaatgaatgtgaatatctttgagtccttcaaacgagctgacatctattctgttggtctggtttactgggaaatagcccggaggtgttcagtcggaggaattgttgaggagtaccaattgccttattatgacatggtgccttcagatccctcgatagaggaaatgagaaaggttgtttgtgaccagaagtttcgaccaagtatcccaaaccagtggcaaagttgtgaagcactccgagtcatggggagaataatgcgtgagtgttggtatgccaacggagcggcccgcctaactgctcttcgtattaagaagactatatctca
id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk1:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk1和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk1:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与相应的同多聚复合体(即alk1和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk1:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0371]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk2和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk2:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、
bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0372]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk3和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk3:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0373]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸
序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk4和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk4:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0374]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk5和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk5:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、
bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0375]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk6和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk6:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)的一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0376]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475
和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305和309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1的氨基酸29-109有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib多肽不含酸性氨基酸(例如天然存在的d或e氨基酸或人工酸性氨基酸)。优选本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk7和/或actriib的胞外域)。在其它实施方案中，本公开内容的alk7:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk7和actriib同多聚体)相比，本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk7:actriib异多聚体复合体是异二聚体。
[0377]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:actriia异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些
实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk1:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0378]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:actriia异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk2:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0379]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:actriia异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β
1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk3:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0380]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:actriia异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与成seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组。优选本公开内容的alk4:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk4和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)的一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk4:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0381]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:actriia异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk5和/或actriia的胞外域)。在其它优选的
实施方案中，本公开内容的alk5:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk5:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0382]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:actriia异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:actriia异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk6:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk6和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和actriia同多聚体)相比，本公开内容的alk6:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0383]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:actriia异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-93有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:actriia异多聚体包含至
少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk7:actrii异多聚体是可溶解的(例如包含alk7和/或actriia的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk7:actriia异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合(即alk7和actriia同多聚体)体相比，本公开内容的alk7:actrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk7:actriia异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk7:actriia异多聚体复合体是异二聚体。
[0384]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk1和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合(即alk1和tgfbrii同多聚体)体相比，本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0385]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在
一些实施方案中，本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk2和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0386]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk3和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的
alk3:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0387]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk4和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0388]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk5和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一
种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0389]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk6和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0390]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-93有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由
其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk7和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk7和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk7:tgfbrii异多聚体复合体是异二聚体。
[0391]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:misrii异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk1和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk1:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:misrii异多聚体是异二聚体。
[0392]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和
修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:misrii异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk2和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk2:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:misrii异多聚体是异二聚体。
[0393]
在某些方面，本公开内容涉及异多聚体包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:misrii异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk3和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk3:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。
本公开内容的alk3:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:misrii异多聚体是异二聚体。
[0394]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:misrii异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk4和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征与其相应的同多聚复合体相比，(即alk4和misrii同多聚体)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。本公开内容的alk4:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:misrii异多聚体是异二聚体。
[0395]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:misrii异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk5和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk5:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激
活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk5:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:misrii异多聚体是异二聚体。
[0396]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:misrii异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk6:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk6和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk6:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:misrii异多聚体是异二聚体。
[0397]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:misrii异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-93有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:misrii异多聚体复合体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％
同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk7:misrii异多聚体复合体是可溶解的(例如包含alk7和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk7:misrii异多聚体复合体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk7和misrii同多聚体)相比，本公开内容的alk7:misrii异多聚体复合体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk7:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk7:misrii异多聚体是异二聚体。
[0398]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk1:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0399]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案
中，本公开内容的alk2:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk2:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0400]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk3:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0401]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk4多肽，其包含
与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk4和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk4:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0402]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk5和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk5:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk5:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体
和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0403]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk6:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk6和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0404]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:bmprii异多聚体复合体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk7:bmprii异多聚体复合体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk7:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含alk7和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激
活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk7和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的alk7:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk7:bmprii异多聚体复合体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk7:bmprii异多聚体复合体是异二聚体。
[0405]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk2异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk2的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk2同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk2异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk2异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体是异二聚体。
[0406]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk2异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk2异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk2的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:
101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk4异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk4的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk4同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk4异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk4异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体是异二聚体。
[0409]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk4异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk4的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk4同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk4异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk4异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk4异多聚体是异二聚体。
[0410]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk5异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、
98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk5异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk5异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk5的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk5异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk5同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk5异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk5异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk5异多聚体是异二聚体。
[0411]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk6异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk6异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk6异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk6异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk6同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk6异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk6异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk6异多聚体是异二聚体。
[0412]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk1多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些
实施方案中，本公开内容的alk1:alk7异多聚体包含至少一种alk1多肽，其包含与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463和464中任一个的氨基酸序列或seq id no:14的氨基酸34-95有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk1:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk1:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk1和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk1和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk1:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk1:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk1:alk7异多聚体是异二聚体。
[0413]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk3异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk3异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:alk3异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或alk3的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk3异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和alk3同多聚体)相比，本公开内容的alk2:alk3异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:alk3异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:
alk3异多聚体是异二聚体。
[0414]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式的异多聚体)。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk4异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk4异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:alk4异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或alk4的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk4异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和alk4同多聚体)相比，本公开内容的alk2:alk4异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:alk4异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk4异多聚体是异二聚体。
[0415]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk5异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk5异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:alk5异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或alk5的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk5异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其
相应的同多聚复合体(即alk2和alk5同多聚体)相比，本公开内容的alk2:alk5异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:alk5异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk5异多聚体是异二聚体。
[0416]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk6异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk6异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:alk6异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk6异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和alk6同多聚体)相比，本公开内容的alk2:alk6异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:alk6异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk6异多聚体是异二聚体。
[0417]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk2多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk7异多聚体包含至少一种alk2多肽，其包含与seq id no:18、19、136、138、173、174、421、422、465和466中任一个的氨基酸序列或seq id no:18的氨基酸35-99有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk2:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk2:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk2和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、
tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk2和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk2:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk2:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk2:alk7异多聚体是异二聚体。
[0418]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk4异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk4异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:alk4异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或alk4的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk4异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和alk4同多聚体)相比，本公开内容的alk3:alk4异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:alk4异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk4异多聚体是异二聚体。
[0419]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk5异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk5异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:alk5异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或alk5的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公
开内容的alk3:alk5异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和alk5同多聚体)相比，本公开内容的alk3:alk5异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:alk5异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk5异多聚体是异二聚体。
[0420]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk6异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk6异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474或seq id no:34的氨基酸32-102中任一个的氨基酸序列或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:alk6异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk6异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和alk6同多聚体)相比，本公开内容的alk3:alk6异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:alk6异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk6异多聚体是异二聚体。
[0421]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk3多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk7异多聚体包含至少一种alk3多肽，其包含与seq id no:22、23、115、117、175、176、407、408、467和468中任一个的氨基酸序列或seq id no:22的氨基酸61-130有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk3:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列
或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk3:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk3和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk3和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk3:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk3:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk3:alk7异多聚体是异二聚体。
[0422]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk5异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk5异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:alk5异多聚体是可溶解的(例如包含alk4和/或alk5的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk5异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和alk5同多聚体)相比，本公开内容的alk4:alk5异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:alk5异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk5异多聚体是异二聚体。
[0423]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk6异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk6异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:alk6异多聚体是可溶解的(例如包含alk4和/或alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk6异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)本公开内容的alk4:alk6异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:alk6异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk6异多聚体是异二聚体。
[0424]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk4多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk7异多聚体包含至少一种alk4多肽，其包含与seq id no:26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469和470中任一个的氨基酸序列或seq id no:26或83的氨基酸34-101有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk4:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk4:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk4和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk4和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk4:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk4:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk4:alk7异多聚体是异二聚体。
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在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些
