一种畜禽用酶制剂及其制备方法与流程

1.本技术涉及畜禽用饲料技术领域，具体涉及一种畜禽用酶制剂及其制备方法。


背景技术：

2.在饲料中添加酶制剂主要由以下4个理由：1.降解在动物饲料中存在的抗营养因子。这些物质不能被动物内源酶降解，从而干扰动物的 正常代谢，导致动物消化不良，生产性能下降。
3.2.提高淀粉、蛋白质和矿物质的利用率。这些物质或者被富含纤维的细胞壁包围，或 者以某些不能被动物消化的结构形式存在(例如在植物饲料原料中，大量的磷以植酸磷的形 式存在)。
4.3.在原料中降解某些特定的化学键。这些化学键不能被动物自身的酶所降解，加入外 源酶以后可以释放更多的营养物。
5.4.由于幼龄动物自身消化系统还不成熟，内源酶不足添加外源酶可以提高饲料消化率， 防止出现消化不良症状。
6.除了可以提高日粮的利用率以外，加酶还可以减少饲料原料之间的差异，提高饲料 配方的精确性，同时还可以提高动物生长的整齐性，减少管理成本，提高经济效益。使用酶 制剂还可以保护环境。由于饲料的利用率提高了，相应的粪便排放量下降了。在效果比较明 显的情况下，粪便的排放量可以减少20％左右，猪粪中氮的排放下降15％左右，鸡粪中氮 的排放下降20％。对于植酸磷，利用微生物植酸酶减少磷酸氢钙等无机磷的用量，提高饲 料中植酸磷的利用率，可以大幅度减少磷对环境的污染。
7.酶制剂对ph环境和蛋白质水解较为敏感，当环境ph远离酶制剂最适ph时其活性 迅速下降，大部分酶损失发生在30min内。酶制剂在动物胃和肠道环境ph3.0和ph6.0条件 下，加入胃蛋白酶和胰酶后，其活性进一步迅速降低，导致酶解效率迅速下降。因此，酶制 剂可采用控释技术以达不同酶制剂在胃肠道特定部位释放，减少酶制剂损耗，提高酶解效率 的目的。
8.具体的，植酸酶和蛋白酶均已广泛应用于饲料行业中，但是植酸酶为酸性酶制剂， 在酸性条件下酶解效率较高，蛋白酶根据ph划分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶， 均应用于饲料行业中。但是酸性蛋白酶在酸性条件下酶活较高，在肠道中性条件下，酶活存 留率极低，几乎没有酶活，而中性蛋白酶最适ph在6-7，不适合于在胃中酸性ph环境，在ph3.0条件下存留率极低。碱性蛋白酶最适ph为10，虽在饲料中因价格廉价而应用，但酶 解效率极低。因此，蛋白酶若不进行包被控释，直接添加于饲料中酶活损失较为严重，大大 降低酶解效率，降低生产性能。
9.控释技术是20世纪90年代发展起来的新技术，主要有定速释放、定位释放和定时 释放几个方面。主要的控释系统有生物降解型体系和非生物降解型体系，常用的有微胶囊、 脂质体和多孔聚合物体系。在饲料添加剂工业中，主要是定速释放和定位释放。
10.定位释放技术的主要原理是利用时滞效应来定位，根据食物在不同动物消化道内
4：1-2：1-2的比例混合均匀，制成控释液。
21.在一些具体的实施方案中，所述酸性蛋白酶、糊精、碳酸钙和纤维素的比例可以 为：(1-2：1-4：1-2：1-2)、(1-3：1-4：1-2：1-2)、(1-4：1-2：1-2：1-2)、(1
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4：1-3：1-2：1-2)、(1-2：1-2：1-2：1-2)、(1-2：1-3：1-2：1-2)、(1-3：1-2： 1-2：1-2)、(1-3：1-3：1-2：1-2)。
22.通过采用上述技术方案，糊精和水溶性无机盐能够增加酸性蛋白酶的加工稳定性， 从而降低酸性蛋白酶的酶活损失；而纤维素能够提升酸性蛋白酶的成膜性能，使得制备的包 衣更加均匀和完整。而采用上述配比，可有效的降低原料酶在畜禽胃和肠道内的酶活损失。