实施方案中，本公开内容的alk5:alk6异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:alk6异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:alk6异多聚体是可溶解的(例如包含alk5和/或alk6的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk5:alk6异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和alk6同多聚体)相比，本公开内容的alk5:alk6异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:alk6异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:alk6异多聚体是异二聚体。
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在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk5多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:alk7异多聚体包含至少一种alk5多肽，其包含与seq id no:30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471和472中任一个的氨基酸序列或seq id no:30或87的氨基酸36-106有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk5:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk5和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk5:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk5和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk5:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk5:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某
些优选的实施方案中，本公开内容的alk5:alk7异多聚体是异二聚体。
[0427]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种alk6多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种alk7多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:alk7异多聚体包含至少一种alk6多肽，其包含与seq id no:34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473和474中任一个的氨基酸序列或seq id no:34的氨基酸32-102或seq id no:91的氨基酸62-132有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的alk6:alk7异多聚体包含至少一种alk7多肽，其包含与seq id no:38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475和476中任一个的氨基酸序列或seq id no:38、305或309的氨基酸28-92有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的alk5:alk7异多聚体是可溶解的(例如包含alk6和/或alk7的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的alk6:alk7异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即alk6和alk7同多聚体)相比，本公开内容的alk6:alk7异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的alk6:alk7异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的alk6:alk7异多聚体是异二聚体。
[0428]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:actriib异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:actriib异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列或seq id no:1的氨基酸29-109或seq id no:1的25-131有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriia:actriib异多聚体是可溶解的(例如包含actriia和/或actriib的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriia:actriib异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经
胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriia和actriib同多聚体)相比，本公开内容的actriia:actriib异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriia:actriib异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriia:actriib异多聚体是异二聚体。
[0429]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46和71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriia:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含actriia和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。与其相应的同多聚复合体(即actriia和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriia:bmprii异多聚体是异二聚体。
[0430]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的
actriia:tgfbrii异多聚体是可溶解的(例如包含actriia和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriia和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriia:tgfbrii异多聚体是异二聚体。
[0431]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriia多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:misrii异多聚体包含至少一种actriia多肽，其包含与seq id no:9、10、11、118、120、151、152、409、410、451和452中任一个的氨基酸序列或seq id no:9的氨基酸30-110有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriia:misrii异多聚体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75和79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriia:misrii异多聚体是可溶解的(例如包含actriia和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriia:misrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriia和misrii同多聚体)相比，本公开内容的actriia:misrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriia:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriia:misrii异多聚体是异二聚体。
[0432]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriib多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:bmprii异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列或seq id no:1的氨基酸29-109或seq id no:1的25-131有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由
其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:bmprii异多聚体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46和71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriib:bmprii异多聚体是可溶解的(例如包含actriib和/或bmprii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriib:bmprii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriib和bmprii同多聚体)相比，本公开内容的actriib:bmprii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriib:bmprii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib:bmprii异多聚体是异二聚体。
[0433]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriib多肽(其包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列或seq id no:1的氨基酸29-109或seq id no:1的25-131有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体是可溶解的(例如包含actriib和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriib和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib:tgfbrii异多聚体是异二聚体。
[0434]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种actriib多肽(其包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:misrii异多聚体包含至少一种actriib多肽，其包含与seq id no:1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453和454中任一个的氨基酸序列或seq id no:1的氨基酸29-109或seq id no:1的25-131有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的actriib:misrii异多聚体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75和79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的actriib:misrii异多聚体是可溶解的(例如包含actriib和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的actriib:misrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即actriib和misrii同多聚体)相比，本公开内容的actriib:misrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的actriib:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的actriib:misrii异多聚体是异二聚体。
[0435]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体是可溶解的(例如包含bmprii和/或tgfbrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、
neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即bmprii和tgfbrii同多聚体)相比，本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的bmprii:tgfbrii异多聚体是异二聚体。
[0436]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种bmprii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的bmprii:misrii异多聚体包含至少一种bmprii多肽，其包含与seq id no:46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455和456中任一个的氨基酸序列或seq id no:46或71的氨基酸34-123有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的bmprii:misrii异多聚体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的bmprii:misrii异多聚体是可溶解的(例如包含bmprii和/或misrii的胞外域)。在其它优选的实施方案中，本公开内容的bmprii:misrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即bmprii和misrii同多聚体)相比，本公开内容的bmprii:misrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的bmprii:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的bmprii:misrii异多聚体是异二聚体。
[0437]
在某些方面，本公开内容涉及包含至少一种tgfbrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)和至少一种misrii多肽(这包括其片段、功能变体和修饰形式)的异多聚体。在一些实施方案中，本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体包含至少一种tgfbrii多肽，其包含与seq id no:42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的氨基酸序列或seq id no:67的氨基酸44-168或seq id no:42的氨基酸51-143有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。在一些实施方案中，本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体包含至少一种misrii多肽，其包含与seq id no:50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457和458中任一个的氨基酸序列或seq id no:50、75或79的氨基酸24-116有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列、由其组成或基本由其组成。优选本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体是可溶解的(例如包含tgfbii和/或misrii的胞外域)。在
其它优选的实施方案中，本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体结合和/或抑制(拮抗)一种或多种tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的活性(例如smad2/3和/或smad 1/5/8信号转导的诱导)。在一些实施方案中，与其相应的同多聚复合体(即tgfbrii和misrii同多聚体)相比，本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体具有不同的配体结合特异性/特征。本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体包括例如异二聚体、异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构。在某些优选的实施方案中，本公开内容的tgfbrii:misrii异多聚体是异二聚体。
[0438]
在一些实施方案中，本公开内容考虑通过修饰tgf-β超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7)和/或tgf-β超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)的结构制备功能变体用于诸如提高治疗效能或稳定性(例如存放期和体内对蛋白水解性降解的抗性)的目的。变体可通过氨基酸取代、缺失、添加或其组合产生。例如，有理由预期，亮氨酸用异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸用谷氨酸、苏氨酸用丝氨酸的单独置换或氨基酸用结构相关氨基酸的类似置换(例如保守突变)将不会对所得分子的生物活性有重大影响。保守置换是发生在其侧链相关的氨基酸家族内的那些。可通过评价变体多肽以类似野生型多肽的方式在细胞中产生反应或与包括例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty等一种或多种tgf-β超家族配体结合的能力，容易地确定本公开内容的多肽氨基酸序列的变化是否产生功能同系物。
[0439]
在一些实施方案中，本公开内容考虑通过修饰tgf-β超家族i型受体多肽和/或tgf-β超家族ii型受体多肽的结构制备功能变体用于例如提高治疗效能或稳定性(例如延长存放期和/或增加对蛋白水解性降解的抗性)等目的。
[0440]
在某些实施方案中，本公开内容考虑本公开内容的tgf-β超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7)和/或tgf-β超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)受体的特异性突变以改变多肽的糖基化。可选择所述突变以引入或消除一个或多个糖基化位点，例如o-联或n-联糖基化位点。天冬酰胺-联糖基化识别位点一般包含被合适的细胞糖基化酶特异性识别的三肽序列，天冬酰胺-x-苏氨酸或天冬酰胺-x-丝氨酸(其中“x”为任何氨基酸)。还可以通过添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基至多肽序列或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代(用于o-联糖基化位点)实现变化。在糖基化识别位点的第一或第三氨基酸位置处一个或两个的各种氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置处的氨基酸缺失)导致修饰的三肽序列的非糖基化。增加多肽上的糖部分数目的另一种方式是通过糖苷与多肽的化学或酶促偶联。根据所采用的偶联方式，糖可连接至：(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，例如半胱氨酸的游离巯
基；(d)游离羟基，例如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基团。脱去存在于多肽上的一个或多个糖部分可通过化学方法和/或酶促方法实现。化学去糖基化可包括例如将多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等同化合物中。这种处理导致大多数或全部糖的切割，只是连接糖(n-乙酰氨基葡萄糖或n-乙酰半乳糖胺)除外，同时留下完整的氨基酸序列。多肽上糖部分的酶促切割可采用thotakura等人描述的多种内切糖苷酶和外切糖苷酶实现[meth.enzymol.(1987)138:350]。适当时，可调节多肽的序列，这取决于所用表达系统的类型，像哺乳动物一样，酵母、昆虫和植物细胞全都可引入可被肽的氨基酸序列影响的不同的糖基化模式。一般而言，用于人的本公开内容的tgf-β超家族i型和ii受体复合体可在提供合适糖基化的哺乳动物细胞系中表达，例如hek293或cho细胞系，尽管预期其它哺乳动物表达细胞系也是有用的。
[0441]
本公开内容另考虑产生突变体、特别是本公开内容的tgf-β超家族i型受体多肽(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6和alk7)和/或tgf-β超家族ii型受体多肽(例如actriia、actriib、tgfbrii、bmprii和misrii)的组合突变体组以及截短突变体的方法。组合突变体库尤其可用于鉴定功能活性的(例如配体结合)tgf-β超家族i型和/或tgf-β超家族ii型受体序列。筛选所述组合文库的目的可以是产生例如性质改变(例如药代动力学改变或配体结合改变)的多肽变体。下面提供多种筛选测定法和例如可用于评价变体的测定法。例如，可针对与tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)结合、防止tgf-β超家族配体与tgf-β超家族受体结合和/或干扰由tgf-β超家族配体引起的信号转导的能力来筛选tgf-β超家族i型和ii受体复合体变体。
[0442]
还可在例如基于细胞的测定法或体内测定法中测试本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体的活性。例如，可评价异多聚体复合体对在肌肉细胞中参与肌肉产生的基因表达或蛋白质活性。需要时，这可在一种或多种重组tgf-β超家族配体蛋白(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)存在下进行，并且可转染细胞以产生tgf-β超家族i型和ii受体复合体，任选tgf-β超家族配体。同样，可将本公开内容的异多聚体复合体给予小鼠或其它动物，并可采用本领域公认的方法评价一个或多个量度，例如肌肉形成和强度。同样，可通过例如本文所述测定法和本领域已知通用知识的测定法，在成骨细胞、脂肪细胞和/或神经元细胞中针对对这些细胞生长的任何作用测试异多聚体或其变体的活性。smad反应性报道基因可用于所述细胞系以监测对下游信号转导的作用。
[0443]
可产生相对于参比tgf-β超家族异多聚体复合体选择性提高或效能总体提高的组合衍生变体。这类变体，当从重组dna构建体表达时，可用于基因疗法方案。同样，诱变可产
生具有显著不同于相应的未修饰tgf-β超家族异多聚体复合体的胞内半寿期的变体。例如，经改变的蛋白质可赋予对蛋白水解性降解或导致未修饰多肽破坏或否则失活的其它细胞过程更稳定或更不稳定。这类变体和编码它们的基因可用于通过调节多肽的半寿期来改变多肽复合体水平。例如，当诱导型表达系统的一部分可允许较严密控制细胞内的重组多肽复合体水平时，短半寿期可产生更短暂的生物作用。在fc融合蛋白中，可在接头(如有的话)和/或fc部分中进行突变以改变tgf-β超家族异多聚体复合体的一种或多种活性，包括例如免疫原性、半寿期和溶解度。
[0444]
可通过编码多肽文库的基因的简并文库产生组合文库，所述多肽各自包含可能的tgf-β超家族i型和/或ii型受体序列的至少一部分。例如，可以酶的方法将合成寡核苷酸的混合物与基因序列连接，使得可能的tgf-β超家族i型和/或ii型受体编码核苷酸序列的简并组可作为个别多肽表达，或者作为一组较大的融合蛋白表达(例如用于噬菌体展示)。
[0445]
存在许多可从简并寡核苷酸序列产生可能的同源物文库的方法。简并基因序列的化学合成可在自动dna合成仪中进行，合成基因然后与用于表达的合适载体连接。简并寡核苷酸的合成是本领域众所周知的。参见例如narang,sa(1983)tetrahedron 39:3；itakura等(1981)recombinant dna,proc.3rd cleveland sympos.macromolecules,ed.ag walton,amsterdam:elsevier pp273-289；itakura等(1984)annu.rev.biochem.53:323；itakura等(1984)science 198:1056；ike等(1983)nucleic acidres.11:477。这类技术已应用于其它蛋白质的定向进化中。参见例如scott等(1990)science 249:386-390；roberts等(1992)pnas usa89:2429-2433；devlin等(1990)science 249：404-406；cwirla等(1990)pnas usa 87：6378-6382；以及美国专利号：5,223,409、5,198,346和5,096,815。
[0446]
或者，可利用其它诱变形式产生组合文库。例如，可采用以下诱变通过筛选，从文库中产生和分离tgf-β超家族异多聚体复合体：例如丙氨酸扫描诱变等[参见例如ruf等(1994)biochemistry 33:1565-1572；wang等(1994)j.biol.chem.269:3095-3099；balint等(1993)gene137:109-118；grodberg等(1993)eur.j.biochem.218:597-601；nagashima等(1993)j.biol.chem.268:2888-2892；lowman等(1991)biochemistry30:10832-10838；和cunningham等(1989)science 244:1081-1085]；通过接头扫描诱变[参见例如gustin等(1993)virology 193:653-660；和brown等(1992)mol.cell biol.12:2644-2652；mcknight等(1982)science232:316]；通过饱和诱变[meyers等(1986)science 232:613]；通过pcr诱变[leung等(1989)method cell mol biol 1:11-19]；或者通过随机诱变，包括化学诱变等[miller等(1992)a short course in bacterial genetics，cshl press，cold spring harbor，ny；以及greener等(1994)strategies in mol biol 7:32-34]。接头扫描诱变，特别在组合背景下，是用于鉴定截短(生物活性)形式的tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽的有吸引力的方法。
[0447]
本领域已知用于筛选通过点突变和截短制备的组合文库的基因产物和在这方面用于筛选具有某种性质的基因产物的cdna文库的各种技术。这类技术一般可适用于快速筛选由本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体的组合诱变所产生的基因文库。最广泛采用的筛选大型基因文库的技术通常包括将基因文库克隆至可复制的表达载体中，用所得载体文库转化合适的细胞，并在其中所需活性的检测有利于相对容易地分离编码其产物被检测的基因的载体的条件下，表达组合基因。优选的测定法包括tgf-β超家族配体(例如bmp2、
bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)结合测定法和/或tgf-β超家族配体介导的细胞信号转导测定法。
[0448]
在某些实施方案中，除天然存在于tgf-β超家族i型和ii型异多聚体复合体中的任何修饰以外，本发明的tgf-β超家族i型和ii型异多聚体复合体还可包含翻译后修饰。这类修饰包括但不限于乙酰化、羧化、糖基化、磷酸化、脂化和酰化。因此，修饰的tgf-β超家族i型和ii型异多聚体复合体可含有非氨基酸成分，例如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖和磷酸酯。可按照本文有关其它异多聚体复合体变体方面所述，测试这类非氨基酸成分对异多聚体复合体的功能性的作用。如果本公开内容的多肽在细胞中通过切割该多肽的新生形式产生，则翻译后加工对于蛋白质的正确折叠和/或功能也可能十分重要。对于这类翻译后活性，不同的细胞(例如cho、hela、mdck、293、wi38、nih-3t3或hek293)具有特定的细胞机器和特有机制，可选择不同的细胞以确保tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽以及包含所述受体多肽的异多聚体的正确修饰和加工。
[0449]
在某些方面，本文公开的多肽可形成包含与至少一种ii型受体多肽共价或非共价缔合的至少一种tgf-β超家族i型多肽的蛋白质复合体。优选本文公开的多肽形成异二聚体复合体，但还包括更高阶的异多聚体复合体(异多聚体)，例如但不限于异三聚体、异四聚体和其它的寡聚体结构(参见例如图1、2和15-17)。在一些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽包含至少一个多聚化结构域。如本文所公开的，术语“多聚化结构域”是指促进至少一个第一多肽和至少一个第二多肽间的共价或非共价相互作用的氨基酸或氨基酸的序列。本文公开的多肽可与多聚化结构域共价或非共价连接。优选多聚化结构域促进第一多肽(例如tgf-β超家族i型多肽)和第二多肽(例如tgf-β超家族ii型多肽)间的相互作用以促进异多聚体形成(例如异二聚体形成)，并任选阻碍或以别的方式不利于同多聚体形成(例如同二聚体形成)，从而提高所需异多聚体的收率(参见例如图2)。
[0450]
可采用本领域已知的许多方法产生本公开内容的tgf-β超家族复合体。例如，非天然存在的二硫键可如下构建：通过在第一多肽(例如tgf-β超家族i型多肽)上用含有游离硫醇基的残基(例如半胱氨酸)置换天然存在的氨基酸，使得游离硫醇基与第二多肽(例如tgf-β超家族ii型多肽)上的另一含有游离硫醇基的残基相互作用，从而在第一和第二多肽之间形成二硫键。相互作用以促进异多聚体形成的其它实例包括但不限于例如描述于kjaergaard等，wo2007147901的离子相互作用；例如描述于kannan等，u.s.8,592,562的静电引导作用(electrostatic steering effect)；例如描述于christensen等，u.s.20120302737的卷曲螺旋相互作用；例如描述于pack&plueckthun,(1992)biochemistry 31：1579-1584的亮氨酸拉链；以及例如描述于pack等(1993)bio/technology 11：1271-1277的螺旋-转角-螺旋基序。不同区段的连接可如下获得：经由例如通过化学交联、肽接头、二硫键等的共价结合，或例如通过抗生物素蛋白-生物素或亮氨酸拉链技术亲和相互作用。
[0451]
在某些方面，多聚化结构域可包含相互作用对的一个组分。在一些实施方案中，本文公开的多肽可形成包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽的蛋白质复合体，其中
第一多肽包含tgf-β超家族i型多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列；第二多肽包含tgf-β超家族ii型多肽的氨基酸序列和相互作用对的第二成员的氨基酸序列。相互作用对可以是相互作用形成复合体、特别是异二聚体复合体的任何2个多肽序列，但是有效实施方案也可使用可形成同二聚体复合体的相互作用对。一个相互作用对的成员可与本文所述tgf-β超家族i型或ii型多肽融合，包括例如与seq id no:14、15、124、126、171、172、413、414、463、464、18、19、136、138、173、174、421、422、465、466、22、23、115、117、175、176、407、408、467、468、26、27、83、84、104、106、177、178、403、404、469、470、30、31、87、88、139、141、179、180、423、424、471、472、34、35、91、92、142、144、181、182、425、426、473、474、38、39、301、302、305、306、309、310、313、112、114、183、184、405、406、475、476、9、10、11、118、120、151、152、409、410、451、452、1、2、3、4、5、6、100、102、153、154、401、402、453、454、46、47、71、72、121、123、155、156、411、412、455、456、50、51、75、76、79、80、133、135、161、162、419、420、457、458、42、43、67、68、127、129、130、132、157、158、159、160、415、416、417、418、459、460、461和462中任一个的序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的多肽序列、基本由其组成或由其组成。可选择相互作用对以赋予改进的性质/活性例如延长的血清半寿期，或作为另一部分与之连接以提供改进的性质/活性的衔接物的作用。例如，聚乙二醇部分可与相互作用对的一个或两个组成分连接以提供改进的性质/活性例如改进的血清半寿期。
[0452]
相互作用对的第一或第二成员可以是不对称对，意味着所述对的成员优先彼此缔合而非自身缔合。因此，不对称相互作用对的第一和第二成员可缔合形成异二聚体复合体(参见例如图2)。或者，相互作用对可为不受引导的，意味着所述对的成员可彼此缔合或自身缔合而无实质性偏好，因此可具有相同或不同的氨基酸序列。因此，不受引导相互作用对的第一和第二成员可缔合形成同二聚体复合体或异二聚体复合体。任选相互作用对(例如不对称对或不受引导相互作用对)的第一成员与相互作用对的第二成员共价缔合。任选相互作用对(例如不对称对或不受引导相互作用对)的第一成员与相互作用对的第二成员非共价缔合。
[0453]
作为具体实例，本公开内容提供融合蛋白，其包含与包含免疫球蛋白的恒定结构域(例如免疫球蛋白的ch1、ch2或ch3结构域或fc结构域)的多肽融合的tgf-β超家族i型或ii型多肽。本文提供衍生自人igg1、igg2、igg3和igg4的fc结构域。已知降低cdc或adcc活性的其它突变，总的来说，这些变体的任一个都包括在本公开内容中，并且可用作本公开内容的异多聚体复合体的有利组分。任选seq id no:208的igg1 fc结构域在例如asp-265、lys-322和asn-434(按照相应的全长igg1编号)等残基上具有一个或多个突变。在某些情况下，具有这些突变(例如asp-265突变)的一个或多个的突变型fc结构域相对于野生型fc结构域与fcγ受体结合的能力降低。在其它情况下，具有这些突变(和asn-434突变)的一个或多个的突变型fc结构域相对于野生型fc结构域与mhc i类相关fc-受体(fcrn)结合的能力降低。
[0454]
可用于人igg1的fc部分(g1fc)的天然氨基酸序列的实例见下(seq id no:208)。点下划线表示铰链区，实线下划线表示含天然存在的变体的位置。一方面，本公开内容提供包含与seq id no:208有70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成的多肽。g1fc中天然存在的变体可包括e134d和m136l，按照用于seq id no:208的编号系统
(参见uniprotp01857)。
[0455][0456]
可用于人igg2(g2fc)的fc部分的天然氨基酸序列的实例见下(seq id no:209)。点下划线表示铰链区，双下划线表示其中在序列(按照uniprot p01859)中冲突的数据库的位置。一方面，本公开内容提供包含与seq id no:209有70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成的多肽。
[0457][0458][0459]
可用人igg3于的fc部分的氨基酸序列(g3fc)的2个实例见下。g3fc中的铰链区长可多达其它fc链的4倍，并含有3个相同的15-残基区段前面接相似的17-残基区段。下面显示的第一g3fc序列(seq id no:210)含有由单个15-残基区段组成的短铰链区，而第二g3fc序列(seq id no:211)含有全长铰链区。按照uniprot p01859，在每种情况下，点下划线表示铰链区，实线下划线表示含天然存在的变体的位置。一方面，本公开内容提供多肽包含与seq id no:210和211有70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成。
[0460][0461]
g3fc中天然存在的变体(例如，参见uniprot p01860)当转换成用于seq id no:210的编号系统时包括e68q、p76l、e79q、y81f、d97n、n100d、t124a、s169n、s169del、f221y，本公开内容提供包含含有这些变化的一个或多个的g3fc结构域的融合蛋白。另外，人免疫
球蛋白igg3基因(ighg3)显示特征在于不同铰链长度的结构多态性[参见uniprotp01859]。具体而言，变体wis缺乏大部分v区和全部ch1区。除了正常存在于铰链区的11位以外，在7位具有额外的链间二硫键。变体zuc缺乏大部分的v区、全部ch1区和部分铰链。变体omm可呈现等位基因形式或另一种γ链亚类。本公开内容提供包含含有这些变体的一个或多个的g3fc结构域的其它融合蛋白。
[0462]
可用于人igg4(g4fc)的fc部分的天然氨基酸序列的实例见下(seq id no:212)。点下划线表示铰链区。一方面，本公开内容提供包含与seq id no:212有70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列、由其组成或基本由其组成的多肽。
[0463][0464]
本文提供相对于g1fc序列(seq id no:208)在fc结构域中有多个工程改造的突变，且g2fc、g3fc和g4fc中的类似突变可来源于与图5中g1fc的比对。由于不等铰链长度所致，基于同种型比对的类似的fc位置(图5)在seq id no:208、209、210和212中具有不同的氨基酸数目。还可以认识到，当如uniprot数据库中一样编号包括整个igg1重链恒定结构域(由ch1、铰链、ch2和ch3区组成)时，可通过与相同位置不同的编号来鉴定由铰链、ch2和ch3区组成的免疫球蛋白序列中指定的氨基酸位置(例如seq id no:208、209、210、211或212)。例如，人g1fc序列(seq id no:208)、人igg1重链恒定结构域(uniprotp01857)和人igg1重链中所选ch3位置间的对应如下。
[0465][0466]
[0467]
在自单细胞系大规模生产基于不对称免疫球蛋白的蛋白质中出现的问题称为“链缔合问题(chain association issue)”。正如主要在双特异性抗体产生中所遇到的，链缔合问题关心当在单细胞系中产生不同的重链和/或轻链时，在固有导致的多种组合中有效产生所需多链蛋白质的挑战[参见例如，klein等(2012)mabs 4:653-663]。当2条不同的重链和2条不同的轻链在同一细胞中产生的，这个问题最为严重，在这种情况下，共有16种可能的链组合(虽然这些中的一些是相同的)，然而通常只有一种是需要的。尽管如此，相同原理说明了仅掺入2条不同的(不对称)重链的所需多链融合蛋白的收率降低。
[0468]
在单细胞系中提高所需含fc的融合多肽链的配对从而以可接受的收率产生优选的不对称融合蛋白的各种方法是本领域已知的[参见例如，klein等(2012)mabs 4:653-663；以及spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。获得所需含fc链的配对的方法包括但不限于基于带电荷的配对(静电引导)、“孔中结(knob-into-hole)”空间配对、seedbody配对和基于亮氨酸拉链的配对。参见例如ridgway等(1996)protein eng 9:617-621；merchant等(1998)nat biotech 16:677-681；davis等(2010)protein eng des sel 23:195-202；gunasekaran等(2010)；285:19637-19646；wranik等(2012)j biol chem 287:43331-43339；us5932448；wo 1993/011162、wo 2009/089004和wo 2011/034605。如本文所述，这些方法可用来产生包含tgf-β超家族i型和ii型受体多肽、至少两种不同的tgf-β超家族i型受体多肽和至少两种不同的tgf-β超家族ii型受体多肽的异二聚体。参见图15-17。
[0469]
例如，可籍以促进特定多肽间的相互作用的一种方法是通过例如描述于arathoon等，u.s.7,183,076和carter等，u.s.5,731,168的方法对凹处凸起(protuberance-into-cavity)(孔中结)互补区进行改造。“凸起”通过将来自第一多肽(例如第一相互作用对)界面的小氨基酸侧链用较大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)置换来构建。与凸起相同或类似大小的互补“凹处”任选在第二多肽(例如第二相互作用对)界面上通过将大氨基酸侧链用较小的侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)置换产生。在适当定位和确定尺寸的凸起或凹处存在于第一或第二多肽任一个的界面上时，只需要分别对邻近界面上的相应凹处或凸起进行改造。
[0470]
在中性ph(7.0)下，天冬氨酸和谷氨酸带有负电荷，赖氨酸、精氨酸和组氨酸带正电荷。这些带电荷的残基可用来促进异二聚体形成，同时阻碍同二聚体形成。吸引的相互作用发生在相反电荷之间，而排斥的相互作用发生在相同电荷之间。一方面，通过对带电荷的界面残基进行位点定向诱变，本文公开的蛋白质复合体利用有吸引的相互作用以促进异多聚体形成(例如异二聚体形成)，并任选利用排斥的相互作用以阻碍同二聚体形成(例如同二聚体形成)。
[0471]