23.在一个具体的实施方式中，所述酸性蛋白酶、糊精、碳酸钙和纤维素的比例可以 为：1:1:1:1、1:1:2:2、2:2:1:1、1:2:1:1、1:3:1:1、1:4:1:1、2:1:1:1、3:1:1:1、4:1:1:2、 3:2:2:1、2:3:2:1、2:3:1:2、3:4:1:2、4:4:1:2。
24.更为优选的，所述步骤s2中，酸性蛋白酶、糊精、碳酸钙和纤维素按照4：4：1： 1的比例混合均匀，制成控释液。
25.申请人发现，酸性蛋白酶与糊精、碳酸钙与纤维素各自两者之间的配比为1:1时， 能够进一步的降低原料酶在畜禽胃和肠道内的酶活损失。
26.优选的，所述水溶性无机盐包括硫酸钙、硫酸镁、硫酸钠、磷酸氢钙。
27.通过采用上述技术方案，上述的水溶性无机盐能够提供最佳贮存以及加工稳定性， 并可有效的提升蛋白酶的酶活留存率。
28.进一步优选的，所述水溶性无机盐为硫酸钠。
29.通过采用上述技术方案，畜禽胃部当中含有高浓度的hcl，水溶性无机盐采用硫酸钠， 可与胃酸当中的h

发生中和反应而分解，进而实现酶制剂的缓释作用，进而使得酶制剂在 较低酶活的损失下进入畜禽的消化道，提升蛋白酶在消化道内的作用效率，最终达到提升动 物性能的目的。
30.优选的，所述糊精为麦芽糖糊精。
31.通过采用上述技术方案，麦芽糖糊精能够可以有效的改变或者掩盖酶制剂中原料酶 和酸性蛋白酶原有的气味，可以是畜禽的进食量增加。
32.优选的，所述纤维素为羟乙基纤维素。
33.通过采用上述技术方案，羟乙基纤维素用在控释液中具有很强的粘合、填充、成膜 的作用，同时羟乙基纤维素还可作为骨架结构以增加包衣的强度。
34.优选的，所述原料酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、植酸酶、非淀粉 多糖酶、葡萄糖氧化酶、几丁质酶、过氧化氢酶中的至少一种。
35.通过采用上述技术方案，根据畜禽肠道生理特点和日粮类型，采用上述原料酶，能 够释放作为饲料的日粮当中淀粉、蛋白质和非淀粉多糖的降解，释放其中的营养物质，综合 提高饲料养分消耗率。
36.优选的，所述步骤s3中，酶颗粒与控释液的酶活比例为1-5：1-10。
37.优选的，所述步骤s3中，酶颗粒与控释液的酶活比例为1：5。
38.优选的，所述步骤s3中，酶颗粒与控释液的酶活比例为1：1。
39.通过采用上述技术方案，酶颗粒与控释液的酶活比例在上述比例范围内，不仅能够 有较高的酶活留存率，而且经济实用。
40.第二方面，本技术提供一种上述制备方法制备的畜禽用酶制剂。
41.第三方面，本技术提供一种畜禽用酶制剂的应用，应用于猪用、禽料、水产、反 刍动物养殖用饲料中。
42.通过采用上述技术方案，本技术制备方法所制备的酶制剂，能够减少原料酶的用 量，利用对胃消化液的耐受力较强的酸性蛋白酶对原料酶进行包被，准确控制原料酶在 胃肠道中的作用位点，保证添加酶制剂的饲料产品中酶的稳定性和酶的活力不受损害。
43.优选的，所述畜禽用酶制剂在饲料中的添加水平为100g～5000g/t，酶活添加水平为 500～25000u/kg。
44.通过采用上述技术方案，能够有效的降低畜禽料肉比，同时显著提升畜禽采食量， 大大提升了畜禽的生长性能。
45.综上所述，本技术具有以下有益效果：1、将原料酶与特定辅材进行混合制粒，同时运用酸性蛋白酶作为缓释材料对饲用原料 酶进行包被控释，避免原料酶在胃和肠道内损失，能够精准释放酶制剂，提升原料酶在 消化道内的作用效率，同时相较于尿素控释，酸性蛋白酶无臭味，能够提高畜禽采食量， 最终达到提升动物性能的目的。
46.2、酸性蛋白酶、糊精、碳酸钙和纤维素按照4：4：1：1的比例混合均匀，制成的控 释液形成的包衣，能够有效的降低原料酶的酶活损失。
47.3、酶颗粒与控释液的酶活比例为1:5时，具有较高的酶活留存率。
附图说明
48.图1是本技术提供的方法的流程图。
具体实施方式
49.以下结合实施例对本技术作进一步详细说明。
50.酸性蛋白酶源自北京盛拓达生物技术有限公司，cas号为9025-49-4。
51.中性蛋白酶源自北京盛拓达生物技术有限公司，cas号为9068-59-1。
52.碱性蛋白酶源自北京盛拓达生物技术有限公司，cas号为9014-01-1。
53.予以特别说明的是：以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议 的条件进行，以下实施例中所用仪器、材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径获 得。
54.因中性蛋白酶、碱性蛋白酶不能耐受饲料制粒，而经过大量动物实验可知，碱性蛋 白酶对猪生产性能改善幅度较小，中性蛋白酶对猪生产性能改善幅度大，因此在实际应用过 程中，亟需对中性蛋白酶胃进行保护，减少其在胃内的酶活损失，本技术结合实际生产需求， 开创性的运用酸性蛋白酶作为控释液，对中性蛋白酶进行包被，避免其在胃和肠道内损失， 提升蛋白酶在消化道内的作用效率，最终达到提升动物性能的目的。实施例
55.实施例1一种畜禽用酶制剂的制备方法，包括以下步骤：s1、制备酶芯颗粒：取酶活为10000u/g的粉末状中性蛋白酶50份、硫酸钙20份、玉
米淀 粉20份和水10份混合均匀，经挤压、切割、圆整后制成小颗粒，再经低温气流干燥、筛分 获得直径为0.2mm的酶颗粒，酶颗粒的酶活为5000u/g；s2、制备控释液：取高浓缩液体酸性蛋白酶制成酶活为5000u/g的酸性蛋白酶控释液；s3、制作酸酶包衣：将步骤s1中制备好的酶颗粒置于包衣锅内，将酸性蛋白酶控释液均匀 喷射中性酶制剂微丸上，其中，酶颗粒与酸性蛋白酶控释液的用量比例为1:1(w:v)，制备 成10000u/g的蛋白酶初酶制品；s4、烘干成品：将包衣后的初酶制品置于50℃的干燥箱干燥6小时，制成双层含酶的酶制 剂成品。
56.实施例2实施例2提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的区别在于，s1、制备酶芯颗粒： 取酶活为10000u/g的粉末状中性蛋白酶50份、硫酸钙30份、稻壳粉10份和水10份混合 均匀，经挤压、切割、圆整后制成小颗粒，再经低温气流干燥、筛分获得直径为0.2mm的 酶颗粒，酶颗粒的酶活为5000u/g。
57.实施例3-4实施例3-4提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的区别在于，酶芯颗粒中组分组 成不同，具体如表1所示。
58.表1实施例2-4中酶芯颗粒中组分比例 项目中性蛋白酶硫酸钙稻壳粉水实施例250301010实施例34010125实施例460253612实施例5-7实施例5-7提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例2的区别在于，中性蛋白酶与酸性 蛋白酶的酶活不同，具体如表2所示。
59.表2实施例5-7中性蛋白酶与酸性蛋白酶的酶活及其比例 实施例中性蛋白酶：酸性蛋白酶活比例中性蛋白酶：酸性蛋白酶活55:15000:100061:15000:500071:55000:25000实施例8-24实施例8-24提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例7的区别在于，步骤s2中，组成 控释液的组分和比例不同，具体如表3所示。
60.表3实施例8-24控释液的组分和比例 实施例酸性蛋白酶麦芽糖糊精碳酸钙羟乙基纤维素比例8101010101:1:1:196612121:1:2:2103312121:1:4:4111010552:2:1:1