例如，igg1 ch3结构域界面包含参与结构域-结构域相互作用的4个独特的带电荷残基对：asp356-lys439’、glu357-lys370’、lys392-asp399’和asp399-lys409’[第二链的残基编号用(’)表示]。应注意，本文所用的标明igg1 ch3结构域中的残基的编号方案与kabat的eu编号方案一致。由于ch3-ch3结构域相互作用中存在的2倍对称性，因此各个单独的相互作用将在结构(例如asp-399-lys409’和lys409-asp399’)中出现两次。在野生型序列中，k409-d399’有利于异二聚体和同二聚体两者形成。改变第一链中的电荷极性(例如k409e；正电荷至负电荷)的单突变对第一链同二聚体的形成产生不利的相互作用。不利的相互作用因发生在相同电荷(负-负；k409e-d399’和d399-k409e’)间的排斥相互作用而产
生。改变第二链中电荷极性的类似突变(d399k’；负-正)对第二链同二聚体形成产生不利的相互作用(k409
’‑
d399k’和d399k-k409’)。但同时，这两个突变(k409e和d399k’)对异二聚体形成产生不利的相互作用(k409e-d399k’和d399-k409’)。
[0472]
通过可与或不与第二链中带相反电荷的残基(包括例如arg355和lys360)配对的其它带电荷残基的突变，可进一步增强对异二聚体形成和同二聚体阻碍的静电引导作用。下表列出可单独或组合使用的可能的电荷变化突变以提高本文公开的多肽复合体的异多聚体形成。
[0473][0474]
在一些实施方案中，构成本技术的融合蛋白中的ch3-ch3界面的一个或多个残基用带电荷的氨基酸置换，使得相互作用变成静电上不利的。例如，界面中的带正电荷的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸或组氨酸)用带负电荷的氨基酸(例如天冬氨酸或谷氨酸)置换。或者，与前述取代组合，将界面中带负电荷的氨基酸用带正电荷的氨基酸置换。在某些实施方案中，氨基酸用具有所需电荷性质的非天然存在的氨基酸置换。应注意，使带负电荷的残基(asp或glu)突变为his将导致侧链体积增加，这可能引起空间问题。此外，his质子供体形式和受体形式取决于局部环境。应根据设计策略考虑这些问题。因为界面残基在人和小鼠igg亚类中是高度保守的，本文公开的静电引导作用可适用于人和小鼠igg1、igg2、igg3和igg4。这个策略还可延伸至在ch3结构域界面修饰不带电荷的残基成为带电荷的残基。
[0475]
一方面，本公开内容提供使用经改造在电荷配对(静电引导)基础上互补的fc序列的含不对称fc的多肽链的所需配对。在有或没有任选接头的情况下，具有静电互补性的一对fc序列之一可任意与构建体的tgf-β超家族i型或ii型受体多肽融合，产生tgf-β超家族i型或ii型受体融合多肽。这个单链连同与第一fc互补的fc序列一起在精选细胞中共表达以利于所需多链构建体(例如tgf-β超家族异聚体复合体)的产生。在基于静电引导的这个实例中，seq id no:200[人g1fc(e134k/d177k)]和seq id no:201[人g1fc(k170d/k187d)]是互补fc序列的实例，其中经改造的氨基酸取代用双下划线表示，构建体的tgf-β超家族i型或ii型受体多肽可与seq id no:200或seq id no:201任一个但非两个融合。鉴于天然hg1fc、天然hg2fc、天然hg3fc和天然hg4fc间的高度氨基酸序列同一性，应认识到hg2fc、
no:204和205)。
[0480][0481][0482]
一方面，本公开内容提供使用经改造以产生人igg的交错β-链区段和iga ch3结构域的fc序列的含不对称fc的多肽链的所需配对。所述方法包括使用允许seedbody融合蛋白形成的链交换改造的结构域(seed)ch3异二聚体[参见例如davis等(2010)protein eng design sel23:195-202]。在有或没有任选接头的情况下，具有seedbody互补性的fc序列对之一可任意与构建体的tgf-β超家族i型或ii型多肽融合，产生tgf-β超家族i型或ii型融合多肽。这个单链连同与第一fc互补的fc序列一起在精选细胞中共表达以利于所需多链构建体的产生。在基于seedbody(sb)配对的这个实例中，seq id no:206[hg1fc(sb
ag
)]和seq id no:207[hg1fc(sb
ga
)]是互补igg fc序列的实例，其中来自iga fc的经改造的氨基酸取代用双下划线表示，且构建体的tgf-β超家族i型或ii型多肽可与seq id no:206或seq id no:207任一个但非两个融合。鉴于天然hg1fc、天然hg2fc、天然hg3fc和天然hg4fc之间的高度氨基酸序列同一性，应认识到hg1fc、hg2fc、hg3fc或hg4fc中相应位置的氨基酸取代(参见图5)将产生fc单体，其可用于下面的互补igg-iga对(seq id no:206和207)。
[0483][0484]
一方面，本公开内容提供具有在fc ch3结构域c端连接的可切割亮氨酸拉链结构域的含不对称fc多肽链的所需配对。亮氨酸拉链的连接足以引起异二聚体抗体重链优先装配。参见例如wranik等(2012)j biol chem 287:43331-43339。如本文所公开的，在有或没有任选接头的情况下，与亮氨酸拉链形成链连接的fc序列对之一可任意与构建体的tgf-β超家族i型或ii型多肽融合，产生tgf-β超家族i型或ii型融合多肽。这个单链可连同与互补亮氨酸拉链形成链连接的fc序列一起在精选细胞中共表达以利于所需多链构建体的产生。
在纯化后，构建体用细菌内切蛋白酶lys-c蛋白水解消化可释放亮氨酸拉链结构域，产生其结构与天然fc的相同的fc构建体。在基于亮氨酸拉链配对的这个实例中，seq id no:213[hg1fc-ap1(酸性)]和seq id no:214[hg1fc-bp1(碱性)]是互补igg fc序列的实例，其中经改造的互补亮氨酸拉链序列用下划线表示，且构建体的tgf-β超家族i型或ii型多肽可与seq id no:213或seq id no:214的任一个但非两个融合。鉴于天然hg1fc、天然hg2fc、天然hg3fc和天然hg4fc之间的高度氨基酸序列同一性，可了解在有或没有任选接头的情况下，与hg1fc、hg2fc、hg3fc或hg4fc连接的亮氨酸拉链形成序列(参见图5)将产生fc单体，其可用于下面的互补亮氨酸拉链形成对(seq id no:213和214)。
[0485][0486]
如上所述，本领域已知在单细胞系中增加含fc的融合多肽链的所需配对从而以可接受的收率产生优选的不对称融合蛋白的各种方法[klein等(2012)mabs 4:653-663；和spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。另外，可使用包含tgf-β超家族i型或tgf-β超家族ii型多肽的重链和轻链融合蛋白的组合，产生本文所述异多聚体。例如，在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽可在有或没有接头结构域的情况下与包含ch1结构域的至少一部分的免疫球蛋白重链(igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1或iga2)融合。同样，tgf-β超家族ii型受体多肽可在有或没有接头结构域的情况下与包含轻链恒定结构域(c
l
)的至少一部分的免疫球蛋白轻链(κ或λ)融合。在备选的实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽可在有或没有接头结构域的情况下与包含ch1结构域的至少一部分的免疫球蛋白重链(igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1或iga2)融合，且tgf-β超家族ii型受体多肽可在有或没有接头结构域的情况下与包含轻链恒定结构域(c
l
)的至少一部分的免疫球蛋白轻链(κ或λ)融合。该设计利用重链与轻链异二聚化的天然能力。具体地讲，重链和轻链的异源二聚化发生在ch1与c
l
之间，这一般通过使2个结构域经由二硫键共价连接来稳定。使用全长重链或包含铰链区的重链的至少一部分的构建体，可产生包含两条“轻链”和两条“重链”的抗体样分子。参见图16。该设计的潜在优势是它可更接近地模拟天然存在的tgf-β超家族i型受体多肽-配体-tgf-β超家族ii型受体多肽复合体，并可对配体显示比相应的单一异二聚体高的亲和力。在一些实施方案中，该设计可通过掺入不同的重链截短物包括例如包含ch1结构域和铰链结构域的一些或全部的截短物(产生f(ab’)2样分子)以及只包含ch1结构域或其片段的截短物(产生fab样分子)来改进。参见图16g。设计这类异多聚体构建体的各
种方法描述于us 2009/0010879、klein等[(2012)mabs 4:653-663]和spiess等[(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]，其内容通过引用以其整体结合到本文中。
[0487]
在一些实施方案中，需要产生这样的抗体样异二聚体：其包含含有tgf-β超家族i型受体多肽-c
l
:tgf-β超家族ii型受体多肽-ch1异二聚体对的复合体的至少一支和包含tgf-β超家族ii型受体多肽-c
l
:tgf-β超家族i型受体多肽r-ch1异二聚体对的至少第二支。参见例如图16b。这类异二聚体复合体可采用例如重链和轻链不对称配对技术的组合产生[spiess等(2015)molecular immunology 67(2a)：95-106]。例如在crossmab技术[schaefer等(2011).proc.natl.acad.sci.u.s.a.108:11187-11192]中，轻链错配使用结构域交叉(domain crossover)和使用孔中结异二聚化的重链来克服[merchant等(1998)nat.biotechnol.16:677-681]。对于结构域交叉，可变结构域或恒定结构域可在轻链和重链之间交换，以产生驱动关联轻链配对同时保持可变结构域的结构和功能完整性的2个不对称fab臂[fenn等(2013)plos one 8：e61953]。用于克服轻链错配的替代方法设计了具有正交的fab界面的重链和轻链[lewis(2014)nat.biotechnol.32:191-198]。这通过计算建模[das等(2008)annu.rev.biochem.77:363-382]与x射线晶体学的组合实现以鉴定vh/v
l
和ch1/c
l
界面上的突变。对于采用该方法产生的异二聚体，可能需要将突变改造进入vh/v
l
和ch1/c
l
界面两者中以使重链/轻链错配最小化。设计的正交fab界面可与重链异二聚化策略联用以在单宿主细胞中促进有效的igg产生。静电引导也可用来产生正交fab界面以促进这类异二聚体的构建。肽接头可用于确保呈称为“luz-y”形式的轻链和重链的关联配对[wranik等(2012)j.biol.chem.287:43331-43339]，其中重链异二聚化使用随后可通过体外蛋白酶解除去的亮氨酸拉链实现。
[0488]
或者，异多聚体可包含本文所述的一个或多个单链配体阱，任选其可与一种或多种tgf-β超家族i型受体多肽或tgf-β超家族i型受体多肽以及其它的tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链配体阱共价或非共价缔合[us 2011/0236309和us2009/0010879]。参见图12。如本文所述，单链配体阱不需要与任何多聚化结构域(例如卷曲螺旋fc结构域)融合成为多价的。一般而言，本公开内容的单链配体阱包含至少一种tgf-β超家族i型受体多肽结构域和一种tgf-β超家族i型受体多肽结构域。tgf-β超家族i型受体多肽和tgf-β超家族i型受体多肽结构域，在本文一般称为结合结构域(bd)，任选可通过接头区连接。
[0489]
例如，一方面，本公开内容提供包含具有下列结构的多肽的异多聚体：
[0490]
(《bd1》-接头1)
k-[《bd2》-接头2-{《bd3》-接头3}f]
n-(《bd4》)
m-(接头4-bd5》d)h[0491]
其中：n和h独立地大于或等于1；d、f、m和k独立地大于或等于零；bd1、bd2、bd3、bd4和bd5独立地为tgf-β超家族i型受体多肽或tgf-β超家族ii型受体多肽结构域，其中bd1、bd2、bd3和bd4的至少一个是tgf-β超家族i型受体多肽结构域，且其中bd1、bd2、bd3和bd4的至少一个是tgf-β超家族ii型受体多肽结构域，接头1、接头2、接头3和接头4独立地为大于或等于零。在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链阱包含至少两种不同的tgf-β超家族i型受体多肽。在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链阱包含至少两种不同的tgf-β超家族ii型受体多肽。在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族i型受体多肽单链阱包含至少两种不同的接头。根据对d、f、h、k、m和n选择的值，异多聚体结构可包含呈不同组合的大
量重复单位或可以是相对简单的结构。
[0492]
另一方面，本公开内容提供包含具有下列结构的多肽的异多聚体：
[0493]
《bd1》-接头1-《bd2》
[0494]
又一方面，本公开内容提供包含具有下列结构的多肽的异多聚体：
[0495]
《bd1》-(接头2-《bd2》)n[0496]
其中n大于或等于1。
[0497]
本发明的另一方面提供包含具有下列结构的多肽的异多聚体：
[0498]
(《bd1》-接头1-《bd1》)
f-接头2-(《bd2》-接头3-《bd3》)g[0499]
其中f和g大于或等于1。
[0500]
在其中bd2和bd3是相同且f和g是相同的数值的实施方案中，这导致以接头2为中心的基本镜面对称的结构，以接头的差异为准。在其中bd2不同于bd3和/或其中f和g为不同的数值的情况下，将产生不同的结构。根据本文的公开内容和本领域的知识选择合适的结合结构域、接头和重复频率属于本领域普通技术人员的能力之内。图18中以示意图显示本公开内容的这类单链配体阱的具体的非限制性实例。
[0501]
接头(1、2、3和4)可相同或不同。接头区提供完全不同于tgf-β超家族i型受体多肽和tgf-β超家族ii型受体多肽的结构性配体结合结构域的区段，因此可用于与辅助分子(例如可用于提高稳定性的分子，例如聚乙二醇化部分)缀合而不必对结合结构域进行化学修饰。接头可包括非结构性氨基酸序列，其可与目标配体的受体或tgf-β超家族的另一受体的胞外部分天然非结构性区的序列相同或来源于对其的保守修饰。在其它情况下，这类接头在组成或来源上可能完全是人工的，但可含有经选择的氨基酸以提供当与目标配体接近时遇到静电或空间阻碍难题的可能性低的非结构性柔性接头。以下接头长度可被为是可接受的：当允许位于接头n端和c端各端的结合结构域与其天然配体上的其天然结合部位结合，使得其两个结合结构域如此结合，配体以比通过仅结合结构域之一的结合高的亲和力结合。在某些情况下，选择天然或人工来源的接头中氨基酸残基的数目等于或大于与tgf-β超家族i型受体多肽和/或tgf-β超家族ii型受体多肽配体上的两个结合部位同时(桥接)结合的最小所需距离。例如，虽不希望以任何方式予以限制，但是接头长度可介于约1-10个氨基酸、10-20个氨基酸、18-80个氨基酸、25-60个氨基酸、35-45个氨基酸或任何其它合适的长度。
[0502]
接头可经设计以利于多肽的纯化。所选的精确的纯化方案将确定需要什么样的修饰，例如且虽然不希望是限制性的，但考虑加入纯化“标签”例如his标签；在其它实例中，接头可包括有利于运货分子或辅助分子分子加入的区域。当这类添加影响接头的非结构性性质或引入可能的静电或空间顾虑时，可进行接头长度的适当增加以确保两个结合结构域能够结合其配体上相应的部位。根据本文的方法和教导内容，本领域技术人员可按常规进行所述决定。
[0503]
另外，本设计允许其它运货分子(例如成像剂像荧光分子)、毒素等的连接。例如且虽不希望以任何方式予以限制，但是可修饰单链多肽以加入一个或多个运货分子和/或辅助分子(本文统称为r1、r2、r3、r4等)：
[0504][0505]
在不限制可获得的r取代基的通用性的情况下，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9可以存在或不存在；当存在时，它们可相同或不同，并且可独立地为以下的一种或多种：用于靶向例如但不限于例如抗体片段(例如单链fv)和/或单一结构域抗体(sdab)的融合蛋白；放射疗法和/或成像剂，例如但不限于放射性核素(例如
123
i、
111
in、
18
f、
64
c、
68
y、
124
i、
131
i、
90
y、
177
lu、
57
cu、
213
bi、
211
at)、荧光染料(例如alexafluor、cy染料)和/或荧光蛋白标签(例如gfp、dsred)；用于化学疗法的细胞素剂，例如但不限于多柔比星、卡奇霉素、类美登素衍生物(例如dm1、dm4)、毒素(例如截短假单胞菌属(pseudomonas)内毒素a、白喉毒素)；基于纳米粒的载体，例如但不限于聚乙二醇(peg)、与药物缀合的聚合物、纳米载体或成像剂(例如聚合物n-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺(hpma)、谷氨酸、peg、葡聚糖)；药物(例如但不限于多柔比星、喜树碱、紫杉醇、palatinate)；纳米载体，例如但不限于纳米壳(nanoshell)或脂质体；成像剂，例如但不限于supermagnetic iron oxide(spio)；树枝状聚体(dendrimer)；和/或用于配体纯化、浓缩或螯合的固相支持体(例如纳米粒、惰性树脂、合适的二氧化硅支持体)。
[0506]
一般而言，在所有可能的位置上具有运货或辅助分子不会是优选的，因为这可能引起空间或静电难题。然而，可根据本文的公开内容通过在结合结构域间模化接头并进行分子动力学模拟，按常规确定将运货或辅助分子加入任何指定的结构的一个或多个位置上的作用，以使分子力学能充分降低到最低并降低接头和本文教导的tgf-β超家族i型受体多肽和tgf-β超家族ii型受体多肽间的空间和静电不相容性。
[0507]
可能优选的是将运货或辅助分子加至作用剂的接头部分而不是结合结构域，以降低结合功能中干扰的可能性。然而，加至结合结构域是可能的，在某些情况下可能是需要的，并且这种加入的作用可按本文所述通过模化结合剂和具有所建议的添加的接头，提前按常规确定。
[0508]
缀合方法可使用通过常见的反应基团(例如伯胺、琥珀酰亚胺基(nhs)酯和巯基反应基团)能够缀合的商用试剂盒进行。一些非限制性实例为：alexa fluor 488蛋白标记试剂盒(molecular probes，invitrogen检测技术)和聚乙二醇化试剂盒(pierce biotechnology inc.)。
[0509]
在某些方面，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链阱可与一种或多种tgf-β超家族i型受体多肽或tgf-β超家族ii型受体多肽以及其它的tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链配体阱共价或非共价缔合形成更高阶的异多聚体，这可按照本文所述方法使用。参见例如图19。例如，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链配体阱可另包含本文所述的多聚化结构域。在一些实施方案中，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链配体阱包含ig免疫球蛋白的恒定结构域。可选择所述免疫球蛋白恒定结构域以促进包含至少一种单链tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽阱的对称或不对称复合体。
[0510]
在某些方面，tgf-β超家族i型受体多肽:tgf-β超家族ii型受体多肽单链阱或所述阱的组合可用作tgf-β超家族拮抗剂治疗或预防本文所述tgf-β超家族病症或疾病(例如肾
病和/或代谢紊乱或病况)。
[0511]
要了解，融合蛋白(例如免疫球蛋白fc融合蛋白)的不同组分可以与所需功能性一致的任何方式排布。例如，tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域可被置于异源结构域的c端，或者，异源结构域可被置于tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域的c端。tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域和异源结构域不必与融合蛋白接近，且其它的结构域或氨基酸序列可包括在任一结构域的c端或n端或在结构域之间。
[0512]
例如，tgf-β超家族i型和/或ii型受体融合蛋白可包含式a-b-c列出的氨基酸序列。b部分相当于tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域。a和c部分可独立地为0、1或不止一个氨基酸，且a和c部分两者当存在时与b是异源的。a和/或c部分可通过接头序列与b部分连接。接头可富含甘氨酸(例如2-10、2-5、2-4、2-3个甘氨酸残基)或甘氨酸和脯氨酸残基，并且可含有例如苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸的单一序列或苏氨酸/丝氨酸和/或甘氨酸的重复序列，例如ggg(seq id no:58)、gggg(seq id no:59)、tgggg(seq id no:60)、sgggg(seq id no:61)、tggg(seq id no:62)或sggg(seq id no:63)单一序列或重复序列。在某些实施方案中，tgf-β超家族i型和/或ii型受体融合蛋白包含式a-b-c所列的氨基酸序列，其中a是前导(信号)序列，b由tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域组成，c是这样的多肽部分，其提高体内稳定性、体内半寿期、摄取/给药、组织定位或分布、蛋白质复合体的形成和/或纯化的一种或多种。在某些实施方案中，tgf-β超家族i型和/或ii型受体融合蛋白包式a-b-c所列的含氨基酸序列，其中a是tpa前导序列，b由tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域组成，c是免疫球蛋白fc结构域。优选的融合蛋白包含seq id no:100、102、104、106、112、114、115、117、118、120、121、123、124、126、127、129、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415和416的任一个列出的氨基酸序列。
[0513]
在一些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族受体异多聚体复合体另包含一种或多种异源部分(结构域)以赋予所需性质。例如一些融合结构域特别可用于通过亲和层析法分离融合蛋白。这类融合结构域的众所周知的实例包括但不限于聚组氨酸、glu-glu、谷胱甘肽s转移酶(gst)、硫氧还蛋白、a蛋白、g蛋白、免疫球蛋白重链恒定区(fc)、麦芽糖结合蛋白(mbp)或人血清白蛋白。可选择融合结构域以提供所必需的性质。为了亲和纯化的目的，使用用于亲和层析法的相关基质，例如谷胱甘肽缀合树脂、淀粉酶缀合树脂和镍缀合树脂或钴缀合树脂。这类基质的许多种可以“试剂盒”形式获得，例如pharmacia gst纯化系统和可与(his6)融合配偶体一起使用的qiaexpress
tm
系统(qiagen)。作为另一个实例，可选择融合结构域以促进配体阱多肽的检测。这类检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如gfp)以及“表位标签”，其通常是短肽序列，可获得针对其的特异性抗体。易获得其特异性单克隆抗体的众所周知的表位标签包括flag、流感病毒血凝素(ha)和c-myc标签。在一些情况下，融合结构域具有蛋白酶切割位点(例如因子xa或凝血酶的切割位点)，其允许相关蛋白酶部分消化融合蛋白，从而从中释放重组蛋白。然后，可通过随后的层析分离，从融合结构域分离出释放的蛋白质。释放的蛋白质然后可通过随后的层析分离从融合结构域中分离。
[0514]
在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽含有能够稳定多肽的一个或多个修饰。例如，这类修饰延长多肽的体外半寿期、延长多肽的循环半寿期或降低多肽的蛋白水解性降解。这类稳定修饰包括但不限于融合蛋白(包括例如包含tgf-β超家族i型和/或ii型受体多肽结构域和稳定剂结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修
饰(包括例如糖基化位点加至本公开内容的多肽上)和糖部分的修饰(包括例如从本公开内容的多肽中脱去糖部分)。本文所用术语“稳定剂结构域”不仅仅是指融合蛋白的情况下的融合结构域(例如免疫球蛋白fc结构域)，而且还包括非蛋白质修饰(例如糖部分)或非蛋白质部分(例如聚乙二醇)。
[0515]
在优选的实施方案中，按照本文所述方法使用的tgf-β超家族异多聚体复合体是分离的多肽复合体。如本文所用，分离的蛋白质(或蛋白质复合体)或多肽(或多肽复合体)是从其天然环境的组分中分离的蛋白质或多肽。在一些实施方案中，将本公开内容的异多聚体复合体纯化至大于95％、96％、97％、98％或99％纯度，如通过例如电泳(例如sds-page、等电聚焦(ief)、毛细管电泳)或层析法(例如离子交换或反相hplc)测定。用于评价抗体纯度的方法是本领域众所周知的[参见例如flatman等(2007)j.chromatogr.b 848:79-87]。在一些实施方案中，本公开内容的异多聚体制备物基本不含tgf-β超家族i型受体多肽同多聚体和/或tgf-β超家族ii型受体多肽同多聚体。例如在一些实施方案中，异多聚体制备物包含小于约10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的tgf-β超家族i型受体多肽同多聚体。在一些实施方案中，异多聚体制备物包含小于约10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的tgf-β超家族ii型受体多肽同多聚体。在一些实施方案中，异多聚体制备物包含小于约10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的tgf-β超家族i型受体多肽同多聚体和小于约10％、9％、8％、7％、5％、4％、3％、2％或小于1％的tgf-β超家族ii型受体多肽同多聚体。
[0516]
在某些实施方案中，本公开内容的tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽及其异多聚体复合体可通过多种本领域已知技术产生。例如可采用标准蛋白质化学技术例如描述于bodansky,m.principles of peptide synthesis,springer verlag,berlin(1993)和grant g.a.(ed.),synthetic peptides:a user's guide,w.h.freeman and company,new york(1992)的技术，合成本公开内容的多肽。另外，自动化肽合成仪是市购可获得的(参见例如advanced chemtech 396型；milligen/biosearch 9600)。或者，如本领域众所周知的，本公开内容的多肽和复合体，包括其片段或变体，可使用不同的表达系统重组产生[例如大肠杆菌(e.coli)、中华仓鼠卵巢(cho)细胞、cos细胞、杆状病毒]。在又一个实施方案中，可通过使用例如胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶或成对碱性氨基酸转化酶(pace)等蛋白酶，经消化重组产生的全长tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽来产生本公开内容的修饰或未修饰的多肽。计算机分析(应用市购可获得的软件，例如macvector、omega、pcgene，molecular simulation，inc.)可用来鉴定蛋白水解切割位点。
[0517]
至于结合和拮抗与本公开内容的tgf-βi型受体多肽:tgf-βii型受体多肽异多聚体结合的配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的抗体，考虑抗体可设计为包含结合所述配体表位使得抗体的第一部分与i型受体竞争结合的第一部分和包含结合所述配体的表位使得抗体的第二部分与ii型受体竞争结合的第二部分的双特异性抗体。以这种方式，靶向单一配体的双特异性抗体可设计成模拟可通过alk7:actriib异多聚体赋予的双重i型-ii型受体结合阻
碍。同样考虑使用两种或更多种抗体的组合可实现相同的作用，其中至少第一抗体结合所述配体的表位，使得第一抗体与i型受体竞争结合，且至少第二抗体结合所述配体的表位，使得第二抗体与ii型受体竞争结合。
[0518]
b.编码tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的核酸
[0519]
在某些实施方案中，本公开内容提供编码本文公开的tgfβ超家族i型和/或ii型受体(包括其片段、功能变体和融合蛋白)的分离和/或重组的核酸。例如seq id no:12编码天然存在的人actriia前体多肽，而seq id no:13编码成熟的actriia胞外域。主题核酸可以是单链或双链的。这类核酸可以是dna或rna分子。这些核酸可用于例如制备本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体的方法中。
[0520]
如本文所用，分离的核酸是指从其天然环境的组分中分离的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中所含的核酸分子，但核酸分子存在于染色体外或不同于其天然染色体位置的染色体位置。
[0521]
在某些实施方案中，编码本公开内容的tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的核酸要理解为包括是seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143中任一个的变体的核酸。变体核苷酸序列包括因一个或多个核苷酸取代、添加或缺失而不同的序列，包括等位基因变体，因此，可包括编码不同于seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143中任一个注明的核苷酸序列的序列。
[0522]
在某些实施方案中，本公开内容的tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽由与seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的分离或重组的核酸序列编码。本领域普通技术人员应认识到，同与seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143互补的序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核酸序列也在本公开内容的范围内。在其它实施方案中，本公开内容的核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合或在dna文库中。
[0523]
在其它实施方案中，本公开内容的核酸还包括在高严格条件下与seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143标明的核苷酸序列、seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143的互补序列或其片段杂交的核苷酸序列。本领域普通技术人员应容
易理解，可改变促进dna杂交的合适的严格性条件。例如可在约45℃下在6.0x氯化钠/柠檬酸钠(ssc)中进行杂交，接着在50℃下2.0 x ssc洗涤。例如洗涤步骤中的盐浓度可以是选自约2.0 x ssc在50℃下的低严格性到约0.2 x ssc在50℃下的高严格性。另外，洗涤步骤中的温度可从在室温约22℃下的低严格性条件提高到约65℃下的高严格性条件。温度和盐两者均可改变，温度或盐浓度任一个保持恒定，同时另一个变量是变化的。在一个实施方案中，本公开内容提供于6 x ssc中在室温下的低严格性条件下杂交接着于2 x ssc中在室温下洗涤的核酸。
[0524]
因遗传密码中的简并而不同于seq id no:7、8、12、13、16、17、20、21、24、25、28、29、32、33、36、37、40、41、44、45、48、49、52、53、69、70、73、74、77、78、81、82、85、86、89、90、93、94、303、304、307、308、311、312、101、105、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140和143所列核酸的分离的核酸也在本公开内容的范围内。例如多种氨基酸用不止一个三联体指定。指定同一氨基酸的密码子或同义密码子(例如cau和cac是组氨酸的同义密码子)，可导致不影响蛋白质的氨基酸序列的“沉默”突变。然而，预期在哺乳动物细胞中可存在确实引起主题蛋白质氨基酸序列改变的dna序列多态性。本领域技术人员认识到，由于天然等位基因变化所致，在给定物种的个体之间，这些变化可存在于编码特定蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(多至约3-5％的核苷酸)之中。任何和所有这类核苷酸变化和所得氨基酸多态性在本公开内容的范围内。
[0525]
在某些实施方案中，在表达构建体中，本公开内容的重组核酸可与一个或多个调节核苷酸序列有效连接。调节核苷酸序列一般可适于用于表达的宿主细胞。本领域已知用于各种宿主细胞的合适表达载体和合适调节序列的许多类型。所述一个或多个调节核苷酸序列通常可包括但不限于启动子序列、前导序列或信号序列、核糖体结合位点、转录起始序列和终止序列、翻译起始序列和终止序列及增强子或激活物序列。本公开内容考虑本领域已知的组成型启动子或诱导型启动子。启动子可以是天然存在的启动子或将不止一种启动子的元件组合的杂合启动子。表达构建体可存在于细胞的附加体(例如质粒)上，或者表达构建体可插入染色体中。在一些实施方案中，表达载体含有选择标记基因以供转化宿主细胞的选择。选择标记基因是本领域众所周知的，并可随所采用的宿主细胞而改变。
[0526]
在本公开内容的某些方面，在包含编码tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽并与至少一个调节序列有效连接的核苷酸序列的表达载体中提供主题核酸。调节序列是本领域公认的，并被选择来指导tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其它表达调控元件。示例性调节序列描述于goeddel；gene expression technology:methods in enzymology,academic press,san diego,ca(1990)。例如，当与dna序列有效连接时，控制dna序列表达的各种表达调控序列的任一种可被用于这些载体以表达编码tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的dna序列。这类有用的表达调控序列包括例如sv40的早期启动子和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒立即早期启动子、rsv启动子、lac系统、trp系统、tac或trc系统、其表达受t7 rna聚合酶指导的t7启动子、噬菌体λ的主要操纵基因和启动子区、fd外壳蛋白的调控区、3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶启动子(例如pho5)、酵母α-交配因子启动子、杆状病毒系统的多角体(polyhedron)启动子和已知控制原核细胞或真核细胞或其病毒的基因表达的其它序列及其各种组合。应当理解，表达载体的设计可取决于以下这类因素，例如待转化的宿主细胞的
选择和/或欲表达的蛋白质类型。此外，还应考虑载体拷贝数、控制该拷贝数的能力和由该载体编码的任何其它蛋白质(例如抗生素标记)的表达。
[0527]
可通过将克隆的基因或其部分连接至适于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽、昆虫或哺乳动物)或两者中表达的载体中来产生本公开内容的重组核酸。用于产生重组tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的表达载体包括质粒和其它载体。例如，合适的载体包括用于在原核细胞(例如大肠杆菌)中表达的以下类型的质粒：pbr322衍生质粒、pembl衍生质粒、pex衍生质粒、pbtac衍生质粒和puc衍生质粒。
[0528]
一些哺乳动物表达载体既含有利于载体在细菌中增殖的原核序列，又含有在真核细胞中表达的一个或多个真核转录单位。pcdnai/amp、pcdnai/neo、prc/cmv、psv2gpt、psv2neo、psv2-dhfr、ptk2、prsvneo、pmsg、psvt7、pko-neo和phyg衍生载体是适于真核细胞转染的哺乳动物表达载体的实例。这些载体的一些用来源于细菌质粒(例如pbr322)的序列修饰，以利于在原核细胞和真核细胞两者中复制和进行药物抗性选择。或者，可使用诸如牛乳头瘤病毒(bpv-1)或埃巴病毒(phebo、prep衍生物和p205)等病毒衍生物在真核细胞中瞬时表达蛋白质。其它病毒(包括反转录病毒)表达系统的实例可参见下面基因疗法递送系统的描述。用于质粒制备和宿主生物转化中的各种方法是本领域众所周知的。对于原核和真核细胞两者的其它合适的表达系统以及通用重组方法，参见molecular cloning a laboratory manual,3rd ed.,ed.by sambrook,fritsch and maniatis(cold spring harbor laboratory press,2001)。在某些情况下，可能需要通过利用杆状病毒表达系统来表达重组多肽。这类杆状病毒表达系统的实例包括pvl衍生载体(例如pvl1392、pvl1393和pvl941)、pacuw衍生载体(例如pacuw1)和pbluebac衍生载体(例如含β-gal的pbluebac iii)。
[0529]
在一个优选的实施方案中，可设计在cho细胞中产生主题tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的载体，例如pcmv-script载体(stratagene，la jolla，calif.)、pcdna4载体(invitrogen，carlsbad，calif.)和pci-neo载体(promega，madison，wisc.)。显然，可使用主题基因构建体于在培养基中繁殖的细胞中使主题tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽表达，例如产生蛋白质(包括融合蛋白或变体蛋白)以便纯化。
[0530]
本公开内容还涉及用包括主题tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的一种或多种的编码序列的重组基因转染的宿主细胞。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。例如本公开内容的tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽可在细菌细胞(例如大肠杆菌)、昆虫细胞(例如利用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞[例如中华仓鼠卵巢(cho)细胞系]中表达。其它合适的宿主细胞为本领域技术人员所知。
[0531]
因此，本公开内容另涉及产生主题tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的方法。例如，可将用编码tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的表达载体转染的宿主细胞在允许tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽表达发生的合适条件下培养。可使所述多肽分泌并从细胞和含有所述多肽的培养基的混合物中分离出来。或者，tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽可从获自收获并裂解的细胞的胞质或膜部分中分离。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其它副产品。用于细胞培养的合适培养基是本领域众所周知的。可采用本领域已知的用于纯化蛋白质的技术，包括离子交换层析法、凝胶过滤层析法、超滤法、电泳、使用对tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽的特定表位有特异性的抗体进行的免疫亲和纯化以及用结合与tgf
β超家族i型和/或ii型受体多肽融合的结构域的物质进行的亲和纯化(例如a蛋白柱可用来纯化tgfβ超家族i型受体-fc和/或ii型受体-fc融合蛋白)，将主题多肽从细胞培养基、宿主细胞或两者中分离出来。在一些实施方案中，tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽是含有有利于其纯化的结构域的融合蛋白。
[0532]
在一些实施方案中，纯化通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶(phenylsepharose)层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。tgfβ超家族i型受体-fc和/或ii型受体-fc融合蛋白可纯化至通过大小排阻层析法测定的》90％、》95％、》96％、》98％或》99％的纯度和通过sds page测定的》90％、》95％、》96％、》98％或》99％的纯度。目标纯度水平是足以在哺乳动物系统，特别是非人灵长类动物、啮齿动物(小鼠)和人中实现所需结果的水平。
[0533]
在另一个实施方案中，编码纯化前导序列(例如重组tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽所需部分的n端上的聚-(his)/肠激酶切割位点序列)的融合基因，可允许使用ni
2
金属树脂通过亲和层析法对表达的融合蛋白进行纯化。然后，纯化前导序列随后可通过用肠激酶处理除去，得到纯化的tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽(例如参见hochuli等(1987)j.chromatography 411:177；以及janknecht等，pnas usa 88:8972)。
[0534]
制备融合基因的技术是众所周知的。基本上，编码不同多肽序列的各种dna片段的连接按照常规技术进行，采用用于连接的平端或交错端、限制性内切酶消化以提供合适末端，适当时补平黏性末端，碱性磷酸酶处理以避免不需要的连接，并进行酶促连接。在另一个实施方案中，融合基因可通过常规技术合成，包括自动dna合成仪。或者，可使用在两个连续基因片段之间产生互补延伸的锚定引物进行基因片段的pcr扩增，所述基因片段随后可退火得到嵌合基因序列(参见例如current protocols in molecular biology，编辑ausubel等，john wiley&sons：1992)。
[0535]
4.筛选测定法
[0536]
在某些方面，本发明涉及使用tgfβ超家族i型和ii型受体异多聚体复合体鉴定作为tgfβ超家族受体的激动剂或拮抗剂的化合物(物质)。可对通过这种筛选法鉴定的化合物进行测试以评价其调节组织例如骨、软骨、肌肉、脂肪和/或神经元的能力；评价其体内或体外调节组织生长的能力。可在例如动物模型中对这些化合物进行测试。
[0537]