122020554:4:1:1132525555:5:1:114102010101:2:1:115103010101:3:1:116104010101:4:1:117201010102:1:1:118301010103:1:1:119401010204:1:1:220302020103:2:2:121203020102:3:2:122203010202:3:1:223304010203:4:1:224404010204:4:1:2对比例对比例1对比例1提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，包括以下步骤：取酶活为10000u/g的粉末状 酸性蛋白酶，按照酸性蛋白酶：尿素：水＝4:1:1的比例制备含5000u/g蛋白酶的尿素控释酸 性蛋白酶颗粒。
61.对比例2对比例2提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，包括以下步骤：取酶活为10000u/g的粉末状 中性蛋白酶，按照中性蛋白酶：尿素：水＝4:1:1的比例制备含5000u/g蛋白酶的尿素控释中 性蛋白酶颗粒。
62.对比例3对比例3提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，包括以下步骤：取酶活为10000u/g的粉末状 碱性蛋白酶，按照碱性蛋白酶：尿素：水＝4:1:1的比例制备含5000u/g蛋白酶的尿素控释碱 性蛋白酶颗粒。
63.对比例4对比例4提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的区别在于：s1、制备酶芯颗粒： 取酶活为10000u/g的粉末状酸性蛋白酶50份和水10份混合均匀，经挤压、切割、圆整后 制成小颗粒，再经低温气流干燥、筛分获得直径为0.2mm的酶颗粒，酶颗粒的酶活为 5000u/g。
64.对比例5对比例5提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的区别在于：s1、制备酶芯颗粒： 取酶活为10000u/g的粉末状中性蛋白酶50份和水10份混合均匀，经挤压、切割、圆整后 制成小颗粒，再经低温气流干燥、筛分获得直径为0.2mm的酶颗粒，酶颗粒的酶活为 5000u/g。
65.对比例6对比例6提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的区别在于：s1、制备酶芯颗粒： 取酶活为10000u/g的粉末状碱性蛋白酶50份和水10份混合均匀，经挤压、切割、圆整
后 制成小颗粒，再经低温气流干燥、筛分获得直径为0.2mm的酶颗粒，酶颗粒的酶活为 5000u/g。
66.对比例7对比例7提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，与实施例1的不同之处在于，不进行步骤s2、 s3、s4，即不对酶颗粒进行酸酶包衣步骤。
67.对比例8对比例8提供一种畜禽用酶制剂的制备方法，包括以下步骤：将酸性蛋白酶12500u/g与中 性蛋白酶12500u/g按照1:1组合，制得12500u/g蛋白酶的复合酶，将复合酶制剂置于包 衣锅内，按照中性蛋白酶：酸性蛋白酶：尿素：水＝4:4:1:1的比例制备含5000u/g蛋白酶的 尿素控释中性蛋白酶颗粒。
68.性能检测试验1、试剂及原料胃蛋白酶p7000、糜蛋白酶a0164、淀粉酶a3306均购自sigma公司，胰蛋白酶0785购 自amresco公司，其他试剂均为国产分析纯。
69.2、体外法评估酶制剂稳定性测定蛋白酶模拟猪胃消化液的稳定性：将1g蛋白酶粉(酸性、中性、碱性蛋白酶)或实施 例1-13和对比例1-8制备的酶制剂置于100ml ph为3.0的人工猪胃消化液(88.64mmnacl、67.11mm kcl、100nah2po4、737.50u/ml胃蛋白酶)中，40℃孵育3小时，采用活 性检测试剂盒(比色法)测定剩余蛋白酶活力。
70.测定蛋白酶模拟猪小肠消化液的稳定性：将1g蛋白酶粉(酸性、中性、碱性蛋白酶) 或实施例1-13和对比例1-8制备的酶制剂置于100ml ph为7.0的人工猪小肠胃消化液 (225.13mm na2hpo4、194.67mm nah2po4、4mm青霉素钠盐、2435.81u/ml淀粉酶、 760.51u/ml胰蛋白酶、89.16u/ml糜蛋白酶)中，40℃孵育8小时，采用活性检测试剂盒 (比色法)测定剩余蛋白酶活力。
71.数据由excel采集，通过spss 20.0进行方差分析，若差异显著再进行ducan’s的 方法进行多重比较，其中p《0.05表示差异显著。
72.3、酸性、中性、碱性蛋白酶的最适ph稀释酸性、中性和碱性蛋白酶的原始酶液，并于37℃、ph2-12范围内进行酶促反应，测定 每种酶的最适ph，经检测该发明所用的酸性、中性、碱性蛋白酶的最适ph结果如下：酸性蛋白酶最适ph为2.5；中性蛋白酶最适ph为7.5；碱性蛋白酶最适ph为10.5。
73.4、试验结果4.1、以酸性、中性、碱性蛋白酶(表中简写成酸蛋、中蛋、碱蛋)直接加入模拟猪胃消化 液作为空白未控释对照组与对比例1-6进行对比，结果如表4所示。
74.表4酸性、中性、碱性蛋白酶以及对比例1-6经人工猪胃消化液处理后的相对酶活 (％)
由表4可知，酸性、中性、碱性蛋白酶对猪胃消化液的耐受力不同，其中酸性蛋白酶对胃蛋 白酶的耐受性最强，而中性蛋白酶和碱性蛋白酶经猪胃消化液处理3h后酶活损失较大，酶 活存留率小于5％。故而，未经控释处理的中性和碱性蛋白酶直接应用于饲料中酶活损失较 大。
75.酸、中、碱性蛋白酶分别通过尿素控释和酸酶控释后，再经猪胃消化液处理其相对 酶活有不同程度的改变。其中，酸性蛋白酶经尿素控释后，酸性蛋白酶相对空白未控释组酶 活下降30.78％，而酸性蛋白酶经过酸性蛋白酶处理以后，其酶活因为叠加自身和外加酸性 蛋白酶，酶活相对无控释工艺提高18.88％，由此可见，酸性蛋白酶经过酸酶控释后，在猪 胃消化液处理后相对酶活最高。
76.中性蛋白酶经尿素控释工艺处理后，在猪胃消化液处理后酶活保留率提升，较未控 释组提高了9倍，而经酸酶控释后，猪胃消化液存留率提升18倍。碱性蛋白酶经尿素控释 后，猪胃消化液处理后，酶活存留率提高35倍，经酸酶工艺进行控释，再经猪胃消化液处 理后，酶活存留率提高125倍。由此可见，本来不能耐受猪胃消化液的中性和碱性蛋白酶经 过尿素控释后，耐受力有不同程度的提高，而经过酸性酶制剂控释后，尤其优选酸性蛋白酶 控释后，中性蛋白酶和碱性蛋白酶存留率大幅提高，存留分别为78.34％和70.62％。由此可 见，本技术采用酸性蛋白酶进行酸酶控释可提高蛋白酶在胃内的存留率。
77.4.2、以酸性、中性、碱性蛋白酶(表中简写成酸蛋、中蛋、碱蛋)直接加入模拟猪 小肠消化液作为空白未控释对照组与对比例1-6进行对比，结果如表5所示。
78.表5酸性、中性、碱性蛋白酶以及对比例1-6经人工猪小肠消化液处理后的相对剩 余酶活(％)
由表5可知，酸性、中性和碱性蛋白酶经人工猪小肠消化液处理后稳定性(存留率)不同。 其中，中性蛋白酶存留率最高，为93.34％，其次为碱性蛋白酶组，存留率为61.86％，酸性 蛋白酶存留率为58.33％，可见酸性蛋白酶既能耐受胃消化液，也能耐受小肠消化液，因此， 酸性蛋白酶可作为缓释材料对饲用蛋白酶进行控释。
79.三种不同蛋白酶分别经过尿素材料和酸性蛋白酶包被后，其在人工猪小肠消化液的 相对酶活变化各异。其中酸性蛋白酶经尿素材料包被后，相对酶活存留率为40.88％，而经 酸性蛋白酶包被后，酶活不降反升，存留率为66.15％。中性蛋白酶经尿素包被后，蛋白酶 相对酶活下降为75.35％，而经过酸性蛋白酶包被后，酶活上升为94.14％。碱性蛋白酶经过 尿素包被后，酶活性下降为55.14％，经过酸性蛋白酶包被后，酶活性上升为68.37％。