有许多针对通过靶向tgfβ超家族配体信号转导(例如smad 2/3和/或smad 1/5/8信号转导)调节组织生长来筛选治疗剂的方法。在某些实施方案中，可进行高通量的化合物筛选以鉴定干扰tgfβ超家族受体介导的对所选细胞系的作用的物质。在某些实施方案中，进行所述测定法以筛选和鉴定特异性抑制或降低tgf-β超家族异多聚体复合体与其配偶体，例如tgfβ超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的结合的化合物。或者，所述测定法可用于鉴定增强tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合配偶体例如tgfβ超家族配体结合的化合物。在又一个实施方案中，可通过其与本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体相互作用的
能力来鉴定化合物。
[0538]
各种测定形式便可满足需要，然而根据本公开内容，本领域的普通技术人员仍应了解未在本文明确描述的测定形式。如本文所述，可通过任何组合化学方法产生本发明的试验化合物(作用剂)。或者，主题化合物可以是体内或体外合成的天然存在的生物分子。待测定其起组织生长调节剂作用的能力的化合物(作用剂)可通过例如细菌、酵母、植物或其它生物产生(例如天然产物)、以化学法产生(例如小分子，包括肽模拟物)或以重组法产生。本发明考虑的试验化合物包括非肽基有机分子、肽、多肽、肽模拟物、糖、激素和核酸分子。在一个具体的实施方案中，试验物质是有机小分子，分子量小于约2,000道尔顿。
[0539]
本公开内容的试验化合物可以单一的分散实体提供，或者以较复杂的文库提供，例如通过组合化学制备的文库。这些文库可包含例如醇、烷基卤化物、胺、酰胺、酯、醛、醚和有机化合物的其它类别。向试验系统中提供的试验化合物可呈分离形式或作为化合物的混合物，尤其在最初的筛选步骤中。任选化合物可任选用其它化合物衍生化并具有利于化合物分离的衍生化基团。衍生化基团的非限制实例包括生物素、荧光素、洋地黄毒苷(digoxygenin)、绿色荧光蛋白、同位素、聚组氨酸、磁珠、谷胱甘肽s转移酶(gst)、可光活化的交联剂或其任何组合。
[0540]
在测试化合物和天然提取物文库的许多药物筛选程序中，需要高通量测定法以便使在给定时间内研究的化合物的数目最大化。在无细胞系统(例如可用纯化的或半纯化的蛋白质衍生)中进行的测定法，常常优选作为“初步”筛选，因为可产生无细胞系统以允许快速显现和相对容易地检测由试验化合物介导的分子靶标中的改变。此外，在体外系统中一般可忽略试验化合物的细胞毒性或生物利用度的作用，测定法反而主要集中在药物对分子靶标的作用，如可表现在tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合配偶体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)之间结合亲和力的改变。
[0541]
仅举例来说，在本公开内容的示例性筛选测定法中，将目标化合物与通常能够与适用于测定意图的tgf-β超家族配体结合的分离和纯化的tgf-β超家族异多聚体复合体接触。然后向化合物和tgf-β超家族异多聚体复合体的混合物中加入含有合适tgf-β超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的组合物。异多聚体-超家族配体复合体的检测和定量测定提供用于测定化合物抑制(或增强)在tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合蛋白之间形成复合体的功效的手段。可通过从使用不同浓度的试验化合物所得到的数据绘制剂量反应曲线，来评价化合物的功效。此外，还可进行对照测定，以提供比较基线。例如，在对照测定中，将分离和纯化的tgf-β超家族配体加入含有tgf-β超家族异多聚体复合体的组合物中，在缺乏试验化合物时，定量测定异多聚体-配体复合体的形成。应了解，一般可以改变可将反应物混
合的顺序，并且可以同时混合。此外，可使用细胞提取物和裂解物替换经纯化的蛋白质以提供合适的无细胞测定系统。
[0542]
可通过各种技术，检测tgf-β超家族异多聚体复合体与其它蛋白质的结合。例如，可使用例如可检测标记的蛋白质，例如放射性标记(例如
32
p、
35
s、
14
c或3h)、荧光标记(例如fitc)或酶标记的tgf-β超家族异多聚体复合体和/或其结合蛋白，通过免疫测定或通过层析检测，定量测定复合体形成的调节。
[0543]
在某些实施方案中，本公开内容考虑在直接或间接测tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合蛋白间的相互作用的程度中，采用荧光偏振测定法和荧光共振能量转移(fret)测定法。此外，其它检测方式，例如基于光波导(参见例如pct公布号wo 96/26432和美国专利号5,677,196)、表面等离振子共振(spr)、表面电荷传感器和表面力传感器的检测方式都适于本公开内容的许多实施方案。
[0544]
此外，本公开内容考虑采用相互作用陷阱测定法(interaction trap assay)，亦称“双杂合测定法(two hybrid assay)”，鉴定干扰或增强tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合配偶体间的相互作用的物质。参见例如美国专利号5,283,317；zervos等(1993)cell 72:223-232；madura等(1993)jbiol chem 268:12046-12054；bartel等(1993)biotechniques 14:920-924；以及iwabuchi等(1993)oncogene 8:1693-1696)。在一个具体的实施方案中，本公开内容考虑采用反相双杂交系统(reverse two hybrid system)鉴定离解tgf-β超家族异多聚体复合体与其结合蛋白间的相互作用的化合物(例如小分子或肽)[参见例如vidal和legrain，(1999)nucleic acids res 27:919-29；vidal和legrain，(1999)trends biotechnol 17:374-81；以及美国专利号5,525,490、5,955,280和5,965,368]。
[0545]
在某些实施方案中，通过其与本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体相互作用的能力来鉴定主题化合物。化合物和tgf-β超家族异多聚体复合体间的相互作用可以是共价的或非共价的。例如，可采用体外生化方法在蛋白质水平上鉴定这类相互作用，包括光致交联、放射性同位素标记配体结合和亲和层析法。参见例如jakobywb等(1974)methods in enzymology46:1。在某些情况下，可在基于机制的测定法中筛选化合物，例如检测与tgf-β超家族异多聚体复合体结合的化合物的测定法。这可包括固相或液相结合事件。或者，可将编码tgf-β超家族异多聚体复合体的基因与报道系统(例如β-半乳糖苷酶、萤光素酶或绿色荧光蛋白)一起转染至细胞中，优选通过高通量筛选针对文库进行筛选或用文库的各个成员进行筛选。可采用基于其它机制的结合测定法，例如检测自由能变化的结合测定法。结合测定法可用固定于孔、珠粒或芯片或被固定化抗体俘获或被毛细管电泳分离的靶标进行。一般可采用比色终点或荧光或表面等离振子共振检测结合的化合物。
[0546]
5.示例性治疗应用
[0547]
在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于治疗或预防与tgfβ超家族受体(例如alk1、alk2、alk3、alk4、alk5、alk6、alk7、actriia、actriib、bmprii、tgfbrii和misrii)和/或tgfβ超家族配体(例如bmp2、bmp2/7、bmp3、bmp4、bmp4/7、bmp5、bmp6、bmp7、bmp8a、bmp8b、bmp9、bmp10、gdf3、gdf5、gdf6/bmp13、gdf7、gdf8、gdf9b/bmp15、gdf11/bmp11、gdf15/mic1、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、激活素a、激活素b、激活素c、激活素e、激活素ab、激活素ac、激活素ae、激活素bc、激
活素be、nodal、神经胶质细胞衍生神经营养因子(gdnf)、neurturin、artemin、persephin、mis和lefty)的异常活性有关的疾病或病况。这些这样疾病、病症或病况在本文一般称为“tgfβ超家族相关病况”或“tgfβ超家族相关病症”。在某些实施方案中，本发明提供通过给予个体治疗有效量的本文所述tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合来治疗或预防有需要的个体的方法。本公开内容的任何tgf-β超家族异多聚体复合体可能分别或组合地用于本文公开的治疗应用。这些方法尤其以哺乳动物(包括例如啮齿动物、灵长类动物和人)的治疗性或预防性治疗为目标。
[0548]
本文使用的“预防”病症或病况的治疗药是指以下化合物，其在统计样本中，与未治疗对照样品相比，减少治疗样品中的病症或病况的发生，或者与未治疗对照样品相比，延缓病症或病况的一种或多种症状的发作或者降低病症或病况的一种或多种症状的严重程度。本文使用的术语“治疗”包括指定病况的预防或者病况一旦确立便改善或根除病况。在任一情况下，可通过医师或其它保健护理者提供的诊断和给予治疗剂的预期结果来分辨预防或治疗。
[0549]
tgfβ超家族受体-配体复合体在组织生长以及早期发育过程例如不同结构的正确形成或一种或多种发育后能力(包括性发育、垂体激素产生及骨和软骨建立)中起必不可少的作用。因此，tgfβ超家族相关病况/病症包括组织生长异常和发育缺陷。另外，tgfβ超家族相关病况包括但不限于细胞生长和分化的病症，例如炎症、反态反应、自身免疫性疾病、感染性疾病和肿瘤。
[0550]
示例性tgfβ超家族相关病况包括神经肌肉病症(例如肌营养不良和肌肉萎缩)、充血性阻塞性肺病(和与copd有关的肌肉消耗)、肌肉消耗综合征、肌肉衰减综合征(sarcopenia)、恶病质、脂肪组织病症(例如肥胖症)、2型糖尿病(niddm、成人型糖尿病)和骨退变性疾病(例如骨质疏松症)。其它示例性tgfβ超家族相关病况包括肌肉变性病症和神经肌肉病症、组织修复(例如伤口愈合)、神经变性疾病(例如肌萎缩性侧索硬化)和免疫病症(例如与淋巴细胞增殖或功能异常有关的病症)。
[0551]
在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合用作治疗肌营养不良的一部分。术语“肌营养不良”是指特征在于骨骼肌和有时心肌和呼吸肌逐步虚弱和衰退的一类退变性肌肉疾病。肌营养不良是特征在于以肌肉的显微镜下变化开始的进行性肌肉消耗和衰弱的遗传病症。在肌肉随时间推移衰退时，人的肌肉强度下降。可用包括主题tgf-β超家族异多聚体复合体的方案治疗的示例性肌营养不良包括：杜兴型肌营养不良(dmd)、贝克肌营养不良(bmd)、emery-dreifuss肌营养不良(edmd)、肢带肌营养不良(lgmd)、面肩胛肱骨肌营养不良(fsh或fshd)(亦称为landouzy-dejerine)、肌强直性营养不良(mmd；亦称为斯坦内特病(steinert's disease))、眼咽肌营养不良(opmd)、远端肌营养不良(dd)、先天肌营养不良(cmd)。
[0552]
法国神经学家guillaume benjamin amandduchenne在1860年代最先描述了杜兴型肌营养不良(dmd)。贝克肌营养不良(bmd)以德国医生peter emil becker命名，他在1950年代最先描述了这个dmd变体。dmd是男性中最常见的遗传疾病，3,500名少年中有1人受影响。当位于x染色体短臂上的肌养蛋白基因有缺陷时，便发生dmd。由于男性只携带一拷贝的x染色体，所以他们只有一拷贝的肌养蛋白基因。在没有肌养蛋白蛋白质的情况下，肌肉在收缩和松驰周期内容易受损。虽然在该病早期肌肉被再生补偿，但之后肌肉祖细胞不能跟
上持续进行的损害，并且健康肌肉被无功能的纤维脂肪组织代替。
[0553]
bmd产生于肌养蛋白基因中的不同突变。bmd患者有部分肌养蛋白，但是或量不足或质量差。部分肌养蛋白的存在保护bmd患者的肌肉免受与dmd患者的肌肉一样严重或快速地衰退。
[0554]
动物研究表明，抑制gdf8信号转导途径可有效治疗dmd和bmd患者的疾病的不同方面(bogdanovich等，2002，nature 420:418-421；pistilli等，2011，am jpathol 178:1287-1297)。因此，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体可用作gdf8抑制剂(拮抗剂)，并构成在dmd和bmd患者体内通过gdf8和/或相关的tgfβ超家族配体阻断信号转导的备选方法。
[0555]
同样，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体可提供在需要肌肉生长的其它疾病状况下提高肌肉质量的有效方法。例如肌萎缩性侧索硬化(als)，亦称lou gehrig病或运动神经元疾病，是一种侵袭运动神经元(其是引发骨骼肌收缩所必需的中枢神经系统的组分)的慢性、进行性且无法治愈的cns病症。在als中，运动神经元退化并最终死亡，并且尽管人的脑通常保持完整的功能和警觉，但肌肉收缩的引发在脊柱水平上被阻断。发生als的个体通常介于40和70岁之间岁，最早退化的运动神经元是支配臂或腿的神经元。患有als的患者可能会有行走困难，可能失手掉落东西，摔倒，言语含糊，并且控制不住地笑或哭。当疾病进展时，四肢肌肉因废用而萎缩。肌肉衰弱会使人变得虚弱，患者最终需要轮椅或变得不能下床行动。大多数als患者从发病起3-5年内死于呼吸衰竭或死于呼吸机辅助型并发症(如肺炎)。
[0556]
通过tgf-β超家族异多聚体复合体对肌肉质量提高的促进还可有益于患有肌肉消耗疾病的人。gonzalez-cadavid等(同上)报道了gdf8表达与人的无脂肪质量负相关，且gdf8基因表达的提高与患有aids消耗综合征的男子的体重减轻有关。通过抑制aids患者的gdf8功能，可以缓解aids的至少某些症状，如果不是完全消除的话，因此显著改善aids患者的生命质量。
[0557]
由于在没有营养摄取减少的情况下，gdf8功能的丧失也与脂肪丧失有关(zimmers等，同上；mcpherron和lee，同上)，因此主题tgf-β超家族异多聚体复合体还可用作减慢或预防肥胖症和2型糖尿病发展的治疗药物。
[0558]
癌症厌食-恶病质综合征属于癌症最使人虚弱和危及生命的方面。这种综合征是许多癌症类型中的常见特征—存在于约80％濒临死亡的癌症患者中，不仅仅是造成生命质量差和对化学治疗反应差的原因，而且还是造成与患有相应肿瘤却无体重减轻的患者的生存时间相比生存时间短的原因。如果在6个月时间内发生的非有意体重减轻超过发病前体重的5％，则应怀疑癌症患者有恶病质。与厌食、脂肪和肌肉组织消耗和心理苦恼(psychological distress)有关，恶病质是由癌症和宿主间的复杂相互作用引起的。癌症恶病质影响细胞因子的产生、蛋脂质动员因子和蛋白酶解诱导因子的释放和中间代谢的变化。虽然厌食普遍存在，但仅食物摄取降低不能解释见于癌症患者中的机体组成的改变，而且营养摄取增加不能逆转消耗综合征。目前，没有对控制或逆转恶病质过程的治疗法。由于发现成年小鼠中gdf8的全身性过量表达诱导类似于见于人恶病质综合征中的严重肌肉和脂肪丧失(zimmers等，同上)，因此主题tgf-β超家族异多聚体复合体药物组合物可有益地用于预防、治疗或减轻其中需要肌肉生长的恶病质综合征的症状。可用于预防、治疗或缓解上述肌肉丢失的异聚体复合体的实例是actriib-fc:alk4-fc。
[0559]
在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于诱导骨和/或软骨形成、防止骨丢失、增加骨矿化、防止骨去矿化和/或增加骨密度的方法。tgf-β超家族异多聚体复合体可用于诊断为亚临床低骨密度的患者，作为针对骨质疏松症发生的保护手段。
[0560]
在一些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可在人和其它动物的骨折愈合和软骨缺陷中具有医疗用途。主题方法和组合物还可在闭合性和开放性骨折复位术以及改进人工关节固定方面具有预防用途。由成骨剂(osteogenic agent)诱导的从头骨形成可用于先天性、创伤诱发的或肿瘤切除术引起的颅面缺陷的修复，并且也可用于美容整形手术。此外，本发明的方法和组合物可用于牙周病和其它牙修复过程的治疗。在某些情况下，tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可提供吸引成骨细胞、刺激成骨细胞生长或诱导成骨细胞祖细胞分化的环境。本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体还可用于治疗骨质疏松症。此外，tgf-β超家族异多聚体复合体可用于软骨缺陷的修复和骨关节炎的预防/逆转。如上所述可用于诱导骨形成、防止骨丢失、增加骨矿化、防止骨去矿化和/或增加骨密度的异聚体复合体的实例是actriib-fc:alk3-fc和actriib-fc:alk4-fc。
[0561]
rosen等(编辑)primer on the metabolic bone diseases and disorders of mineral metabolism,7
th ed.american society for bone and mineral research,washington d.c.(通过引用结合到本文)提供可从属于用tgf-β超家族异多聚体复合体或与tgf-β超家族异多聚体复合体的组合治疗的骨病的详尽论述。本文提供部分名单。本发明的方法和组合物可适用于特征是骨丢失或引起骨丢失的病况，例如骨质疏松症(包括继发性骨质疏松症)、甲状旁腺功能亢进、慢性肾病-矿物质和骨异常(chronic kidney disease mineral bone disorder)、性激素剥夺或切除(例如雄激素和/或雌激素)、糖皮质激素治疗、类风湿性关节炎、重度烧伤、甲状旁腺功能亢进、高钙血症、低钙血症、低磷酸盐血症、骨软化(包括瘤源性软骨病)、高磷酸盐血症、维生素d缺乏症、甲状旁腺功能亢进(包括家族性甲状旁腺功能亢进)和假性甲状旁腺功能减退症、肿瘤骨转移、肿瘤或化学疗法引起的骨丢失、骨与骨髓肿瘤(例如多发性骨髓瘤)、缺血性骨病、牙周病和口腔骨丢失、库欣病(cushing’s disease)、佩吉特病(paget’sdisease)、甲状腺毒症、慢性腹泻状态或吸收不良、肾小管性酸中毒或神经性厌食症。本发明的方法和组合物还可用于以骨形成或愈合失败为特征的病况，包括不愈合骨折、在其它方面愈合缓慢的骨折、胎儿和新生儿骨发育异常(例如低钙血症、高钙血症、钙受体缺陷和维生素d缺乏症)、骨坏死(包括颌骨坏死)和成骨不全。另外，合成代谢作用可引起这类拮抗剂减轻与骨损伤或侵蚀相关的骨疼痛。由于抗吸收作用，这类拮抗剂可用于治疗异常骨形成的病症，例如成骨细胞肿瘤转移(例如原发性前列腺癌或乳腺癌有关的肿瘤转移)、骨原性骨肉瘤、骨硬化症、进行性骨干发育异常、骨内膜骨质增生(endosteal hyperostosis)、全身脆弱性骨硬化和肢骨纹状肥大。可治疗的其它病症包括纤维性结构不良和软骨发育不全。
[0562]
在另一个具体的实施方案中，本公开内容提供用于修复骨折和与软骨和/或骨缺陷或牙周病有关的其它病况的治疗方法和组合物。本发明进一步提供用于伤口愈合和组织修复的治疗方法和组合物。伤口的类型包括但不限于烧伤、切口和溃疡。参见例如pct公布号wo 84/01106。这类组合物包含与药物可接受的溶媒、载体或基质混合的治疗有效量的本
公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体的至少一种。
[0563]
在一些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可适用于引起骨丢失的病况，例如骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进、库欣病、甲状腺毒症、慢性腹泻状态或吸收不良、肾小管性酸中毒或神经性厌食症。通常认为，作为女性、具有低体重和有久坐生活方式是骨质疏松症的风险因子(骨矿物质密度丢失，导致骨折风险)。然而，骨质疏松症还可产生于某些药物的长期使用。产生于药物或另一种医学病况的骨质疏松症称为继发性骨质疏松症。在库欣病中，由机体产生的过量皮质醇引起骨质疏松症和骨折。与继发性骨质疏松症有关的最普通的药物是皮质甾类，一种像由肾上腺天然产生的激素皮质醇一样起作用的药物类别。虽然骨骼发育需要适当水平的甲状腺激素，但过量的甲状腺激素可随时间降低骨质量。含有铝的抗酸药当被有肾问题的人、特别进行透析的人以高剂量服用时，可引起骨丢失。可引起继发性骨质疏松症的其它药物包括用于预防癫痫发作的苯妥英(dilantin)和巴比妥类；甲氨蝶呤(rheumatrex，immunex，folex pfs)，一种用于某些形式的关节炎、癌症和免疫疾病的药物；环孢菌素(sandimmune，neoral)，一种用于治疗某些自身免疫病和抑制器官移植患者的免疫系统的药物；促黄体激素释放激素激动剂(lupron、zoladex)，用于治疗前列腺癌和子宫内膜异位症；肝素(calciparine、liquaemin)，一种抗凝药；以及消胆胺(questran)和考来替泊(colestid)，用于治疗高胆固醇。产生于癌症疗法的骨丢失是普遍公认的，并称为癌症疗法诱导的骨丢失(ctibl)。骨转移可在骨中产生空腔，这可通过用tgf-β超家族异多聚体复合体治疗来纠正。骨丢失还可能由牙龈病(一种其中位于牙龈隐窝的细菌产生毒素和有害酶的慢性感染)引起。
[0564]
在又一个实施方案中，本公开内容提供用于治疗与异常或不需要的骨生长有关的疾病或病症的方法和治疗剂。例如患有先天病症进行性骨化性纤维发育不良(fop)的患者受累于自发或在响应组织创伤时软组织中的进行性异位骨生长，其对生命质量造成重大影响。另外，异常骨生长可发生在髋置换手术之后，因此破坏手术结果。这是一种更常见的病理性骨生长的实例，且其中主题方法和组合物的情况可能是治疗有益的。相同的方法和组合物也可用于治疗其它形式的异常骨生长(例如在创伤、烧伤或脊髓损伤后骨的病理性骨生长)，并且用于治疗或预防与见于与转移性前列腺癌或骨肉瘤关联的异常骨生长有关的不良病况。
[0565]
在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于促进癌症患者的骨形成。患有某些肿瘤(例如前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、多发性骨髓瘤或引起甲状旁腺功能亢进的任何肿瘤)的患者因肿瘤诱导的骨丢失、骨转移和治疗剂可能有骨丢失的高风险。甚至在缺少骨丢失或骨转移的证据时，这类患者也可用tgf-β超家族异多聚体复合体或复合体的组合治疗。还可监测患者的骨丢失或骨转移的证据，且在指示物表明风险增加的情况下，可用tgf-β超家族异多聚体复合体治疗患者。一般而言，采用dexa扫描评价骨密度的变化，同时骨重建的指示物可用于评价骨转移的可能性。可监测血清标志物。骨特异性碱性磷酸酶(bsap)是一种存在于成骨细胞中的酶。患有骨转移和导致骨重建增加的其它病况的患者中，bsap的血液水平升高。骨钙蛋白和前胶原肽也与骨形成和骨转移有关。在患有由前列腺癌引起的骨转移的患者中检出bsap增加，在乳腺癌所致骨转移中增加的程度较低。在已转移至骨的前列腺癌中，bmp7水平高，但在由膀
胱癌、皮肤癌、肝癌或肺癌所致骨转移中，bmp7不高。i型羧基端端肽(ictp)是存在于骨吸收期间形成的胶原中的交联物。因为骨不断破坏和重建，ictp可存在于整个机体中。然而，在骨转移部位，水平可显著高于正常骨的区域。在由前列腺癌、肺癌和乳腺癌所致骨转移中存在高水平的ictp。另一种胶原交联物，i型n端端肽(ntx)在骨更新期间随ictp一起产生。在由许多不同类型的癌症(包括肺癌、前列腺癌和乳腺癌)引起的骨转移中，ntx的量增加。同样，ntx的水平随骨转移进程提高。因此，这种标志物既可用于检测转移，又可测定疾病的程度。吸收的其它标志物包括吡啶诺林(pyridinoline)和脱氧吡啶诺林。吸收标志物或骨转移标志物的任何增加都表明患者需要tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合治疗。
[0566]
本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可与其它骨活性药物一同给予。可通过给予单一共制剂、同时给予或在不同时间给予实现共同给药。tgf-β超家族异多聚体复合体如果与其它骨活性剂一起给予，可能是特别有利的。患者可获益于同时接受tgf-β超家族异多聚体复合体和服用钙补充剂、维生素d、适当运动和/或在一些情况下的其它药物。其它药物的实例包括二膦酸盐(阿仑膦酸盐、伊班膦酸盐和利塞膦酸盐)、降钙素、雌激素、甲状旁腺激素和雷洛昔芬。二膦酸盐(阿仑膦酸盐、伊班膦酸盐和利塞膦酸盐)、降钙素、雌激素和雷洛昔芬影响骨重建周期，被归类为抗吸收药物。骨重建包括两个截然不同的阶段：骨吸收和骨形成。抗吸收药物减慢或终止骨重建周期的骨吸收部分，但不减慢该周期的骨形成部分。因此，以比骨吸收大的速度持续新的形成，而且骨密度可随时间增加。特立帕肽，一种甲状旁腺激素形式，在骨重建周期中提高骨形成的速度。阿仑膦酸盐获准用于预防(5mg/天或一周一次35mg)和治疗(10mg/天或一周一次70mg)绝经后骨质疏松症。阿仑膦酸盐减少骨丢失，增加骨密度和降低脊柱、腕和髋骨折的风险。阿仑膦酸盐还获准用于治疗由于长期使用这些药物(即泼尼松和可的松)所致男性和女性的糖皮质激素诱发性骨质疏松症并用于治疗男性骨质疏松症。阿仑膦酸盐加维生素d获准用于治疗绝经后女性的骨质疏松症(70mg一周一次加维生素d)，以及用于治疗以改善患有骨质疏松症的男性的骨质量。伊班膦酸盐获准用于预防和治疗绝经后骨质疏松症。一月一次以丸剂服用(150mg)，伊班膦酸盐应在每个月的同一天服用。伊班膦酸盐减少骨丢失、增加骨密度和降低脊柱骨折风险。利塞膦酸盐获准用于预防和治疗绝经后骨质疏松症。每日(5mg剂量)或每周(35mg剂量或35mg剂量与钙)服用，利塞膦酸盐减缓骨丢失，增加骨密度并降低脊柱和非脊柱骨折的风险。利塞膦酸盐还获准用于男性和女性以预防和/或治疗由于长期使用这些药物(即泼尼松或可的松)引起的糖皮质激素诱发性骨质疏松症。降钙素是天然存在的参与钙调节和骨代谢的激素。在绝经期后5年以上的女性中，降钙素减缓骨丢失、增加脊柱骨密度，并可缓解骨折相关疼痛。降钙素降低脊柱骨折的风险。可以注射剂(每日50-100iu)或鼻腔喷雾剂(每日200iu)获得降钙素。
[0567]
患者还可获益于共同接受tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合和其它的骨活性药物。雌激素疗法(et)/激素疗法(ht)获准用于预防骨质疏松症。已表明et减少骨丢失，增加脊柱和髋两者的骨密度，并降低绝经后女性的髋和脊柱骨折的风险。最常以递送约每日0.3mg的低剂量或约每日0.625mg的标准剂量的丸剂或皮肤贴剂形式给予et，甚至在70岁以后开始给予时也有效。当只服用雌激素时，可能增加女性发生子宫膜癌(子宫内膜癌)的风险。为了排除这种风险，医疗保健人员将激素孕酮与雌激素(激
素替代疗法或ht)联合开给有完整子宫的女性。et/ht缓解绝经期症状，并显示对骨健康具有有益作用。副作用可包括阴道出血、乳房触痛、情绪障碍和胆囊疾病。雷洛昔芬，一天60mg，获准用于预防和治疗绝经后骨质疏松症。它来自一类已开发以提供雌激素的有益作用而无其潜在缺点的称为选择性雌激素受体调节剂(serm)的药物类别。雷洛昔芬提高骨质量，并降低脊柱骨折风险。尚未获得表明雷洛昔芬可降低髋骨折和其它非脊柱骨折的风险的数据。特立帕肽，一种甲状旁腺激素形式，获准用于治疗处于高骨折风险的绝经后女性和男性的骨质疏松症。这种药物刺激新骨形成，并显著增加骨矿物质密度。在绝经后女性中，在脊柱、髋、足、肋和腕中注意到骨折减少。在男性中，在脊柱中注意到骨折减少，但没有足够的数据评价其它部位的骨折减少。特立帕肽以每日注射剂自我给药长达24个月。
[0568]
在其它实施方案中，tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于调节调节动物的体脂肪含量和用于治疗或预防其相关病况、特别是其损害健康的相关病况的组合物和方法。按照本发明，调节(控制)体重可指减轻或增加体重、降低或提高体重增加的速度或者提高或降低体重减轻的速度，并且还包括主动保持或不显著改变体重(例如针对可能以其它方式增加或降低体重的外部或内部影响)。本公开内容的一个实施方案涉及通过将本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合给予有需要的动物(例如人)来调节体重。
[0569]
在一些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于在动物中减轻体重和/或降低体重增加，更特别是用于治疗或改善有肥胖症风险或患有肥胖症的患者的肥胖症。在另一个具体实施方案中，本发明涉及用于治疗不能增加体重或保持体重的动物(例如患有消耗综合征的动物)的方法和化合物。这类方法有效增加体重和/或身体质量，或减轻体重和/或减轻质量丧失，或改善与/由不良性的低(例如不健康)体重和/或身体质量有关/引起的病况。另外，高胆固醇病症(例如高胆固醇血症或脂血症障碍(dislipidemia))可用本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合治疗。
[0570]
在某些方面，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用来在有需要的受试者中提高红细胞水平、治疗或预防贫血和/或治疗或预防无效红细胞生成。在某些方面，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可与用于提高红细胞水平的常规治疗方法，特别是用于治疗多因素起因贫血的常规治疗方法联用。用于提高红细胞水平的常规治疗方法包括例如红细胞输注、给予一种或多种epo受体激活物、造血干细胞移植、免疫抑制生物制剂和药物(例如皮质甾类)。在某些实施方案中，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可用于在有需要的受试者中治疗或预防无效红细胞生成和/或与无效红细胞生成有关的病症。在某些方面，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合可与用于治疗或预防贫血或无效红细胞生成障碍的常规治疗方法，特别是用于治疗多因素起因贫血的常规治疗方法联用。
[0571]
一般而言，本公开内容所述疾病或病况的治疗或预防通过以“有效量”给予本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合来实现。药剂的有效量是指以达到所需治疗或预防结果所必需的剂量并持续一段时间的有效的量。本公开内容的药剂的“治疗有效量”可随例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及作用剂在个体
中引起所需反应的能力等因素而变化。“预防有效量”是指以达到所需预防结果所必需的剂量并持续一段时间的有效的量。
[0572]
在某些实施方案中，tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合，任选与epo受体激活物混合，可用于增加健康个体和所选患者群的红细胞、血红蛋白或网织红细胞水平。合适的患者群的实例包括具有不良性低红细胞或血红蛋白水平的患者(例如贫血患者)和有发育中的不良性低红细胞或血红蛋白水平的风险的患者，例如将要进行大手术或可引起大量失血的其它手术的那些患者。在一个实施方案中，有足够红细胞水平的患者用tgf-β超家族异多聚体复合体或tgf-β超家族异多聚体复合体的组合治疗以提高红细胞水平，然后抽出血液，保存待稍后输血用。
[0573]
任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可在贫血患者中用于提高红细胞水平、血红蛋白水平和/或血细胞比容水平。在观察人的血红蛋白和/或血细胞比容水平时，对于适当年龄和性别类别小于正常的水平可表示有贫血，但要考虑个体变化。例如10-12.5g/dl的血红蛋白水平，通常约11.0g/dl被视为在健康成年人的正常范围内，然而，就疗法而言，较低的目标水平可引起较少的心血管副作用[参见例如jacobs等(2000)nephrol dial transplant 15,15-19]。或者，血细胞比容水平(由细胞占据的血样体积的百分比)可用作贫血的度量。健康个体的血细胞比容水平对于成年男性为约41-51％，对于成年女性为35-45％。在某些实施方案中，患者可用欲使患者恢复到红细胞、血红蛋白和/或血细胞比容的目标水平的给药方案治疗。由于血红蛋白和血细胞比容水平在人与人之间不同，最好针对每个患者，分别考虑目标血红蛋白和/或血细胞比容水平。
[0574]
在患有组织损伤、感染和/或慢性疾病，特别是癌症的患者中常常观察到贫血。在一些受试者中，贫血以低红细胞生成素水平和/或对骨髓中的红细胞生成素的不当反应为特征[参见例如adamson(2008)harrison’s principles of internal medicine,17th ed.；mcgraw hill,new york,pp 628-634]。贫血的可能病因包括例如失血、缺乏营养(例如蛋白质膳食摄入减少)、药物反应、与骨髓有关的各种问题和多种疾病。更具体地说，贫血与包括例如以下的多种病症和病况有关：骨髓移植；实体瘤(例如乳腺癌、肺癌和结肠癌)；淋巴系统肿瘤(例如慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤)；造血系统肿瘤(例如白血病、骨髓增生异常综合征和多发性骨髓瘤)；放射疗法；化学疗法(例如含铂的方案)；炎性疾病和自身免疫性疾病，包括但不限于类风湿性关节炎、其它炎性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、急性或慢性皮肤疾病(例如银屑病)、炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)；急性或慢性肾病或肾衰竭，包括特性性或先天性病况；急性或慢性肝病；急性或慢性出血；其中因患者同种抗体或自身抗体和/或出于宗教原因(例如一些耶和华见证人)不可能输入红细胞的情况；感染(例如疟疾和骨髓炎)；血红蛋白病，包括例如镰状细胞病(贫血)、珠蛋白生成障碍性贫血；药物使用或滥用(例如酒精滥用)；因任何原因避免输血的患有贫血的儿科患者；和年长患者或患有基础性心肺疾病伴贫血、因担心有关循环超负荷而不能接受输血的患者[参见例如adamson(2008)harrison’s principles of internal medicine,17th ed.；mcgraw hill,newyork,pp 628-634]。在一些实施方案中，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可用来治疗或预防与本文公开的一种或多种病症或病况有关的贫血。
[0575]
许多因素可对癌症相关贫血产生影响。一些与疾病过程本身和炎性细胞因子(例如白介素-1、干扰素-γ)和肿瘤坏死因子的产生有关[bron等(2001)semin oncol 28(suppl 8)：1-6]。在它的作用当中，炎症诱导关键的铁-调节肽hepcidin，从而抑制铁自巨噬细胞输出，常常限制用于红细胞生成的铁可用性[参见例如ganz(2007)j am soc nephrol 18:394-400]。不同途径失血也可引起癌症相关贫血。因癌症进展所致贫血的发生率随癌症类型而变化，血细胞比容水平为前列腺癌中的5％到多发性骨髓瘤高达90％。癌症相关贫血对患者有重大后果，包括疲劳和生命质量下降、治疗功效降低和死亡率升高。在一些实施方案中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用来治疗癌症相关贫血。
[0576]
造血障碍性贫血可产生于骨髓的原发性功能障碍或衰竭。造血障碍性贫血包括：慢性病贫血、肾病贫血、代谢减退状态相关贫血和癌症相关贫血。在这些类型的每种中，内源性红细胞生成素水平对于所观察到的贫血程度不适当地低。其它造血障碍性贫血包括：早期缺铁性贫血和因骨髓损害引起的贫血。在这些类型中，内源性红细胞生成素水平对于所观察到的贫血程度不适当地升高。突出的实例可为由癌症和/或化学治疗药物或癌症放射疗法引起的骨髓抑制。临床试验的广泛综述发现轻度贫血可在化学疗法后发生于100％的患者中，而较严重的贫血可发生在高达80％的这类患者中[参见例如groopman等(1999)j natl cancer inst91:1616-1634]。骨髓抑制药物包括例如：1)烷化剂例如氮芥(例如美法仑)和亚硝基脲(例如链佐星)；2)抗代谢药例如叶酸拮抗剂(例如甲氨蝶呤)、嘌呤类似物(例如硫鸟嘌呤)和嘧啶类似物(例如吉西他滨)；3)细胞毒性抗生素例如蒽环类(例如多柔比星)；4)激酶抑制剂(例如吉非替尼)；5)有丝分裂抑制剂例如紫杉烷类(例如紫杉醇)和长春花属生物碱(例如长春瑞滨)；6)单克隆抗体(例如利妥昔单抗)；和7)拓扑异构酶抑制剂(例如托泊替康和依托泊苷)。另外，导致低代谢率的病况可产生轻度-中度造血障碍性贫血。在这类病况中有内分泌缺乏状态。例如贫血可发生在艾迪生病(addison’s disease)、甲状腺机能减退、甲状旁腺功能亢进或去雄或用雌激素治疗的男性。在一些实施方案中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用来治疗造血障碍性贫血。
[0577]
慢性肾病有时与造血障碍性贫血有关，且贫血程度在严重程度上随肾损害水平变化。这类贫血主要由红细胞生成素产生不足和红细胞存活减少引起。慢性肾病通常在数年或数十年间逐步进行到末期(第5期)疾病，在该点上患者生存需要透析或肾移植。贫血常常在该进程早期发生，并随疾病进展恶化。肾病所致贫血的临床结果被充分证实，包括发生左心室肥大、认知功能减退、生命质量下降和免疫功能改变[参见例如levin等(1999)am j kidney dis 27:347-354；nissenson(1992)am j kidney dis20(suppl 1)：21-24；revicki等(1995)am j kidney dis 25:548-554；gafter等(1994)kidney int 45:224-231]。在一些实施方案中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用来治疗与急性或慢性肾病或肾衰竭有关的贫血。
[0578]
产生于足量体积的急性失血(例如来自创伤或产后出血)的贫血称为急性出血后贫血。急性失血最初引起血容量减少而无贫血，因为存在rbc连同血液组分成比例的耗减。然而，血容量减少可快速引发将流体自血管外转移到血管区室的生理机制，这导致血液稀释和贫血。如果是慢性的话，失血逐步耗减体内铁储存并最终导致铁缺乏。在一些实施方案
中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用来治疗由急性失血引起的贫血。
[0579]
缺铁性贫血在铁缺乏增加的逐步进展中是终末期，所述铁缺乏包括作为中期的铁负平衡和缺铁性红细胞生成。铁缺乏可产生于铁需求增加、铁摄取减少或铁丢失增加，正如以例如妊娠、不当饮食、肠吸收不良、急性或慢性炎症和急性或慢性失血等病况为例说明的。在该类型的轻度-中度贫血的情况下，骨髓保持低增殖，且rbc形态大多正常；然而，即使轻度贫血也可产生一些小细胞低色素性rbc，且向重度铁-缺陷型贫血的转变伴有骨髓的过度增殖和日益普遍的小红细胞和血红蛋白过少的rbc[参见例如adamson(2008)harrison’s principles ofinternal medicine,17th ed.；mcgraw hill,new york,pp 628-634]。缺铁性贫血的合适疗法取决于其病因和严重程度，以口服铁制剂、胃肠外铁制剂和rbc输入作为主要常规选择。在一些实施方案中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用来治疗慢性铁缺乏。
[0580]
骨髓增生异常综合征(mds)是一类多种多样的血液病况，其特征在于骨髓血细胞产生失效和转化成急性髓细胞性白血病的风险。在mds患者中，血液干细胞不长成健康的红细胞、白细胞或血小板。mds病症包括例如难治性贫血、带有环铁粒幼红细胞的难治性贫血、带有过量胚细胞的难治性贫血、带有转化中的过量胚细胞的难治性贫血、难治性血细胞减少症伴多谱系发育异常和与分离的5q染色体异常相关的骨髓增生异常综合征。因为这些病症在造血细胞的数量和质量两方面出现不可逆的缺陷，所以大多数mds患者患上慢性贫血。因此，mds患者最终需要血液输血和/或用生长因子(例如红细胞生成素或g-csf)治疗以提高红细胞水平。然而，许多mds患者出现因这类疗法的频率引起的副作用。例如经常性频繁红细胞输注的患者显示因额外铁积累引起组织和器官损害。因此，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用于治疗患有mds的患者。在某些实施方案中，患有mds的患者可使用任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗。在其它实施方案中，患有mds的患者可使用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体和一种或多种用于治疗mds的其它治疗剂的组合治疗，所述其它治疗剂包括例如沙利度胺、来那度胺、阿扎胞苷、地西他滨、红细胞生成素、去铁胺、抗胸腺细胞球蛋白和非格司亭(g-csf)。
[0581]
根据铁动力学研究最初与再生障碍性贫血、出血或外周性溶血区分开来[参见例如ricketts等(1978)clin nucl med 3:159-164]，无效红细胞生成描述了鉴于存在于骨髓中的祖红细胞(成红细胞)的数目其中成熟rbc的产生小于可预期的数目的各种各样的贫血[tanno等(2010)adv hematol 2010:358283]。在这类贫血中，组织缺氧持续，尽管红细胞生成素水平因无效的成熟rbc产生所致升高。有缺陷的循环最终发展成其中升高的红细胞生成素水平驱动成红细胞大量扩增，甚至在治疗性rbc输入下，都可能因髓外红细胞生成[参见例如aizawa等(2003)am jhematol 74:68-72]、成红细胞诱导的骨病理[参见例如di matteo等(2008)j biol regul homeost agents 22:211-216]和组织铁超负荷所致导致脾大(脾增大)[参见例如pippard等(1979)lancet 2:819-821]。因此，通过提高红细胞生成有效性，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可打破前述循环，因此不仅仅减轻基础性贫血，而且还减轻红细胞生成素水平升高、脾大、骨病理和组织铁超负荷的相关并发症。在一些实施方案中，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可用于
治疗或预防无效红细胞生成，包括贫血和epo水平升高以及并发症例如脾大、成红细胞诱导的骨病理、铁超负荷及其伴之而来的病理。至于脾大，这类病理包括胸痛或腹痛和网状内皮增生。髓外血细胞生成不仅可发生在脾中，还可能以髓外造血性假性肿瘤的形式存在于其它组织中[参见例如musallam等(2012)cold spring harb perspect med2:a013482]。至于成红细胞诱导的骨病理，伴之而来的病理包括低骨矿物质密度、骨质疏松症和骨痛[参见例如haidar等(2011)bone48:425-432]。至于铁超负荷，伴之而来的病理包括hepcidin抑制和膳食铁吸收过多[参见例如musallam等(2012)blood rev 26(suppl 1)：s16-s19]、多发性内分泌病和肝纤维变性/肝硬化[参见例如galanello等(2010)orphanet j rare dis 5:11]和铁超负荷心肌病[lekawanvijit等，2009，can j cardiol 25:213-218]。
[0582]