80.由此可见，酸性、中性、碱性蛋白酶经过尿素包被后，酶活有不同程度的下降，而 经过酸性蛋白酶包被后，酶活有不同程度的上升。因此，本技术采用酸性蛋白酶作为控释液 对蛋白酶进行缓释，提升蛋白酶的存留率，起到提高蛋白质类饲料的消化的作用。
81.4.3、将酸性、中性、碱性蛋白酶和对比例1-6中的酶制剂经过人工猪胃、小肠消化液 处理后相对酶活进行计算，经过人工猪胃、小肠消化液处理后相对相对酶活＝(人工猪胃处 理后的相对酶活*经小肠液处理后的相对酶活)/100，可得不同蛋白酶经猪消化液处理后的 相对酶活，结果如表6。
82.表6经人工猪胃、小肠消化液处理后的相对酶活(％)
由表6可知，酸性蛋白酶经酸性蛋白酶控释后存留率最高，为56.36％；中性蛋白酶经酸性 蛋白酶控释后存留率最高为73.74％；碱性蛋白酶经酸性蛋白酶控释后存留率最高，为 48.28％，因此酸性蛋白酶可作为一种优质的缓释材料对蛋白酶进行控释。
83.与此同时，相同酶活的酸性、中性、碱性蛋白酶经不同控释工艺处理，并且模拟猪 胃、小肠消化液作用后相对蛋白酶存留率最高的为中性蛋白酶经酸性蛋白酶处理，为 73.74％，其次为酸性蛋白酶叠加酸性蛋白酶控释，为56.36％，再次为碱性蛋白酶经酸性蛋 白酶包被，为48.28％。因此，本技术中采用酸性蛋白酶作为缓释材料对蛋白酶进行控释可 有效的避免蛋白酶在胃和肠道内损失，能够精准释放酶制剂，提升原料酶在消化道内的作用 效率。
84.4.4、将实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经过人工猪胃消化液处理后可得不同实 施例和对比例中酶制剂经猪消化液处理后的相对酶活，结果如表7。
85.表7实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经人工猪胃消化液处理后的相对酶活(％)
4.5、将实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经过人工猪小肠消化液处理后可得不同实施例 和对比例中酶制剂经猪小肠消化液处理后的相对酶活，结果如表8。
86.表8实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经人工猪小肠消化液处理后的相对酶活 (％)(％)
4.6、将实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经过人工猪胃、小肠消化液处理后相对酶活进 行计算，经过人工猪胃、小肠消化液处理后相对相对酶活＝(人工猪胃处理后的相对酶活*经 小肠液处理后的相对酶活)/100，可得不同蛋白酶经猪消化液处理后的相对酶活，结果如表 9。
87.表9实施例1-24和对比例7-8中的酶制剂经人工猪胃、小肠消化液处理后的相对酶 活(％)
结合实施例1-4和对比例4-6并结合表6和9可以看出，实施例1-4相较于对比例4-6，酶芯 颗粒中增加了硫酸钙、玉米淀粉(实施例1)、稻壳粉(实施例2-4)，说明硫酸钙、玉米淀 粉或稻壳粉的组合能够影响中性蛋白酶在胃和肠道内的酶活损失；并通过实施例1-4可以看 出，中性蛋白酶、玉米淀粉或稻壳粉之间的配比也能够影响到中性蛋白酶在胃和肠道内的酶 活损失。结合表9可以看出，实施例2当中，中性蛋白酶50份、硫酸钙30份、稻壳粉10 份时，中性蛋白酶在胃和肠道内的存留率最优，为84.52％。
88.结合实施例5-7并结合表7可以看出，在中性蛋白酶酶活一定的情况下，随着酸性蛋 白酶占比酶活的提高，经人工胃液处理后的蛋白酶存留率呈上升趋势，其中中性蛋白酶：酸 性蛋白酶＝1:5的比例最高，为88.56％，再次为中性：酸性＝1:1的比例，最次为中性：酸性 ＝5:1的比例。