无效红细胞生成的最常见的原因是珠蛋白生成障碍性贫血综合征、其中完整α-和β-血红蛋白链产生失衡导致成红细胞成熟期间细胞凋亡增加的遗传性血红蛋白病[参见例如schrier(2002)curr opin hematol9:123-126]。珠蛋白生成障碍性贫血总体上是全世界最常见的遗传病症，预测在美国和全球其变动的流行病学模式引起不断增长的公共健康问题[vichinsky(2005)ann ny acad sci 1054:18-24]。珠蛋白生成障碍性贫血综合征根据其严重程度命名。因此，α-珠蛋白生成障碍性贫血包括轻型α-珠蛋白生成障碍性贫血(亦称为α-珠蛋白生成障碍性贫血特性；2个受影响的α-珠蛋白基因)、血红蛋白h病(3个受影响的α-珠蛋白基因)和重型α-珠蛋白生成障碍性贫血(亦称为卵泡积液；4个受影响的α-珠蛋白基因)。β-珠蛋白生成障碍性贫血包括轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血(亦称为β-珠蛋白生成障碍性贫血特性；1个受影响β-珠蛋白基因)、中间型β-珠蛋白生成障碍性贫血(2个受影响的β-珠蛋白基因)、血红蛋白e珠蛋白生成障碍性贫血(2个受影响的β-珠蛋白基因)和重型β-珠蛋白生成障碍性贫血(亦称为库利氏贫血(cooley’s anemia)；2个受影响的β-珠蛋白基因，造成β-珠蛋白蛋白质完全缺乏)。β-珠蛋白生成障碍性贫血影响多个器官，与可观的发病率和死亡率有关，并且目前需要终身治疗。虽然患有β-珠蛋白生成障碍性贫血的患者预期寿命近年来因使用与铁螯合疗法组合的常规输血所致延长，但产生于输血和铁的过量胃肠吸收的铁超负荷可引起严重的并发症，例如心脏病、血栓形成、性腺功能减退症、甲状腺机能减退、糖尿病、骨质疏松症和骨质减少[参见例如rund等(2005)n engl j med 353:1135-1146]。在某些实施方案中，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体，可用于治疗或预防珠蛋白生成障碍性贫血综合征。
[0583]
在一些实施方案中，除珠蛋白生成障碍性贫血综合征以外，任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体还可用于治疗无效红细胞生成的病症。这类病症包括铁粒幼细胞贫血(遗传性或先天性)；红细胞生成异常性贫血(i和ii型)；镰状细胞性贫血；遗传性球形细胞增多症；丙酮酸激酶缺乏；可能由例如叶酸缺乏(因先天疾病、摄取减少或需求增加所致)、钴胺素缺乏(因先天疾病、恶性贫血、吸收减低、胰功能不全或摄取减少所致)、某些药物或不明原因(先天性红细胞生成异常性贫血、难治性巨红细胞性贫血或红白血病)等情况引起的巨红细胞性贫血；包括例如骨髓纤维变性(骨髓组织异生)和脊髓痨在内的骨髓病性贫血；先天性红细胞生成性卟啉症和铅中毒。
[0584]
在某些实施方案中，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可与用于无效红细胞生成的支持疗法联用。这类疗法包括输入红细胞或全血以治疗贫血。在慢性或遗传性贫血中，铁稳态的正常机制被重复输血克制，最终导致铁在例如心脏、肝和内分
泌腺等活组织中的中毒性和可能致死蓄积。因此，对患有慢性无效红细胞生成的患者的支持疗法还包括用一种或多种铁螯合分子处理以促进尿和/或大便中的铁排泄，从而防止或逆转组织铁超负荷[参见例如hershko(2006)haematologica 91:1307-1312；cao等(2011)，pediatr rep 3(2)：e17]。有效的铁螯合剂应能够选择性结合和中和三价铁这种非运铁蛋白结合铁的氧化形式，这可能解释大多数的铁毒性通过催化产生羟基和氧化产物[参见例如esposito等(2003)blood 102:2670-2677]。这些螯合剂在结构上是多样化的，但所有都具有氧或氮供体原子能够与单个铁原子以1:1(六齿螯合剂)、2:1(三齿)或3:1(二齿)的化学计量关系形成中和性八面体配位络合物[kalinowski等(2005)pharmacol rev 57:547-583]。一般而言，有效的铁螯合剂还是相对低分子量的(例如小于700道尔顿)，在水和脂质两者中的溶解度使得能够接近受累组织。铁螯合分子的具体实例包括去铁胺、需要每日胃肠外给予的细菌源的六齿螯合剂和口服活性合成剂去铁酮(二齿)和地拉罗司(三齿)。由同日给予两种铁螯合剂组成的组合疗法在对螯合疗法单一疗法无反应的患者中显示出希望，并且还克服了仅用去铁胺顺应性差的患者中的问题[cao等(2011)pediatr rep 3(2)：e17；galanello等(2010)ann ny acad sci 1202:79-86]。
[0585]
如本文所用，“与
……
组合”或“共同给药”是指使得第二疗法在体内仍然有效的任何给药形式(例如两种化合物在患者中同时有效，这可包括两种化合物的协同效应)。有效性可能与药剂在血液、血清或血浆中的可测量浓度无关。例如不同的治疗药化合物可在同一制剂或单独的制剂中共同或序贯给予并以不同的方案给予。因此，接受这类治疗的个体可获益于不同疗法的综合作用。本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可与一种或多种其它另外的药剂或支持疗法同时、在其之前或之后给予。一般而言，可以针对该具体治疗剂确定的某一剂量和/或按某一时间表给予每种治疗剂。在方案中采用的具体组合应考虑本公开内容的拮抗剂与疗法和/或要达到的所需治疗作用的相容性。
[0586]
在某些实施方案中，对于无效红细胞生成，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可与hepcidin或hepcidin激动剂联用。一种主要产生于肝的循环多肽hepcidin由于其诱导ferroportin(一种位于吸收性肠细胞、肝细胞和巨噬细胞的铁输出蛋白)降解的能力而被视为铁代谢的主要调节剂。一般地说，hepcidin降低胞外铁的可用性，因此hepcidin激动剂在治疗无效红细胞生成中可能是有益的[参见例如nemeth(2010)adv hematol 2010:750643]。这个看法得到得到β-珠蛋白生成障碍性贫血小鼠模型中hepcidin表达的有益作用的支持[gardenghi等(2010)j clin invest 120:4466-4477]。
[0587]
任选与epo受体激活物组合的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体还可适用于治疗无序rbc成熟性贫血，其特征部分在于不够大(小红细胞)、过大(大红细胞)、畸形或异常着色(血蛋白过少)的rbc。
[0588]
在某些实施方案中，本公开内容提供通过给予个体治疗有效量的本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体和epo受体激活物治疗或预防有需要的个体的贫血的方法。在某些实施方案中，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可与epo受体激活物联用以降低易受epo不良反应影响的患者中这些激活物的所需剂量。这些方法可用于患者的治疗性或预防性治疗。
[0589]
本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可与epo受体激活物联用以实现红细胞的增加，特别在epo受体激活物较低的剂量范围内。这在降低已知的脱靶作用
和与高剂量epo受体激活物有关的风险中可能是有益的。epo的初级不良反应包括例如血细胞比容或血红蛋白水平的过度增加和红细胞增多。血细胞比容水平升高可导致高血压(更具体地说高血压加重)和血管血栓形成。已报道的epo的其它不良反应，其中一些与高血压有关，有头痛、流感样综合征、分流的阻断、因血栓形成引起的心肌梗死和脑惊厥、高血压脑病和红细胞血细胞发育不全。参见例如singibarti(1994)j.clin investig 72(suppl 6),s36-s43；horl等(2000)nephrol dial transplant 15(suppl 4),51-56；delanty等(1997)neurology 49,686-689；以及bunn(2002)n engl j med 346(7),522-523)。
[0590]
如果本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体通过不同于epo的机制起作用，则这些拮抗剂可用于在对epo反应不良的患者中提高红细胞和血红蛋白水平。例如本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体可能有利于这样的患者，其中给予该患者正常到剂量升高的epo(》300iu/kg/周)无法使血红蛋白水平上升至目标水平。对epo反应不足的患者可见于所有类型的贫血中，但在癌症患者和晚期肾病患者中特别频繁地观察到更高数量的非应答者。对epo反应不足可以是组成型(在第一次用epo治疗时即观察到)或获得性的(在用epo反复治疗后观察到)。
[0591]
在某些实施方案中，本公开提供了用于通过测量患者体内一项或多项血液学参数来管理患者的方法，所述患者已经用(或是作为候选者将用)本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗。所述血液学参数可用于评价用于患者(其为待用本公开内容的拮抗剂治疗的候选者)的合适剂量、用于监测治疗期间的血液学参数、用于评价在用本公开内容的一种或多种拮抗剂治疗期间是否调整剂量和/或用于评价本公开内容的一种或多种拮抗剂的合适的维持剂量。如果所述血液学参数中的一项或多项在正常水平之外，则本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体的给药可减少、推迟或终止。
[0592]
可采用本领域公认的方法，按照本文提供的方法，测量的血液学参数包括例如红细胞水平、血压、铁储存以及与红细胞水平升高相关的存在于体液中的其它作用剂。这类参数可使用患者血样测定。红细胞水平、血红蛋白水平和/或血细胞比容水平的升高可能引起血压升高。
[0593]
在一个实施方案中，如果作为用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗的候选者的患者中一项或多项血液学参数在正常范围以外或在正常的高位，则开始给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可能被推迟直到所述血液学参数自然地或通过治疗干预回复正常或可接受水平。例如，如果候选患者有高血压或高血压前期，则患者可用降压药治疗以降低患者的血压。可使用适于各个患者状况的任何降压药，包括例如利尿药、肾上腺素能抑制剂(包括α阻断剂和β阻断剂)、血管扩张药、钙通道阻断剂、血管紧张素转化酶(ace)抑制剂或血管紧张素ii受体阻断剂。血压可备选地使用饮食和运动方案治疗。同样，如果候选患者具有低于正常的或在正常低位的铁储存，则患者可用合适的饮食和/或铁补充剂方案治疗直到患者的铁储存回复到正常或可接受水平。对于具有高于正常的红细胞水平和/或血红蛋白水平的患者而言，则给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体可能被推迟直到所述水平回复到正常或可接受水平。
[0594]
在某些实施方案中，如果作为用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗的候选者的患者中一项或多项血液学参数在正常范围以外或在正常的高位，则开始给药可能不被推迟。然而，本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体的给
药剂量或频率可能被设定为这样的量，其将降低在给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体时产生的不可接受的血液参数升高的风险。或者，可开发针对所述患者的治疗方案，其将本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体与解决不期望的血液学参数水平的治疗剂组合。例如，如果患者的血压升高，则可设计涉及给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体和降压药的治疗方案。对于具有低于所需铁储存的患者，可开发这样的治疗方案，其包括本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体和铁补充的治疗方案。
[0595]
在一个实施方案中，可针对作为待用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗的候选者的患者和针对该患者基于基线值确立的合适给药方案，确立一项或多项血液学参数的基线参数。或者，基于患者病史确立的基线参数可用于了解用于患者的合适给药方案。例如，如果健康患者的已确立的基线血压读数高于规定的正常范围，则在用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗前，可能不必将所述患者的血压降到被认为对于普通人群是正常的范围。在用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗之前患者的一项或多项血液学参数的基线值还可用作相关比较值用于监测在用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗期间所述血液学参数的任何变化。
[0596]
在某些实施方案中，测量用本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗的患者的一项或多项血液学参数。血液学参数可用于在治疗期间监测所述患者并允许调整或终止给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体或额外给予另一种治疗剂。例如，如果给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体导致血压、红细胞水平或血红蛋白水平升高或铁储存减少，则可减少本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体的剂量或频率以降低本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体对一项或多项血液学参数的影响。如果给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体导致一项或多项血液学参数出现对患者不利的变化，则可暂时终止给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体直到血液学参数回复到可接受的水平，或可永久终止给药。同样，如果在减少本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体的剂量或频率之后，一项或多项血液学参数仍未回复到可接受的范围内，则可终止给药。作为减少或终止给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体的备选方式或除此之外，可向所述患者给予应对不期望的血液学参数水平的其它治疗剂，例如降压药或铁补充剂。例如，如果正在接受本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体治疗的患者的血压升高，则可以相同水平继续给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体并向治疗方案中加入降压药、可减少给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体(例如量和/或频率)并向治疗方案中加入降压药、或可终止给予本公开内容的一种或多种tgf-β超家族异多聚体复合体并可用降压药治疗患者。
[0597]
6.药物组合物
[0598]
在某些方面，本公开内容的tgf-β超家族异多聚体复合体可以单独给予或作为药物制剂(亦称为治疗组合物或药物组合物)的组分给予。药物制剂是指呈如此形式使得允许其中所含活性成分的生物活性起效并且不含对将向其给予制剂的受试者具有不可接受的毒性的其它组分的制品。可配制主题化合物以用于人或兽医用药的任何便利方式给药。例
如，本公开内容的一种或多种作用剂可与药学上可接受的载体一起配制。药学上可接受的载体是指药物制剂中活性成分之外的成分，其通常对受试者是无毒的。药学上可接受的载体包括但不限于：缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。通常，用于本公开内容的药物制剂当给予受试者时是无热原的、生理学上可接受的形式。可任选包括在上述制剂中的本文所述作用剂以外的治疗有益的作用剂，在本公开内容的方法中可与主题作用剂组合给予。
[0599]
在某些实施方案中，组合物将肠胃外给予[例如通过静脉内(i.v.)注射、动脉内注射、骨内注射、肌内注射、鞘内注射、皮下注射或皮内注射]。适用于肠胃外给药的药物组合物可包含本公开内容的一种或多种作用剂与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液或无菌粉末(其可在临用前重配成无菌注射剂或分散剂)的组合。注射注射剂或分散剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、助悬剂、增稠剂或使制剂与预定接受者的血液等渗的溶质。可用于本公开内容的药物制剂中的合适的水性或非水性载体的实例包括：水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、植物油(例如橄榄油)、注射用有机酯(例如油酸乙酯)及其合适的混合物。例如可通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、通过在分散剂的情况下保持所需的粒径以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
[0600]
在一些实施方案中，本公开内容的治疗方法包括从植入物或装置全身或局部给予药物组合物。另外，药物组合物可以一定形式包封或注射用于递送至靶组织部位(例如骨髓或肌肉)。在某些实施方案中，本公开内容的组合物可包含能够将本公开内容的一种或多种作用剂递送至靶组织部位(例如骨髓或肌肉)的基质，为发育中的组织提供结构并最好能够被身体再吸收。例如，所述基质可提供本公开内容的一种或多种作用剂的缓慢释放。这类基质可由目前用于其它植入的医疗应用的材料形成。
[0601]
基质材料的选择基于以下一项或多项：生物相容性、生物降解能力、机械性能、美容外观和界面性质。主题组合物的具体应用将界定适当的制剂。用于组合物的可能基质可以是生物可降解的和化学成分确定的硫酸钙、磷酸三钙、羟磷灰石、聚乳酸和聚酐。其它可能的材料是生物可降解的和生物学成分清晰确定的，例如骨或真皮胶原。其它基质由纯的蛋白质或胞外基质组分组成。其它可能的基质是非生物可降解的和化学成分确定的，例如烧结羟磷灰石、生物玻璃、铝酸盐或其它陶瓷。基质可由任何上述材料类型的组合组成，例如聚乳酸和羟磷灰石或胶原和磷酸三钙。生物陶瓷在组成方面可改变(例如钙-铝酸盐-磷酸盐)，并进行加工以改变孔径、颗粒大小、颗粒形状和生物降解能力的一项或多项。
[0602]
在某些实施方案中，本公开内容的药物组合物可局部给予。“局部施用”或“局部”意指药物组合物与身体表面(包括例如皮肤、伤口部位和粘膜)接触。局部药物组合物可具有不同的应用形式，通常包含含药层，其适于在局部给予组合物时置于组织附近或与组织直接接触。适于局部给药的药物组合物可包含本公开内容的一种或多种tgfβ超家族i型和/或ii型受体多肽复合体，组合配制成液体制剂、凝胶剂、乳膏剂、洗剂、软膏剂、泡沫剂、糊剂、擦粉剂(putty)、半固体剂或固体剂。可通过将组合物在靶组织上涂撒、喷雾、涂抹、涂敷或铺展，施用液体剂、凝胶剂、乳膏剂、洗剂、软膏剂、泡沫剂、糊剂或擦粉形式中的组合物。还可将组合物浸入无菌敷料剂、透皮贴剂、硬膏和绷带中。擦粉剂、半固体剂或固体剂形式的组合物可能是可变形的。它们可以是弹性或无弹性的(例如柔性或刚性)。在某些方面，组合物形成复合物的一部分，并可包括纤维、微粒或具有相同或不同组合物的多个层。
[0603]
液体形式的局部组合物可包括药学上可接受的溶液剂、乳剂、微乳剂和混悬剂。除活性成分以外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，包括例如水或其它溶剂、增溶剂和/或乳化剂[例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸乙酯、丙二醇或1,3-丁二醇、油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、失水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物]。
[0604]
局部凝胶剂、乳膏剂、洗剂、软膏剂、半固体或固体组合物可包括一种或多种增稠剂，例如多糖、合成聚合物或基于蛋白质的聚合物。在本发明的一个实施方案中，本文的胶凝剂是适当无毒的且提供所需粘度的胶凝剂。增稠剂可包括以下的聚合物、共聚物和单体：乙烯吡咯烷酮、甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺n-乙烯基咪唑、羧基乙烯基、乙烯基酯、乙烯基醚、硅酮、聚氧化乙烯、聚乙二醇、乙烯基醇、丙烯酸钠、丙烯酸盐、马来酸、nn-二甲基丙烯酰胺、双丙酮丙烯酰胺、丙烯酰胺、丙烯酰吗啉、普朗尼克酸、胶原、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚亚乙烯基、聚硅酸乙烯酯、被糖(例如蔗糖、葡萄糖、氨基葡萄糖、半乳糖、海藻糖、甘露糖或乳糖)取代的聚丙烯酸酯、丙烯酰胺基丙烷磺酸、正硅酸四甲氧基酯、正硅酸甲基三甲氧基酯、正硅酸烷氧基酯、正硅酸三烷氧基酯、二醇、丙二醇、甘油、多糖、藻酸盐、葡聚糖、环糊精、纤维素、改性纤维素、氧化纤维素、脱乙酰壳多糖、壳多糖、瓜尔胶、角叉菜胶、透明质酸、菊糖、淀粉、改性淀粉、琼脂糖、甲基纤维素、植物树胶、乙酰透明质酸、水凝胶、明胶、糖胺聚糖、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、果胶、低甲氧基果胶、交联葡聚糖、淀粉-丙烯腈接枝共聚物、淀粉聚丙烯酸钠、甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟乙酯、聚亚乙烯、聚乙基乙烯基醚、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、聚氨酯、聚链烷酸酯、聚乳酸、聚乳酸酯、聚(3-羟基丁酸酯)、磺化水凝胶、amps(2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙磺酸)、sem(甲基丙烯酸磺乙酯)、spm(甲基丙烯酸磺丙酯)、spa(丙烯酸磺丙酯)、n,n-二甲基-n-甲基丙烯酰氧基乙基-n-(3-磺丙基)铵甜菜碱、甲基丙烯酸酰氨基丙基-二甲基铵磺基甜菜碱、spi(衣康酸-双(1-丙基磺酸-3)酯二钾盐)、衣康酸、ambc(3-丙烯酰氨基-3-甲基丁酸)、β-羧基乙基丙烯酸酯(丙烯酸二聚体)和马来酸酐-甲基乙烯基醚聚合物、其衍生物、其盐、其酸及其组合。在某些实施方案中，本公开内容的药物组合物可口服给予，例如为胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味基料例如蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂、水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂、水包油或油包水液体乳剂或酏剂或糖浆剂或含锭剂(使用惰性基料，例如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯树胶)和/或漱口剂的形式，各含有预定量的本公开内容的化合物和任选一种或多种其它活性成分。本公开内容的化合物和任选一种或多种其它活性成分还可作为大丸剂、药糖剂或糊剂给予。
[0605]
在用于口服给药的固体剂型(例如胶囊剂、片剂、丸剂、糖衣丸、散剂和颗粒剂)中，可将本公开内容的一种或多种化合物与包括例如以下的一种或多种药学上可接受的载体混合：柠檬酸钠、磷酸二钙、填充剂或增充剂(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸)、粘合剂(例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶)、湿润剂(例如甘油)、崩解剂(例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、硅酸盐和碳酸钠)、溶液阻滞剂(例如石蜡)、吸收促进剂(例如季铵化合物)、润湿剂(例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)、吸收剂(例如高岭土和膨润土)、润滑剂(例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)、着色剂及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，药物制剂(组合物)还可包含缓冲剂。在使用包括乳糖以及高分子量聚乙二醇等在内的一种或多种赋形
剂的软充填和硬充填明胶胶囊剂中，相似类型的固体组合物也可用作填充剂。
[0606]
用于药物组合物的口服给药的液体剂型可包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型可含有常用于本领域的惰性稀释剂，包括例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂[例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物]。除惰性稀释剂以外，口服制剂还可包含辅料，包括例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂及其组合。
[0607]
除活性化合物以外，混悬剂可含有助悬剂，包括例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其组合。
[0608]
可通过加入多种抗细菌剂和抗真菌剂，包括例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，来确保防止微生物的作用。
[0609]
在某些实施方案中，组合物中还可能需要包含等渗剂，包括例如糖、氯化钠。另外，可通过加入延迟吸收的物质(例如单硬脂酸铝和明胶)，使可注射药物形式的吸收延长。
[0610]
要了解，主治医师可在考虑修正本公开内容的一种或多种作用剂的作用的各种因素后，确定剂量方案。在促进红细胞形成的tgf-β超家族异多聚体复合体的情况下，各种因素可包括但不限于患者的红细胞计数、血红蛋白水平、所需的目标红细胞计数、患者年龄、患者性别、患者饮食、可能造成红细胞水平下降的任何疾病的严重程度、给药时间和其它临床因素。向最终的组合物中加入其它已知活性剂也可能影响剂量。可通过定期评价红细胞水平、血红蛋白水平、网织红细胞水平和造血过程的其它指示物的一项或多项来监测过程。
[0611]
在某些实施方案中，本公开内容还提供用于体内产生本公开内容的一种或多种作用剂的基因疗法。这类疗法可通过将作用剂序列引入受累于上文所列病症的细胞或组织中，来达到其治疗效果。可使用重组表达载体(例如嵌合病毒或胶体分散系统)实现作用剂序列的递送。本公开内容的一种或多种作用剂序列优选的治疗递送是使用靶向脂质体。
[0612]
可用于本文教导的基因疗法的各种病毒载体包括腺病毒、疱疹病毒、痘苗病毒或优选rna病毒(例如反转录病毒)。反转录病毒载体是鼠或禽反转录病毒的衍生物。其中可插入单一外源基因的反转录病毒载体的实例包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(momulv)、harvey鼠肉瘤病毒(hamusv)、鼠乳腺肿瘤病毒(mumtv)和劳斯肉瘤病毒(rous sarcoma virus,rsv)。许多其它的反转录病毒载体可掺入多个基因。所有的这些载体可转移或整合选择标记的基因，使得可鉴定和产生转导细胞。可通过连接例如糖、糖脂或蛋白质，使反转录病毒载体具有靶标特异性。通过使用抗体来完成优选的打靶。本领域的技术人员应认识到，可将特异性多核苷酸序列插入反转录病毒基因组或与病毒包膜连接，以供含有本公开内容的一种或多种作用剂的反转录病毒载体的靶标特异性递送。
[0613]
或者，可通过常规磷酸钙转染，将组织培养细胞用编码反转录病毒结构基因gag、pol和env的质粒直接转染。然后将这些细胞用含有目标基因的载体质粒转染。所得细胞释放反转录病毒载体到培养基中。
[0614]
本公开内容的一种或多种作用剂的另一种靶定递送系统是胶体分散系统。胶体分散系统包括大分子复合体、纳米囊、微球、珠粒和脂质型系统，包括水包油乳液、微团、混合
微团和脂质体。在某些实施方案中，优选的本公开内容的胶体系统是脂质体。脂质体是可体外和体内用作递送载体的人工膜囊泡。rna、dna和完整病毒体可包封在水性内部，并以生物活性形式递送至细胞。参见例如fraley等(1981)trends biochem.sci.,6:77。使用脂质体载体的有效基因转移方法是本领域已知的，参见例如mannino等(1988)biotechniques,6:682,1988。
[0615]
脂质体的组成一般是磷脂的组合，磷脂可包括类固醇(例如胆固醇)。脂质体的物理特性取决于ph、离子强度和二价阳离子的存在情况。还可使用的其它磷脂或其它脂质包括例如磷脂酰化合物，例如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、脑苷脂和神经节苷脂。说明性的磷脂包括蛋黄磷脂酰胆碱(egg phosphatidylcholine)、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱。根据例如器官特异性、细胞特异性和细胞器特异性靶定脂质体也是可行的，并且是本领域已知的。
[0616]
实例
[0617]
现对本发明进行了大致描述，通过参照下列实施例可更容易地理解本发明，只包括用于说明本发明的某些实施方案和实施方案的目的的实施例，并无意限制本发明。
[0618]
实施例1.actriib-fc:alk4-fc异二聚体的产生
[0619]
申请人构建了包含人actriib和人alk4的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriib-fc:alk4-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc融合多肽和alk4-fc融合多肽，下面提供每个的序列。
[0620]
与actriib-fc或alk4-fc同二聚体复合体不同，用于促进actriib-fc:alk4-fc异聚体复合体形成的方法是将变化引入fc结构域的氨基酸序列中以指导不对称异聚体复合体的形成。本公开内容描述了使用fc结构域制备不对称相互作用对的许多不同的方法。
[0621]
在一种方法中，分别在seq id no:100-102和104-106的actriib-fc和alk4-fc多肽序列中说明的，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。actriib-fc融合多肽和alk4-fc融合多肽各自使用组织纤溶酶原激活物(tpa)前导序列：mdamkrglccvlllcgavfvsp(seq id no:98)。
[0622]
actriib-fc多肽序列(seq id no:100)见下：
[0623][0624][0625]
前导(信号)序列和接头用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文换)引入上文所示actriib融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端除去赖氨酸(k)的seq id no:100的氨基酸序列。
[0626]
该actriib-fc融合蛋白由下列核酸序列(seq id no:101)编码：
[0627][0628]
成熟的actriib-fc融合多肽(seq id no:102)如下，并且可任选提供从c端脱去赖氨酸的多肽。
[0629][0630]
alk4-fc融合多肽的互补形式(seq id no:104)如下：
[0631][0632]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上述seq id no:100和102的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示alk4-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供在c端加入赖氨酸的seq id no:104的氨基酸序列。
[0633]
该alk4-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:105)编码：
[0634][0635][0636]
成熟的alk4-fc融合蛋白序列(seq id no:106)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0637][0638]
seq id no:102和seq id no:106的actriib-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0639]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入分别如seq id no:401-402和403-404的actriib-fc和alk4-fc多肽序列所示的互补疏水相互作用和其它分子间二硫键。actriib-fc融合多肽和alk4-fc融合多肽各自使用组织纤溶酶原激活物(tpa)前导序列：mdamkrglccvlllcgavfvsp(seq id no:98)。
[0640]
actriib-fc多肽序列(seq id no:401)见下：
[0641][0642][0643]
前导(信号)序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:401的氨基酸序列。
[0644]
成熟的actriib-fc融合多肽如下：
[0645][0646]
alk4-fc融合多肽的互补形式(seq id no:403)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的多肽。
[0647][0648]
前导序列和接头用下划线表示。为了引导用上文seq id no:401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk4融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:403的氨基酸序列。
[0649]
成熟的alk4-fc融合蛋白序列如下并可任选以从c端脱去赖氨酸的序列提供。
[0650][0651]
seq id no:402和seq id no:404的actriib-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0652]
不同的actriib-fc:alk4-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0653]
实施例2.与actriib-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比actriib-fc:alk4-fc异二聚体的配体结合特征
[0654]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以比较上文所述actriib-fc:alk4-fc异二聚体复合体与actriib-fc和alk4-fc同二聚体复合体的配体结合选择性。使用抗fc抗体将actriib-fc:alk4-fc异二聚体、actriib-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影表示。
[0655]
配体解离速率是评价配体阱的特别重要的参数。体内给予的可溶性受体-fc蛋白与配体的天然受体不断竞争。当tgfβ超家族的内源配体典型地在细胞表面与关联受体结合时，多步骤信号转导过程被触发，其在分子时间尺度上相对慢。天然受体部分从配体上慢慢解离，因为从配体结合事件产生胞内信号需要相当的时间。对于与配体有效竞争的可溶性受体-fc蛋白，其复合体与配体的解离速率需要相当于或慢于配体复合体与天然受体的解离速率。配体结合是一个动态过程，一部分的配体将总是处于未结合形式，因此受体-fc蛋白尽可能久地俘获靶配体的剂量在治疗上是重要的。改变有利于更多俘获配体的结合平衡的一种方法是提高抑制剂的浓度(剂量水平)，然而这可能产生降低耐受性和安全性的脱靶
作用。优选的方法是使用具有较慢配体解离速率(较长俘获时间)与配体结合选择性组合的抑制剂，以较低的抑制剂浓度实现配体拮抗作用的有效水平。
[0656][0657]
这些比较结合数据表明相对于actriib-fc或alk4-fc同二聚体，actriib-fc:alk4-fc异二聚体的结合特征/选择性改变。actriib-fc:alk4-fc异二聚体显示与任一种同二聚体相比与激活素b的结合增强，与用actriib-fc同二聚体观察到的一样保持与激活素a、gdf8和gdf11牢固结合，且显示与bmp9、bmp10和gdf3的结合大大减弱。具体地讲，bmp9显示针对actriib-fc:alk4-fc异二聚体低或无可观察的亲和力，而该配体与actriib-fc同二聚体牢固结合。像actriib-fc同二聚体一样，异二聚体保持与bmp6的中等水平结合。参见图6。
[0658]
这些结果因此表明与actriib-fc同二聚体相比，actriib-fc:alk4-fc异二聚体是更高选择性的激活素a、激活素b、gdf8和gdf11的拮抗剂。因此，在其中这类选择性拮抗作用是有利的某些应用中，actriib-fc:alk4-fc异二聚体将比actriib-fc同二聚体更有用。实例包括其中需要保持激活素a、激活素b、激活素ac、gdf8和gdf11的一种或多种的拮抗作用但使bmp9、bmp10和bmp6的一种或多种的拮抗作用减到最小的治疗应用。
[0659]
实施例3.小鼠中与actriib-fc同二聚体相比actriib-fc:alk4-fc异二聚体的活性特征
[0660]
在小鼠中测试同二聚体和异二聚体复合体以研究其体内活性特征的差异。从约10周龄(n＝9只小鼠/周)开始，每周两次皮下给予野生型c57bl/6小鼠actriib-fc同二聚体(10mg/kg)、actriib-fc:alk4-fc异二聚体(3或10mg/kg)或溶媒(磷酸缓冲盐水，pbs)达4
周。如通过表面等离子体共振测定的，因其在无细胞条件下无法以高亲和力结合配体，故未体内测定alk4-fc同二聚体。研究终点包括：在基线和研究完成(4周)通过核磁共振(nmr)测定的体重、总瘦体质量(total lean mass)和总脂肪质量；在基线和4周通过双能x光吸光测定法(dexa)测定的总骨矿物质密度；以及在4周测定的腓肠肌、股直肌和胸肌重量。
[0661][0662][0663]
研究结果概括于上表中。正如所预期的，actriib-fc同二聚体引起身体组成的显明变化，许多与gdf8和激活素抑制的已知作用一致。与溶媒治疗对照相比，用actriib-fc同二聚体治疗野生型小鼠在研究过程中体重增加超过两倍。与溶媒相比，伴随这种净体重增加的是总瘦体质量和总骨矿物质密度的显著增加，以及总脂肪质量的显著降低。应认识到，瘦组织和脂肪组织的归一化(百分比型)变化不同于其相应的绝对变化，因为瘦体质量(小鼠中通常约为体重的70％)远大于脂肪质量(通常约为体重的10％)。检查各个骨骼肌(包括腓肠肌、股直肌和胸肌)，用actriib-fc同二聚体治疗过程中，与溶媒对照相比，所有的重量都显著增加。
[0664]
actriib-fc:alk4-fc异二聚体产生惊人地类似于actriib-fc同二聚体的某些作用，尽管两种复合体的差异性配体选择性。如上表所示，对于所列的所有终点，小鼠以10mg/kg的剂量水平用actriib-fc:alk4-fc异二聚体治疗比得上、几乎比得上或超过相同剂量水平的actriib-fc同二聚体的作用。对于几项终点，与10mg/kg相比，3mg/kg的actriib-fc:alk4-fc异二聚体的作用轻微减弱，因此提供剂量-作用关系的证据。
[0665]
因此，actriib-fc:alk4-fc异二聚体对骨骼肌和骨发挥有益的合成代谢作用，并对脂肪组织发挥分解代谢作用，与actriib-fc同二聚体的作用非常类似。然而，与actriib同二聚体不同，actriib-fc:alk4-fc异二聚体对bmp9和bmp10只显示低亲和力或瞬时结合，因此不会同时抑制由所述配体介导的过程，例如血管生成。这种新的选择性在例如治疗需要对肌肉和骨的刺激作用和对脂肪的抑制作用，但不需要改变血管生成的患者中将是有用的。
[0666]
实施例4.actriib-fc:alk3-fc异二聚体的产生
[0667]
申请人构建了包含人actriib和人alk3的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriib-fc:alk3-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc和alk3-fc。
[0668]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriib-fc:alk3-fc的形成。
[0669]
在第一种方法中，在上文实施例1中以seq id no:100-102提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0670]
互补alk3-fc融合蛋白使用tpa前导序列，并列举如下：
[0671][0672]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:115的氨基酸序列。
[0673]
该alk3-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:116)编码。
[0674]
[0675][0676]
成熟的alk3-fc融合蛋白序列(seq id no:117)如下，可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0677][0678]
seq id no:102和seq id no:117的actriib-fc和alk3-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化以产生包含actriib-fc:alk3-fc的异聚体复合体。
[0679]
在分别在seq id no:401-402和407-408的actriib-fc和alk3-fc多肽序列中说明的使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例1中论述了actriib-fc融合多肽序列。
[0680]
alk3-fc融合多肽的互补形式(seq id no:407)如下：
[0681][0682]
前导序列和接头用下划线表示。为了引导用上文seq id no 401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk3融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:407的氨基酸序列。
[0683]
成熟的alk3-fc融合蛋白序列(seq id no:408)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸(k)的序列。
[0684][0685]
seq id no:402和seq id no:408的actriib-fc和alk3-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk3-fc的异聚体复合体。
[0686]
不同actriib-fc:alk3-fc复合体可的纯化通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0687]