89.结合实施例5-7并结合表8可以看出，在中性蛋白酶一定的情况下，随着酸性蛋白酶 作为控释材料酶活的提高，经人工猪小肠液处理后的蛋白酶存留率呈上升趋势，其中中性蛋 白酶：酸性蛋白酶＝1:5比例的酶活存留率最高，为96.62％，再次为中性：酸性＝1:1
vd3 3000iu、vk2 mg、vb1 1.50mg、vb2 6mg、vb6 2.2mg、vb12 0.04mg、泛酸14mg、 烟酸45mg、生物素0.15mg、叶酸1.2mg、mn 40mg、fe 120mg、cu 10mg、zn 130mg、 se 0.30mg、i 0.50mg。
96.1.3、饲养管理试验猪在同一栋猪舍高床漏缝地板饲养，自由采食及饮水，防疫、驱虫等饲养管理依照常规 安全相同进行。
97.1.4生长性能测定1.4.1生长性能预试期为7d，正式试验期28d，分别与试验期开始和结束时清晨空腹称重，准确记录饲料耗 料量，计算平均采食量、平均日增重和料重比。
98.1.4.2腹泻率及发病率腹泻率(％)＝全期腹泻头次/(试验头数
×
试验天数)
×
100发病率(％)＝观察期间内发生的新病例数/同期平均猪只头数
×
1001.4.3数据处理数据由excel采集，通过spss 20.0进行方差分析，若差异显著再进行ducan’s的方法进行 多重比较，其中p《0.05表示差异显著。
99.1.5试验结果表11不同控释材料对断奶仔猪生长性能的影响1不同控释材料对断奶仔猪生长性能的影响注：adg：平均日增重；adfi：平均日采食量。
100.不同控释材料对断奶仔猪生长性能的影响各异。由表11的生长性能结果显示，尿素 控释组平均日增重与未控释组差异不显著，料肉比较未控释组下降，但差异不显著。酸酶控 释组日增重显著高于未控释组和尿素控释组(p《0.05)，料肉比显著低于未控释组和尿素控 释组(p《0.05)。值得注意的是，尿素控释组的采食量低于未控释组，而酸酶控释组的采食 量高于未控释组和尿素控释组(p《0.05)。由此可见，尿素控释材料虽然采食量呈下降趋势， 但却提升断奶仔猪的料肉比；而酸酶控释组既降低了断奶仔猪料肉比，同时显著提升了采食 量，大大提升了断奶仔猪的生长性能。
101.表12不同控释工艺对断奶仔猪腹泻率和发病率的影响 分组腹泻率(％)发病率(％)未控释组(对比例7)7.40
±
0.34a4.80
±
0.95a尿素控释组(对比例8)4.68
±
0.30b2.56
±
0.96a酸酶控释组(实施例12)0.98
±
0.20c1.00
±
1.13b由表12可知，控释组对断奶仔猪腹泻率和发病率具有显著效果，对未控释组相比，尿素控 释组和酸酶控释组显著降低了腹泻率，分别降低了38％和87％(p《0.05)。相较于未控释组， 尿素控释组和酸酶控释组发病率显著降低，分别下降了47％和79％(p《0.05)。由此可见， 酸酶控释组大大提升了仔猪抗病能力。
102.综上所述，尿素控释方法能显著提升仔猪的日增重，降低料肉比，腹泻率和发病率 也显著低于未控释组，但因其特殊气味，影响了乳仔猪的采食量。而酸酶控释工艺不仅能够 提高仔猪日增重和饲料转化率，显著降低腹泻率和发病率，并且此材料有发酵特有香味，不 会干扰仔猪采食量，因此酸酶控制工艺对于乳仔猪具有更佳综合效果。
103.2、验证酶制剂不同添加水平对乳仔猪生产性能的影响运用本发明实施例12制得酸蛋控释中性蛋白酶的酶制剂，并验证酶制剂不同添加水平对乳 仔猪生产性能的影响，以期为生产实践提供理论和推广基础。
104.2.1试验动物与设计选择180头健康状况良好的三元杂交(杜
×
长
×
大)28日龄乳猪开展本次试验，按胎次基 本一致、品种相同、体重相近、公母比例一致的原则分组，共分3个处理组，3个处理组均 在基础日粮的基础上添加酸蛋控释材料制成的蛋白酶制剂，其中试验1组酸蛋控释材料添加 水平为500g,试验2组酸蛋控释材料添加水平为1000g,试验3组酸蛋控释材料添加水平为 2000g。每个处理组分6个重复组，每个重复组分10头猪。圈舍分组采取随机区组设计法。 3个处理组的酶制剂具体分组如下：表13试验动物分组 组别试验日粮试验组1基础日粮 酸蛋控释蛋白酶500g试验组2基础日粮 酸蛋控释蛋白酶1000g试验组3基础日粮 酸蛋控释蛋白酶2000g2.2试验日粮基础日粮参照有关理想蛋白质模型标准配制，其中日粮组分为：玉米56.9％、豆粕22％、发 酵豆粕5％、鱼粉2％、乳清粉10％、预混料4％，蛋白酶0.1％。