实施例5.与actriib-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体相比actriib-fc:alk3-fc异二聚体的配体结合特征
[0688]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上述actriib-fc:alk3-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与actriib-fc和alk3-fc同二聚体复合体的配体结合选择性进行比较。使用抗fc抗体将actriib-fc:alk3-fc异二聚体、actriib-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0689][0690][0691]
这些比较结合数据表明相对于actriib-fc同二聚体或alk3-fc同二聚体，actriib-fc:alk3-fc异二聚体的结合特征/选择性改变。actriib-fc:alk3-fc异二聚体以异常高的亲和力结合bmp2和bmp4，并且显示与任一种同二聚体相比与bmp5、bmp6、bmp7、gdf5、gdf6和gdf7的结合大大增强。与actriib同二聚体相比，actriib-fc:alk3-fc异二聚体显示与激活素a、激活素b、bmp10、gdf8和gdf11的结合减弱，并且还区分这些配体至较大程度，尤其激活素a和激活素b。另外，actriib-fc同二聚体以高亲和力结合bmp9和gdf3的能力对于actriib-fc:alk3-fc异二聚体不存在。参见图7。
[0692]
这些结果因此表明actriib-fc:alk3-fc异二聚体是激活素b、gdf5/gdf6/gdf7配体亚家族和几种关键bmp配体(最值得注意的bmp9除外)的选择性抑制剂。因此，在其中这类选择性拮抗作用是有利的某些应用中，actriib-fc:alk3-fc异二聚体将比actriib-fc同二聚体或alk3-fc同二聚体更有用。实例包括其中需要保持bmp2、bmp4、bmp5和bmp6或激活素b的拮抗作用但使具有肌肉合成作用的一种或多种配体(例如激活素a和gdf8)或具有血管生
成作用的配体(例如bmp9和bmp10)的拮抗作用减到最小的治疗应用。
[0693]
实施例6.小鼠中与actriib-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体相比actriib-fc:alk3-fc异二聚体的活性特征
[0694]
在小鼠中测试同二聚体和异二聚体复合体以研究其体内活性特征的差异。在10周龄(n＝5只小鼠/周)时开始，腹膜内给予野生型c57bl/6小鼠actriib-fc同二聚体(10mg/kg)、alk3-fc同二聚体(10mg/kg)、actriib-fc:alk4-fc异二聚体(3或10mg/kg)或溶媒(磷酸缓冲盐水，pbs)每周两次达6.5周(46天)。研究终点包括在基线和研究完成(6.5周)通过核磁共振(nmr)测定的体重、总脂肪质量和在基线和6.5周通过双能x光吸光测定法(dexa)测定的总骨矿物质密度。
[0695][0696]
研究结果概括于上表中。正如所预期的，所有与溶媒相比，actriib-fc同二聚体显著增加体重和总骨矿物质密度，并显著减少总脂肪质量。同样正如所预期的，与溶媒相比，alk3-fc同二聚体显著增加总骨矿物质密度，但与actriib-fc同二聚体不同，不显著改变体重或总脂肪质量。actriib-fc:alk3-fc异二聚体值得注意地显示不同于actriib-fc同二聚体或alk3-fc同二聚体的活性特征。小鼠用任一种剂量水平的actriib-fc:alk4-fc异二聚体治疗显著增加骨矿物质密度，至少与任一种同二聚体一样好。然而，与alk3-fc同二聚体不同，actriib-fc:alk3-fc异二聚体显著减少脂肪质量，且与actriib-fc同二聚体不一样，actriib-fc:alk3-fc异二聚体显著减少脂肪质量而不改变体重。因此，actriib-fc:alk3-fc异二聚体对骨发挥有益作用，并且对脂肪组织发挥可能的有益作用。这种新的选择性在例如治疗需要对骨的刺激作用和对脂肪的抑制作用但不需要改变体重的患者中将是有用的。
[0697]
实施例7.actriib-fc:alk7-fc异二聚体的产生
[0698]
申请人构建了包含人actriib和人alk7的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriib-fc:alk7-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc和alk7-fc。
[0699]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体alk7-fc:actriib-fc的形成。
[0700]
在第一种方法中，actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列在上文实施例1中以seq id no:100-102提供。
[0701]
互补alk7-fc融合蛋白使用tpa前导序列，并列举如下(seq id no:112)：
[0702][0703]
信号序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk7-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:112的氨基酸序列。
[0704]
该alk7-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:113)编码：
[0705][0706][0707]
预期成熟的alk7-fc融合蛋白序列(seq id no:114)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0708][0709]
seq id no:102和seq id no:114的actriib-fc和alk7-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk7-fc的异聚体复合体。
[0710]
在分别在seq id no:401-402和405-406的actriib-fc和alk7-fc多肽序列举例说明的使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例1中论述了actriib-fc融合多肽序列。
[0711]
alk7-fc融合多肽的互补形式(seq id no:405)如下：
[0712][0713]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk7融合多肽的fc结构域中。此外，fc结构域的c端赖氨酸残基可缺失。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:405的氨基酸序列。
[0714]
预期成熟的alk7-fc融合蛋白序列(seq id no:406)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0715][0716]
seq id no:402和seq id no:406的actriib-fc和alk7-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含的异聚体复合体actriib-fc:alk7-fc。
[0717]
不同actriib-fc:alk7-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0718]
实施例8.与actriib-fc同二聚体和alk7-fc同二聚体相比actriib-fc:alk7-fc异二聚体的配体结合特征
[0719]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述actriib-fc:alk7-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与actriib-fc和alk7-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将actriib-fc:alk7-fc异二聚体、actriib-fc同二聚体和alk7-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0720][0721][0722]
这些比较结合数据表明与actriib-fc同二聚体或alk7-fc同二聚体相比，actriib-fc:alk7-fc异二聚体具有不同的结合特征。引人关注的是，与actriib-fc同二聚体牢固结合的4-5种配体(激活素a、bmp10、gdf8和gdf11)显示与actriib-fc:alk7-fc异二聚体的结合减弱，例外的是保持与异二聚体紧密结合的激活素b。另外，与actriib-fc同二聚体中等结合的3种配体(gdf3、bmp6和尤其bmp9)显示与actriib-fc:alk7-fc异二聚体的
结合减弱。相比之下，bmp5以中等强度结合actriib-fc:alk7异二聚体但只与actriib-fc同二聚体弱结合。无受测配体与alk7-fc同二聚体结合。参见图8。
[0723]
这些结果因此表明与actriib-fc同二聚体相比，actriib-fc:alk7-fc异二聚体是激活素b的更高选择性拮抗剂。因此，在其中这类选择性拮抗作用是有利的某些应用中，actriib-fc:alk7-fc异二聚体将比actriib-fc同二聚体更有用。实例包括其中需要保持激活素b的拮抗作用但使激活素a、gdf3、gdf8、gdf11、bmp9或bmp10的一种或多种的拮抗作用减到最小的治疗应用。
[0724]
实施例9.actriib-fc:alk2-fc异二聚体的产生
[0725]
申请人构建了包含人actriib和人alk2的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriib-fc:alk2-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc和alk2-fc。
[0726]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriib-fc:alk2-fc的形成。
[0727]
在第一种方法中，实施例1中以seq id no:100-102提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0728]
互补alk2-fc融合蛋白使用tpa前导序列，并列举如下(seq id no:136)：
[0729][0730]
信号序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk2-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:136的氨基酸序列。
[0731]
该alk2-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:137)编码：
[0732][0733]
成熟的alk2-fc融合蛋白序列(seq id no:138)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0734][0735]
seq id no:102和seq id no:138的actriib-fc和alk2-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk2-fc的异聚体复合体。
[0736]
在使用分别以seq id no:401-402和421-422的actriib-fc和alk2-fc多肽序列举例说明的不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例1中论述了actriib-fc融合多肽序列。
[0737]
alk2-fc融合多肽的互补形式(seq id no:421)如下：
[0738][0739]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no 401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk2融合多肽的fc结构域中。此外，fc结构域的c端赖氨酸残基可缺失。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:421的氨基酸序列。
[0740]
成熟的alk2-fc融合蛋白序列(seq id no:422)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0741][0742]
seq id no:402和seq id no:422的actriib-fc和alk2-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk2-fc的异聚体复合体。
[0743]
不同actriib-fc:alk2-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0744]
实施例10.与actriib-fc同二聚体和alk2-fc同二聚体相比actriib-fc:alk2-fc异二聚体的配体结合特征
[0745]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述actriib-fc:alk2-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与actriib-fc和alk2-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将actriib-fc:alk2-fc异二聚体、actriib-fc同二聚体和alk2-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0746][0747]
这些比较结合数据表明actriib-fc:alk2-fc异二聚体显示不同于actriib-fc同二聚体或alk2-fc同二聚体的配体结合特征。actriib-fc:alk2-fc异二聚体显示与激活素b优先地牢固结合，因此类似于actriib-fc:alk7-fc异二聚体(参见实施例8)。然而，actriib-fc:alk2-fc异二聚体通过保持actriib-fc同二聚体特有的与bmp9紧密结合而部分不同于actriib-fc:alk7-fc，而actriib-fc:alk7-fc极弱地结合bmp9，如果多少有的话。无受测配体与alk2-fc同二聚体结合。参见图9。
[0748]
这些结果表明与actriib-fc同二聚体相比actriib-fc:alk2-fc异二聚体是激活素b的更高选择性拮抗剂。因此，actriib-fc:alk2-fc异二聚体在其中这类选择性拮抗作用是有利的某些应用中将是有用的。实例包括其中需要保持主要是激活素b的拮抗作用并补充对bmp9、gdf8和gdf11次要的拮抗作用的治疗应用。
[0749]
实施例11.actriib-fc:alk5-fc异二聚体的产生
[0750]
申请人构建了包含人actriib和人alk5的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriib-fc:alk5-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc和alk5-fc。
[0751]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriib-fc:alk5-fc的形成。
[0752]
在第一种方法中，实施例1中以seq id no:100-102提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0753]
互补alk5-fc融合蛋白使用tpa前导序列，并列举如下(seq id no:139)：
[0754][0755][0756]
信号序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:139的氨基酸序列。
[0757]
该alk5-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:140)编码：
[0758][0759]
成熟的alk5-fc融合蛋白序列(seq id no:141)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0760][0761][0762]
seq id no:102和seq id no:141的actriib-fc和alk5-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化以产生包含actriib-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0763]
在seq id no:401-402和423-424的actriib-fc和alk5-fc多肽序列中分别举例说明的使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例1中论述了actriib-fc融合多肽序列。
[0764]
alk5-fc融合多肽的互补形式(seq id no:423)如下：
[0765][0766]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk5融合多肽的fc结构域中。此外，fc结构域的c端赖氨酸残基可缺失。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:423的氨基酸序列。
[0767]
成熟的alk5-fc融合蛋白序列(seq id no:424)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0768][0769][0770]
seq id no:402和seq id no:424的actriib-fc和alk5-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0771]
不同actriib-fc:alk5-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析
法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0772]
实施例12.与actriib-fc同二聚体和alk5-fc同二聚体相比actriib-fc:alk5-fc异二聚体的配体结合特征
[0773]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述actriib-fc:alk5-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与actriib-fc和alk5-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将actriib-fc:alk5-fc异二聚体、actriib-fc同二聚体和alk5-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0774][0775][0776]
实施例13.actriib-fc:alk6-fc异二聚体的产生
[0777]
可产生包含各自可与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合的人actriib和人alk6的胞外域的可溶性actriib-fc:alk6-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriib-fc和alk6-fc。
[0778]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriib-fc:alk6-fc的形成。
[0779]
在第一种方法中，在上文实施例1中以seq id no:100-102提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0780]
互补alk6-fc融合蛋白使用tpa前导序列，并列举如下(seq id no:142)：
[0781][0782]
信号序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriib-fc:alk6-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:142的氨基酸序列。
[0783]
该alk6-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:143)编码：
[0784][0785][0786]
成熟的alk6-fc融合蛋白序列(seq id no:144)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0787][0788]
seq id no:102和seq id no:144的actriib-fc和alk6-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk6-fc的异聚体复合体。
[0789]
在分别在seq id no:401-402和425-426actriib-fc和alk6-fc多肽序列举例说明的使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，可改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例1中论述了。actriib-fc融合多肽序列
[0790]
alk6-fc融合多肽的互补形式(seq id no:425)如下：
[0791][0792]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no401和402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk6融合多肽的fc结构域中。此外，fc结构域的c端赖氨酸残基可缺失。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:425的氨基酸序列。
[0793]
成熟的alk6-fc融合蛋白序列(seq id no:426)可如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0794][0795]
seq id no:402和seq id no:426的actriib-fc和alk6-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriib-fc:alk6-fc的异聚体复合体。
[0796]
不同actriib-fc:alk6-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例
如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0797]
实施例14.actriia-fc:alk4-fc异二聚体的产生
[0798]
申请人构建了包含人actriia和人alk4的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:alk4-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriia-fc融合多肽和alk4-fc融合多肽。
[0799]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriia-fc:alk4-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。
[0800]
actriia-fc多肽序列(seq id no:118)见下：
[0801][0802]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示actriia融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:118的氨基酸序列。
[0803]
该actriia-fc融合蛋白由下列核酸序列(seq id no:119)编码：
[0804]
[0805][0806]
成熟的actriia-fc融合多肽(seq id no:120)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0807][0808]
在此第一种方法中，在上文实施例1中以seq id no:104-106提供互补alk4-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0809]
seq id no:120和seq id no:106的actriia-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0810]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[0811]
actriia-fc多肽序列(seq id no:409)见下：
[0812][0813][0814]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并
将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:409的氨基酸序列。
[0815]
成熟的actriia-fc融合多肽(seq id no:410)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0816][0817]
在此第二种方法中，在上文实施例1中以seq id no:403-404提供互补alk4-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0818]
seq id no:410和seq id no:404的actriia-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0819]
不同actriia-fc:alk4-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0820]
实施例15.与actriia-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比actriia-fc:alk4-fc异二聚体的配体结合特征
[0821]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述actriia-fc:alk4-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与actriia-fc和alk4-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将actriia-fc:alk4-fc异二聚体、actriia-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0822][0823]
这些比较结合数据表明相对于actriia-fc或alk4-fc同二聚体actriia-fc:alk4-fc异二聚体的结合特征/选择性改变。例如actriia-fc:alk4-fc异二聚体显示与actriia-fc同二聚体相比，与激活素a的结合增强，尤其与激活素ac的结合增强，同时保持与激活素ab和gdf11牢固结合。另外，具有对actriia-fc同二聚体有最高亲和力的配体激活素b显示对actriia-fc:alk4-fc异二聚体的亲和力降低(尽管仍在高亲和力范围内)。actriia-fc:alk4-fc异二聚体还显示与actriia-fc同二聚体相比与bmp10的结合显著减弱。参见图10。
[0824]
这些结果表明与actriia-fc同二聚体相比，actriia-fc:alk4-fc异二聚体是激活素a和激活素ab高于激活素b的更高选择性拮抗剂。另外，与actriia-fc同二聚体相比，actriia-fc:alk4-fc异二聚体对激活素ac的亲和力大大增强，对bmp10的亲和力则大大减弱。因此，在其中这类选择性拮抗作用是有利的某些应用中，actriia-fc:alk4-fc异二聚体将比actriia-fc同二聚体更有用。实例包括其中需要优先高于激活素b地拮抗激活素a和/或激活素ab，并达到对激活素ac的强抑制，同时避免bmp10的抑制的治疗应用。
[0825]
实施例16.bmprii-fc:alk1-fc异二聚体的产生
[0826]
申请人构建了包含人bmprii和人alk1的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性bmprii-fc:alk1-fc异聚体复合体。各个构
建体分别被称为bmprii-fc融合多肽和alk1-fc融合多肽，下面提供每个的序列。
[0827]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体bmprii-fc:alk1-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。
[0828]
bmprii-fc多肽序列(seq id no:121)见下：
[0829][0830][0831]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进bmprii-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示bmprii-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:121的氨基酸序列。
[0832]
此bmprii-fc融合蛋白由下列核酸序列(seq id no:122)编码：
[0833][0834]
成熟的bmprii-fc融合多肽(seq id no:123)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0835][0836][0837]
alk1-fc融合多肽的互补形式(seq id no:124)如下：
[0838][0839]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no:121和123的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示alk1-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:124的氨基酸序列。
[0840]
该alk1-fc融合蛋白由下列核酸(seq id no:125)编码：
[0841][0842][0843]
成熟的alk1-fc融合蛋白序列(seq id no:126)如下，并可任选提供c端加入赖氨酸的序列。
[0844][0845]
seq id no:123和seq id no:126的bmprii-fc和alk1-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk1-fc的异聚体复合体。
[0846]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[0847]
bmprii-fc多肽序列(seq id no:411)见下：
[0848][0849]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进bmprii-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:411的氨基酸序列。
[0850]
成熟的bmprii-fc融合多肽(seq id no:412)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸(k)的序列。
[0851][0852]
alk1-fc融合多肽的互补形式(seq id no:413)如下：
[0853][0854]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用上文seq id no:411和412的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示alk1融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:413的氨基酸序列。
[0855]
成熟的alk1-fc融合蛋白序列(seq id no:414)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0856][0857]
seq id no:412和seq id no:414的bmprii-fc和alk1-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk1-fc的异聚体复合体。
[0858]
不同bmprii-fc:alk1-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0859]
实施例17.与bmprii-fc同二聚体和alk1-fc同二聚体相比bmprii-fc:alk1-fc异二聚体的配体结合特征
[0860]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述bmprii-fc:alk1-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与bmprii-fc和alk1-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将bmprii-fc:alk1-fc异二聚体、bmprii-fc同二聚体和alk1-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0861][0862]
这些比较结合数据表明bmprii-fc:alk1-fc异二聚体具有不同于bmprii-fc同二聚体但与alk1-fc同二聚体的类似的结合特征/选择性。例如bmprii-fc:alk1-fc异二聚体大多保持alk1-fc同二聚体特有的与bmp9和bmp10牢固结合；然而，异二聚体显示用同二聚体不存在的针对bmp10优于bmp9的适度选择性。此外与alk1-fc同二聚体不一样，bmprii-fc:alk1-fc异二聚体与bmp15结合，尽管其亲和力比bmprii-fc同二聚体的弱大约一个数量级。参见图11。因此，bmprii-fc:alk1-fc异二聚体将意料不到地用于其中bmp9特别是bmp10的选择性拮抗作用对于例如抑制血管生成是有利的某些治疗应用，或用于其中bmp15的拮抗作用也是有利的应用中。
[0863]
实施例18.bmprii-fc:alk2-fc异二聚体的产生
[0864]
申请人构建了包含人bmprii和人alk2的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性bmprii-fc:alk2-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为bmprii-fc融合多肽和alk2-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0865]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体bmprii-fc:alk2-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。上文实施例1中以seq id no:121-123提供bmprii-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了促进bmprii-fc:alk2-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:121和123的氨基酸序列。
[0866]
实施例9中以seq id no:136-138提供互补alk2-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:121和123的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例9所示alk2-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:136和138的氨基酸序列。
[0867]
seq id no:123和seq id no:138的bmprii-fc和alk2-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk2-fc的异聚体复合体。
[0868]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中论述了bmprii-fc融合多肽序列(seq id no:411-412)。为了促进bmprii-fc:alk2-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸
的seq id no:411和412的氨基酸序列。
[0869]
实施例9中论述了互补alk2-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:421-422)。为了引导用seq id no:411-412的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入实施例9所示alk2融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:421-422的氨基酸序列。
[0870]
seq id no:412和seq id no:422的bmprii-fc和alk2-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk2-fc的异聚体复合体。
[0871]
不同bmprii-fc:alk2-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0872]
实施例19.与bmprii-fc同二聚体和alk2-fc同二聚体相比bmprii-fc:alk2-fc异二聚体的配体结合特征
[0873]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述bmprii-fc:alk2-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与bmprii-fc和alk2-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将bmprii-fc:alk2-fc异二聚体、bmprii-fc同二聚体和alk2-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0874][0875][0876]
实施例20.bmprii-fc:alk3-fc异二聚体的产生
[0877]
申请人构建了包含人bmprii和人alk3的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性bmprii-fc:alk3-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为bmprii-fc融合多肽和alk3-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0878]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体bmprii-fc:alk3-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。上文实施例1中以seq id no:121-123提供
bmprii-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了促进bmprii-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:121和123的氨基酸序列。
[0879]
在实施例4中以seq id no:115-117提供互补alk3-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:121和123的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例4所示alk3-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:115和117的氨基酸序列。
[0880]
seq id no:123和seq id no:117的bmprii-fc和alk3-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk3-fc的异聚体复合体。
[0881]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中论述了bmprii-fc融合多肽序列(seq id no:411-412)。为了促进bmprii-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:411和412的氨基酸序列。
[0882]
实施例4中论述了互补alk3-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:407-408)。为了引导用seq id no:411-412的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引实施例4所示alk3融合多肽入的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:407和408的氨基酸序列。
[0883]
seq id no:412和seq id no:408的bmprii-fc和alk3-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk3-fc的异聚体复合体。
[0884]
不同bmprii-fc:alk3-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0885]
实施例21.与bmprii-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体相比bmprii-fc:alk3-fc异二聚体的配体结合特征
[0886]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述bmprii-fc:alk3-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与bmprii-fc和alk3-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将bmprii-fc:alk3-fc异二聚体、bmprii-fc同二聚体和alk3-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0887][0888]
这些比较结合数据表明bmprii-fc:alk3-fc异二聚体具有与bmprii-fc同二聚体显然不一样但也不同于alk3-fc同二聚体的配体结合选择性。bmprii-fc:alk3-fc异二聚体比alk3-fc同二聚体牢得多地与bmp6结合，反映在解离速率几乎为1/10。由于其与bmp2和bmp4的结合大多未改变，因此bmprii-fc:alk3异二聚体可被视为bmp2、bmp4和bmp6的联合抑制剂。这种结合特征与alk3-fc同二聚体的截然不同，后者与bmp4和bmp2异常牢固地结合将其确定为与具有中等水平结合的4种配体(包括bmp6)相比对该配体对有高度选择性。参见图12。因此，bmprii-fc:alk3-fc异二聚体将意料不到地用于其中bmp2、bmp4和bmp6的联合拮抗作用是有利的某些治疗应用。
[0889]
实施例22.bmprii-fc:alk4-fc异二聚体的产生
[0890]
申请人构建了包含人bmprii和人alk4的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性bmprii-fc:alk4-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为bmprii-fc融合多肽和alk4-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0891]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体bmprii-fc:alk4-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。上文实施例1中以seq id no:121-123提供bmprii-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了促进bmprii-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:121和123的氨基酸序列。
[0892]
实施例1中以seq id no:104-106提供互补alk4-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:121和123的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例1所示alk4-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:104和106的氨基酸序列。
[0893]
seq id no:123和seq id no:106的bmprii-fc和alk4-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0894]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中论述了bmprii-fc融合多肽序列(seq id no:411和412)。为了促进bmprii-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入实施例16所示bmprii-fc多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:411和412的氨基酸序列。
[0895]
实施例1中论述了互补alk4-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:403和404)。为了引导用seq id no:411和412的bmprii-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入实施例1所示alk4融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:403和404的氨基酸序列。
[0896]
seq id no:412和seq id no:404的bmprii-fc和alk4-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含bmprii-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[0897]
不同bmprii-fc:alk4-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0898]
实施例23.与bmprii-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体相比bmprii-fc:alk4-fc异二聚体的配体结合特征
[0899]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述bmprii-fc:alk4-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与bmprii-fc和alk4-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将bmprii-fc:alk4-fc异二聚体、bmprii-fc同二聚体和alk4-fc同二聚体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0900][0901]
这些比较结合数据表明bmprii-fc:alk4-fc异二聚体具有与bmprii-fc同二聚体或alk4-fc同二聚体不一同的配体结合选择性。bmprii-fc:alk4-fc异二聚体因以高或中等强度结合几种激活素配体而不同于两种同二聚体，且因仅弱结合bmp15而不同于bmprii-fc同二聚体。最值得注意的是，bmprii-fc:alk4-fc异二聚体与异二聚体配体激活素ab优先且牢固结合。参见图13。因此，bmprii-fc:alk4-fc异二聚体将意料不到地用于其中激活素a、激活素b、特别是激活素ab的拮抗作用是有利的且其中要避免bmp15(其大量参与排卵)的拮抗作用的某些治疗应用。
[0902]
实施例24.tgfβrii-fc:alk1-fc异二聚体的产生
[0903]
申请人构建了包含人tgfβrii的短(典型)同种型和人alk1的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性tgfβrii-fc:alk1-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为tgfβrii
short-fc融合多肽和alk1-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0904]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体tgfβrii
short-fc:alk1-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。
[0905]
tgfβrii
short-fc多肽序列(seq id no:127)见下：
[0906][0907]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进tgfβrii
short-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示tgfβrii
short-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:127的氨基酸序列。
[0908]
该tgfβrii
short-fc融合蛋白由下列核酸序列(seq id no:128)编码：
[0909][0910][0911]
成熟的tgfβrii
short-fc融合多肽(seq id no:129)如下，并可任选提供从c端脱去
赖氨酸的序列。
[0912][0913]
实施例16中以seq id no:124-126提供互补alk1-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:127和129的异二聚体形成tgfβrii
short-fc融合多肽，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例16所示alk1-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:124和126的氨基酸序列。
[0914]
seq id no:129和seq id no:126的tgfβrii
short-fc和alk1-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
short-fc:alk1-fc的异聚体复合体。
[0915]
可产生其中上文所述alk1-fc多肽(seq id no:126)与包含tgfβrii的长(a)同种型(tgfβrii
long
)的胞外域替换短同种型的胞外域的fc融合蛋白配对的变体tgfβrii-fc:alk1-fc异聚体复合体。
[0916]
tgfβrii
long-fc多肽序列(seq id no:130)见下：
[0917][0918]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进tgfβrii
long-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文置换)引入上文所示tgfβrii
long-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:130的氨基酸序列。
[0919]
该tgfβrii
long-fc融合蛋白由下列核酸序列(seq id no:131)编码：
[0920][0921][0922]
成熟的tgfβrii
long-fc融合多肽(seq id no:132)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0923][0924]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[0925]
tgfβrii
short-fc多肽序列(seq id no:415)见下：
[0926][0927]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进tgfβrii
short-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:415的氨基酸序列。
[0928]
成熟的tgfβrii
short-fc融合多肽(seq id no:416)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0929][0930]
实施例16中论述了互补alk1-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:413和414)。为了引导用seq id no:415和416的tgfβrii
short-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入实施例16所示alk1融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:413和414的氨基酸序列。
[0931]
seq id no:416和seq id no:414的tgfβrii
short-fc和alk1-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含的异聚体复合体tgfβrii-fc:alk1-fc。
[0932]
可产生其中上文所述alk1-fc多肽(seq id no:414)与包含tgfβrii(tgfβrii
long
)的长(a)同种型的胞外域替换短同种型的胞外域的fc融合蛋白配对的变体tgfβrii-fc:alk1-fc异聚体复合体。
[0933]
tgfβrii
long-fc多肽序列(seq id no:417)见下：
[0934][0935]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进tgfβrii
long-fc:alk1-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:417的氨基酸序列。
[0936]
成熟的tgfβrii
long-fc融合多肽(seq id no:418)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0937][0938]
seq id no:418和seq id no:414的tgfβrii
long-fc和alk1-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
long-fc:alk1-fc的异聚体复合体。
[0939]
不同tgfβrii-fc:alk1-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0940]
实施例25.与tgfβrii-fc同二聚体和alk1-fc同二聚体相比tgfβrii-fc:alk1-fc异二聚体的配体结合特征
[0941]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对上文所述tgfβrii
short-fc:alk1-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与tgfβrii
short-fc和alk1-fc同二聚体复合体的进行比较。tgfβrii
short-fc:alk1-fc异二聚体、tgfβrii
short-fc同二聚体和alk1-fc同二聚体使用抗fc抗体将独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0942][0943]
实施例26.tgfβrii
short-fc:alk5-fc异二聚体的产生
[0944]
申请人构建了包含人tgfβrii短(典型)同种型和人alk5的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性tgfβrii
short-fc:alk5-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为tgfβrii
short-fc融合多肽和alk5-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0945]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体tgfβrii
short-fc:alk5-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。实施例24以seq id no:127-129提供tgfβrii
short-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了促进tgfβrii
short-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入实施例24所示tgfβrii
short-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:127和129的氨基酸序列。
[0946]
实施例11中以seq id no:139-141提供互补alk5-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:127和129tgfβrii
short-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例11所示alk5-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:139和141的氨基酸序列。
[0947]
seq id no:129和seq id no:141的tgfβrii
short-fc和alk5-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
short-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0948]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例24中论述了tgfβrii
short-fc融合多肽序列(seq id no:415-416)。为了促进tgfβrii
short-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入实施例24所示tgfβrii
short-fc多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:415-416的氨基酸序列。
[0949]
实施例11中论述了互补alk5-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:423-424)。为了引导用seq id no:415-416的tgfβrii
short-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代
引入实施例11所示alk5融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:423-424的氨基酸序列。
[0950]
seq id no:416和seq id no:424的tgfβrii
short-fc和alk5-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
short-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0951]
不同tgfβrii
short-fc:alk5-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0952]
实施例27.tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体的产生
[0953]
申请人构建了包含人tgfβrii的长(a)同种型的胞外域和人alk5的胞外域(其各自分别与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性tgfβrii
long-fc:alk5-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为tgfβrii
long-fc融合多肽和alk5-fc融合多肽，本文提供各自的序列。
[0954]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体tgfβrii
long-fc:alk5-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。上文实施例24中以seq id no:130-132提供tgfβrii
long-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了促进tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入实施例24所示tgfβrii
long-fc融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:130和132的氨基酸序列。
[0955]
实施例11中以seq id no:139-141提供互补alk5-fc融合多肽的多肽序列和其编码核酸序列。为了引导用seq id no:130和132的tgfβrii
long-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入实施例11所示alk5-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供c端加入赖氨酸的seq id no:139和142的氨基酸序列。
[0956]
seq id no:132和seq id no:141的tgfβrii
long-fc和alk5-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
long-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0957]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例24中论述了tgfβrii
long-fc融合多肽序列(seq id no:417-418)。为了促进tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入实施例24所示tgfβrii
long-fc多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:417-418的氨基酸序列。
[0958]
实施例11中论述了互补alk5-fc融合多肽的多肽序列(seq id no:423-424)。为了引导用seq id no:417-418的tgfβrii
long-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入实施例11所示alk5融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:423-424的氨基酸序列。
[0959]
seq id no:418和seq id no:424的tgfβrii
long-fc和alk5-fc融合多肽分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含tgfβrii
long-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[0960]
不同tgfβrii
long-fc:alk5-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶
层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0961]
实施例28.与tgfβrii-fc同二聚体和alk5-fc同二聚体相比tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体的活性特征
[0962]
采用基于biacore
tm
的结合测定法以对描述于实施例26-27的tgfβrii
short-fc:alk5-fc和tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体复合体的配体结合选择性与tgfβrii
short-fc和alk5-fc同二聚体复合体的进行比较。使用抗fc抗体将异聚体或同聚体蛋白质复合体独立俘获在系统中。注入配体，并使之在俘获的受体蛋白上流过。结果概括于下表，其中最能表明有效配体阱的配体解离速率(kd)用灰色阴影标示。
[0963][0964][0965]
这些比较结合数据表明tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体的配体结合特征显著不同于tgfβrii-fc同二聚体，且不同于alk5-fc同二聚体的配体结合特征，后者不结合任何配体。根据平衡解离常数(kd)，tgfβrii-fc同二聚体以比tgfβ1高得多的亲和力结合tgfβ1和tgfβ3，虽然3种tgfβ配体的解离速率相似。相比之下，tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体显示对tgfβ2超过tgfβ1/tgfβ3的高选择性。具体地讲，tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体以比tgfβrii-fc同二聚体高约5个数量级的亲和力和比之慢约4个数量级的解离速率结合tgfβ2。tgfβrii
long-fc:alk5-fc异二聚体比含有短同种型的异二聚体更牢固地结合tgfβ2。参见图14。tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体无一能够结合bmp9或bmp10(数据未显示)，这将这些tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体与tgfβrii-fc:alk1-fc异二聚体区分开来(参见实施例25)。两种tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体的传感图显示低信号幅度，表明了各个蛋白质的大部分是无活性的。
[0966]
为了更好的解释通过表面等离子体共振获得的这些数据，在a549细胞采用报道基因测定法测定tgfβrii融合蛋白抑制tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3的活性的能力。该测定法基于用报道分子质粒pgl3(caga)12-萤火虫萤光素酶(dennler等，1998，embo 17：3091-3100)和prlcmv-海肾萤光素酶转染的人肺癌细胞系，后者用于控制转染效率。caga基序存在于tgfβ-响应基因的启动子(例如pai-1)中，因此该载体对于通过smad2和smad3发出信号的因子具有通用性。
[0967]
在测定的第一天，将a549细胞(ccl-185
tm
)以6.5x104个细胞/孔分布在48
孔板中，并孵育过夜。所有的孵育都在组织培养箱中在37℃和5％co2下，除非另有说明。在第二天，将含有10μgpgl3(caga)12-萤火虫萤光素酶、100ng prlcmv-海肾萤光素酶、30μlx-tremegene9(roche applied science)和970μl optimem(invitrogen)的溶液在室温下预先孵育30分钟，然后加入24ml补充0.1％bsa的eagle极限必需培养基(emem，)中。从铺板的细胞中取出培养基，将该转染混合物施加到细胞(500μl/孔)中用于过夜孵育。在第三天，除去培养基，使细胞与按下文所述制备的配体和抑制剂的混合物一起孵育过夜。
[0968]
在48孔板中在200μl体积的测定缓冲液(emem 0.1％bsa)中制备试验品的系列稀释液。加入等体积的含有试验配体的测定缓冲液，获得等于之前确定的ec
50
的最终配体浓度。人tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3获自peprotech。将试验溶液孵育30分钟，然后将250μl的混合物加入转染的细胞中。一式两份测定试验品的各个浓度。在与试验溶液一起孵育过夜后，将细胞用磷酸缓冲盐水冲洗，然后用被动裂解缓冲液(promega e1941)裂解，并在-70℃下保存过夜。在第4天和最后一天，在轻轻振荡时使板升温至室温。将细胞裂解物转移到化学发光板(96孔)中，在发光计中用双重萤光素酶报道分子测定系统(promega e1980)的试剂分析，测定归一化萤光素酶活性。
[0969]
该测定法用来比较tgfβrii融合蛋白变体通过tgfβrii配体抑制细胞信号转导的能力。结果见下表。
[0970][0971]
用tgfβrii-fc同二聚体的结果与之前有关野生型tgfβrii
short-fc和tgfβrii
long-fc同二聚体的报道(del re等，j biol chem 279:22765，2004)一致。在该实验中，tgfβrii
short-fc同二聚体有效地抑制tgfβ1和tgfβ3，但是在高达10nm的同二聚体浓度下不能抑制tgfβ2。这个结果与tgfβ2结合tgfβrii-fc同二聚体的低亲和力一致，但奇怪地与其慢的解离速率不一致(参见上文的结合结果)。相比之下，tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体在细胞环境中有效地抑制所有3种tgfβ配体。因此，tgfβrii-fc:alk5-fc异二聚体将意料不到地用于其中tgfβ2优先的拮抗作用—或tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3的综合拮抗作用—是有利的某些治疗应用。
[0972]
实施例29.misrii-fc:alk3-fc异二聚体的产生
[0973]
可产生包含其各自可与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合的人misrii和人alk3的胞外域的可溶性misrii-fc:alk3-fc异聚体复合体。各个构建体分
别被称为misrii-fc融合多肽和alk3-fc融合多肽。
[0974]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体misrii-fc:alk3-fc的形成。在第一种方法中，改变一个fc结构域以在相互作用面上引入阳离子氨基酸，同时改变另一个fc结构域以在相互作用面上引入阴离子氨基酸。
[0975]
misrii-fc多肽序列(seq id no:133)见下：
[0976][0977]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进misrii-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示misrii融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:133的氨基酸序列。
[0978]
成熟的misrii-fc融合多肽(seq id no:135)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0979][0980]
在此第一种方法中，上文实施例4中以seq id no:115-117提供互补alk3-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0981]
seq id no:135和seq id no:117的misrii-fc和alk3-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含misrii-fc:alk3-fc的异聚体复合体。可通过使上文所述alk3-fc蛋白(seq id no:117)与包含misrii的胞外域同种型2或misrii同种型3的胞外域替换misrii同种型1的胞外域的fc融合蛋白配对，产生类似的异聚体复合体。
[0982]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体的形成的第二种方法中，可改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[0983]
misrii-fc多肽序列(seq id no:419)见下：
[0984][0985][0986]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进misrii-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:419的氨基酸序列。
[0987]
成熟的misrii-fc融合多肽(seq id no:420)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[0988][0989]
在此第二种方法中，实施例4中以seq id no:407-408提供互补alk3-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0990]
seq id no:420和seq id no:408的misrii-fc和alk3-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含misrii-fc:alk3-fc的异聚体复合体。可通过使上文所述alk3-fc蛋白(seq id no:408)与fc融合蛋白包含misrii同种型2的胞外域或misrii同种型3的胞外域替换上文所述misrii同种型1的胞外域配对，产生类似的异聚体复合体。
[0991]
不同misrii-fc:alk3-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[0992]
实施例30.actriia-fc:actriib-fc异二聚体的产生
[0993]
可产生包含人actriia和人actriib的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:actriib-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriia-fc和actriib-fc融合蛋白。
[0994]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体actriia-fc:actriib-fc的形成。
[0995]
静电方法
[0996]
在第一种方法中，上文实施例14中以seq id no:118-120提供actriia-fc融合蛋
白的多肽序列和其编码核酸序列。
[0997]
互补actriib-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:153)使用tpa前导序列，且列举如下：
[0998][0999]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:actriib-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:153的氨基酸序列。
[1000]
成熟的actriib-fc融合蛋白序列(seq id no:154)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1001][1002][1003]
seq id no:120和seq id no:154的actriia-fc和actriib-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:actriib-fc的异聚体复合体。
[1004]
反向静电方法
[1005]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域同时与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列(seq id no:151)使用tpa前导序列，且列举如下。
[1006][1007]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:actriib-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:151的氨基酸序列。
[1008]
成熟的actriia-fc融合蛋白序列(seq id no:152)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1009][1010]
实施例1中以seq id no:100-102提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1011]
seq id no:152和seq id no:102的actriia-fc和actriib-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:actriib-fc的变体异聚体复合体。
[1012]
疏水方法
[1013]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例14中以seq id no:409-410提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列。
[1014]
actriib-fc融合多肽的互补形式(seq id no:453)如下：
[1015]
[1016]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:409-410的actriia-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示actriib-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:453的氨基酸序列。
[1017]
成熟的actriib-fc融合蛋白序列(seq id no:454)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1018][1019]
seq id no:410和seq id no:454的actriia-fc和actriib-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:actriib-fc的变体异聚体复合体actriia-fc:actriib-fc。
[1020]
反向疏水方法
[1021]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列(seq id no:451)使用tpa前导序列，且列举如下。
[1022][1023]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no401-402的actriib-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示actriia-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:451的氨基酸序列。
[1024]
成熟的actriia-fc融合蛋白序列(seq id no:452)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1025][1026]
实施例1中以seq id no:401-402提供actriib-fc融合蛋白的多肽序列。
[1027]
seq id no:452和seq id no:402的actriia-fc和actriib-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:actriib-fc的变体异聚体复合体。
[1028]
不同actriia-fc:actriib-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1029]
实施例31.actriia-fc:bmprii-fc异二聚体的产生
[1030]
可产生包含人actriia和人bmprii的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:bmprii-fc异聚体复合体。各个构建体被称为actriia-fc和bmprii-fc融合蛋白，分别。
[1031]
通过与描述于实施例30类似的方法可引导异聚体actriia-fc:bmprii-fc的形成。
[1032]
静电方法
[1033]
在第一种方法中，实施例14中以seq id no:118-120提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1034]
互补bmprii-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:155)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1035][1036]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:bmprii-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:155的氨基酸序列。
[1037]
成熟的bmprii-fc融合蛋白序列(seq id no:156)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1038][1039]
seq id no:120和seq id no:156的actriia-fc和bmprii-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:bmprii-fc的异聚体复合体。
[1040]
反向静电方法
[1041]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:151-152提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1042]
实施例16中以seq id no:121-123提供bmprii-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1043]
seq id no:152和seq id no:123的actriia-fc和bmprii-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:bmprii-fc的变体异聚体复合体。
[1044]
疏水方法
[1045]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例14中以seq id no 409-410提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列。
[1046]
bmprii-fc融合多肽的互补形式(seq id no:455)如下：
[1047][1048]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:409-410的actriia-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示bmprii-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:455的氨基酸序列。
[1049]
成熟的bmprii-fc融合蛋白序列(seq id no:456)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1050][1051]
seq id no:410和seq id no:456的actriia-fc和bmprii-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:bmprii-fc的变体异聚体复合体。
[1052]
反向疏水方法
[1053]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:451-452提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1054]
实施例16中以seq id no:411-412提供bmprii-fc融合蛋白的多肽序列。
[1055]
seq id no:452和seq id no:412的actriia-fc和bmprii-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:bmprii-fc的变体异聚体复合体。
[1056]
不同actriia-fc:bmprii-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1057]
实施例32.actriia-fc:misrii-fc异二聚体的产生
[1058]