105.营养水平为：消化能14.18mj/kg、粗蛋白质18.6％、钙0.67％、总磷0.51％、赖氨酸 1.25％、蛋氨酸 胱氨酸0.57％、苏氨酸0.71％。其中预混料为每千克饲粮提供va 8000iu、 vd3 3000iu、vk2 mg、vb1 1.50mg、vb2 6mg、vb6 2.2mg、vb12 0.04mg、泛酸14mg、 烟酸45mg、生物素0.15mg、叶酸1.2mg、mn 40mg、fe 120mg、cu 10mg、zn 130mg、 se 0.30mg、i 0.50mg。
106.2.3饲养管理试验猪在同一栋猪舍高床漏缝地板饲养，自由采食及饮水，防疫、驱虫等饲养管理依照常规 安全相同进行。
107.2.4生长性能检测2.4.1生长性能预试期为7d，正式试验期28d,分别与试验期开始和结束时清晨空腹称重，准确记
录饲料耗 料量，计算平均采食量、平均日增重和料重比。
108.2.4.2腹泻率及发病率腹泻率(％)＝全期腹泻头次/(试验头数
×
试验天数)
×
100发病率(％)＝观察期间内发生的新病例数/同期平均猪只头数
×
1002.4.3数据处理数据由excel采集，通过spss 20.0进行方差分析，若差异显著再进行ducan’s的方法进行 多重比较，其中p《0.05表示差异显著。
109.2.5试验结果表14不同添加水平的控释蛋白酶对断奶仔猪生长性能的影响 分组初重(kg)末重(kg)adg(g/d)adfi(g/d)料肉比试验组111.48
±
0.3424.85
±
0.95a477.53
±
33.58a660.75
±
61.311.38
±
0.03a试验组211.52
±
0.2025.75
±
1.13b508.05
±
36.02b670.62
±
46.641.32
±
0.09b试验组311.88
±
0.6026.14
±
1.03b509.85
±
36.02b672.62
±
46.641.32
±
0.09b注：adg：平均日增重；adfi：平均日采食量。
110.不同添加水平的控释蛋白酶对断奶仔猪生长性能的影响如表15所示。由表可知，试 验1组的日增重为477.53g/d，显著低于试验2组和试验3组的平均日增重(p《0.05)。3个 试验组的日采食量差异不显著。试验1组的料肉比最高，显著高于试验2组和试验3组 (p《0.05)。试验2组和试验3组的料肉比差异不显著。由此可见，试验2组和试验3组添 加水平的控释蛋白酶具有更优断奶仔猪生产性能。考虑到经济，优选1000g添加水平的控释 蛋白酶。
111.表15不同添加水平控释材料对断奶仔猪腹泻率和发病率的影响由表15可知，3个处理组对断奶仔猪腹泻率和发病率具有显著效果。其中，试验1组的腹 泻率最高，为2.4％，但3个试验组间腹泻率差异不显著。与此同时，3个试验组的发病率均 较低，低于2％。由此可见，不同添加水平的酸酶控释材料均能维持肠道健康，提升断奶仔 猪的抗病能力。
112.综上所述，500-2000g添加水平的酸蛋控释均能有效控制断奶仔猪的腹泻率和发病率。 从生产性能和经济性能方面考虑，1000g添加剂量的酸蛋控释方法最为经济，生产性能最佳。
113.可以理解的是，以上实施方式仅仅是为了说明本发明的原理而采用的示例性实施方式， 然而本发明并不局限于此。对于本领域内的普通技术人员而言，在不脱离本发明的精神和实 质的情况下，可以做出各种变型和改进，这些变型和改进也视为本发明的保护范围。