可产生包含人actriia和人misrii的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:misrii-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriia-fc和misrii-fc融合蛋白。
[1059]
可通过类似于实施例30所述方法引导异聚体actriia-fc:misrii-fc的形成。
[1060]
静电方法
[1061]
在第一种方法中，实施例14中以seq id no:118-120提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1062]
互补misrii-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:161)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1063]
fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示misrii-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:457的氨基酸序列。
[1077]
成熟的misrii-fc融合蛋白序列(seq id no:458)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1078][1079]
seq id no:410和seq id no:458的actriia-fc和misrii-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:misrii-fc的变体异聚体复合体。
[1080]
反向疏水方法
[1081]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:451-452提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1082]
实施例29中以seq id no:419-420提供misrii-fc融合蛋白的多肽序列。
[1083]
seq id no:452和seq id no:420的actriia-fc和misrii-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:misrii-fc的变体异聚体复合体。
[1084]
不同actriia-fc:misrii-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1085]
实施例33.actriia-fc:tgfβrii
short-fc异二聚体的产生
[1086]
可产生包含人actriia和人tgfβrii
short
的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:tgfβrii
short-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为actriia-fc和tgfβrii
short-fc融合蛋白。
[1087]
可通过类似于实施例30所述方法引导异聚体actriia-fc:tgfβrii
short-fc的形成。
[1088]
静电方法
[1089]
在第一种方法中，实施例14中以seq id no:118-120提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1090]
互补tgfβrii
short-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:157)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1091][1092][1093]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:tgfβrii
short-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:157的氨基酸序列。
[1094]
成熟的tgfβrii
short-fc融合蛋白序列(seq id no:158)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1095][1096]
seq id no:120和seq id no:158的actriia-fc和tgfβrii
short-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
short-fc的异聚体复合体。
[1097]
反向静电方法
[1098]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:151-152提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1099]
实施例24中以seq id no:127-129提供tgfβrii
short-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1100]
seq id no:152和seq id no:129的actriia-fc和tgfβrii
short-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
short-fc的变体异聚体复合体。
[1101]
疏水方法
[1102]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例14中以seq id no 409-410提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列。
[1103]
tgfβrii
short-fc融合多肽的互补形式(seq id no:459)如下：
[1104][1105]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:409-410的actriia-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示tgfβrii
short-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:459的氨基酸序列。
[1106]
成熟的tgfβrii
short-fc融合蛋白序列(seq id no:460)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1107][1108]
seq id no:410和seq id no:460的actriia-fc和tgfβrii
short-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
short-fc的变体异聚体复合体。
[1109]
反向疏水方法
[1110]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:451-452提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1111]
实施例24中以seq id no:415-416提供tgfβrii
short-fc融合蛋白的多肽序列。
[1112]
seq id no:452和seq id no:416的actriia-fc和tgfβrii
short-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
short-fc的变体异聚体复合体。
[1113]
不同actriia-fc:tgfβrii
short-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1114]
实施例34.actriia-fc:tgfβrii
long-fc异二聚体的产生
[1115]
可产生包含人actriia和人tgfβrii
long
的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性actriia-fc:tgfβrii
long-fc异聚体复合体。
各个构建体分别被称为actriia-fc和tgfβrii
long-fc融合蛋白。
[1116]
可通过类似于实施例30所述方法引导异聚体actriia-fc:tgfβrii
long-fc的形成。
[1117]
静电方法
[1118]
在第一种方法中，实施例14中以seq id no:118-120提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1119]
互补tgfβrii
long-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:159)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1120][1121][1122]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进actriia-fc:tgfβrii
long-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将赖氨酸用天冬氨酸置换)引入上文置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:159的氨基酸序列。
[1123]
成熟的tgfβrii
long-fc融合蛋白序列(seq id no:160)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1124][1125]
seq id no:120和seq id no:160的actriia-fc和tgfβrii
long-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
long-fc的异聚体复合体。
[1126]
反向静电方法
[1127]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:151-152提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1128]
实施例24中以seq id no:130-132提供tgfβrii
long-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1129]
seq id no:152和seq id no:132的actriia-fc和tgfβrii
long-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
long-fc的变体异聚体复合体。
[1130]
疏水方法
[1131]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例14中以seq id no 409-410提供actriia-fc融合蛋白的多肽序列。
[1132]
tgfβrii
long-fc融合多肽的互补形式(seq id no:461)如下：
[1133][1134]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:409-410的actriia-fc融合多肽形成异二聚体，可将4个氨基酸取代引入上文所示actriib-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:461的氨基酸序列。
[1135]
成熟的tgfβrii
long-fc融合蛋白序列(seq id no:462)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1136][1137]
seq id no:410和seq id no:462的actriia-fc和tgfβrii
long-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含actriia-fc:tgfβrii
long-fc的变体异聚体复合体。
[1138]
反向疏水方法
[1139]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例30中以seq id no:451-452提供actriia-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1140]
实施例24中以seq id no:417-418提供tgfβrii
long-fc融合蛋白的多肽序列。
[1147]
[1148]
[1149]
[1150]
[1151][1152]
实施例36.alk1-fc:alk2-fc异二聚体的产生
[1153]
可产生包含人alk1和人alk2的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk2-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk2-fc融合蛋白。
[1154]
通过类似于实施例1所述方法可引导异聚体alk1-fc:alk2-fc的形成。
[1155]
静电方法
[1156]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的的多肽序列和其编码核酸序列。
[1157]
互补alk2-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:173)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1158][1159]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk2-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:173的氨基酸序列。
[1160]
成熟的alk2-fc融合蛋白序列(seq id no:174)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1161]
[1162]
seq id no:126和seq id no:174的alk1-fc和alk2-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含的异聚体复合体alk1-fc:alk2-fc。
[1163]
反向静电方法
[1164]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域同时与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列(seq id no:171)使用tpa前导序列，且列举如下。
[1165][1166]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk2-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:171的氨基酸序列。
[1167]
成熟的alk1-fc融合蛋白序列(seq id no:172)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1168][1169][1170]
实施例9中以seq id no:136-138提供alk2-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1171]
seq id no:172和seq id no:138的alk1-fc和alk2-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk2-fc的变体异聚体复合体。
[1172]
疏水方法
[1173]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中以seq id no:413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1174]
alk2-fc融合多肽的互补形式(seq id no:465)如下：
[1175][1176]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk2-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:465的氨基酸序列。
[1177]
成熟的alk2-fc融合蛋白序列(seq id no:466)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1178][1179]
seq id no:414和seq id no:466的alk1-fc和alk2-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk2-fc的变体异聚体复合体。
[1180]
反向疏水方法
[1181]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列(seq id no:463)使用tpa前导序列，且列举如下。
[1182][1183]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no421-422的alk2-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸
置换)引入上文所示alk1-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:463的氨基酸序列。
[1184]
成熟的alk1-fc融合蛋白序列(seq id no:464)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1185][1186][1187]
实施例9中以seq id no:421-422提供alk2-fc融合蛋白的多肽序列。
[1188]
seq id no:464和seq id no:422的alk1-fc和alk2-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk2-fc的变体异聚体复合体。
[1189]
不同alk1-fc:alk2-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1190]
实施例37.alk1-fc:alk3-fc异二聚体的产生
[1191]
可产生包含人alk1和人alk3的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk3-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk3-fc融合蛋白。
[1192]
可采用类似于实施例36的方法引导异聚体alk1-fc:alk3-fc的形成。
[1193]
静电方法
[1194]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1195]
互补alk3-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:175)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1196][1197][1198]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk3-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:
175的氨基酸序列。
[1199]
成熟的alk3-fc融合蛋白序列(seq id no:176)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1200][1201]
seq id no:126和seq id no:176的alk1-fc和alk3-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk3-fc的异聚体复合体。
[1202]
反向静电方法
[1203]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:171-172提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1204]
alk3-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列在实施例4中以seq id no:115-117提供。
[1205]
seq id no:172和seq id no:117的alk1-fc和alk3-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk3-fc的变体异聚体复合体。
[1206]
疏水方法
[1207]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[1208]
实施例16中以seq id no 413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1209]
alk3-fc融合多肽的互补形式(seq id no:467)如下：
[1210][1211]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk3-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:467的氨基酸序列。
[1212]
成熟的alk3-fc融合蛋白序列(seq id no:468)如下，并可任选提供从c端脱去赖
氨酸的序列。
[1213][1214]
seq id no:414和seq id no:468的alk1-fc和alk3-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk3-fc的变体异聚体复合体。
[1215]
反向疏水方法
[1216]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:463-464提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1217]
实施例4中以seq id no:407-408提供alk3-fc融合蛋白的多肽序列。
[1218]
seq id no:464和seq id no:408的alk1-fc和alk3-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk3-fc的变体异聚体复合体。
[1219]
不同alk1-fc:alk3-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1220]
实施例38.alk1-fc:alk4-fc异二聚体的产生
[1221]
可产生包含人alk1和人alk4的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk4-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk4-fc融合蛋白。
[1222]
可采用类似于实施例36的方法引导异聚体alk1-fc:alk4-fc的形成。
[1223]
静电方法
[1224]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1225]
互补alk4-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:177)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1226]
[1227][1228]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk4-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:177的氨基酸序列。
[1229]
成熟的alk4-fc融合蛋白序列(seq id no:178)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1230][1231]
seq id no:126和seq id no:178的alk1-fc和alk4-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk4-fc的异聚体复合体。
[1232]
反向静电方法
[1233]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:171-172提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1234]
实施例1中以seq id no:104-106提供alk4-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1235]
seq id no:172和seq id no:106的alk1-fc和alk4-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk4-fc的变体异聚体复合体。
[1236]
疏水方法
[1237]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。
[1238]
实施例16中以seq id no 413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1239]
alk4-fc融合多肽的互补形式(seq id no:469)如下：
[1240][1241]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk4-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:469的氨基酸序列。
[1242]
成熟的alk4-fc融合蛋白序列(seq id no:470)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1243][1244]
seq id no:414和seq id no:470的alk1-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk4-fc的变体异聚体复合体。
[1245]
反向疏水方法
[1246]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:463-464提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1247]
实施例1中以seq id no:403-404提供alk4-fc融合蛋白的多肽序列。
[1248]
seq id no:464和seq id no:404的alk1-fc和alk4-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk4-fc的变体异聚体复合体。
[1249]
不同alk1-fc:alk4-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1250]
实施例39.alk1-fc:alk5-fc异二聚体的产生
[1251]
可产生包含人alk1和人alk5的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk5-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk5-fc融合蛋白。
[1252]
可采用类似于实施例36的方法引导异聚体alk1-fc:alk5-fc的形成。
[1253]
静电方法
[1254]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1255]
互补alk5-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:179)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1256][1257][1258]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进的形成alk1-fc:alk5-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:179的氨基酸序列。
[1259]
成熟的alk5-fc融合蛋白序列(seq id no:180)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1260][1261]
seq id no:126和seq id no:180的alk1-fc和alk5-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk5-fc的异聚体复合体。
[1262]
反向静电方法
[1263]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:171-172提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1264]
实施例11中以seq id no:139-141提供alk5-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1265]
seq id no:172和seq id no:141的alk1-fc和alk5-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk5-fc的变体异聚体复合体。
[1266]
疏水方法
[1267]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构
域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中以seq id no 413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1268]
alk5-fc融合多肽的互补形式(seq id no:471)如下：
[1269][1270]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk5-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:471的氨基酸序列。
[1271]
成熟的alk5-fc融合蛋白序列(seq id no:472)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1272][1273]
上文所示alk5-fc融合多肽的fc结构域中的alk1-fc和alk5-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk5-fc的变体异聚体复合体。
[1274]
反向疏水方法
[1275]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:463-464提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1276]
实施例16中以seq id no:423-424提供alk5-fc融合蛋白的多肽序列。
[1277]
seq id no:464和seq id no:424的alk1-fc和alk5-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk5-fc的变体异聚体复合体。
[1278]
不同alk1-fc:alk5-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1279]
实施例40.alk1-fc:alk6-fc异二聚体的产生
[1280]
可产生包含人alk1和人alk6的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk6-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk6-fc融合蛋白。
[1281]
可采用类似于实施例36的方法引导异聚体alk1-fc:alk6-fc的形成。
[1282]
静电方法
[1283]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1284]
互补alk6-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:181)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1285][1286][1287]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk6-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:181的氨基酸序列。
[1288]
成熟的alk6-fc融合蛋白序列(seq id no:182)如下，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1289][1290]
seq id no:126和seq id no:182的alk1-fc和alk6-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk6-fc的异聚体复合体。
[1291]
反向静电方法
[1292]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:171-172提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1293]
实施例13中以seq id no:142-144提供alk6-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1294]
seq id no:172和seq id no:144的alk1-fc和alk6-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk6-fc的变体异聚体复合体。
[1295]
疏水方法
[1296]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中以seq id no 413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1297]
alk6-fc融合多肽的互补形式(seq id no:473)如下：
[1298][1299]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk6-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:473的氨基酸序列。
[1300]
成熟的alk6-fc融合蛋白序列(seq id no:474)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1301][1302]
seq id no:414和seq id no:474的alk1-fc和alk6-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk6-fc的变体异聚体复合体。
[1303]
反向疏水方法
[1304]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:463-464提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1305]
实施例13中以seq id no:425-426提供alk6-fc融合蛋白的多肽序列。
[1306]
seq id no:464和seq id no:426的alk1-fc和alk6-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk6-fc的变体异聚体复合体。
[1307]
不同alk1-fc:alk6-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1308]
实施例41.alk1-fc:alk7-fc异二聚体的产生
[1309]
可产生包含人alk1和人alk7的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性alk1-fc:alk7-fc异聚体复合体。各个构建体分别被称为alk1-fc和alk7-fc融合蛋白。
[1310]
可采用类似于实施例36的方法引导异聚体alk1-fc:alk7-fc的形成。
[1311]
静电方法
[1312]
在第一种方法中，实施例16中以seq id no:124-126提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1313]
互补alk7-fc融合蛋白的多肽序列(seq id no:183)使用tpa前导序列，且列举如下：
[1314][1315][1316]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了促进alk1-fc:alk7-fc异二聚体而非可能的同二聚体复合体的任一个的形成，可将2个氨基酸取代(将酸性氨基酸用赖氨酸置换)引入上文所示融合蛋白的fc结构域中。可任选提供c端添加赖氨酸的seq id no:183的氨基酸序列。
[1317]
预期成熟的alk7-fc融合蛋白序列如下(seq id no:184)，且可任选提供c端添加赖氨酸的序列。
[1318][1319]
seq id no:126和seq id no:184的alk1-fc和alk7-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk7-fc的异聚体复合体。
[1320]
反向静电方法
[1321]
在反向方法中，与上文描述的第一种方法相比，受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:171-172提供alk1-fc融合蛋白的备
选多肽序列。
[1322]
实施例7中以seq id no:112-114提供alk7-fc融合蛋白的多肽序列和其编码核酸序列。
[1323]
seq id no:172和seq id no:114的alk1-fc和alk7-fc融合蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk7-fc的变体异聚体复合体。
[1324]
疏水方法
[1325]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。实施例16中以seq id no 413-414提供alk1-fc融合蛋白的多肽序列。
[1326]
alk7-fc融合多肽的互补形式(seq id no:475)如下：
[1327][1328]
前导序列和接头序列用下划线表示。为了引导用seq id no:413-414的alk1-fc融合多肽形成异二聚体，可将2个氨基酸取代(将丝氨酸用半胱氨酸置换并将苏氨酸用色氨酸置换)引入上文所示alk7-fc融合多肽的fc结构域中。可任选提供从c端脱去赖氨酸的seq id no:475的氨基酸序列。
[1329]
预期成熟的alk7-fc融合蛋白序列(seq id no:476)如下，并可任选提供从c端脱去赖氨酸的序列。
[1330][1331]
seq id no:414和seq id no:476的alk1-fc和alk7-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk7-fc的变体异聚体复合体。
[1332]
反向疏水方法
[1333]
在使用不对称fc融合蛋白促进异多聚体复合体形成的另一种方法中，按紧接的上文所述，改变fc结构域以引入互补疏水相互作用和其它的分子间二硫键。然而，与上述方法相比，该方法中的受体胞外域与fc相互作用对的对立成员连接。在该实施例中，实施例36中以seq id no:463-464提供alk1-fc融合蛋白的备选多肽序列。
[1334]
实施例7中以seq id no:405-406提供alk7-fc融合蛋白的多肽序列。
[1335]
seq id no:464和seq id no:406的alk1-fc和alk7-fc蛋白分别可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生包含alk1-fc:alk7-fc的变体异聚体复合体。
[1336]
不同alk1-fc:alk7-fc复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1337]
实施例42.包含两种i型受体的其它异二聚体的产生
[1338]
可通过类似于实施例36所述方法引导包含两种i型受体的胞外域的其它异二聚体蛋白质复合体的形成。下表公开了这些变体异二聚体的氨基酸seq id no，出于完整性还包括已论述的包含两种i型受体的异二聚体(实施例36-41)。如实施例36-41中公开的，各受体-fc融合蛋白的c端赖氨酸可任选包括或删除。
[1339]
在每种情况下，可产生包含2种不同i型受体的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性异聚体复合体。在每种情况下，融合蛋白可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生变体异聚体蛋白质复合体。在每种情况下，不同异聚体蛋白质复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1340]
表：“i型:i型受体异二聚体”[1341]
[1342]
[1343]
[1344]
[1345]
[1346][1347]
实施例43.包含i型受体和ii型受体的其它异二聚体的产生
[1348]
可通过类似于实施例1所述方法引导包含i型受体和ii型受体的胞外域的其它异二聚体蛋白质复合体的形成。下表公开了这些变体异二聚体的氨基酸seq id no，出于完整性还包括已论述的包含i型受体和ii型受体的异二聚体(实施例1-29)。如实施例1-29中公开的，各受体-fc融合蛋白的c端赖氨酸可任选包括或删除。
[1349]
在每种情况下，可产生包含i型受体和ii型受体的胞外域(其各自与具有位于胞外域和fc结构域之间的接头的fc结构域融合)的可溶性异聚体复合体。在每种情况下，融合蛋白可共表达并从cho细胞系中纯化，以产生变体异聚体蛋白质复合体。在每种情况下，不同
异聚体蛋白质复合体的纯化可通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：a蛋白层析法、q琼脂糖凝胶层析法、苯基琼脂糖凝胶层析法、大小排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可用病毒过滤和缓冲液交换完成。
[1350]
表：“i型:ii型受体异二聚体”[1351]
[1352]
[1353]
[1354]
[1355]
[1356]
[1357]
[1358]
[1359]
[1360]
[1361][1362]
总体来说，这些实施例表明当置于异聚体复合体的情况下，i型和ii型受体多肽形成新的结合袋，其显示相对于任一类型的同聚体复合体选择性改变，使得形成可能用作治疗剂的新的蛋白质作用剂。